裂解型腺病毒Ad-E1A对人脐静脉内皮细胞的影响

以QBI-293A细胞基因组DNA为模板,PCR扩增E1A基因,酶切连接到pAdTrack-CMV转移质粒上,pAdTrack-CMV-E1A经PmeI线性化后,与pAdEasy-1共转化大肠杆菌BJ5183,筛选重组腺病毒质粒pAdEasy-1-pAdTrack-CMV-E1A,经PacI线性化,脂质体转染QBI-293A细胞,获得裂解型腺病毒Ad-E1A。裂解型腺病毒Ad-E1A在ECV304细胞内复制裂解,抑制细胞的生长,并可以降低VEGF的表达,探讨了Ad-E1A可能通过抑制ECV304细胞NF-κB的激活而引起细胞生长抑制的机制,说明Ad-E1A具有抑制肿瘤转移的功能。

三种癌细胞对Ad-E1A的敏感程度研究

目的研究腺病毒介导的E1A基因(Ad-E1A)体外对Hep-2人喉癌细胞、A375人黑色素瘤细胞、SMMC-7721人肝癌细胞的生长抑制作用及敏感程度。方法 RT-PCR鉴定E1A基因的转录;MTT法检测细胞的生长抑制作用;Hoechst染色法检测细胞核形态改变;流式细胞术(FCM)检测细胞周期和细胞凋亡。结果 Ad-E1A在三种癌细胞内均有效表达,在其感染72h和96h后对Hep-2、A375、SMMC-7721细胞的生长抑制率达分别为18.65%和29.95%;33.02%和45.36%;36.32%和54.11%;其中对SMMC-7721细胞的作用最强,FCM检测发现其凋亡率为36.92%。Hoechst染色表明Ad-E1A诱导肿瘤细胞凋亡,使其呈现典型的核固缩、断裂并出现凋亡小体等核形态改变。结论 Ad-E1A对Hep-2、A375、SMMC-7721三种癌细胞均有生长抑制作用,尤以对SMMC-7721细胞作用最强、A375细胞次之,Hep-2细胞的敏感性相对较低;此外,Ad-E1A还能诱导肿瘤细胞凋亡。

裂瘤型腺病毒Ad-E1A对小鼠腹水型肝癌的基因治疗及免疫功能影响

目的研究裂瘤型腺病毒Ad-E1A对BALB/c小鼠腹水型肝癌的基因治疗效果,并检测其对免疫功能的影响。方法将Ad-E1A进行多轮扩增获得高效价病毒子,采用RT-PCR法鉴定E1A基因在小鼠肝癌H22细胞内的转录。将BALB/c小鼠分为非致瘤组(正常组)和皮下注射H22细胞转移瘤的致瘤组,其中致瘤组又分为PBS组、Ad-E1A组、5-Fu组进行抗肿瘤试验,检测各组的抑瘤率、胸腺指数、脾脏指数、白细胞总数等。结果获得了达7×109pfu/ml的高滴度Ad-E1A。致瘤组的抗肿瘤试验中,Ad-E1A组与5-Fu组的抑瘤率分别为66.7%和68.8%,二者差异无统计学意义(P>0.05);Ad-E1A组和PBS组间的胸腺指数和脾脏指数变化无统计学意义,而5-Fu组显著降低(P<0.01和P<0.05);同时Ad-E1A组和PBS组间的白细胞总数变化不大,但5-Fu组显著降低(P<0.01),其中中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞均明显降低(P<0.05)。结论 Ad-E1A可以抑制小鼠腹水型肝癌的生长,且对小鼠的免疫功能未见明显毒副作用。

人参皂苷衍生物AD-1通过抑制NLRP3炎症小体活化改善TNBS诱导的小鼠急性IBD

目的:初步探讨人参皂苷衍生物AD-1对三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的小鼠急性炎症性肠病(IBD)的影响及相关机制。方法:将6~8周龄的C57BL/6雄性小鼠随机分为正常对照组、乙醇对照组、模型组、治疗组和阳性对照组,后3组于造模前7 d采用1%TNBS乙醇溶液涂抹皮肤进行预敏化处理,造模日采用2.5%TNBS乙醇溶液灌肠建立小鼠急性IBD模型。AD-1和阳性对照药5-ASA于TNBS造模后第2天进行灌胃给药,连续灌胃4 d,第6天处死小鼠。取小鼠结肠,HE染色观察结肠组织的病理变化;RT-PCR和Western blot方法检测小鼠结肠组织的促炎细胞因子、紧密连接蛋白和NLRP3炎症小体的表达水平;ELISA法检测小鼠血清中IL-1β、IL-18水平。结果:AD-1能降低小鼠DAI评分,明显改善TNBS诱导的急性IBD小鼠结肠长度缩短的情况(P<0.01);治疗组小鼠结肠组织炎症病理明显改善,结肠组织促炎细胞因子IL-6、TNF-α、IL-1β、IL-18及NLRP3表达水平明显低于模型组(P<0.05或P<0.01);紧密连接蛋白的表达水平高于模型组(P<0.01)。结论:人参皂苷衍生物AD-1可能通过抑制NLRP3炎症小体活化缓解TNBS诱导的小鼠急性IBD。

人参皂苷衍生物AD-1对CD4^(+)T细胞亚群的调控及对DSS诱导的实验性结肠炎小鼠的影响

目的:探讨新型人参皂苷衍生物AD-1对体外分化CD4^(+)T细胞亚群的影响及对DSS诱导的实验性结肠炎小鼠CD4^(+)T细胞亚群的调控作用。方法:采用磁珠阴性选择法获得正常小鼠幼稚CD4^(+)T细胞,定向分化为Th1、Th2、Th17细胞、Treg,流式细胞术检测AD-1对其分化的影响。3%DSS三次循环法建立小鼠实验性结肠炎模型,AD-1药物干预后,流式细胞术、HE染色检测结肠、脾脏、肠系膜淋巴结中Th1、Th2、Th17细胞、Treg所分泌的细胞因子和特异性转录因子。结果:细胞活化后,早期标志物CD69无显著变化;AD-1下调Th1和Th17细胞分泌的细胞因子IFN-γ和IL-17A表达,上调Th2细胞分泌的细胞因子IL-4和Treg转录因子Foxp3及表面标志物CD25表达。AD-1可通过下调脾脏和肠系膜淋巴结中Th1和Th17细胞表达及上调Th2和Treg表达改善DSS诱导的小鼠实验性结肠炎。结论:AD-1对CD4^(+)T细胞活化无影响,但可抑制Th1和Th17细胞分化,促进Th2细胞和Treg分化,同时通过调节CD4^(+)T细胞亚群改善DSS诱导的小鼠实验性结肠炎。

人参皂苷元AD-1抗肺纤维化作用及机制

目的探讨人参皂苷元AD-1抗体内外肺纤维化的作用及其机制,为后疫情时代肺损伤保护作用的中药研发提供理论依据。方法体外实验利用脂多糖(LPS)10 mg·L^(-1)刺激小鼠成纤维细胞L92924 h,再分别给予AD-15,10和20μmol·L^(-1)进行治疗,采用MTT法检测AD-1对LPS诱导的成纤维细胞增值毒性的影响;采用流式细胞术检测AD-1对LPS诱导的L929细胞凋亡的影响;采用划痕愈合实验检测AD-1对L929细胞迁移的影响;采用Western印迹法检测AD-1对LPS诱导的L929细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Bax、Bcl-2、基质金属蛋白酶抑制剂1(TIMP-1)和基质金属蛋白酶2(MMP-2)的表达水平。在体实验采用昆明小鼠单次博来霉素(BLM,3.5 mg·kg^(-1))气管灌注的方法建立小鼠特发性肺纤维化模型。术后随机分为对照组(对照组气管灌注等体积的生理盐水),BLM组,BLM+AD-1(5,10和20 mg·kg^(-1))组,BLM+醋酸泼尼松(PA,5 mg·kg^(-1))组,于术后24 h灌胃治疗,连续给药28 d后取材,计算小鼠肺系数,并采用ELISA法检测小鼠肺组织羟脯氨酸(HYP)含量;采用Western印迹法检测α-SMA、转化生长因子β1(TGF-β1)、TIMP-1等纤维化因子的表达,并检测Bax、Bcl-2、β-连环蛋白和人沉默调节蛋白3(Sirt-3)等凋亡蛋白的表达。结果体外实验结果显示,AD-1可显著抑制LPS诱导的L929细胞增殖与迁移(P<0.01);与LPS(10 mg·L^(-1))组比,AD-15,10和20μmol·L^(-1)均可显著降低Bax/Bcl-2比值改善LPS诱导的L929细胞损伤引起的细胞凋亡(P<0.01);10和20μmol·L^(-1)组可显著增加MMP-2/TIMP-1比值(P<0.01),提示AD-2可能通过促进细胞外基质的降解从而改善LPS诱导的L929细胞损伤。在体实验结果显示,与BLM模型组相比,AD-110和20 mg·kg^(-1)均能显著降低BLM诱导的小鼠肺系数增加(P<0.01);显著降低血清及肺泡灌洗液中HYP的表达水平(P<0.01),并体现出剂量依赖性;显著降低BLM诱导的α-SMA,TGF-β1及TIMP-1的表达增加(P<0.05);显著降低Bax/Bcl-2,p-P53和β-连环蛋白表达(P<0.01);显著增加Sirt3表达水平(P<0.01),提示AD-1对BLM所致小鼠肺纤维化具有抑制作用。结论AD-1能够改善LPS诱导的成纤维细胞损伤及BLM诱导的小鼠肺纤维化,机制可能与改善正常肺细胞凋亡及抑制TGF-β1/α-SMA/Sirt3信号通路有关。

一株恶臭假单胞菌AD-1的好氧反硝化及产酶特性研究

为更好地实现好氧反硝化菌的脱氮性能,本研究基于前期筛选的一株好氧反硝化菌pseudomonas putida AD-1,从脱氮效率及产酶角度考察其不同CODcr/TN和DO下的反硝化脱氮性能。在一定CODcr/TN范围内,CODcr/TN与培养24h后的菌株脱氮效率及ORP的减少量均呈正相关。当CODcr/TN为20.7时,脱氮效率为59.68%;当CODcr/TN为2.1时,脱氮效率仅为7.53%。培养过程中NO2-N浓度虽始终处于较低水平却呈上下波动状态。AD-1菌的ODO在4.82 mg/L左右,与大多数的好氧反硝化菌相比具有更高的氧气忍受浓度。通过SDS-PAGE蛋白电泳可以明显看出不同DO下菌体与反硝化相关的蛋白表达差异性,为进一步研究好氧反硝化菌产酶特性奠定理论基础。

高效主抗氧剂AO-1的生产工艺及应用

本文叙述了AO-1抗氧剂生产工艺路线及应用情况。AO-1抗氧剂具有良好的热老化性、热稳定性和光稳定性,是一种非污染的硫代双酚型高效主抗氧剂。可用于高密度和低密度聚乙烯、聚内烯、聚苯乙烯、聚氨酯、聚氯乙烯和ABS等塑料制品;也可用于透明制品和橡胶制品中。

AD—1型平印胶的研制

本文介绍AD—1型平印胶的生产工艺,产品性能,讨论了原材料配方、浸泡时间、温度、搅拌速度、胶化时间对产品质量影响等。

紫外分光光度法测定澳洲茄胺盐酸盐含量

研究了用紫外分光光度法测定龙葵平喘胶囊和AD-1注射剂中澳洲茄胺盐酸盐（SHBL）含量的方法．结果表明，澳洲茄胺盐酸盐在75％的甲醇溶剂中波长λmax=204nm处有最大吸收；澳洲茄胺盐酸盐对照品溶液的线性回归方程为Y=-0．274＋8．726x，r=1．002，加标回收率为92．0％～100．1％（n=9）．

改善水泥体积安定性的新途径

目前,解决水泥安定性不良多采用磨前淋水、掺含水混合材或延长熟料存放时间的办法。本试验方法是在粉磨水泥熟料时,掺入AD-1普通硅酸盐水泥体积安定剂(以下简称AD-1剂),现将研究情况及试验结果介绍如下。 1.原材料的组分 (1)AD-1剂 AD-1剂是由工业废料、化工原料复合而成,呈超细灰色粉末状,比重为1.28,化学成分见表1。

力拔山兮气盖世 天逸AD-1PA后级功率放大器解析

熟悉天逸音响产品型号的朋友都知道,AD-2SE是天逸Hi-Fi系列功放中最顶级的合并式甲类旗舰产品,多年来,其优异的音质音色和实实在在的用料,以及铁甲威龙的重量级形象,给广大有纯甲情结的朋友们留下了极其深刻的印象。事实上,这台刚刚问世的AD-1PA Hi-Fi纯后级旗舰功放,其主体电路和AD-2SE的电路是基本一致的,选用了全平衡传输及全平衡放大电路。这样将全对称和全平衡有机地融合为一体的电路形式,极大地改善了重放音乐的纯净度，极好地保留音乐各个声部的细节，从而基本达到了我们所追求的全平衡传输放大的至高境界。

腺病毒介导的E1A对PC-3人前列腺癌细胞生长的抑制效应

1研究背景前列腺癌是男性生殖系统常见的恶性肿瘤,其发病率及病死率都很高,目前首选的治疗方法仍然是手术治疗,但效果尚不理想。当今,基因治疗作为肿瘤治疗的一种新模式,越来越受到人们的重视。

腺病毒介导IL-24-E1A双基因载体的构建及其体外抑制SMMC-7721肝癌细胞生长作用初探

构建IL-24和E1A双基因腺病毒载体,获得Ad-IL-24-E1A重组腺病毒子,分析其体外抑瘤作用。PCR及BglⅡ和SalⅠ酶切获得IL-24,与空载体构建成pAdTrack-IL-24-IRES。XhoI和EcoRV酶切获得E1A片段,与pAdTrack-IL-24-IRES连接后成功构建pAdTrack-IL-24-IRES-E1A,同源重组、包装和扩增获得Ad-IL-24-E1A重组病毒子。用50MOI重组腺病毒感染SMMC-7721肝癌细胞,MTT法测定Ad-IL-24-E1A的细胞生长抑制作用;流式细胞仪分析细胞凋亡情况。本研究成功获得Ad-IL-24-E1A重组病毒子。与其他组相比,Ad-IL-24-E1A明显抑制肿瘤细胞生长,感染48h后凋亡率达52%,而抑制正常细胞作用不明显。研究提示Ad-IL-24-E1A双基因重组载体明显抑制SMMC-7721肝癌细胞生长。