IGF-1介导MAPKs通路在C3H10T1/2细胞成骨分化中的作用

目的探究胰岛素样生长因子1(IGF-1)介导丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)信号通路在C3H10T1/2细胞成骨分化中的调控作用及机制。方法不同浓度IGF-1(0、5、10、20 ng/mL)培养C3H10T1/2细胞,碱性磷酸酶(ALP)与茜素红(ARS)染色检测ALP活性、钙盐沉积情况,qRT-PCR法检测成骨特性因子核心结合因子α-1(RUNX2)、成骨分化特异性因子骨桥蛋白(OPN)、骨钙蛋白(OCN)mRNA表达水平,Western Blot法检测MAPK通路蛋白磷酸化表达水平。对数期细胞分为空白组、IGF-1组、ERK通路抑制剂(PD98059)组、PD+IGF-1组、p38通路抑制剂(SB202192)组、SB+IGF-1组,qRT-PCR法检测成骨特性因子RUNX2、成骨分化特异性因子骨桥蛋白(OPN)、骨钙蛋白(OCN)mRNA表达水平。结果不同浓度IGF-1组ALP显色加深,ALP活性升高,钙盐结节形成增多,RUNX2、OPN、OCN mRNA表达水平升高,磷酸化ERK、p38、JNK蛋白表达增加,具有剂量效应(P<0.05)。与空白组比较,PD组、SB组C3H10T1/2细胞RUNX2、OPN、OCN mRNA表达水平明显降低(P<0.05),PD+IGF-1组、SB+IGF-1组C3H10T1/2细胞RUNX2、OPN、OCN mRNA表达水平明显升高(P<0.05);但与IGF-1组比较,PD+IGF-1组、SB+IGF-1组C3H10T1/2细胞RUNX2、OPN、OCN mRNA表达水平明显降低(P<0.05)。结论IGF-1促进C3H10T1/2细胞成骨分化,其作用机制可能与激活ERK信号通路和p38 MAPK信号通路有关。

胃癌组织中IL-32与Apaf-1蛋白的表达及意义

目的 分析胃癌组织中白细胞介素-32(Interleukin-32,IL-32)与凋亡蛋白酶激活因子-1(Apoptotic Protease Activating Factor-1,Apaf-1)的表达及意义。方法 回顾性选取2019年1月—2022年12月南通市肿瘤医院收治的100例胃癌患者的临床资料,分别取其胃癌组织标本(胃癌组)和正常胃黏膜标本(癌旁组),通过免疫组化法(Streptavidin-perosidase,SP)检测胃癌标本与正常标本中IL-32、Apaf-1蛋白的阳性表达情况。结果胃癌组IL-32阳性表达率高于癌旁组,Apaf-1蛋白阳性表达率低于癌旁组,差异有统计学意义(P均<0.05);胃癌患者高中分化程度与低分化程度之间,浸润深度<肌层与≥肌层之间,TNM分期为Ⅰ、Ⅱ期与分期为Ⅲ、Ⅳ期之间以及有无淋巴结转移之间的IL-32、Apaf-1蛋白阳性表达率对比,差异有统计学意义(P均<0.05)。结论 IL-32与Apaf-1蛋白的阳性表达可为胃癌患者的临床诊断和治疗提供重要的参考价值。

基于JNK/AP-1信号通路探讨广西毛冬青在放射性脑损伤中的作用机制

目的:探讨广西毛冬青(IPH)对放射性脑损伤的改善作用及其机制。方法:将40只SPF级昆明小鼠随机分为对照组、IPH、放射组和放射+IPH组,每组10只。采用γ射线建立放射性脑损伤模型,放射前、后连续灌胃给药14 d。采用Morris水迷宫实验、避暗实验检测小鼠认知功能,苏木精—伊红(HE)染色和尼氏染色观察脑组织病理形态变化,电镜观察胶质细胞超微结构,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清白介素-6(IL-6)水平,免疫组织化学染色法检测脑组织c-Jun氨基末端激酶(JNK)、磷酸化(p-)JNK、激活蛋白-1(AP-1)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)蛋白表达,免疫荧光检测脑组织星型胶质细胞标记物GFAP和小胶质细胞标记物Iba-1蛋白表达,western blotting法检测脑组织JNK和p-JNK蛋白表达。结果:与对照组相比,放射组小鼠放射后7 d体重减低,血清IL-6含量升高,脑组织AP-1、MCP-1表达水平及p-JNK/JNK比值升高,小胶质细胞Iba-1和GFAP表达水平升高(均P<0.05)。与放射组比较,放射+IPH组小鼠放射后7 d体重增加,血清IL-6含量降低,脑组织AP-1、MCP-1表达水平及p-JNK/JNK比值降低,小胶质细胞Iba-1和GFAP表达水平降低(均P<0.05)。HE染色和尼氏染色显示,放射组大量细胞和神经元出现核固缩现象,小胶质细胞激活,呈圆形;电镜下可见细胞内溶酶体增多,星形胶质细胞细胞核及胞质肿胀;经IPH干预后,小鼠脑组织神经元变性情况和胶质细胞形态明显改善。结论:广西IPH能改善放射性脑损伤小鼠的认知功能,减少小胶质细胞和星形胶质细胞激活,其机制可能与减轻神经炎症反应、抑制JNK/AP-1信号通路有关。

circ_100284通过miR-217/MAPK1调控食管鳞状细胞癌侵袭及其对5-FU化疗敏感性的影响

目的 探究环状RNA(circ_100284)作为竞争性内源RNA(ceRNA)通过调控miR-217/丝裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)影响食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞侵袭及其对5-氟尿嘧啶(5-FU)化疗的敏感性。方法 生物信息学分析ESCC中差异表达的circRNAs。qRT-PCR检测ESCC组织和细胞中circ_100284的表达。使用浓度逐渐增加的5-FU处理ESCC细胞KYSE450以建立5-FU耐药KYSE450细胞系(KYSE450-R),MTT实验检测KYSE450和KYSE450-R细胞的IC_(50)。qRT-PCR检测KYSE450和KYSE450-R细胞中circ_100284、miR-217和MAPK1 mRNA的表达,Western blotting检测MAPK1蛋白的表达。取KYSE450-R细胞,设置:(1)空白对照组(不做处理)、si-NC组(转染si-NC)、si-circ_100284组(转染si-circ_100284)、pc-Control组(转染pc-Control)、pc-circ_100284组(转染pc-circ_100284)、pc-circ_100284+mimic NC组(转染pc-circ_100284和mimicNC)与pc-circ_100284+miR-217mimic组(转染pc-circ_100284和miR-217mimic),采用MTT实验检测细胞活力,Transwell实验检测细胞侵袭能力,流式细胞术检测细胞凋亡情况。(2)空白对照组(不做处理)、si-NC组(转染si-MAPK1的阴性对照)、si-MAPK1组(转染si-MAPK1)、si-MAPK1+inhibitor NC组(转染si-MAPK1和inhibitor NC)与si-MAPK1+miR-217inhibitor组(转染si-MAPK1和miR-217 inhibitor),采用qRT-PCR和Western blotting检测MAPK1 mRNA和蛋白的表达,MTT实验检测细胞活力,Transwell实验检测细胞侵袭能力,流式细胞术检测细胞凋亡情况。将circ_100284-WT或circ_100284-MUT报告质粒、MAPK1-WT或MAPK1-MUT报告质粒分别与miR-NC或miR-217 mimic共转染KYSE450-R细胞48 h,采用双荧光素酶报告实验测定荧光素酶相对活性。结果 生物信息学分析显示circ_100284在ESCC中呈高表达。与癌旁正常组织比较,ESCC组织中circ_100284表达明显增加(P<0.05);与健康人食管上皮细胞HEEC比较,ESCC细胞系TE-11、ECA09和KYSE450中circ_100284表达明显增加(P<0.05)。与KYSE450细胞比较,KYSE450-R细胞的IC_(50)增加,circ_100284、MAPK1表达增加但miR-217表达被抑制(P<0.05)。与si-NC组比较,si-circ_100284组细胞活力被抑制,细胞侵袭数减少,细胞凋亡率增高(P<0.05)。与pc-Control组比较,pc-circ_100284组细胞活力和细胞侵袭数增加,细胞凋亡率降低(P<0.05),而pc-circ_100284对ESCC细胞恶性生物学行为的影响被miR-217过表达逆转(P<0.05)。与si-NC组比较,si-MAPK1组细胞活力被抑制,细胞侵袭数减少,细胞凋亡率增高(P<0.05),而si-MAPK1对ESCC细胞生物学行为的影响被miR-217 inhibitor逆转(P<0.05)。circ_100284与miR-217、miR-217与MAPK1具有靶向关系。结论 circ_100284通过调控miR-217/MAPK1进而增强ESCC细胞的侵袭能力,抑制ESCC细胞对5-FU化疗的敏感性,在ESCC中发挥促癌因子的作用。

瑞马唑仑调节EPAC1/RAP1信号通路对急性心肌梗死大鼠心肌损伤的影响

目的探讨瑞马唑仑调节环腺苷酸激活的交换蛋白1(EPAC1)/RAS相关蛋白1(RAP1)信号通路对急性心肌梗死(AMI)大鼠心肌损伤的影响。方法将大鼠按照随机数字表法分为假手术组、模型组、瑞马唑仑组、瑞马唑仑+8-CPT(EPAC1的激动剂)组,每组20只。除假手术组外,其余各组大鼠通过左前降支结扎法构建AMI大鼠模型;小动物超声仪检测心功能指标;HE染色检测心肌组织病理情况;化学比色法检测大鼠心肌组织超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)水平;JC-1染色法检测大鼠心肌细胞线粒体膜电位;TUNEL染色检测心肌细胞TUNEL阳性率;Western blot检测心肌组织EPAC1、RAP1、胱天蛋白酶3(Caspase-3)蛋白表达水平。结果与假手术组相比,模型组大鼠心肌组织结构被严重破坏且浸润大量炎性细胞;心功能指标左心室舒张末期内径(LVEDD)、左心室收缩末期内径(LVESD),心肌组织MDA水平,心肌细胞TUNEL阳性率,心肌组织EPAC1、RAP1、Caspase-3蛋白表达水平均明显升高;左心室射血分数(LVEF)、左心室短轴缩短率(LVFS),心肌组织SOD水平,心肌细胞线粒体膜电位明显降低(P<0.05)。与模型组相比,瑞马唑仑组大鼠心肌损伤缓解,炎性细胞浸润减轻,心功能指标LVEDD、LVESD,心肌组织MDA水平,心肌细胞TUNEL阳性率,心肌组织EPAC1、RAP1、Caspase-3蛋白表达水平均明显降低;LVEF、LVFS,心肌组织SOD水平,心肌细胞线粒体膜电位明显升高(P<0.05)。EPAC1的激动剂减弱了瑞马唑仑对AMI大鼠心肌损伤的缓解作用。结论瑞马唑仑可能通过抑制EPAC1/RAP1信号通路抑制心肌细胞凋亡,减轻AMI大鼠心肌损伤。

沉默HMGB1通过抑制p38 MAPK信号通路减少LPS或IL-17A诱导的中耳腔上皮细胞的炎症与凋亡

目的:探讨高迁移率族蛋白B1(High Mobility Group Protein 1,HMGB1)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)或白细胞介素-17A(interleukin-17A,IL-17A)诱导人中耳腔上皮细胞(human middle ear epithelial cells,HMEEC)的炎症反应与凋亡的调控作用与机制。方法:培养HMEEC细胞系。将HMEEC分为对照组、LPS组、LPS联合短发夹RNA(shRNA)沉默质粒阴性对照处理组(LPS+shNC组)、LPS联合shRNA沉默HMGB1处理组(LPS+shHMGB1组)、LPS联合p38-丝裂原激活的蛋白激酶(p38 MAPK)抑制剂SB202190处理组(LPS+SB202190组)、IL-17A组、IL-17A+shNC组、IL-17A+shHMGB1组、IL-17A+SB202190组。酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测TNF-α、IL-1β和IL-6的水平变化。用Western blot检测粘蛋白5AC(mucoprotein 5AC,MUC5AC)、粘蛋白8(mucoprotein 8,MUC8)、p38 MAPK、磷酸化的p38 MAPK(p-p38 MAPK)、E26样蛋白1(E-twenty-six like 1 protein,ELK1)、B细胞淋巴瘤2蛋白(B-cell lymphoma 2 protein,Bcl-2),以及Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)的表达。流式细胞术检测细胞的凋亡。结果:与对照组比,LPS组或IL-17A组的HMEEC的凋亡率都增加,且HMGB1、MUC5AC、MUC8、TNF-α、IL-1β、IL-6、p38、p-p38、ELK1、Bax的表达水平升高,而Bcl-2的表达水平降低(均P<0.05)。与LPS组或IL-17A组比,LPS+shHMGB1组或IL-17A+shHMGB1组的凋亡率都降低,且HMGB1、MUC5AC、MUC8、TNF-α、IL-1β、IL-6、p38、p-p38、ELK1、Bax的表达水平都减少,而Bcl-2的表达水平升高(均P<0.05)。与LPS组或IL-17A组比,LPS+SB202190组或IL-17A+SB202190组的的凋亡率都降低,MUC5AC、MUC8、TNF-α、IL-1β、IL-6、p38、p-p38、ELK1、Bax的表达水平都降低,而Bcl-2的表达水平升高(均P<0.05)(均P<0.05)。结论:沉默HMGB1通过抑制p38 MAPK信号通路减少LPS或IL-17A诱导的HMEEC的炎症与凋亡。

CX3CR1对创伤性骨髓炎大鼠骨骼肌微纤维、ERK/MAPK信号通路及炎症反应的影响

目的探索CX3CR1对创伤性骨髓炎大鼠骨骼肌微纤维、ERK/MAPK信号通路及炎症反应的影响。方法选取30只SPF级SD雄性大鼠,依据随机数字表法分为健康组、模型组、CX3CR1抑制组,每组10只。除健康组外,其余各组均建立创伤性骨髓炎模型。其中健康组、模型组大鼠均每日常规腹腔注射生理盐水,CX3CR1干预组向残腔内注射CX3CR1中和抗体进行处理。采用ELISA法检测血清中IL-6、IL-10、IL-1β、TGF-β水平,应用改良X线Norden评分检测骨骼肌微纤维,HE染色观察病理变化,免疫印迹及PCR检测股骨组织中细胞外信号调节蛋白激酶(Extracellular regulated protein kinase,ERK1/2)、丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen activated protein kinase,MAPK)蛋白及mRNA表达。结果与健康组比较,模型组TGF-β、IL-1β、IL-10、IL-6等炎症因子含量均升高(P<0.05);与模型组比较,CX3CR1抑制组炎症因子含量降低(P<0.05)。与健康组比较,模型组随时间推移X线Norden评分升高(P<0.05);与模型组比较,CX3CR1抑制组X线Norden评分降低(P<0.05)。HE染色显示,健康组骨质完好;模型组可见大量炎性细胞浸润、灶性脓肿及坏死灶;CX3CR1抑制组大鼠的骨质明显改善,炎症反应降低。与健康组比较,模型组ERK1/2、MAPK蛋白及mRNA表达升高(P<0.05);与模型组比较,CX3CR1抑制组ERK1/2、MAPK蛋白及mRNA表达降低(P<0.05)。结论抑制CX3CR1可改善创伤性骨髓炎大鼠的疾病反应,可能与降低炎症反应、ERK/MAPK信号通路以及改善骨骼肌微纤维相关。

电针夹脊穴对腰椎间盘退变兔髓核细胞Cav-1和p38 MAPK蛋白表达的影响

目的 通过观察电针夹脊穴对腰椎间盘退变(intervertebral disc degeneration, IDD)兔髓核细胞中小窝蛋白1(caveolin 1,Cav-1)及p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase, p38 MAPK)蛋白表达的影响,探讨电针延缓IDD髓核细胞衰老的作用机制。方法 采用随机数字表法将25只雄性新西兰大白兔随机分为正常组、假模型组、模型组、模型+电针组及模型+假电针组,每组各5只。造模方式采用加压器对L_4~L_5椎间盘进行200 N压力持续轴向加压28天,通过磁共振成像(magnetic resonance imaging, MRI)判断是否造模成功。正常组兔予以自然喂养,不予任何干预;模型组兔使用加压器对L_4~L_5椎间盘加压28天,造模成功后不作任何治疗;假模型组兔同模型组造模方法,保留加压装置及克氏针但不完成椎体加压及干预治疗;模型+电针组兔在模型组的基础上,自造模成功后第1天起予以双侧L_4~L_5夹脊穴电针治疗,电针强度为1~2mA,每次20 min, 1次/天,6天为1疗程,每个疗程间隔1天,共4个疗程;模型+假电针组兔同模型+电针组方法,但在针刺夹脊穴时仅接上电针不接通电流。实验周期结束后,观察各组兔一般情况、MRI下椎间盘信号强度并进行Pfirrmann分级,并采用Western blot法检测椎间盘髓核细胞中Cav-1及p38 MAPK蛋白表达。结果 与正常组兔比较,假模型组兔的一般情况无明显变化,MRI下椎间盘信号差异较小;模型组兔一般情况变差,MRI下椎间盘信号为黑色低信号表现;模型+电针组兔一般情况明显缓解改善,MRI下椎间盘信号增强呈灰-白信号表现,质地更均匀;模型+假电针组兔一般情况较差,无明显改善,MRI下椎间盘呈灰黑色信号,未见明显信号改善。同正常组兔比较,假模型组兔椎间盘Pfirrmann评分、椎间盘髓核细胞Cav-1蛋白表达、p38 MAPK蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05),模型组兔椎间盘Pfirrmann评分、椎间盘髓核细胞Cav-1蛋白表达、p38 MAPK蛋白表达显著升高(P均<0.05);与模型组、模型+假电针组兔比较,模型+电针组兔椎间盘Pfirrmann评分、椎间盘髓核细胞Cav-1蛋白表达、p38 MAPK蛋白表达明显降低(P均<0.05)。结论 电针可能通过下调椎间盘髓核细胞中Cav-1及p38 MAPK蛋白表达以延缓髓核细胞衰老所致的IDD。

子痫前期患者血清MAPK1、TNF-α及vWF水平及其与病情严重程度的关系

目的分析子痫前期患者血清丝裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)及血管性血友病因子(vWF)水平及其与病情严重程度的关系。方法纳入100例子痫前期患者及70例健康孕妇(对照组),根据病情严重程度将子痫前期患者分为重度组46例及轻度组54例。比较3组孕妇的常规指标(血清肌酐及尿素水平、血压、24 h尿蛋白含量)及血清TNF-α、MAPK1、vWF水平。结果重度组和轻度组的血清肌酐和尿素水平、收缩压、舒张压、24 h尿蛋白含量,以及血清TNF-α、MAPK1、vWF水平高于对照组,且重度组的上述指标高于轻度组(P<0.05)。结论子痫前期患者血清MAPK1、TNF-α及vWF水平升高,且与患者病情严重程度密切相关。检测以上指标或许有助于提高子痫前期的早期诊断率。

息肉样脉络膜视网膜病变患者泪液p38 MAPK mRNA、 Sirt1 mRNA水平与康柏西普治疗效果的关系

目的探讨息肉样脉络膜视网膜病变(PCV)患者泪液p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)mRNA、沉默信息调节因子2相关酶1(Sirt1)mRNA水平与康柏西普治疗效果的关系。方法选取2020年8月至2022年4月该院94例PCV患者作为观察组,根据康柏西普治疗效果分为效果良好亚组、效果较差亚组,选取同期年龄、性别匹配的健康体检者94例作为对照组。2组均检测泪液p38 MAPK mRNA、Sirt1 mRNA及血管内皮生长因子(VEGF)水平。分析泪液p38 MAPK mRNA、Sirt1 mRNA水平与VEGF的相关性。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析泪液p38 MAPK mRNA、Sirt1 mRNA及VEGF对康柏西普治疗效果的预测价值。采用多因素Logistic回归分析康柏西普治疗效果的影响因素。结果观察组治疗前、治疗12周泪液p38 MAPK mRNA及VEGF水平高于对照组,Sirt1 mRNA水平低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);观察组治疗12周泪液p38 MAPK mRNA及VEGF水平低于治疗前,Sirt1 mRNA水平高于治疗前,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗前、治疗12周泪液p38 MAPK mRNA水平与VEGF水平呈正相关(r=0.717、0.338,P<0.001),治疗前、治疗12周泪液Sirt1 mRNA水平与VEGF水平呈负相关(r=-0.766、-0.396,P<0.001)。94例PCV患者随访1年,息肉完全消退率为40.66%。效果较差亚组治疗前、治疗12周p38 MAPK mRNA及VEGF水平高于效果良好亚组,Sirt1 mRNA水平低于效果良好亚组,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗12周泪液p38 MAPK mRNA、Sirt1 mRNA及VEGF联合预测PCV患者康柏西普治疗效果的曲线下面积(AUC)大于单项指标预测的AUC(P<0.05)。p38 MAPK mRNA、Sirt1 mRNA均是PCV患者康柏西普治疗效果的影响因素(P<0.05)。结论PCV患者p38 MAPK mRNA、Sirt1 mRNA表达异常,二者均与康柏西普治疗效果有关。

MAP2K1表达对肾透明细胞癌细胞恶性生物行为的影响

目的 探讨丝裂原活化蛋白激酶激酶1(MAP2K1)在肾透明细胞癌(cc RCC)组织中的表达及其对ACHN细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法 收集2011年1月至2019年12月国药同煤总医院手术切除的cc RCC组织82例及配对的癌旁组织标本。通过免疫组织化学染色法检测MAP2K1在82例cc RCC癌组织及配对癌旁组织中的表达水平,分析其表达与cc RCC临床病理特征及生存预后的关系。通过CCK-8法、Transwell侵袭和迁移实验检测沉默MAP2K1基因对ACHN细胞生物学功能的影响。结果 癌组织中MAP2K1高表达率高于癌旁组织(74.39%vs23.17%,P<0.001)。癌组织中MAP2K1蛋白相对表达量明显高于癌旁组织[(0.89±0.10) vs(0.21±0.05),P=0.005]。MAP2K1表达水平与TNM分期、T分期相关(P值分别为0.040和0.030)。生存曲线分析显示,MAP2K1高表达患者的中位生存时间为39.3个月,而低表达患者为87.6个月,差异有统计学意义(P<0.001)。沉默MAP2K1基因后,ACHN细胞MAP2K1蛋白表达水平(P=0.037)、72 h细胞增殖活力(P=0.002)、96 h细胞增殖活力(P=0.001)、侵袭力(P=0.014)和迁移力(P=0.002)均降低。结论 MAP2K1在cc RCC癌组织中高表达预示患者不良生存预后,沉默MAP2K1基因可抑制cc RCC癌细胞增殖、侵袭和迁移。MAP2K1可能成为cc RCC的生物学标志物。

IKBKE、YAP1和TEAD2在结直肠癌中的表达及临床意义

目的探讨核因子κb激酶亚基ε的抑制剂(IKBKE)、Yes相关蛋白1(YAP1)和转录增强结构域转录因子2(TEAD2)在结直肠癌(CRC)组织中的表达及其临床意义。方法收集2016年1月至2017年12月在蚌埠医科大学第一附属医院手术切除的142例CRC组织及对应癌旁组织,采用免疫组化法检测标本中IKBKE、YAP1和TEAD2的表达情况。分析3种蛋白在CRC组织中表达的相关性,分析蛋白阳性率与患者临床病理参数及预后的关系;绘制Kaplan-Meier生存曲线,比较这些蛋白不同表达情况患者的生存差异。采用Cox回归分析影响患者预后的危险因素。结果CRC组织中IKBKE、YAP1和TEAD2的阳性率均显著高于癌旁组织(65.5%比9.9%,73.9%比14.1%,66.9%比8.5%,均P<0.05)。IKBKE的表达与肿瘤的分化程度、浸润深度、淋巴结转移、肿瘤-淋巴结-远处转移(TNM)分期有关,YAP1和TEAD2的表达均与肿瘤的分化程度、浸润深度、淋巴结转移、远处转移及TNM分期有关。Spearman秩相关分析显示CRC组织中IKBKE与YAP1、TEAD2表达均呈正相关(均P<0.01)。Kaplan-Meier生存分析显示IKBKE、YAP1和TEAD2阳性表达组的总生存率降低。Cox回归分析显示IKBKE、YAP1和TEAD2阳性、肿瘤分化程度高、TNM分期高是CRC患者预后的独立危险因素。结论CRC中IKBKE、YAP1和TEAD2阳性表达与肿瘤的分化程度、TNM分期、转移等因素有关,可能成为CRC治疗的潜在靶点;检测这3个蛋白的表达有助于评估预后。

姜黄素调控MAPK/NF-κB/AP-1信号通路抑制狼疮性肾炎小鼠炎性反应作用分析

目的 探讨姜黄素调控丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/核因子-κB(NF-κB)/激活蛋白-1(AP-1)信号通路抑制狼疮性肾炎(lupus nephritis, LN)小鼠炎性反应作用。方法 LN小鼠16只分为LN组和实验组,各8只;C57BL/6小鼠8只作为对照组。实验组小鼠给予200 mg/kg姜黄素灌胃,1次/d;LN组和对照组小鼠灌胃等体积氯化钠溶液,1次/d;各组小鼠连续灌胃4周。运用全自动生化分析仪测定Scr和BUN水平;运用BCA蛋白测定试剂盒说明书测定尿蛋白水平;运用ELISA法测定白细胞介素1β(IL-1β)、血清白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子-a (TNF-a)水平;运用Western Blot法测定MAPK/NF-κB/AP-1蛋白表达。结果 LN组和实验组Scr和BUN水平高于对照组(P<0.05);实验组Scr和BUN水平低于LN组(P<0.05)。LN组和实验组尿蛋白水平高于对照组(P<0.05);实验组尿蛋白水平低于LN组(P<0.05)。LN组和实验组血清IL-1β、IL-6和TNF-α水平高于对照组(P<0.05);实验组血清IL-1β、IL-6和TNF-α水平低于LN组(P<0.05)。LN组和实验组MAPK蛋白灰度值、NF-κB蛋白灰度值和AP-1蛋白灰度值高于对照组(P<0.05);实验组MAPK蛋白灰度值、NF-κB蛋白灰度值和AP-1蛋白灰度值低于LN组(P<0.05)。结论 姜黄素可通过下调MAPK/NF-κB/AP-1蛋白表达而抑制LN小鼠炎性反应,且可改善肾功能。

白藜芦醇通过调节SIRT1/AMPK信号通路介导自噬反应对膝关节骨性关节炎大鼠细胞凋亡的影响

目的:从沉默信息调节因子1(SIRT1)/腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)信号通路介导自噬角度,探讨白藜芦醇对大鼠膝关节骨性关节炎(KOA)软骨细胞凋亡的影响。方法:50只健康Wistar大鼠随机分为对照组、模型组、白藜芦醇组、白藜芦醇+SIRT1抑制剂组、自噬激活剂组,每组10只。除对照组外其余大鼠均通过注射弗氏完全佐剂造模法复制KOA大鼠模型,白藜芦醇组、白藜芦醇+AMPK抑制剂组、自噬激活剂组分别使用10μmol/kg白藜芦醇、10μmol/kg白藜芦醇+10 mg/kg EX527、2 mg/kg雷帕霉素进行干预,4周后,观察大鼠Lequesne MG膝关节级别;测定大鼠膝关节液中IL-6、肿瘤坏死因子β(TNF-β)水平;HE染色与TUNEL染色观测大鼠膝关节软骨组织形态及凋亡情况;透射电子显微镜观察大鼠软骨细胞自噬情况;Western blot法检测SIRT1、p-AMPK、AMPK、LC3、Beclin-1蛋白表达。结果:与对照组相比,模型组局部反应、步态反应、关节活动、关节肿胀程度加重(P<0.05);与模型组相比,白藜芦醇组、自噬激活剂组局部反应、步态反应、关节活动、关节肿胀程度减轻(P<0.05)。与对照组相比,模型组大鼠软骨组织细胞排列紊乱,粗糙,存在纤维化变性、边缘丘状隆起,细胞器减少,可见空泡变性,自噬小体数目增多,膝关节液IL-6、TNF-β水平、软骨细胞凋亡率、Beclin-1和LC3B/A升高(P<0.05),软骨组织SIRT1、p-AMPK/AMPK降低(P<0.05);与模型组相比,白藜芦醇组、自噬激活剂组大鼠软骨组织细胞排列紊乱、边缘丘状隆起等现象有改善,自噬小体数目增多,膝关节液IL-6、TNF-β水平、软骨细胞凋亡率降低(P<0.05),软骨组织SIRT1、p-AMPK/AMPK、Beclin-1和LC3B/A水平升高(P<0.05);SIRT1抑制剂可逆转白藜芦醇组对大鼠软骨细胞的保护作用。结论:白藜芦醇可能是通过激活SIRT1/AMPK通路介导自噬KOA大鼠软骨细胞凋亡,SIRT1抑制剂可逆转此过程。

阿江榄仁酸由AMPK/mTOR/HO-1信号通路调控自噬对糖尿病视网膜病变影响

目的探讨阿江榄仁酸(arjunolic acid,AA)对糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)大鼠视网膜细胞自噬及AMPK/mTOR/HO-1信号通路的影响。方法以健康SD大鼠为研究对象,构建链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠模型,随机分为对照组(Con)组、模型(STZ)组、AA低剂量(AAL,10 mg/kg)组和AA高剂量(AAH,10 mg/kg)组。连续给药10周后,HE染色检测视网膜组织病理结构;qRT-PCR检测视网膜组织白介素(IL)-1β、IL-6和线粒体丙酮酸转运载体(MPC)-1的mRNA表达;二氢乙锭(DHE)染色评估视网膜组织ROS产生;Western blot检测自噬和AMPK/mTOR/HO-1信号通路相关蛋白表达。结果与Con组比较,STZ组大鼠视网膜出现肿胀和空泡样变化等病理变化,中央视网膜ONL层厚度和细胞核计数明显降低(P<0.01);IL-1β、IL-6和MCP-1的mRNA水平显著增高(P<0.05);视网膜外核层(ONL)、内核层(INL)和神经节细胞层(GCL)中ROS产生增加(P<0.01);LC3II/I比率、HO-1和p-AMPK/AMPK蛋白表达显著降低,p62和p-mTOR/mTOR表达升高(P<0.01)。与STZ组比较,AAL和AAH组大鼠视网膜ONL厚度和细胞核计数逐渐升高,结构相对规整(P<0.05);AAH组IL-1β、IL-6和MCP-1的mRNA表达明显降低(P<0.05);视网膜ONL、INL和GCL中ROS产生逐渐降低(P<0.01);LC3II/I比率、p-AMPK/AMPK和HO-1表达逐渐升高,p62和p-mTOR/mTOR表达逐渐降低(P<0.01)。结论阿江榄仁酸可能是治疗DR的候选药物,可能机制为通过AMPK/mTOR/HO-1调节的自噬途径保护视网膜细胞免受STZ诱导的氧化应激和炎症损伤。

蠲痹汤含药血清调控线粒体自噬抑制白细胞介素1β诱导的关节软骨细胞损伤

背景:软骨细胞线粒体自噬的缺陷会引起细胞凋亡和基质消失等软骨细胞退行性病变的变化。目的:探讨蠲痹汤含药血清对白细胞介素1β诱导的大鼠膝关节软骨细胞炎症反应和凋亡的影响及可能作用机制。方法:50只雄性SD大鼠随机给予生理盐水、蠲痹汤低、中、高剂量(1.24,2.48,4.96 g/kg)、塞来昔布(阳性药物),连续灌胃2周后获得含药血清。①分离软骨细胞,将其随机分为对照组、白细胞介素1β组、蠲痹汤低、中、高剂量含药血清组及阳性药物血清组。CCK-8法检测细胞存活率、免疫荧光双染检测线粒体自噬水平、免疫荧光检测磷酸化腺苷酸激活蛋白激酶水平、Western blot检测PTEN诱导激酶1/Parkin通路相关蛋白和裂解的半胱氨酸蛋白酶蛋白3表达、ELISA检测炎症因子水平;②分别采用PTEN诱导激酶1 siRNA和Compound C进行干预,探究AMPK/PTEN诱导激酶1/Parkin通路在蠲痹汤含药血清调控线粒体自噬中的作用。结果与结论:①与对照组比较,白细胞介素1β组软骨细胞存活率、Ⅱ型胶原蛋白表达、磷酸化腺苷酸激活蛋白激酶、PTEN诱导激酶1、Parkin和微管相关蛋白1轻链3蛋白水平以及线粒体自噬水平明显降低(P<0.05),而裂解的半胱氨酸蛋白酶蛋白3蛋白水平、白细胞介素6、白细胞介素8和肿瘤坏死因子α水平显著升高(P<0.05);与白细胞介素1β组比较,蠲痹汤各剂量含药血清组和阳性药物血清组上述各项指标呈现相反的变化(P<0.05);②PTEN诱导激酶1 siRNA可显著抑制蠲痹汤含药血清对白细胞介素1β处理软骨细胞线粒体自噬的影响,降低蠲痹汤含药血清对白细胞介素1β诱导的软骨细胞炎症与凋亡的保护作用;Compound C逆转了蠲痹汤含药血清对白细胞介素1β处理软骨细胞中PTEN诱导激酶1/Parkin信号通路的影响。结论:蠲痹汤含药血清通过影响线粒体自噬水平来抑制软骨细胞炎症和凋亡,从而减轻白细胞介素1β诱导的软骨细胞退化,其机制可能与调控AMPK/PTEN诱导激酶1/Parkin通路有关。

金合欢素调节Sirt1/AMPK/Nrf2信号通路对糖尿病白内障大鼠氧化应激损伤的影响

目的探讨金合欢素对糖尿病白内障(DC)大鼠氧化应激损伤的影响及其对沉默调节蛋白1(Sirt1)/腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/核因子E2相关因子2(Nrf2)信号通路的调控作用。方法60只SD大鼠随机分为对照组、模型组、金合欢素低剂量组、金合欢素高剂量组、金合欢素+Sirt1抑制剂(EX527)组,除对照组以外均构建DC大鼠模型,其中,金合欢素低剂量组、金合欢素高剂量组大鼠分别经颈部皮下注射10 mg·kg^(-1)、20 mg·kg^(-1)的金合欢素,金合欢素+EX527组大鼠经颈部皮下注射20 mg·kg^(-1)金合欢素,均为每天2次,同时金合欢素+EX527组大鼠经皮下埋入渗透微型泵每天泵入3.5 mg·kg^(-1)EX527,其余组别均泵入等量生理盐水,给药持续4周。给药结束后,测量血压和空腹血糖(FBG),裂隙灯照射法观察大鼠晶状体混浊状况,HE染色观察晶状体组织病理学变化,ELISA测定血清丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、白细胞介素(IL)-6、IL-1β的含量,Western blot检测Sirt1、p-AMPK、AMPK、Nrf2蛋白表达水平。结果与对照组相比,模型组大鼠晶状体上皮细胞呈片状、条索状,发生迁移性聚集,收缩压、FBG、晶状体混浊评分、MDA、IL-6、IL-1β水平均升高,SOD、GSH-Px含量及Sirt1、p-AMPK/AMPK、Nrf2蛋白表达水平均降低(均为P<0.05);与模型组比较,金合欢素低、高剂量组大鼠晶状体上皮细胞迁移性聚集现象改善,收缩压、FBG、晶状体混浊评分、MDA、IL-6、IL-1β水平均降低,SOD、GSH-Px含量及Sirt1、p-AMPK/AMPK、Nrf2蛋白表达水平均升高(均为P<0.05);与金合欢素高剂量组比较,金合欢素+EX527组晶状体上皮细胞形态改变和聚集现象加重,收缩压、FBG、晶状体混浊评分、MDA、IL-6、IL-1β水平均升高,SOD、GSH-Px含量及Sirt1、p-AMPK/AMPK、Nrf2蛋白表达水平均降低(均为P<0.05)。结论金合欢素可能通过激活Sirt1/AMPK/Nrf2通路保护DC大鼠免受氧化应激损伤。

泛癌分析揭示SREK1在低级别胶质瘤中促进CD274表达

目的剪接调节谷氨酸和富赖氨酸的蛋白质1(SREK1)在多种肿瘤中的泛癌分析,揭示SREK1在泛癌中的作用。方法利用在线数据库GEPIA 2、TIMER 2.0、TISIDB和cBioPortal分析SREK1表达对肿瘤患者预后的影响、在低级别胶质瘤(LGG)肿瘤组织中的表达、遗传变异的特征及其表达对肿瘤组织中免疫细胞的浸润和免疫—肿瘤靶基因的相关性分析。结果LGG肿瘤组织中,SREK1表达与记忆B细胞、活化的CD4+T细胞、Th2细胞、中性粒细胞、NKT细胞以及单核细胞和CD56dimNK细胞的浸润存在相关性(P均<0.05)。SREK1与免疫—肿瘤靶基因如信号传导及转录激活蛋白3(STAT3)、Ⅰ型干扰素受体1(IFNAR1)、核受体亚家族3C组成员1(NR3C1)和表皮生长因子受体(EGFR)、表面抗原分化簇274(CD274)等表达在LGG中均呈正相关(P均<0.05)。结论SREK1是LGG患者的危险因子之一,可能通过促进CD274的表达来加剧LGG的进展。

青藤碱调节AMPK/mTOR/ULK1信号通路对IL-1β诱导的关节软骨细胞自噬和凋亡的影响

目的探讨青藤碱(SN)调节单磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMPK)/雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/UNC-51样激酶1(ULK1)信号通路对白介素-1β(IL-1β)诱导的关节软骨细胞自噬和凋亡的影响。方法将关节软骨细胞分为Control组(正常培养)、IL-1β组(10μg/L的IL-1β诱导12 h)、L-SN、M-SN、H-SN组(在IL-1β诱导的基础上添加25、50、100μmol/L的SN)、SN+Compound C组(在H-SN组的基础上添加10μmol/L AMPK抑制剂Compound C)。MTT法、透射电子显微镜(TEM)、流式细胞仪分别检测SN对各组关节软骨细胞增殖、自噬、凋亡的影响;ELISA试剂盒检测各组细胞中COX-2、TNF-α、MMP-3、MMP-13的表达;蛋白印迹实验(WB)检测各组细胞中p-AMPK、AMPK、p-mTOR、mTOR、p-ULK1、ULK1蛋白水平。结果与Control组比较,IL-1β组关节软骨细胞的A 490值、p-AMPK/AMPK、p-ULK1/ULK1蛋白水平降低,自噬空泡数、凋亡率、COX-2、TNF-α、MMP-3、MMP-13、p-mTOR/mTOR蛋白水平升高(P<0.05);与IL-1β组比较,L-SN组、M-SN组、H-SN组A 490值、自噬空泡数、p-AMPK/AMPK、p-ULK1/ULK1蛋白水平升高,凋亡率、COX-2、TNF-α、MMP-3、MMP-13、p-mTOR/mTOR蛋白水平降低(P<0.05);与H-SN组比较,SN+Compound C组A 490值、自噬空泡数、p-AMPK/AMPK、p-ULK1/ULK1蛋白水平降低,凋亡率、COX-2、TNF-α、MMP-3、MMP-13、p-mTOR/mTOR蛋白水平升高(P<0.05)。结论SN可以通过促进IL-1β诱导的关节软骨细胞自噬,抑制细胞凋亡,其机制可能是通过激活AMPK/mTOR/ULK1信号通路实现的。

利拉鲁肽通过Sirt1/AMPK信号通路改善肝细胞脂肪变性机制研究

目的探讨利拉鲁肽(Lira)干预棕榈酸(PA)诱导的人肝癌细胞对沉默信息调节因子1(Sirt1)/腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/固醇调节元件结合蛋白(SREBP1c)信号通路的影响。方法取HepG2细胞,分为5组,以PA干预诱导肝细胞脂肪变制备模型,再分别以PA/Lira、PA/Sirt1或PA/Sirt1/Lira干预组。采用油红O染色观察细胞脂滴,采用试剂盒测定肝细胞培养上清液烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化态/还原态比值(NAD+/NADH)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)和肝细胞甘油三酯(TG)含量,采用RT-qPCR法检测肝激酶B1(LKB1)、游离脂肪酸(FFA)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)和甘油三酯脂肪酶(ATGL)mRNA水平,采用蛋白质印迹法检测细胞p-AMPK、p-Sirt1和p-SREBP1c蛋白表达。结果PA处理组肝细胞内见大量脂滴,PA/Sirt1组脂滴更大,而PA/Lira处理组和PA/Sirt1/Lira处理组细胞脂滴数量显著减少,提示模型制备成功并显示Lira的防治作用;PA组细胞FFA和ACC基因水平显著高于对照组(P均<0.01),PA/Lira处理组LKB1和ATGL基因水平显著高于PA处理组(P均<0.001),而FFA和ACC基因水平显著低于PA组(P均<0.01),PA/Sirt1/Lira组LKB1和ATGL基因水平显著高于(P均<0.01),而FFA基因水平显著低于PA/Sirt1处理组(P<0.05);与对照组比,PA组细胞p-AMPK和p-Sirt1蛋白表达下调,而SREBP1c表达上调;与PA组比,PA/Lira组p-AMPK蛋白表达上调而SREBP1c蛋白表达下调;与PA/Sirt1组比,PA/Sirt1/Lira组细胞p-AMPK表达上调。结论Lira改善HepG2细胞脂肪蓄积可能是通过直接上调Sirt1/AMPK信号通路或部分激活LKB1升高AMPK蛋白表达,抑制SREBP1c蛋白表达,降低了脂质合成分子水平。