光化性角化病病人皮肤组织Toll样受体7蛋白表达及其临床意义

目的探讨光化性角化病(AK)病人皮肤组织中Toll样受体7(TLR7)蛋白表达及其对AK病人预后的预测效能。方法选取2015年1月至2019年1月四川大学华西医院收集的134例AK病人的皮肤蜡块标本作为观察组,选取同时期收集的129例健康人员的皮肤蜡块标本作为对照组。采用免疫组化法测定两组皮肤组织的TLR7蛋白表达情况,比较两组皮肤组织TLR7蛋白表达水平。对观察组病人随访3年,根据是否发展为皮肤鳞状细胞癌(cSCC)分为癌变组和非癌变组,对比癌变组与非癌变组皮肤组织中TLR7蛋白表达水平,采用单因素分析和logistic回归模型分析AK病人进展为cSCC的影响因素,采用受试者操作特征(ROC)曲线分析皮肤组织TLR7蛋白表达水平对AK病人发生cSCC的预测效能。结果观察组皮肤组织中TLR7蛋白表达水平高于对照组(23.76±3.90比4.95±0.64)(P<0.05);AK病人cSCC发生率为15.67%;癌变组与非癌变组皮肤病史、病程、病理类型比较差异无统计学意义(P>0.05),癌变组年龄高于非癌变组(P<0.05),男性、Fitzpatrick皮肤分型为Ⅰ/Ⅱ型的比例及皮肤组织TLR7蛋白表达量高于非癌变组(P<0.05);高龄、男性、Fitzpatrick皮肤分型为Ⅰ/Ⅱ型、皮肤组织TLR7蛋白高表达均为AK病人癌变发生的独立危险因素(P<0.05),且该模型拟合效果良好(P>0.05);皮肤组织TLR7蛋白表达预测AK病人进展为cSCC的ROC曲线的截断值25.34,灵敏度80.95%,特异度81.42%,ROC曲线下面积0.81,95%CI:(0.74,0.88)。结论AK病人皮肤组织中TLR7蛋白的表达量升高,且是AK病人继发cSCC的独立危险因素,对AK病人的预后具有良好预测效能。

结肠癌组织LTBP2、ACTL8表达与病理参数及预后的关系

目的 探讨结肠癌组织中转化生长因子结合蛋白2(LTBP2)、肌动蛋白样蛋白8(ACTL8)表达水平与病理参数及预后的关系。方法 收集163例结肠癌癌组织及癌旁组织。采用免疫组织化学法检测结肠癌及癌旁组织中LTBP2、ACTL8表达,分析不同临床病理参数患者LTBP2和ACTL8表达阳性水平。采用Cox回归分析LTBP2、ACTL8表达对患者预后的影响。结果 结肠癌组织中LTBP2、ACTL8强阳性、总阳性表达率均高于癌旁组织(P<0.05)。结肠癌中高分化、Ⅲ~Ⅳ期及淋巴结转移患者的LTBP2、ACTL8阳性表达率增高(P<0.05)。Cox回归分析显示:pTNM分期Ⅲ~Ⅳ期、肿瘤低分化、有淋巴结转移、ACTL8阳性、LTBP2阳性是影响结肠癌患者预后的危险因素(P<0.05)。结论 结肠癌组织中LTBP2、ACTL8表达较高,且其高表达与相关病理参数相关,高表达者预后更差。

AFAP-1L2通过PI3K/Akt通路影响胰腺癌细胞增殖及凋亡

目的:检测肌动蛋白丝相关蛋白1相似蛋白(actin filament-associated protein 1-like 2,A FA P-1L2)在不同分化程度胰腺癌细胞株中的表达,并观察其对下游磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶(phosphatidylinositol 3 kinase/protein kinase B,PI3K/Akt)通路调控作用及对胰腺癌细胞的增殖、周期及凋亡的影响.方法:以Western blot及实时定量PCR检测(real-time quantitative PCR,q RT-PCR)法对不同分化程度胰腺癌细胞系PANC-1、Mia Pa Ca-2、Colo-357、BXPC-3、SW1990及CFPAC-1中AFAP-1L2表达进行检测;构建靶向AFAP-1L2的干扰质粒si AFAP-1L2,转染Mia Pa Ca-2细胞,以Western blot及q RTPCR法检测AFAP-1L2下调后PI3K/Akt通路蛋白及m RNA变化;四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(methyl-thiazolyl-tetrazolium,MTT)法检测转染后Mia Pa Ca-2细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期及凋亡.结果:Western blot及q RT-PCR法显示,AFAP-1L2蛋白及m R N A表达水平在低分化胰腺癌细胞系中表达水平高于中分化及高分化细胞系.si AFAP-1L2转染后磷脂酰肌醇3激酶a亚单位(P I3K C A)蛋白在s i A FA P-1L2组的表达量明显低于A FA P-1L2组及小干扰RNA(small interfering RNA,si RNA)control组(F=9.280,P=0.0139),a蛋白激酶(a-Akt)在si AFAP-1L2细胞的表达量高于MOCK细胞及si RNA control细胞(F=7.719,P=0.0219),磷酸化a蛋白激酶(a-p A k t)在si AFAP-1L2细胞的表达量低于MOCK细胞及si RNA control细胞(F=5.507,P=0.0439).PI3KCAm RNA在si AFAP-1L2组的表达量明显低于AFAP-1L2组及si RNA control组(F=20.16,P=0.0022),a-Akt m RNA在si AFAP-1L2细胞的表达量高于MOCK细胞及siRNA control细胞(F=6.068,P=0.0362),a-p Akt m R N A在s i A FA P-1L2细胞的表达量低于MOCK细胞及si RNA control细胞(F=10.33,P=0.0114).MTT检测显示,在48、72及96h siAFAP-1L2干扰后Mia PaCa-2细胞增殖能力下降(F=3.924,P<0.05;F=6.812,P<0.01;F=7.003,P<0.01).流式细胞检测显示,si AFAP-1L2干扰后G1期细胞比例增高,G2及S期比例减少(F=4.87,F=5.26,F=4.94,均P<0.05),si AFAP-1L2干扰后Mia Pa Ca-2细胞凋亡率增高(F=7.231,P<0.01).结论:在分化程度低的胰腺癌细胞中AFAP-1L2表达较高,AFAP-1L2通过PI3K/Akt通路影响胰腺癌细胞增殖、细胞周期及凋亡,可作为胰腺癌治疗新的靶向候选基因.

人源类共激活蛋白的研究进展

人源类共激活蛋白(hCLP)是新近发现的一种细胞骨架蛋白,在人体多个器官均可表达。hCLP属于肌动蛋白解聚因子同系物家族(ADF-H),能够同纤维状肌动蛋白及5脂-氧合酶结合,协助二者发挥生理功能。对于HLA-A2阳性的胰腺癌患者以及膀胱癌患者,hCLP可在癌组织中过表达。hCLP是一种新的肿瘤相关抗原,同时能够诱导机体产生针对肿瘤组织的免疫反应,这使其有可能成为一种肿瘤免疫治疗的理想候选抗原株。

ACTL8的表达与乳腺癌临床病理特征及预后的关系

目的:探讨肌动蛋白样蛋白8(ACTL8)在乳腺癌中的表达及其与乳腺癌临床病理特征及预后的关系。方法:采用Western blot方法检测人正常乳腺上皮细胞株MCF-10A和5种乳腺癌细胞株中ACTL8蛋白的表达;采用免疫组织化学方法检测6例乳腺癌标本及其对应的癌旁组织中ACTL8蛋白的表达;收集TCGA乳腺癌数据集,将488例乳腺标本纳入,分析ACTL8的mRNA表达水平与乳腺癌患者临床病理特征及预后的关系。结果:ACTL8蛋白在乳腺癌细胞株T47D、BT474、HCC1954和SKBR3中表达显著高于乳腺上皮细胞株MCF-10A;ACTL8蛋白在乳腺癌组织中的表达也显著高于癌旁组织;ACTL8 mRNA表达与乳腺癌患者年龄、肿瘤大小、临床TNM分期和淋巴结转移相关(P<0.05)。ACTL8 mRNA高表达的乳腺癌患者5年内生存率低、预后差。结论:ACTL8在乳腺癌组织中高表达并与乳腺癌临床病理特征及预后密切相关,提示ACTL8可作为判断乳腺癌预后的标志物。

敲低ACTL8基因对子宫内膜癌细胞增殖与迁移的影响

目的探讨采用携带shRNA特异序列的载体转染子宫内膜癌细胞敲低肌动蛋白样蛋白8(ACTL8)基因对细胞增殖、侵袭迁移能力的影响及其机制。方法选取人子宫内膜癌Ishikawa细胞株进行实验研究,以携带shRNA特异序列的载体及空载质粒分别转染Ishikawa细胞株,形成敲低ACTL8基因的shACTL8组和以空载质粒转染的对照组。荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测两组细胞中ACTL8 mRNA表达,Western blot法检测两组细胞ACTL8蛋白表达,Transwell迁移和侵袭实验分析Ishikawa细胞侵袭和迁移能力,CCK8细胞增殖实验及平板克隆实验检测细胞的增殖情况,Western blot法检测两组细胞的E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、P21蛋白的表达情况。结果shACTL8组的ACTL8 mRNA、ACTL8蛋白相对表达强度均低于对照组(P<0.05);shACTL8组的Ishikawa细胞侵袭、迁移水平均低于对照组(P<0.05);在细胞培养后1天、2天、3天,shACTL8组的Ishikawa细胞数目测定OD值显著低于对照组(P<0.05);平板克隆实验培养3天,可见shACTL8组培养皿中细胞生长数目明显少于对照组(P<0.05);shACTL8组E-cadherin蛋白、P21蛋白表达强度高于对照组(P<0.05);shACTL8组N-cadherin蛋白、MMP-9蛋白表达强度低于对照组(P<0.05)。结论敲低ACTL8基因抑制子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖、迁移、侵袭。

熊去氧胆酸抑制人肝星状细胞活化和NIX蛋白表达的实验研究

目的研究NIX蛋白的表达变化与熊去氧胆酸(UDCA)抑制人肝星状细胞(HSC)活化作用的关系。方法人肝星状细胞-LX2细胞实验分为四组:溶媒对照组、UDCA(0.5μM)组、TGF-β1(5 ng/ml)组、TGF-β1(5 ng/ml)+UDCA(0.5μM)组。通过Western blot检测比较各组间α-SMA、NIX的表达差异。结果TGF-β1刺激LX2细胞后,α-SMA、NIX表达分别较对照组增加60.9%、51.0%;UDCA抑制TGF-β1活化LX2细胞后,α-SMA的表达抑制率达55.6%,与其显著下调NIX的表达呈正相关。结论 UDCA下调HSC细胞NIX蛋白的表达,可能为UDCA抗肝纤维化的药理新机制。

酒精性肝纤维化及肝癌大鼠Klf6及基因的表达

目的:研究不同白酒对酒精性肝纤维化、肝硬化合并肝癌大鼠肝组织中Kruppule样因子6(Klf 6)及相关基因表达的影响。方法:运用2种白酒和黄曲霉素B1(AFB1)对大鼠进行处理,制备酒精性肝纤维化、肝硬化合并肝癌大鼠模型。用免疫组织化学法检测模型大鼠肝脏组织Klf 6、转化生长因子-β1(TGF-β1)、p21及α-平滑肌动蛋白(α-SMA)的表达水平。RT-PCR技术检测大鼠肝脏组织中Klf 6基因mRNA表达水平。结果:成功制备了酒精性肝纤维化、肝硬化合并肝癌大鼠模型,不同白酒诱导大鼠肝纤维化、肝硬化合并肝癌的程度不同。Klf 6、p21在白酒A组(AD组和AG组)的表达率高于白酒B组(BD组和BG组),差异有统计学意义(P<0.05);TGF-β1,α-SMA在白酒B组(BD组和BG组)表达高于白酒B组(BD组和BG组),差异有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR结果显示,白酒A组(AD组和AG组)肝组织Klf 6基因的mRNA表达高于白酒B组(BD组和BG组),差异有统计学意义(P<0.05)。结论:不同白酒对酒精性肝纤维化,肝硬化合并肝癌大鼠肝脏Klf 6、p21、TGF-β1和α-SMA的表达不同,可能是导致酒精性肝病(ALD)的程度不同的机制之一。

ACTL8表达与子宫内膜癌的发生及细胞侵袭、迁移能力的关系

目的探讨子宫内膜癌组织中肌动蛋白样蛋白8(ACTL8)表达与肿瘤发生及癌细胞侵袭、迁移能力的关系。方法回顾性选取2020年3月至2021年3月恩施土家族苗族自治州中心医院妇儿医院病理科收集的68例子宫内膜癌组织(病例组),并选取45例正常子宫内膜作为对照组。采用蛋白质印迹法检测两组标本中的ACTL8蛋白。选取人子宫内膜癌KLE细胞系,以携带shRNA特异序列的载体及空载质粒分别KLE细胞系,形成敲出ACTL8基因的sh ACTL8-1组、sh ACTL8-2组及以空载质粒转染KLE细胞系的对照组。采用荧光定量PCR检测3组细胞中ACTL8 RNA表达,采用蛋白质印迹法检测3组细胞ACTL8蛋白表达,采用Transwell迁移和侵袭实验分析KLE细胞系培养后的侵袭和迁移能力差异。结果病例组标本中的ACTL8蛋白的相对表达强度为0.983±0.211,对照组标本中的ACTL8蛋白的相对表达强度为0.377±0.089,子宫内膜癌组织中的ACTL8蛋白相对表达强度显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。在年龄≥55岁、子宫内膜癌分级G3级、FIGO分期(Ⅲ期+Ⅳ期)的子宫内膜癌组织中的ACTL8蛋白的相对表达强度高于<55岁、子宫内膜癌分级(G1+G2)、FIGO分期(Ⅰ期+Ⅱ期)的患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。对照组的ACTL8 RNA、ACTL8蛋白表达显著高于sh ACTL8-1组、sh ACTL8-2组,差异有统计学意义(P<0.05);sh ACTL8-1组、的ACTL8 RNA、ACTL8蛋白表达显著高于sh ACTL8-2组,差异有统计学意义(P<0.05)。sh ACTL8组的侵袭、迁移细胞数目均低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论子宫内膜癌组织中ACTL8蛋白表达上调并且与肿瘤发生发展关系密切;ACTL8基因表达与肿瘤细胞侵袭及迁移能力有关。

下调肌动蛋白丝相关蛋白1相似蛋白2表达对人肝癌Hep3B细胞增殖及凋亡的影响

目的观察肌动蛋白丝相关蛋白1相似蛋白2在人肝细胞癌细胞中的表达及下调后对增殖生存的影响并探讨其机制。方法以蛋白免疫印迹法(Western blot)及实时定量逆转录聚合酶链反应法(q RT-PCR)检测肝细胞癌细胞株中肌动蛋白丝相关蛋白1相似蛋白2表达,并采用小干扰RNA转染Hep3B细胞株对肌动蛋白丝相关蛋白1相似蛋白2表达进行下调,Western blot和q RT-PCR检测转染效率、增殖凋亡相关基因表达;甲基噻唑基四唑检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期及凋亡。结果肌动蛋白丝相关蛋白1相似蛋白2蛋白及m RNA在肝癌细胞株Hep3B、Huh7、Hep G2、MHCC97H中均有表达,在Hep3B细胞株中表达量最高(F=5.742,P<0.01;F=3.452,P<0.05);与空白对照(si NC)组比较,si肌动蛋白丝相关蛋白1相似蛋白2组中P-P21及磷酸化的蛋白激酶B蛋白表达下调(t=8.462,P<0.01;t=9.742,P<0.01),P21、蛋白激酶B及Cleaved Capase-9蛋白表达上调(t=12.247,P<0.001;t=6.452,P<0.01;t=11.634,P<0.001;t=12.273,P<0.001);与si NC组比较,在72 h和96 h,si肌动蛋白丝相关蛋白1相似蛋白2表达下调后Hep3B细胞增殖能力下降(t=8.176,P<0.01;t=2.246,P<0.05),Hep3B停留在G1期比例增高,G_2及S期比例减少(t=4.23,P<0.05;t=2.13,P<0.05;t=5.72,P<0.05),凋亡率升高(t=8.633,P<0.01)。结论下调肌动蛋白丝相关蛋白1相似蛋白2表达通过P21磷酸化及磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路抑制肝细胞癌细胞增值及生存,可作为肝细胞癌治疗的靶向候选基因。

肌动蛋白样分子参与TNFRⅡ介导的TM-TNF-α杀瘤活性的研究

目的 寻找并研究参与TM TNF α杀瘤的协同分子 ,进一步揭示TM TNF α发挥生物学作用的特征 ,阐明其与S TNF α功能差异的分子机制。方法 利用免疫共沉淀法、质谱分析、Westernblot及细胞毒实验探索参与TM TNF α杀瘤功能的协同作用分子并确定其性质。结果 TM TNF α免疫共沉淀产物中发现一相对分子质量 (Mr)为 4 3× 10 3蛋白分子 ,用质谱分析及Westernblot证实该分子属于肌动蛋白家族 ;用抗肌动蛋白抗体封闭效应细胞和 或靶细胞后 ,TM TNF α对主要表达TNFRⅡ的肿瘤细胞HL 6 0的杀伤作用显著下降 ,而对主要表达TNFRⅠ的肿瘤细胞MCF 7则无影响。结论 Mr为 4 3× 10 3的肌动蛋白样分子可能参与并增强TM TNF α通过TNFRⅡ介导的杀瘤功能。

AFAP-1L2对胰腺癌细胞侵袭及转移的影响及机制

目的:探讨AFAP-1L2表达下调对胰腺癌细胞的影响及其机制。方法:人胰腺癌SW1990细胞分别转染靶向AFAP-1L2的干扰质粒si AFAP-1L2和阴性对照si RNA,以未处理的SW1990细胞为空白对照,检测各组细胞的迁移与侵袭能力,以及肿瘤浸润相关分子的蛋白与m RNA变化;免疫共沉淀法检测AFAP-1L2蛋白与p85α蛋白相互作用关系。结果:与空白对照SW1990细胞比较,转染si AFAP-1L2下调AFAP-1L2后,SW1990细胞的迁移与侵袭能力明显降低,p85α及α-p Akt表达降低,α-Akt表达升高(均P<0.05),MMP-9与E-cadherin表达无变化(均P>0.05);转染阴性对照si RNA的SW1990细胞各项指标无明显变化(均P>0.05)。免疫共沉淀显示,胰腺癌SW1990细胞中AFAP-1L2蛋白与p85α蛋白存在相互作用。结论:AFAP-1L2可能通过与p85α相互作用调控PI3K/Akt通路,从而影响胰腺癌细胞的迁移及浸润,下调AFAP-1L2表达能抑制胰腺癌细胞迁移与侵袭能力。

下调XB130表达对胃癌HGC-27细胞增殖及凋亡的影响

【目的】观察下调肌动蛋白丝相关蛋白1相似蛋白2(actin filament-associated protein 1-like 2,XB130)表达对胃癌细胞增殖及凋亡的影响并探讨其机制。【方法】以Western blotting及q RT-PCR检测4种胃癌细胞株(HGC-27、KATOⅢ、N87、SNU-1)中XB130表达水平;构建小RNA干扰质粒si XB130,转染HGC-27细胞,以Western blotting及q RT-PCR检测转染效率及转染后凋亡相关基因(Cleaved-PARP、Cleaved-Caspase3)表达水平;MTT法检测转染后细胞增殖,流式细胞术检测转染后细胞凋亡。【结果】4种胃癌细胞株中XB130蛋白及m RNA均有表达,其中以HGC-27细胞表达水平最高。转染si XB130至HGC-27细胞后显示,si XB130组细胞增殖率在72 h及96 h低于MOCK组及si NC组(F=3.991,P<0.05;F=2.804,P<0.05),而凋亡率则高于MOCK组及si NC组(F=14.261,P<0.001);与MOCK及si NC组对比,si XB130组中Cleaved-PARP蛋白及m RNA表达水平降低,CleavedCaspase3则升高。【结论】下调胃癌细胞XB130表达可抑制增殖和促进其凋亡,XB130可作为胃癌治疗靶向候选基因。