重组Lac-Z、反义c-myc腺病毒载体的增殖及鉴定

目的:建立重组反义c-myc腺病毒载体(Ad-AS-c-myc)、LacZ腺病毒(AD-Lac-Z)的增殖的方法。方法:对培养的293细胞转染重组反义c-myc、Lac-Z腺病毒载体,使重组反义c-myc、Lac-Z腺病毒载体在293细胞内大量复制,及时收集病变细胞,反复冻融以释放293细胞中的病毒载体,过滤除细胞碎片,利用倍比稀释法测定病毒载体滴度。PCR技术对扩增重组反义c-myc、Lac-Z腺病毒载体进行鉴定。结果:利用293细胞扩增重组腺病毒载体,获得的Ad-AS-c-myc滴度为:2.3×109pfu/ml;Ad-LacZ滴度为:1.2×1010pfu/ml。在Ad-LacZ可见在800bp出现一特异性PCR扩增条带,为腺病毒特异扩增带。Ad-AS-c-myc在800及608bp处出现两条特异扩增条带,分别为腺病毒及反义c-myc特异扩增条带。结论:对转染的293细胞冻融后收集重组腺病毒载体具有高效、可靠、简便、相对经济实用的优点,有推广价值。