Actinomucor elegans、Aspegillus oryzae和Rhizopus oligosporus产蛋白酶条件及蛋白酶性质的比较

比较了腐乳生产菌株Actinomucor elegans、豆酱和酱油生产菌株Aspegillus oryzae以及天培生产菌株Rhizopus oligosporus产生蛋白酶的条件和所产蛋白酶的性质。结果表明,不同的菌株产酶条件及蛋白酶的性质有较大的差异:少孢根霉主要产生酸性蛋白酶,在pH2.5-4.0的酸性介质中、32℃条件下培养时产酶能力较强,所分泌的蛋白酶系在pH5.0时酶活力最高,在pH5.0附近最稳定;米曲霉可以产生酸性、中性及碱性蛋白酶,所产生的蛋白酶活力显著高于少孢根霉和毛霉,米曲霉在酸性条件下产酸性蛋白酶能力强,在中性条件下产中性蛋白酶能力强,在碱性条件下产碱性蛋白酶能力强,在28-32℃时产酶能力强,所分泌的蛋白酶系在pH5.0-9.0的广泛范围内有很强的活力,在pH6.0-8.0的范围内稳定性强;毛霉可以产生酸性、中性及碱性蛋白酶,但酶活力明显低于米曲霉,毛霉在中性偏酸性(pH5.5)的介质中产酸性蛋白酶的能力较强,但介质的酸碱度对毛霉产中性及碱性蛋白酶没有影响,在28℃时产酸性、中性和碱性蛋白酶的能力都比较强,毛霉所分泌的蛋白酶系在pH5.0-9.0的广泛pH范围内有活力,在pH5.0-6.0时酶活力最高,在pH5.0-7.0时稳定强。

雅致放射毛霉AS3.2778碱性蛋白酶的纯化及水解特性

毛霉蛋白酶可以高效地水解大豆蛋白,而且对蛋白水解物具有良好的脱苦效果.为了开发这一蛋白酶系,采用离子交换、疏水层析及凝胶层析等方法,从雅致放射毛霉AS3.2778的发酵麸曲中分离纯化出一蛋白酶组分,并对其水解特性进行了探讨.结果显示：纯化后的蛋白酶是一单体蛋白,其相对分子质量大约为32000;该蛋白酶在55℃、pH8.0-10.0的条件下对大豆蛋白显示出较强的水解能力,其水解效果明显优于商品化的蛋白酶（如木瓜蛋白酶、Alcalase及Protamex）,表明该蛋白酶比以上几种商品化蛋白酶具有更广泛的肽键选择性,对大豆蛋白亲和力更强,在大豆蛋白肽链上有相对较多的酶切位点.

基于序贯设计的毛霉AS3.2778发酵产蛋白酶工艺优化

本研究主要就毛霉AS3.2778固体发酵的工艺条件进行了探讨,利用序贯设计这一数学工具对影响产酶的若干因素进行了优化,并最终确立了相对稳定的发酵工艺条件。结果表明,每250ml三角瓶装8g麸皮,其中添加1.23%麦芽糖,1.56%蛋白胨,0.74%KH2PO4,0.06% FeSO4·7H2O作为辅助营养物,培养基的起始含水量为每克麸皮添加0.79ml水,发酵温度24.1℃,时间48h。在优化的工艺条件下,每克干基可发酵产酶1541U,是起始发酵单位的202%。

雅致放射毛霉AS3.2778碱性蛋白酶的纯化及性质研究(英文)

利用盐析、离子交换、疏水层析及凝胶过滤的方法从雅致放射毛霉AS3.2778的发酵麸曲中分离纯化出一碱性蛋白酶,其纯化提高了22.7倍,酶活回收率16.1%,最终比酶活可达到6094μ/mg。电泳分析发现,该蛋白酶是一单体蛋白,其分子量大约在32kDa。性质分析表明:该蛋白酶在60℃,pH8.5～10.5具有最大催化活性;在40℃以下,pH6.0 ～9.0的范围有很好的稳定性;1mmol/L的PMSF可以完全抑制其活性,显示该蛋白酶属于丝氨酸蛋白酶家族。底物专一性的研究发现,该蛋白酶有相当广泛的肽键选择性,对绝大多数由疏水性氨基酸(尤其是亮氨酸)构成的肽键有很强的水解能力。

雅致放射毛霉AS3.2778酸性蛋白酶的纯化及性质研究

毛霉蛋白酶对大豆蛋白有较高的水解效率以及对蛋白水解物具有良好的脱苦效果,因此在大豆多肽的制备方面显示出很好的应用前景。为了开发这一蛋白酶系,采用硫酸铵盐析、羧甲基琼脂糖凝胶阳离子交换层析及苯基琼脂糖凝胶疏水层析对其进行分离纯化,从雅致放射毛霉AS3.2778的发酵麸曲中纯化得到两个酸性蛋白酶组分Pa1和Pa2。电泳分析并结合凝胶色谱确定纯化的两个组分均是单体酶,其分子质量分别在35ku和33ku。对其性质研究发现:Pa1在pH5.5、50℃有最大催化活性,Pa2在pH4.5、50℃有最大催化活性;两者在温度低于40℃,酸性的环境(pH4.0～7.0)中有很好的稳定性;浓度10μmol/L的Pepstatin A可以完全抑制这两种蛋白酶的活性,表明Pa1和Pa2属于天冬氨酸蛋白酶家族;金属离子对两者的活性影响不显著,其中仅Cu2+、Zn2+对Pa1有弱的抑制作用,而Mn2+、Co2+、Cu2+对Pa2有弱的抑制作用;Pa1和Pa2具有相同的肽键选择性,并且与雅致放射毛霉碱性蛋白酶Pb1存在一定的肽键选择互补性;Pa2的N端氨基酸序列为:GTGTVPVTDY,这与来源于根霉属微生物的酸性蛋白酶有很高的同源性。

毛霉AS3.2778脯氨酸氨肽酶的部分纯化及性质研究

毛霉蛋白酶对大豆蛋白有较高的水解效率并对蛋白水解物有良好的脱苦效果,因此在大豆多肽的制备方面显示出很好的应用前景。为了开发这一蛋白酶系,实验中P采用硫酸铵盐析、离子交换层析、疏水层析及凝胶层析等方法对其进行了分离纯化,从雅致放射毛霉AS3.2778的发酵麸曲中部分纯化得到一氨肽酶组分,并对其性质进行了探讨。纯化的毛霉氨肽酶是一典型的脯氨酸氨肽酶,它对小肽N端的脯氨酸有非常强的水解能力;该氨肽酶在40～45℃、pH6.5有最大催化活性,在30℃以内,pH5.0～8.0有很好的稳定性;在所试验的几种蛋白酶抑制剂中,仅1 mmol/L的苯甲基磺酰氟(PMSF)对毛霉氨肽酶有抑制作用,由此说明纯化的毛霉氨肽酶可能是一种丝氨酸蛋白酶;常见金属离子对该氨肽酶活性的影响不明显;脱苦实验结果表明,纯化的毛霉氨肽酶对于大豆蛋白水解物的苦味有明显的去除效果。

接触辉光放电等离子体对Actinomucor elegans的杀菌作用与机理研究

雅致放射毛霉(Actinomucor elegans)感染的毛霉病在人群中比较严重,如何杀灭Actinomucor elegans显得尤为重要。为了研究接触辉光放电等离子体(CGDP)对Actinomucor elegans的杀菌作用与机理,本文通过考察电压、时间、电解质对杀菌效率的影响,确定了杀菌条件。通过分析CGDP对菌落形态、孢子内容物泄漏和过氧化损伤的影响,探讨了CGDP对Actinomucor elegans的杀菌机理。结果表明:CGDP对Actinomucor elegans的杀菌效果显著,在560 V、15 min、Na_(2)SO_(4)溶液的条件下杀菌率(η)最高达90.71%;CGDP处理后菌落直径、孢子萌发率、菌丝生物量积累等明显减小;孢子内容物泄漏量、过氧化损伤程度等显著增大;孢子表面皱缩甚至破裂。初步确定,CGDP通过破坏细胞膜完整性使Actinomucor elegans失活。本文结果为CGDP在杀灭真菌领域的应用及机理研究提供了一定的参考依据。

雅致放射毛霉3.2778羧肽酶性质及其活性中心结构的研究

固态发酵雅致放射毛霉菌株(Actinomucor elegans)3.2778得到羧肽酶粗酶液,以N-苄氧羰酰基-L-苯丙胺酰-L-亮氨酸(N-CBZ-Phe-Leu)为底物,采用镉-茚三酮法测定羧肽酶水解产物。结果表明:雅致放射毛霉3.2778羧肽酶最适作用pH值范围为6.5～7.2,最适作用温度范围在40℃～45℃,最适作用温度为40℃,在30℃～40℃具有良好的温度稳定性。0.99mmol/L金属离子中,Mg2+对羧肽酶活力表现出显著的促进作用,酶活提高37%;而Cu2+、Fe2+、Fe3+、Hg2+可以抑制绝大部分酶活,残留的相对酶活力约10%。9.1mmol/L金属蛋白酶抑制剂1,10-邻菲啰啉(OP)和丝氨酸蛋白酶抑制剂苯甲基磺酰氟(PMSF)和二异丙基磷酰氟(DFP)均可以完全抑制该酶活性,同时,对巯基有修饰作用的蛋白酶抑制剂PCMB、DTT、碘乙酸和β-巯基乙醇对羧肽酶有强烈的抑制作用。因此,推断该酶可能是一种丝氨酸羧肽酶,其活性中心有丝氨酸残基和二硫键结构,酶活受Mg2+激活。

毛霉型腐乳发酵菌株筛选和人工接种发酵腐乳感官品质评价

为了改善传统腐乳的品质不易控制和安全性等缺点,该研究根据菌株生长量、蛋白酶活力和脂肪酶活力筛选出具有良好生产特性的雅致放射毛霉CJ-6制备腐乳,通过感官评价与顶空固相微萃取(head space solid-phase micro-extraction,HS-SPME)结合GC-MS确定CJ-6能产生与传统发酵腐乳相似的风味特征。并通过分析人工接种腐乳在发酵过程中质构特性和游离氨基酸含量的变化,评估CJ-6对口感和滋味的影响。结果表明,菌株CJ-6具有生长速度快、蛋白酶活力和脂肪酶活力高的优点。人工接种腐乳的风味特征与传统腐乳具有较高的相似性。共鉴定出70个挥发性物质,其中13个挥发性物质的香气活性值>1。偏最小二乘回归分析发现辛酸乙酯、苯酚、3-苯丙酸乙酯等是CJ-6产生的关键风味物质。菌株CJ-6在发酵过程中使腐乳的硬度和弹性逐渐减小,增加了4种必需氨基,氨基酸总量提高了5.94倍。雅致放射毛霉CJ-6有作为腐乳发酵剂的潜力,为高品质腐乳的开发提供了新菌株。

腐乳中雅致放射毛霉的全基因组测序及比较分析

雅致放射毛霉是腐乳发酵最常用的毛霉之一,然而到目前为止有关其基因组的信息仍然较少。因此该研究旨在完善雅致放射毛霉(Acitinomucor elegans)CJ-6的全基因组信息并从基因水平分析其在腐乳发酵过程中的安全性和可能的代谢途径。该研究使用从头测序技术对雅致放射毛霉进行全基因组测序及基因功能注释。雅致放射毛霉具有丰富的碳源、风味前体氨基酸及脂肪代谢途径,这对腐乳发酵过程中的风味形成具有重要意义。此外,从次级代谢产物分析结果来看,雅致放射毛霉不具备产生致病性物质的能力。该研究获得的雅致放射毛霉CJ-6的基因组信息有助于我们了解该菌种潜在的产毒能力,评估其在腐乳发酵过程中的安全性,有利于进一步研究其次生代谢产物的生物合成并更好地调控腐乳风味。

对硝基苯酚法对雅致放射毛霉脂肪酶特性的研究

以不同碳链长度的对硝基苯酚酯为底物对雅致放射毛霉(Actinomucor elegans AS3.27)脂肪酶的酶学特性和其发酵的腐乳在发酵过程中脂肪酶活力的变化进行研究,结果表明:分别以对硝基苯酚正辛酸酯(pNPC)和对硝基苯酚棕榈酸酯(pNPP)为反应底物所测得的脂肪酶酶学特性有所不同。以pNPC和pNPP为反应底物时,雅致放射毛霉脂肪酶的最适作用温度分别为30、35℃,最适作用pH为7.5、7.0,最适盐浓度都为0.20mol/L。以两种底物分别测定雅致放射毛霉接种的腐乳在发酵过程中的脂肪酶活力,均显示在后期发酵过程中脂肪酶活力呈现出不断下降的趋势,然而在第20～25d脂肪酶活力呈现出小幅度的反复。使用碱滴定法以聚乙二醇-橄榄油为底物进行验证,得到相同的趋势。

雅致放射毛霉在干酪中的应用

雅致放射毛霉(Actinomucorelegans)是酿造腐乳的优良菌株,鉴于其优良发酵特性和蛋白酶解效力,将其引入到传统表面霉菌成熟干酪的发酵成熟过程中,研究该菌种对干酪成熟期间理化特性等各项指标的影响。理化特性研究表明,雅致放射毛霉表面成熟干酪在成熟期间水分含量由59%(W/W)下降到50%;外部和内部的pH都呈上升的趋势,最后达到pH7.0左右;乳酸含量由1.2%(W/W)下降到0.4%;pH4.6 SN(可溶性氮)和12%TCA(三氯乙酸)SN在成熟的30 d内分别由10.1%(W/W)和2.5%增长到了45.2%和27.1%;电泳结果表明,酪蛋白发生强烈水解;毛霉干酪游离脂肪酸含量在成熟末期达到6.54%(W/W);TPA硬度由450 g下降到150 g。毛霉干酪成品的主要成分指标为:水分50%,蛋白质20%(W/W),脂肪20.6%(W/W),盐含量2.1%(W/W),符合NY478-2002软质干酪农业部标准,与Camembert青霉干酪的理化指标相似。

毛霉蛋白酶的组分特性及对大豆蛋白水解的研究

毛霉是腐乳酿造的主要微生物之一,其分泌的蛋白酶对大豆蛋白具有较高的水解效率以及对蛋白水解物良好的脱苦效果,因此在大豆蛋白水解加工方面显示出很好的应用前景。本研究采用多种蛋白纯化的方法从毛霉胞外分离纯化出三种不同的蛋白酶组分。在探讨了各组分蛋白酶性质的基础上,考察了各种蛋白酶组分对大豆蛋白的水解效果。结果显示,纯化得到的碱性蛋白酶组分Pb1对大豆蛋白具有相对较强的水解能力,而酸性蛋白酶对大豆蛋白水解能力较差,碱性蛋白酶与酸性蛋白酶之间具有良好的协同作用。

腐乳生产过程中自由基清除能力的变化

实验用DPPH法对腐乳的抗氧化能力变化趋势作了测定,前酵和盐腌期迅速上升,后酵期上升比较缓慢,最终产品腐乳的自由基清除能力比发酵前的豆腐坯高了2倍以上。并且发现,用雅致放射毛霉和少根根霉发酵腐乳,前者的自由基清除能力更高。

豆渣毛霉发酵条件的研究

以氨基酸态氮含量和感官评分为指标,考察了水分含量、接种量、发酵温度和时间对豆渣毛霉发酵的影响,优化了其发酵条件,并比较了发酵前后豆渣主要成分的变化。结果显示,豆渣毛霉固态发酵的最优条件为:在水分含量为70%的豆渣中接种其质量的2%毛霉菌悬液,搅匀后于28℃下发酵4天。发酵后的豆渣色泽棕黄,质地松软,入口细腻,滋味鲜美,发酵风味浓郁;其水分和粗蛋白含量明显降低,氨基酸态氮含量和总酸含量升高。

雅致放射毛霉液体深层培养条件及发酵培养基的优化研究

文中研究了在摇瓶液体培养条件下 ,不同培养基成分及发酵条件对雅致放射毛霉菌丝体生长的影响 ,并经正交实验得到其最优的培养基组成为 :黄豆粉 3%、饴糖 0 5 %、硫酸镁 0 2 %、磷酸二氢钾 0 2 %、酵母膏0 1% ,在此条件下 ,2 8℃、2 0 0r/min摇瓶培养 6 4h ,毛霉菌丝体生物量 (以菌丝体干重表示 )可达 1 0 2g/10 0mL。

腐乳在发酵过程中脂肪酶活力变化研究

研究了雅致放射毛霉脂肪酶的酶学特性及其脂肪酶活力在腐乳发酵过程中的变化,和对脂肪水解作用的程度。研究发现,雅致放射毛霉脂肪酶的最适作用温度为40℃,最适pH为7.0。对腐乳在发酵不同阶段的pH,酸值,脂肪含量以及脂肪酶活力的研究中发现,腐乳在毛坯阶段其脂肪酶活力最高,自盐坯阶段起,脂肪酶活力一直呈下降的趋势。而脂肪含量在白坯、毛坯和盐坯(扣除盐分重量)阶段基本保持不变,在后期发酵阶段呈现下降的趋势。pH随着后期发酵的进行呈现出下降的趋势,脂肪酸值则呈现出相反的趋势,逐步上升。

高压静电场(HVEF)臭氧产生能力以及所产生臭氧对毛霉菌的抑制作用

对高压静电场操作过程中由于微弱的放电所产生的臭氧做了观测,发现随着电场强度的增加,臭氧产生量增加。电场产生的臭氧对密闭环境空气中毛霉具有杀灭作用,随着电场强度的增加,灭菌效率增加,证明了高压静电场所产生的臭氧不能忽视。

雅致放射毛霉产孢子培养基组成及培养条件的优化

文中研究了在以麸皮为基础培养基的条件下,不同培养基的组成及培养条件对雅致放射毛霉生成孢子量的影响,并经正交试验得出其最优的培养基组成为外加1.0%的葡萄糖,0.1%氯化钙、0.2%硫酸铜、0.2%硫酸铵的麸皮培养基。雅致放射毛霉生成孢子的最佳培养条件为料液比1∶1.5,接种量为104个/mL的孢子悬浮液,28℃培养4d。

雅致放射毛霉深层液体发酵工艺研究

对雅致放射毛霉液体发酵工艺研究表明,其适宜碳源为饴糖和可溶性淀粉,适宜氮源为黄豆粉和酵母膏,最适培养基含黄豆粉3%、饴糖0 5%、磷酸二氢钾0 2%、硫酸镁0 2%、酵母膏0 1%。适宜液体培养条件:温度28℃,接种量5%,发酵前期通风量1∶0 8,之后将风量调至1∶1 5～2 0。全程不搅拌培养18～20h。生物量为每100mL发酵液中菌丝鲜重达30g以上。菌丝体氨基酸含量为46 1mg/100mL。