下调肌动蛋白相关蛋白2/3复合体5对肺鳞癌细胞株SK-MES-1增殖、侵袭和转移能力的影响

背景与目的:肌动蛋白相关蛋白2/3复合体5(actin related protein 2/3 complex subunit5,ARPC5)参与肌动蛋白的组装,影响细胞的运动能力,在形成癌细胞侵袭性伪足的过程中起到重要作用。本研究通过基因沉默手段,探讨下调ARPC5基因表达对肺鳞癌细胞株SK-MES-1增殖、侵袭和转移能力的影响。方法:应用阳离子脂质体转染法构建ARPC5基因沉默(si-ARPC5)的SK-MES-1肺鳞癌细胞株,qRT-PCR和蛋白质印迹法(Western blot)鉴定转染效率和表达情况。实验设置si-ARPC5实验组、空白对照组(mock组)及阴性对照组(NC组)。采用细胞技术试剂盒(cell couiting kit-8,CCK-8)法测定si-ARPC5对SK-MES-1细胞的增殖的影响;划痕修复实验测定si-ARPC5对SK-MES-1细胞迁移能力的影响;Transwell小室体外侵袭实验测定siARPC5对SK-MES-1细胞的侵袭能力的影响。结果:转染si-ARPC5后的SK-MES-1细胞在mRNA和蛋白水平上均下调ARPC5的表达。与mock组及NC组比较,si-ARPC5实验组SK-MES-1细胞增殖能力明显下降(t=7.993,t=8.681,P<0.05)。si-ARPC5实验组划痕修复率(43.32±0.23)%,而mock组和NC组划痕修复率分别为(73.11±0.43)%和(76.58±0.88)%,差异有统计学意义(t=7.348,t=10.614,P<0.05)。si-ARPC5组的SK-MES-1细胞穿膜数为(27±6)个,mock组为(101±11)个,NC组为(92±9)个。si-ARPC5组穿膜细胞数明显少于其他2组,差异有统计学意义(t=10.229,t=8.391,P<0.05)。结论:下调ARPC5基因的表达能够显著抑制肺鳞癌细胞株SK-MES-1的增殖、侵袭和转移能力。

潮湿环境下大鼠脾组织差异蛋白组学研究

目的:通过比较正常及潮湿环境下大鼠脾组织蛋白质谱,筛选和鉴定与湿邪有关的疾病特异性蛋白,探寻湿邪致病的生物标志物。方法:选取SD大鼠20只随机分为对照组、外湿组,每组10只。造模成功后无菌摘除脾脏,取出脾组织10mg/只,进行双向电泳实验、双向凝胶电泳图象分析,肽质量指纹图谱与电喷雾串联质谱鉴定蛋白质,分析差异蛋白质意义。结果:通过比较正常及潮湿环境下大鼠脾组织差异蛋白质,发现3个有意义的蛋白质:表达上调的有2个:载脂蛋白A-I、肌动蛋白相关蛋白2/3复合物亚基5;表达下调的有1个:结合珠蛋白。结论:正常及潮湿环境下大鼠脾组织蛋白质存在差异表达,这些差异蛋白质可能是与湿邪致病相关的疾病特异性蛋白。