针刺百会、曲鬓穴对急性期脑出血大鼠的影响及其作用机制研究

目的 观察针刺百会、曲鬓穴对急性期脑出血(ICH)大鼠白细胞分化抗原36(CD36)、Toll样受体4(TLR4)表达的影响,探讨针刺治疗脑出血的作用机制。方法 选择144只Wistar雄性大鼠,采用随机数字表法分为假手术组、模型组、针刺组、抑制剂组4组,每组36只,每组按1、3、7 d时间点再分为3个亚组,每组12只。采用立体定位自体血注入法建立ICH大鼠模型。模型组仅接受ICH模型制备,不进行任何治疗;假手术组接受类似模型组各项手术操作,但不进行注血制作;抑制剂组造模后6 h,腹腔注射TLR4抑制剂TAK242,3 mg/kg,1次/d,连续5 d;造模12 h后,针刺组各亚组开始接受针刺治疗,穴位选择百会穴(顶骨正中)、右侧曲鬓穴,采用透刺方法,进针深度20 mm,以100 r/min小幅度捻转,持续捻转2 min,每间隔5 min捻针1次,共留针30 min,期间捻转3次,1次/d,针刺组各亚组分别治疗1、3、7 d。分别于治疗后第1、3、7天,采用改良神经功能缺损评分(mNSS)评估大鼠神经功能;检测脑组织血肿体积;采用Western blot法检测脑组织CD36、TLR4蛋白表达水平;采用免疫荧光法观察CD36、TLR4在星形胶质细胞中的表达。结果 (1) mNSS评分:与假手术组同一时间点比较,模型组、针刺组、抑制剂组治疗后1、3、7 d mNSS评分均明显升高(P<0.05);与模型组同一时间点比较,针刺组、抑制剂组治疗后1、3、7 d mNSS评分均明显降低(P<0.05);与针刺组同一时间点比较,抑制剂组治疗后1 d mNSS评分明显降低(P<0.05)。(2)血肿体积:与模型组同一时间点比较,针刺组、抑制剂组治疗后3、7 d脑血肿体积均明显降低,抑制剂组治疗后1、3、7 d脑血肿体积明显降低(P<0.05);与针刺组同一时间点比较,抑制剂组治疗后1、3、7 d脑血肿体积明显降低(P<0.05)。(3) CD36、TLR4蛋白表达水平:与假手术组同一时间点比较,模型组、针刺组、抑制剂组治疗后1、3、7 d CD36、TLR4蛋白表达水平均明显升高(P<0.05);与模型组同一时间点比较,针刺组、抑制剂组治疗后1、3、7 d CD36蛋白表达水平均明显升高(P<0.05),针刺组、抑制剂组治疗后3、7 d TLR4蛋白表达水平均明显降低(P<0.05);与针刺组比较,抑制剂组治疗后1、3、7 d CD36蛋白表达水平均明显升高,TLR4蛋白表达水平均明显降低(P<0.05)。(4) CD36、TLR4在GFAP中的表达水平:假手术组大鼠脑组织内可见少量CD36、TLR4表达。与假手术组同一时间点比较,模型组治疗后1、3、7 d CD36、TLR4在GFAP表达均明显增加(P<0.05);与模型组同一时间点比较,抑制剂组、针刺组治疗后1、3、7 d CD36在GFAP表达明显增加,TLR4在GFAP表达明显降低(P<0.05)。结论 针刺百会、曲鬓穴可以改善急性期ICH大鼠神经功能,减轻脑出血血肿体积,可能与促进CD36蛋白表达、抑制TLR4蛋白表达有关。