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Association between infection of different strains of Porphyromonas gingivalis and Actinobacillus actinomycetemcomitans in subgingival plaque and clinical parameters in chronic periodontitis 被引量:4
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作者 WU Yan-min YAN Jie +1 位作者 CHEN Li-li GU Zhi-yuan 《Journal of Zhejiang University-Science B(Biomedicine & Biotechnology)》 SCIE CAS CSCD 2007年第2期121-131,共11页
Objective: The aim of this study was to investigate subgingival infection frequencies ofPorphyromonas gingivalis and Actinobacillus actinomycetemcomitans strains with genetic variation in Chinese chronic periodontit... Objective: The aim of this study was to investigate subgingival infection frequencies ofPorphyromonas gingivalis and Actinobacillus actinomycetemcomitans strains with genetic variation in Chinese chronic periodontitis (CP) patients and to evaluate its correlation with clinical parameters. Methods: Two multiplex polymerase chain reaction (PCR) assays were developed to detect the 16SrDNA, collagenase (prtC) and fimbria (fimA) genes of P. gingivalis and the 16SrDNA, leukotoxin (lktA) and fimbria-associated protein (fap) genes ofA. actinomycetemcomitans in 60 sulcus samples from 30 periodontal healthy subjects and in 122 subgingival plaque samples from 61 patients with CP. The PCR products were further T-A cloned and sent for nucleotide sequence analysis. Results: The 16SrDNA,prtC andfimA genes ofP. gingivalis were detected in 92.6%, 85.2% and 80.3% of the subgingival plaque samples respectively, while the 16SrDNA, lktA andfap genes ofA. actinomycetemcomitans were in 84.4%, 75.4% and 50.0% respectively. Nucleotide sequence analysis showed 98.62%-100% homology of the PCR products in these genes with the reported sequences. P. gingivalis strains with prtC+/fimA+ and A. actinomycetemcomitans with lktA+ were predominant in deep pockets (〉6 mm) or in sites with attachment loss 〉5 mm than in shallow pockets (3-4 mm) or in sites with attachment loss 〈2 mm (P〈0.05). P. gingivalis strains withprtC+/fimA+ also showed higher frequency in gingival index (GI)=3 than in GI=1 group (P〈0.05). Conclusion: Infection ofP. gingivalis with prtC+/fimA+ and A. actinomycetemcomitans with lktA+ correlates with periodontal destruction of CP in Chinese. Nonetheless P. gingivalis fim4, prtC genes and A. actinomycetem- comitans lktA gene are closely associated with periodontal destruction, while A. actinomycetemcomitansfap gene is not. 展开更多
关键词 Porphyromonas gingivalis actinobacillus actinomycetemcomitans STRAIN PERIODONTITIS PCR
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AaGroEL对OMECs增殖的影响及其作用机制研究
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作者 雷先会 赵蔚萍 杨森 《西南国防医药》 CAS 2019年第5期526-528,共3页
目的探讨HSP60的细菌同源物GroEL(AaGroEL)对口腔黏膜上皮细胞(OMECs)增殖的影响及其作用机制。方法从15名正常牙周健康者的口腔黏膜中分离OMECs,随机分为HSP60组和对照组;从放线共生放线杆菌(A.a)中提取并纯化AaGroEL,将0.25 g/ml的AaG... 目的探讨HSP60的细菌同源物GroEL(AaGroEL)对口腔黏膜上皮细胞(OMECs)增殖的影响及其作用机制。方法从15名正常牙周健康者的口腔黏膜中分离OMECs,随机分为HSP60组和对照组;从放线共生放线杆菌(A.a)中提取并纯化AaGroEL,将0.25 g/ml的AaGroEL加入HSP60组,对照组则加入溶媒。分别于孵育0、6、12、24、48、72、96、144 h时,采用细胞增殖试剂盒检测各组细胞增殖抑制率;于孵育12 h和96 h时,采用实时定量PCR检测细胞内信号调节激酶(ERK)、丝裂原激活蛋白激酶p38 (p38)、蛋白磷酸酶1(PP1)和热休克蛋白60(HSP60)的表达水平。结果与对照组相比,AaGroEL与OMECs孵育12 h前,显著促进OMECs的增殖;而孵育12 h后,则显著抑制OMECs的增殖。与对照组对比,AaGroEL处理12 h时,可显著增加ERK1和ERK2的表达,抑制p38和PP1的表达(P <0.05);而处理96 h时,ERK1和ERK2的表达降低,p38和PP1的表达均增加(P <0.05)。AaGroEL处理12 h时,可抑制热刺激诱导的胞内HSP60表达的增加(P <0.05)。结论 AaGroEL短期处理促进OMECs增殖,而长期处理则抑制OMECs增殖,其机制可能与AaGroEL双调控MAPK信号通路有关。 展开更多
关键词 热休克蛋白60 GROEL 放线共生放线杆菌 口腔黏膜 上皮细胞
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基础治疗对慢性牙周炎临床疗效和龈下牙周致病菌的影响 被引量:11
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作者 束蓉 宋忠臣 +6 位作者 葛琳华 顾晶晶 程岚 谢玉峰 李超伦 刘晓峰 刘大力 《上海口腔医学》 CAS CSCD 2010年第3期225-227,共3页
目的:评价牙周基础治疗对慢性牙周炎临床疗效及龈下牙周致病菌的影响。方法:纳入慢性牙周炎患者120例,在牙周基础治疗前和治疗后1个月时检查牙周探诊深度(probing depth,PD)、附着丧失(attachment loss,AL)、菌斑指数(plaque index,PLI... 目的:评价牙周基础治疗对慢性牙周炎临床疗效及龈下牙周致病菌的影响。方法:纳入慢性牙周炎患者120例,在牙周基础治疗前和治疗后1个月时检查牙周探诊深度(probing depth,PD)、附着丧失(attachment loss,AL)、菌斑指数(plaque index,PLI)和牙龈指数(gingival index,GI)。采用实时荧光定量聚合酶链反应法(real-timePCR)检测基础治疗前和治疗后6周时龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌(P.g)和伴放线放线杆菌(A.a)比例的变化。采用SAS6.12软件包对所得数据进行t检验。结果:各项指数在治疗前、后比较差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后P.g占总菌的比例与基线相比有显著性差异(P<0.05),治疗后A.a占总菌的比例与基线相比,无显著差异(P>0.05)。结论:基础治疗可以有效治疗慢性牙周炎,并能降低致病菌P.g的比例。 展开更多
关键词 慢性牙周炎 临床指标 牙龈卟啉单胞菌 伴放线放线杆菌
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放线共生放线杆菌表面相关物质对人牙龈成纤维细胞DNA合成和细胞周期的影响 被引量:6
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作者 张亚庆 肖明振 +1 位作者 赵守亮 陈新梅 《牙体牙髓牙周病学杂志》 CAS 2001年第4期231-233,共3页
目的 :观察放线共生放线杆菌表面相关物质对人牙龈成纤维细胞的DNA合成和细胞周期的影响。方法 :应用流式细胞仪技术。结果 :10 0mg/L组明显抑制细胞DNA合成 ,细胞增殖指数 (S +G2 M) %降低(P <0 .0 5 )。结论 :此物质不仅抑制细胞... 目的 :观察放线共生放线杆菌表面相关物质对人牙龈成纤维细胞的DNA合成和细胞周期的影响。方法 :应用流式细胞仪技术。结果 :10 0mg/L组明显抑制细胞DNA合成 ,细胞增殖指数 (S +G2 M) %降低(P <0 .0 5 )。结论 :此物质不仅抑制细胞的分裂、增殖 。 展开更多
关键词 放线共生放线杆菌 流式细胞仪技术 成纤维细胞 牙龈
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放线共生放线杆菌表面相关物质对人牙龈成纤维细胞的增殖抑制作用 被引量:4
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作者 张亚庆 肖明振 +2 位作者 陈建元 孙叶芳 赵守亮 《牙体牙髓牙周病学杂志》 CAS 1998年第2期123-125,共3页
目的:观察放线共生放线杆菌表面相关物质对人牙龈成纤维细胞的增殖抑制作用。方法:采用细胞计数法和图像分析法观察对人牙龈成纤维细胞的生长抑制作用。结果:此物质抑制作用明显,能抑制细胞的分裂、增殖,使细胞、细胞核面积增大,... 目的:观察放线共生放线杆菌表面相关物质对人牙龈成纤维细胞的增殖抑制作用。方法:采用细胞计数法和图像分析法观察对人牙龈成纤维细胞的生长抑制作用。结果:此物质抑制作用明显,能抑制细胞的分裂、增殖,使细胞、细胞核面积增大,100mg/L对与对照组差别显著(P<0.05),且细胞无死亡现象。结论:此物质可明显抑制人牙龈成纤维细胞的生长、增殖。 展开更多
关键词 放线杆菌 人牙龈 成纤维细胞 Y4 增殖抑制作用
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慢性牙周炎患者抗伴放线放线杆菌IgG滴度改变的临床意义 被引量:3
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作者 冯向辉 徐莉 +3 位作者 孟焕新 张立 陈智滨 释栋 《北京大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期207-210,共4页
目的:明确慢性牙周炎(chronic periodontitis,CP)患者血清抗伴放线放线杆菌(Aggregatibacter actinomyce-temcomitans,Aa)血清c型的抗体反应并探讨其与牙周临床指标的关系。方法:采集30例CP患者和45例牙周健康者的空腹静脉血,同时收集C... 目的:明确慢性牙周炎(chronic periodontitis,CP)患者血清抗伴放线放线杆菌(Aggregatibacter actinomyce-temcomitans,Aa)血清c型的抗体反应并探讨其与牙周临床指标的关系。方法:采集30例CP患者和45例牙周健康者的空腹静脉血,同时收集CP患者的龈下菌斑和非刺激性全唾液用于Aa的检测(PCR方法),应用酶联免疫吸附方法(ELISA)测定血清中抗Aa血清c型IgG抗体滴度。结果:CP组和健康对照组血清抗Aa血清c型抗体检出率均为100%。CP组IgG抗体滴度高于健康对照组,差异有统计学意义[(10.9±1.9)vs(9.1±1.8),P=0.000];同时CP组抗体滴度升高率也高于健康对照组,差异有统计学意义(23.3%vs0%,P=0.003)。龈下菌斑或唾液Aa检出阳性的7例慢性牙周炎患者血清IgG抗体滴度(12.6±1.6)高于Aa阴性患者(10.4±1.7),差异有统计学意义(P=0.005)。CP患者血清抗AaIgG抗体滴度与全口平均探诊深度呈正相关(r=0.344,P=0.068)。结论:血清c型为CP患者定植的Aa的重要血清型;CP患者血清抗Aa抗体并非简单的保护作用。 展开更多
关键词 牙周炎 放线杆菌 伴放射菌 免疫球蛋白G 血清分型
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采用PCR方法鉴别伴放线放线杆菌的6种血清型 被引量:4
7
作者 钟德钰 宋文斌 +2 位作者 袁昌青 葛春旭 徐全臣 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期855-858,共4页
目的:探索采用PCR的方法对伴放线放线杆菌的不同菌株进行血清型分类。方法:根据伴放线放线杆菌不同血清型特异性多糖抗原基因序列设计6对不同的寡核苷酸引物,用这6对引物分别对所选择伴放线放线杆菌6种不同的血清型菌株各3株,共18株,其... 目的:探索采用PCR的方法对伴放线放线杆菌的不同菌株进行血清型分类。方法:根据伴放线放线杆菌不同血清型特异性多糖抗原基因序列设计6对不同的寡核苷酸引物,用这6对引物分别对所选择伴放线放线杆菌6种不同的血清型菌株各3株,共18株,其中参考菌株6株,系ATCC29523(血清型a),ATCC43718(血清型b),ATCC33384(血清型c),IDH781(血清型d),IDH1705(血清型e)以及CU1000(血清型f),其余12个菌株均为临床分离株的DNA进行PCR扩增分析。结果:每一对引物均针对相应的血清型产生特异性单一条带PCR产物,产物大小分别为428bp(a),298bp(b),559bp(c),690bp(d),211bp(e),232bp(f)。全部18个菌株均能够被准确识别,无交叉反应。结论:PCR方法可以快速准确地鉴别伴放线放线杆菌目前已知的全部6种血清型。 展开更多
关键词 伴放线放线杆菌 血清分型 聚合酶链反应
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伴放线放线杆菌与牙周病相关细胞凋亡关系的研究 被引量:7
8
作者 张迪亚 李盛来 陈莉丽 《国际口腔医学杂志》 CAS 2007年第2期94-96,109,共4页
牙周病是口腔的常见病和多发病,但其具体机制至今尚未完全明了。大量研究证实,细胞凋亡在牙周病的发生和发展过程中起重要作用。伴放线放线杆菌是牙周炎主要致病菌之一,可产生多种毒力因子。本文就伴放线放线杆菌的各种毒力因子与细胞... 牙周病是口腔的常见病和多发病,但其具体机制至今尚未完全明了。大量研究证实,细胞凋亡在牙周病的发生和发展过程中起重要作用。伴放线放线杆菌是牙周炎主要致病菌之一,可产生多种毒力因子。本文就伴放线放线杆菌的各种毒力因子与细胞凋亡及伴放线放线杆菌与牙周组织内多种细胞凋亡的关系进行综述。 展开更多
关键词 伴放线放线杆菌 牙周病 细胞凋亡
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伴放线放线杆菌flp-1基因遗传多样性分析 被引量:6
9
作者 刘冬宇 王者玲 +3 位作者 王明荣 徐昕 蔡岩 杨圣辉 《北京口腔医学》 CAS 2004年第1期18-21,共4页
目的 :分析伴放线放线杆菌 (Actinobacillusactinomycetemcomitans,Aa)临床分离菌株菌毛结构基因flp 1的遗传多样性和flp 1基因与菌株表型之间的关系。方法 :对从不同牙周状况患者口腔中分离的 6 0株Aa(5 7株粗糙型 ,3株传代转变成光滑... 目的 :分析伴放线放线杆菌 (Actinobacillusactinomycetemcomitans,Aa)临床分离菌株菌毛结构基因flp 1的遗传多样性和flp 1基因与菌株表型之间的关系。方法 :对从不同牙周状况患者口腔中分离的 6 0株Aa(5 7株粗糙型 ,3株传代转变成光滑型 )和 6株Aa标准菌株 (光滑型 )进行flp 1基因扩增 ,并通过PCR限制性片段长度多态性 (PCR RFLP)法分析临床分离菌株flp 1基因的遗传多样性。结果 :所有 5 7株粗糙型菌株和 9株光滑型菌株都检测到flp 1基因 ;6 0株临床分离菌株检测到 5种flp 1基因型 ,其中基因型 2型占 6 7% ,共有 4 0株。结论 :Aa菌株表型的改变不伴有flp 1基因缺失 ;Aa临床分离菌株flp 1基因具有遗传多样性 ,基因型主要为 展开更多
关键词 伴放线放线杆菌 flp-1基因 基因多态性 基因缺失 侵袭性牙周炎 菌株鉴定
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放线共生放线杆菌表面相关物质对人牙龈成纤维细胞超微结构的影响 被引量:6
10
作者 张亚庆 肖明振 赵守亮 《实用口腔医学杂志》 CSCD 北大核心 1999年第1期21-23,共3页
目的:观察放线共生放线杆菌对人牙龈成纤维细胞超微结构的影响。方法:100mg/L细菌表面相关物质和人牙龈成纤维细胞在CO2孵箱内培养72h后,采用透射电镜观察细菌表面相关物质对成纤维细胞超微结构的影响。结果:主要使细... 目的:观察放线共生放线杆菌对人牙龈成纤维细胞超微结构的影响。方法:100mg/L细菌表面相关物质和人牙龈成纤维细胞在CO2孵箱内培养72h后,采用透射电镜观察细菌表面相关物质对成纤维细胞超微结构的影响。结果:主要使细胞粗面内质网扩张,线粒体水肿,溶酶体增多,但未见膜性结构有明显破坏现象。结论:此物质可影响细胞的超微结构。 展开更多
关键词 牙龈 成纤维细胞 超微结构 放线杆菌
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应激对豚鼠牙周炎模型的影响 被引量:7
11
作者 葛姝云 李德懿 《上海口腔医学》 CAS CSCD 2003年第1期30-33,共4页
目的探讨应激对豚鼠牙周炎模型的影响。方法龈沟接种伴放线放线杆菌和牙龈卟啉单胞菌,制备豚鼠牙周炎模型24只,随机分为应激组12只(冷刺激和惊吓刺激)和对照组12只(无刺激),于1、2、4、6周后分批处死,进行临床参数、病理切片、破骨细胞... 目的探讨应激对豚鼠牙周炎模型的影响。方法龈沟接种伴放线放线杆菌和牙龈卟啉单胞菌,制备豚鼠牙周炎模型24只,随机分为应激组12只(冷刺激和惊吓刺激)和对照组12只(无刺激),于1、2、4、6周后分批处死,进行临床参数、病理切片、破骨细胞和成骨细胞计数以及血清皮质醇浓度检测。结果应激组第1、2、4周皮质醇浓度升高,第2、4周牙周袋深度与对照组比较有明显差异(P<0.05或P <0.01)。病理切片显示:与对照组相比,应激组牙周破坏更明显,骨修复不活跃,应激组第1、4、6周破骨细胞计数明显增高(P<0.05)。结论应激加重致病菌感染后牙周组织的破坏,延缓组织修复,是牙周炎的重要危险因子。 展开更多
关键词 牙周炎模型 应激 放线放线杆菌 牙龈卟琳单胞菌
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抗牙龈卟啉单胞菌IgY的制备及抑菌效果 被引量:6
12
作者 胡国柱 聂荣庆 +2 位作者 张进 文珠 唐宁 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期337-340,共4页
目的:使用牙龈卟啉单胞菌(P.g)诱导产蛋母鸡特异性IgY抗体产生及制备,特异性IgY抗体抑制P.g及其它牙周病病因菌生长。方法:采用免疫接种、水稀释、盐析、液体培养抑菌及ELISA等方法,诱导、提纯IgY抗体,抑制P.g及其它牙周病病因菌生长。... 目的:使用牙龈卟啉单胞菌(P.g)诱导产蛋母鸡特异性IgY抗体产生及制备,特异性IgY抗体抑制P.g及其它牙周病病因菌生长。方法:采用免疫接种、水稀释、盐析、液体培养抑菌及ELISA等方法,诱导、提纯IgY抗体,抑制P.g及其它牙周病病因菌生长。结果:诱导产生的IgY抗体经硫酸铵盐析提取纯度达87.6%~89.1%,IgY特异性结合牙龈卟啉单胞菌抗原的结合效价1∶1600。制备的抗牙龈卟啉单胞菌IgY抗体与牙龈二氧化碳噬纤维菌、中间普氏菌、伴放线放线杆菌、具核梭杆菌等牙周病致病菌的交叉免疫反应抗原结合效价分别为1∶800、1∶800、1∶6400、1∶12800。抗牙龈卟啉单胞菌IgY在5.0、1.0、0.1g/L时,分别与牙龈卟啉单胞菌、牙龈二氧化碳噬纤维菌、伴放线放线杆菌、中间普氏菌、具核梭杆菌、粘性放线菌、变形链球菌等厌氧菌在(1×108)CFU/L和(5×108)CFU/L时培养24h和72h均有不同程度的抑制其生长作用。结论:牙龈卟啉单胞菌免疫产蛋母鸡诱导产生的特异性IgY抗体在一定的浓度内有抑制牙龈卟啉单胞菌生长,以及抑制多种牙周病致病菌生长的作用。牙龈卟啉单胞菌与这些牙周病病因均存在着共同抗原,其可能具有防治牙周病的前景。 展开更多
关键词 牙龈卟啉单胞菌 牙龈二氧化碳噬纤维菌 中间普氏菌 伴放线放线杆菌 具核梭杆菌 粘性放线菌 变型链球菌 IGY 细菌抑制
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磷酸锆载银抗菌剂对种植体周炎致病菌抗菌效能研究 被引量:4
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作者 朱梓园 张富强 +2 位作者 李鸣宇 朱彩莲 郑学斌 《上海第二医科大学学报》 CSCD 北大核心 2005年第4期356-358,共3页
目的研究磷酸锆载银抗菌剂对种植体周炎致病菌的抗菌效能。方法将载银磷酸锆抗菌剂用无菌中心脑浸液(BHI)培养基稀释成浓度从10mg/mL到0.020mg/mL递减的抗菌剂应用液,与1×106CFU/mL的牙龈卟啉单胞菌(Pg)、具核梭杆菌(Fn)、伴放线... 目的研究磷酸锆载银抗菌剂对种植体周炎致病菌的抗菌效能。方法将载银磷酸锆抗菌剂用无菌中心脑浸液(BHI)培养基稀释成浓度从10mg/mL到0.020mg/mL递减的抗菌剂应用液,与1×106CFU/mL的牙龈卟啉单胞菌(Pg)、具核梭杆菌(Fn)、伴放线放线杆菌(Aa)标准菌液混合,厌氧恒温培养48h,划线接种后计数菌落数,取无细菌生长的最低抗菌剂浓度为其最小杀菌浓度。结果磷酸锆载银抗菌剂对Pg、Fn和Aa的最小杀菌浓度分别为0.039、0.313、0.625mg/mL。抗菌剂对三种细菌杀菌能力由强到弱依次为Pg>Fn>Aa。结论磷酸锆载银抗菌剂对Pg、Fn和Aa均具有杀菌效能,可用于对抗种植体周炎的致病菌。 展开更多
关键词 载银抗菌剂 种植体周炎 牙龈单胞卟啉菌 具核梭杆菌 伴放线放线杆菌
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伴放线放线杆菌cdtC基因的克隆及其原核表达载体pET15b-cdtC的构建 被引量:4
14
作者 王晓茜 李璐 徐艳 《口腔医学研究》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期153-156,共4页
目的:本实验设计克隆Aa CdtC亚基蛋白的编码基因cdtC并构建其原核表达载体pET 15b-cdtC,为研究CdtC亚基对CDT全毒素功能的分子机制奠定基础。方法:厌氧培养Aa ATCC 29523,提取Aa基因组DNA,PCR反应扩增cdtC基因片段。将此片段克隆入pMD 1... 目的:本实验设计克隆Aa CdtC亚基蛋白的编码基因cdtC并构建其原核表达载体pET 15b-cdtC,为研究CdtC亚基对CDT全毒素功能的分子机制奠定基础。方法:厌氧培养Aa ATCC 29523,提取Aa基因组DNA,PCR反应扩增cdtC基因片段。将此片段克隆入pMD 19-T Vector,经限制性内切酶BamHI和Xho I酶切得到粘性末端cdtC片段,克隆入原核表达载体pET 15b中。结果:产物经PCR初步鉴定后进行DNA序列分析,测序结果与Genbank公布序列一致性达100%。结论:本实验成功克隆了cdtC基因,并成功构建了其原核表达载体pET15b-cdtC。为深入研究CdtC亚基以及CDT全毒素分子作用机制奠定基础。 展开更多
关键词 伴放线放线杆菌 基因克隆 cdtC 原核表达载体
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放线共生放线杆菌表面相关物质对Mc3T3-E1细胞的增殖抑制作用 被引量:2
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作者 张亚庆 肖明振 +1 位作者 赵守亮 陈建元 《牙体牙髓牙周病学杂志》 CAS 1998年第4期260-262,共3页
目的:观察放线共生放线杆菌表面相关物质对成骨样细胞Mc3T3-E1的增殖抑制作用。方法:采用细胞计数法和图像分析法观察。结果:此物质抑制作用明显,能抑制细胞分裂、增殖,使细胞、细胞核面积增大,100μg/ml与对照组... 目的:观察放线共生放线杆菌表面相关物质对成骨样细胞Mc3T3-E1的增殖抑制作用。方法:采用细胞计数法和图像分析法观察。结果:此物质抑制作用明显,能抑制细胞分裂、增殖,使细胞、细胞核面积增大,100μg/ml与对照组差别显著(P<0.05),且细胞无死亡现象。结论:此物质可明显抑制成骨样细胞Mc3T3-E1的生长、增殖。 展开更多
关键词 放线共生放线菌 MC3T3-E1细胞 牙周病
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放线共生放线杆菌菌毛重组蛋白的提取及纯化 被引量:1
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作者 李毅 郭学军 +2 位作者 杨涛 冯书章 孙宏晨 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期370-374,共5页
目的:对大肠杆菌表达的放线共生放线杆菌菌毛重组蛋白LTB-FAP进行提取和纯化,为其用于牙周病的治疗提供理论依据。方法:将重组质粒pET28a/LTB和pET28a/LTB-FAP分别转化到大肠杆菌中进行表达,通过超声裂解法获得以包涵体形式表达的重组... 目的:对大肠杆菌表达的放线共生放线杆菌菌毛重组蛋白LTB-FAP进行提取和纯化,为其用于牙周病的治疗提供理论依据。方法:将重组质粒pET28a/LTB和pET28a/LTB-FAP分别转化到大肠杆菌中进行表达,通过超声裂解法获得以包涵体形式表达的重组外源蛋白LTB-FAP;用2,4,6和8mol·L-1尿素缓冲液对重组蛋白进行洗涤、溶解;然后用阴离子交换和凝胶过滤柱层析对重组蛋白进行纯化,采用薄层扫描仪对蛋白纯度进行测定。结果:目的包涵体蛋白经过3次4mol·L-1尿素洗涤,6mol·L-1尿素溶解后,经薄层扫描可获得纯度为60%的目的蛋白;经离子交换层析纯化,蛋白纯度可达约75%;Sepharose 6B行凝胶过滤层析获得了纯度可达90%的重组蛋白LTB-FAP。结论:阴离子交换和凝胶过滤柱层析的方法可提取、纯化重组蛋白LTB-FAP,获得的LTB-FAP可以用于免疫机体。 展开更多
关键词 放线共生放线杆菌 LTB-FAP 提取 纯化
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放线共生放线杆菌粗糙型与光滑型菌落的主要外膜蛋白 被引量:2
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作者 王者玲 DAISUKE Kato +3 位作者 大岛友子 高尾亚由子 前田伸子 杨圣辉 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2002年第3期153-154,共2页
目的 :观察放线共生放线杆菌粗糙型与光滑型菌株菌体蛋白表达上的差异。方法 :聚丙稀酰胺凝胶电泳观察两型细菌全细胞蛋白及超高速离心提取的细菌主要外膜蛋白差异。结果 :全细胞蛋白电泳两型细菌蛋白带无明显差异 ;提取的主要外膜蛋白... 目的 :观察放线共生放线杆菌粗糙型与光滑型菌株菌体蛋白表达上的差异。方法 :聚丙稀酰胺凝胶电泳观察两型细菌全细胞蛋白及超高速离心提取的细菌主要外膜蛋白差异。结果 :全细胞蛋白电泳两型细菌蛋白带无明显差异 ;提取的主要外膜蛋白电泳粗糙型存在 18、2 9、4 5 k Da蛋白带 ,实验室参考菌株不存在 ,临床光滑型菌株存在少量。光滑型实验室参考菌株存在的蛋白带在所有实验菌株中均存在。结论 :18、2 9、4 5 k 展开更多
关键词 放线共生放线杆菌 粗糙型 光滑型菌落 外膜蛋白
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B淋巴细胞对牙周致病菌免疫反应及骨细收因子RANKL表达的影响 被引量:6
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作者 林晓萍 韩晓哲 +1 位作者 魏巍 Martin A. Taubman 《上海口腔医学》 CAS CSCD 2009年第4期392-396,共5页
目的:通过评价B淋巴细胞与牙周致病菌——伴放线放线杆菌(Aa)发生免疫反应过程中核因子-КB受体活化配体(RANKL)的表达,探讨B淋巴细胞是否参与Aa引起的牙周骨吸收。方法:采用RT-PCR方法测定大鼠脾细胞中第1和7d细胞因子的mRNA转录水平,... 目的:通过评价B淋巴细胞与牙周致病菌——伴放线放线杆菌(Aa)发生免疫反应过程中核因子-КB受体活化配体(RANKL)的表达,探讨B淋巴细胞是否参与Aa引起的牙周骨吸收。方法:采用RT-PCR方法测定大鼠脾细胞中第1和7d细胞因子的mRNA转录水平,采用流式细胞技术测定大鼠脾细胞中B细胞表达RANKL IgG阳性细胞的百分数,应用TRAP法评价B淋巴细胞对破骨细胞分化的诱导潜力。实验结果采用SPSS 10.0软件包进行分析。结果:在无Aa抗原刺激的条件下,大鼠脾细胞培养1d和7d的TNF-α及IL-4表达水平均升高,IL-10、RANKL的表达水平无明显变化;加入Aa组培养1d时,TNF-α的表达显著增加,7d后,IL-4、IL-10及RANKL的mRNA转录水平显著增加;B细胞的百分数以及表达RANKL的IgG阳性细胞百分数与不加Aa组相比显著增加;Aa免疫组加入Aa培养后,表达RANKL的IgG阳性细胞百分数增加显著高于非免疫组。Aa免疫组的B淋巴细胞与RAW 264.7细胞共同培养后,TRAP染色阳性细胞显著增加(P<0.01);加入人OPG-Fc培养,可显著抑制TRAP阳性细胞的形成(P<0.05)。结论:B淋巴细胞经特异性抗原Aa活化后,通过上调RANKL的表达,增加对破骨细胞分化的诱导潜力,参与牙周骨吸收。 展开更多
关键词 牙周病 动物模型 核因子-КB受体活化配体 B淋巴细胞 免疫反应 伴放线放线杆菌
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寡核苷酸探针检测龈下菌斑中伴放线菌放线杆菌的分布 被引量:2
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作者 张贤华 吴织芬 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期227-229,共3页
目的 :研究伴放线菌放线杆菌在牙周炎患者和健康人龈下菌斑中的分布。方法 :利用合成的寡核苷酸探针对 6 0例慢性牙周炎患者 6 0患病位点、10例健康人的 10个对照位点龈下菌斑中伴放线菌放线杆菌进行检测。结果 :6 0个患病位点中有 19... 目的 :研究伴放线菌放线杆菌在牙周炎患者和健康人龈下菌斑中的分布。方法 :利用合成的寡核苷酸探针对 6 0例慢性牙周炎患者 6 0患病位点、10例健康人的 10个对照位点龈下菌斑中伴放线菌放线杆菌进行检测。结果 :6 0个患病位点中有 19位点检出伴放线菌放线杆菌 ,检出率为 31.6 7% ,在健康部位未检测出伴放线菌放线杆菌 ,二者差异有统计学意义 (P<0 .0 5 ) ;检出伴放线菌放线杆菌的患者的年龄是 (2 8.6 8±7.33)岁 ,未检出伴放线菌放线杆菌的患者的年龄是 (44 .48± 12 .48)岁 ,二者差异有统计学意义 (P <0 .0 1)。结论 :伴放线菌放线杆菌与年轻患者慢性牙周炎的发生、发展密切相关。 展开更多
关键词 牙周炎 伴放线菌放线杆菌 寡核苷酸探针
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伴放线放线杆菌菌毛融合蛋白基因的克隆 被引量:1
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作者 李毅 孙宏晨 +1 位作者 郭学军 冯书章 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期24-25,40,共3页
目的 探讨克隆伴放线放线杆菌菌毛融合蛋白基因ltb_fap的方法。方法 采用PCR方法扩增伴放线放 线杆菌菌毛相关蛋白(Fap)和大肠杆菌不耐热性肠毒素B亚单位(Ltb)的融合蛋白基因ltb_fap,NcoⅠ EcoRⅠ双酶切 载体pET28a(+)及ltb_fa... 目的 探讨克隆伴放线放线杆菌菌毛融合蛋白基因ltb_fap的方法。方法 采用PCR方法扩增伴放线放 线杆菌菌毛相关蛋白(Fap)和大肠杆菌不耐热性肠毒素B亚单位(Ltb)的融合蛋白基因ltb_fap,NcoⅠ EcoRⅠ双酶切 载体pET28a(+)及ltb_fap基因,连接形成重组质粒pETltb_fap,转化至大肠杆菌DH5α,扩增后提取质粒pETltb_fap进 行PCR鉴定、酶切鉴定和序列分析。结果 本实验扩增的ltb基因约为303bp,fap基因约为228bp,融合基因约为 531bp。重组质粒含外源基因片段约为531bp,酶切鉴定可得到一条约531bp带,DNA测序结果表明与GenBank中 的fap基因序列有97.4%的同源性。结论 成功克隆出融合蛋白基因ltb_fap,为进一步进行蛋白表达、制备抗体奠 定基础。 展开更多
关键词 菌毛蛋白 基因克隆 伴放线放线杆菌
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