PI3K/Akt/mTOR信号转导通路在肝细胞癌发生发展中的作用

PI3K/Akt/mTOR信号转导通路可以通过调控基因表达,在肝细胞癌肿瘤细胞生成、增殖、转移和凋亡等过程中发挥重要作用。简述了PI3K/Akt/mTOR信号通路的组成及功能,对PI3K/Akt/mTOR通路在肝细胞癌进程中的作用机制及相关抑制剂的研究进展进行了综述,揭示阻断PI3K/Akt/mTOR通路可以成为肝细胞癌治疗新的靶点方向。

细胞凋亡途径及其机制

细胞凋亡存在于多细胞生物的整个生命过程当中,可及时清除机体内多余和受损伤的细胞,维持组织器官的稳定性。真核细胞主要通过死亡受体介导的外部凋亡途径、内部线粒体途径、B粒酶介导的细胞凋亡途径以及近几年开始关注的内质网应激途径介导细胞凋亡的发生。而参与这些细胞凋亡过程的主要有4类蛋白分子,即凋亡蛋白酶(caspases)、衔接蛋白(adapter proteins)、Bcl-2和凋亡抑制蛋白(IAPs)。细胞凋亡对卵巢储备及一些妇科疾病如子宫内膜异位症、卵巢癌等的发生发展产生影响。

黄芪注射液调节一氧化氮合酶抗再灌注损伤作用

目的:研究黄芪注射液抗培养乳鼠心肌细胞再灌注损伤的作用与一氧化氮合酶(NOS)表达的关系。方法:采用培养的SD乳鼠心肌细胞缺氧复氧模型,实验分为5组:A组为正常对照组,B组、C组、D组、E组均为缺氧-复氧组。各组培养液组成:B组缺氧液,C组缺氧液加黄芪,D组缺氧液加NOS抑制剂L-NAME,E组缺氧液加黄芪加L-NAME。缺氧4 h,复氧2 h。比较缺氧-复氧后培养液中心肌酶含量,并进行心肌细胞NOS蛋白表达检测。结果:复氧2 h后,B组、C组、D组、E组与A组比较心肌酶谷草转氨酶(GOT)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)均有升高(P<0.05)。C组与B组比较GOT升高减轻(P<0.05),但无统计学意义。黄芪增强缺氧-复氧引起的心肌细胞NOS表达增加,L-NAME对黄芪引起的NOS表达增加有一定抑制作用。结论:黄芪能够减轻缺血再灌注损伤,其机制涉及了NOS信号转导途径。

E-cadherin和C-erbB2在非小细胞肺癌中的表达及其临床病理意义

目的:研究非小细胞肺癌(NSCLC)中E-cadherin和C-erbB2蛋白的表达状况,分析其临床病理意义。方法:用免疫组化方法对82例非小细胞肺癌标本和20例正常肺组织进行免疫组化检测。结果:正常肺组织E-cadherin表达;4例C-erbB2+表达,无C-erbB2过表达。NSCLC中E-cadherin表达率为(49%),低分化组NSCLC E-cadherin表达率为30%,明显低于中高分化组表达率60%(P=0.010);中晚期(+)NSCLC表达率为31%,明显低于早期(+)NSCLC表达率62%(P=0.007);淋巴结转移组NSCLC表达率为39%,低于无淋巴结转移组表达率65%(0.026),均有统计学意义。肺腺癌C-erbB2表达率为45%,高于鳞癌过表达率17%(P=0.017);中晚期NSCLC(+)过表达率为51%,高于早期(+)过表达率21%(P=0.004);淋巴转移组过表达率为41%,高于无淋巴转移组过表达率23%(P=0.028)。E-cadherin的低表达和C-erbB2过表达无相关性。结论:E-cadherin低表达和C-erbB2过表达在肺癌的发生、发展和淋巴结转移中可能扮演重要的角色,联合检测对判断NSCLC生物学行为有病理临床意义。

骨桥蛋白剪接变体对胶质瘤细胞侵袭性的影响

目的探讨骨桥蛋白(OPN)剪接变体对胶质瘤细胞侵袭性的影响及其作用机制。方法采用荧光定量聚合酶链反应或逆转录-聚合酶链反应分别检测正常脑组织、WHOⅡ～Ⅳ级胶质瘤组织,以及人胶质瘤细胞系U251、U87、SHG44和TJ905骨桥蛋白各剪接变体表达水平;小干扰RNA(siRNA)技术沉默野生型骨桥蛋白,慢病毒质粒表达载体分别导入三种突变型剪接变体OPN-a、OPN-b和OPN-c;细胞体外侵袭实验检测U251和U87细胞体外侵袭力。整合素α_vβ_3受体抗体和磷脂酰肌醇3-激酶(PI_3K)抑制剂LY294002抑制骨桥蛋白的作用,阻断PI_3K/Akt信号转导通路。Western blotting法检测侵袭相关蛋白尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达水平,以及丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶AKT磷酸化水平和核因子-κB(NF-κB)p65转录进入细胞核水平,明胶酶谱法检测MMP-2和MMP-9活性。结果 WHOⅢ～Ⅳ级胶质瘤组织,以及U251和U87细胞骨桥蛋白各剪接变体呈高表达,而正常脑组织、WHOⅡ级胶质瘤组织及SHG44和TJ905细胞呈低表达。OPN-a和OPN-c可升高U251和U87细胞AKT磷酸化水平,诱导NF-κB p65转录进入细胞核,提高uPA、MMP-2和MMP-9表达水平,增强MMP-2和MMP-9活性,从而增强胶质瘤细胞侵袭力;OPN-b对胶质瘤细胞侵袭力无明显作用。结论 OPN-a和OPN-c通过激活PI_3K/Akt/NF-κB信号转导通路而增强胶质瘤细胞侵袭力。

微小RNA-9-5p调控脂多糖诱导小鼠树突状细胞免疫功能的机制研究

目的研究微小RNA-9-5p(miR-9-5p)对脂多糖炎性损伤小鼠树突状细胞(DCs)免疫功能的影响,并探讨其机制。方法该研究于2019年1—9月完成。小鼠树突状细胞DC2.4购于美国模式培养物中心。运用脂多糖(LPS)处理DC2.4细胞,建立炎性树突状细胞损伤模型;将miRNA模拟物阴性对照(miR-NC)、miR-9-5p模拟物(mimics)、miRNA抑制物阴性对照(antimiR-NC)、miR-9-5p抑制剂(anti-miR-9-5p)、小干扰RNA无序对照(si-NC)组、信号转导和转录激活因子6(STAT6)的小干扰RNA(si-STAT6)、miR-9-5p mimics+空载体质粒(pcDNA)、miR-9-5p mimics+STAT6过表达质粒(pcDNA-STAT6)均用脂质体法转染至LPS诱导的DC2.4细胞;噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖;实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测细胞中miR-9-5p、STAT6、白细胞分化抗原80(CD80)、白细胞分化抗原86(CD86)、白细胞介素-12(IL-12)的mRNA表达;蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞中STAT6的蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验检测细胞的荧光素酶活性。结果与正常DC2.4相比,脂多糖炎性损伤的DC2.4细胞中miR-9-5p表达(0.16±0.01)比(1.00±0.08)降低,STAT6表达(3.02±0.26)比(1.00±0.07)升高(P<0.05);过表达miR-9-5p可降低LPS诱导的DC2.4细胞中CD80(0.31±0.03)比(1.00±0.08)、CD86(0.29±0.02)比(1.01±0.06)、IL-12(0.46±0.04)比(1.00±0.05)的表达;敲减STAT6可降低LPS诱导的DC2.4细胞中CD80(0.42±0.04)比(1.00±0.08)、CD86(0.34±0.03)比(0.99±0.07)、IL-12(0.29±0.02)比(1.01±0.08)的表达;miR-9-5p明显的抑制野生型STAT6细胞的荧光活性,并负向调控STAT6的表达水平;重要的是,过表达STAT6可逆转过表达miR-9-5p对LPS诱导的DC2.4细胞中CD80[(1.68±0.13)比(1.00±0.06)]、CD86[(1.79±0.15)比(0.99±0.08)]、IL-12[(1.82±0.18)比(0.98±0.09)]的抑制作用。结论miR-9-5p抑制LPS诱导的DC2.4细胞的免疫功能,其机制可能与靶向STAT6有关,将可为炎性疾病的治疗提供新靶点。

SOCS3基因在人类疾病发生中的作用

细胞因子信号通路抑制因子3(SOCS3)是多种细胞因子(如白细胞介素、干扰素、肿瘤坏死因子等)信号通路的负反馈调节因子。SOCS3主要通过酪氨酸激酶信号转导与转录活化因子(JAK-STAT)通路执行其在信号转导过程中的抑制作用。近年研究发现,SOCS3与糖尿病、多囊卵巢综合征、肿瘤、炎症和过敏反应等多种疾病有关。SOCS3或许可以作为某些疾病诊断及评估预后的分子指标,以及作为特定疾病的靶基因。

高表达衔接蛋白Src羧基端激酶结合蛋白对Jurkat细胞形态及功能的影响(英文)

背景:衔接蛋白分子的联动和协同有效调控T细胞的信号转导,形成级联放大或限制,最终实现T细胞复杂的免疫功能。蛋白分子Src羧基端激酶结合蛋白正是衔接蛋白的一种,其主要是通过负反馈调节Src家族激酶活性。而这种负反馈调节作用依赖于Src羧基端激酶结合蛋白的Y317,可能涉及Src羧基端激酶的SH2结构域。目的:探索衔接蛋白Cbp对Jurkat细胞形态及功能的作用。方法:构建仅表达增强绿色荧光蛋白的融合蛋白和Src羧基端激酶结合蛋白-增强绿色荧光蛋白的融合蛋白的病毒颗粒。将Jurkat细胞分为未转染组、阴性对照组和Src羧基端激酶结合蛋白组,后2组转染仅表达增强绿色荧光蛋白的病毒和转染Src羧基端激酶结合蛋白-增强绿色荧光蛋白的病毒。结果与结论:细胞转染效率大于95%,Src羧基端激酶结合蛋白定位于细胞膜上。转染Src羧基端激酶结合蛋白-增强绿色荧光蛋白病毒的Jurkat细胞,皱缩细胞增多,大小均一性较差,细胞坏死凋亡的数量增加,细胞中Src羧基端激酶结合蛋白基因表达上调,Src羧基端激酶表达下降,而酪氨酸蛋白激酶表达增加。提示Jurkat细胞转染Src羧基端激酶结合蛋白后,可使细胞存活率下降,细胞信号转导功能减弱。

构建大鼠减体积肝移植模型的肝脏信号转导差异蛋白表达

背景:蛋白质组学是目前医学界比较热门的科学研究技术,已经在肝移植的相关研究中得到初步应用,但未曾报道有在大鼠减体积肝移植相关研究中的应用。目的:利用蛋白质组学相关技术探讨大鼠减体积肝移植后与肝脏信号转导蛋白相关的差异蛋白。方法:在成功建立大鼠减体积肝移植模型的基础上,分别于移植后1,3,7 d获取移植肝脏组织,然后与预先获取冻存的供体和受体肝脏组织采用固相p H梯度双向凝胶电泳技术,建立双向凝胶电泳图谱,再利用串联质谱(MS-MS)分析及数据库对差异表达的蛋白质点进行鉴定。结果与结论:实验中以变化倍数大于10倍为标准进行差异蛋白点的选择,总共发现了72个差异点,最终鉴定到了功能比较明确的32个蛋白,其中有4个蛋白参与了信号转导的过程,其分布于肝移植后的第3天和第7天,占6%。结果显示在大鼠减体积肝移植模型的成功和稳定建立的基础上,利用蛋白组学的相关技术,研究了大鼠减体积肝移植后参与肝脏信号转导的差异蛋白,为下一步深入研究调控这些蛋白的Micro RNA提供了有力的前期基础研究数据。

左、右归丸对大鼠骨髓间充质干细胞成骨诱导中转化生长因子β1及Smad2/3的影响

背景:滋补肾阴左归丸、温补肾阳右归丸均可协同诱导剂诱导骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化,但其机制尚有待探讨。目的:观察左、右归丸含药血清对体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化过程中转化生长因子β1及其信号转导蛋白Smad2/3表达的影响。方法:运用全骨髓贴壁法分离和培养大鼠骨髓间充质干细胞;分别以空白血清对照组,左归丸、右归丸、阳性对照药补佳乐制备的大鼠含药血清加诱导剂(地塞米松、维生素C、β-甘油磷酸钠),以及诱导剂组为对照共5组对骨髓间充质干细胞进行干预。采用Western blot法检测Ⅰ型胶原蛋白表达,用免疫组化法检测转化生长因子和Smad2/3在细胞内的表达。结果与结论:左归丸、右归丸含药血清诱导骨髓间充质干细胞成骨后Ⅰ型胶原蛋白、转化生长因子β1、Smad2/3蛋白表达高于空白组、诱导剂组,差异有显著性意义(P<0.05),且左归丸优于右归丸(P<0.05)。提示左、右归丸含药血清能通过转化生长因子β1调节Smad2/3信号通路促进骨髓间充质干细胞成骨分化,且左归丸组效果更好,表明中医"滋肾阴"法更能有效的促进骨髓间充质干细胞的成骨分化。

P62蛋白在常见神经变性病中的表达观察

目的评价P62蛋白在临床常见神经变性病特征性病理改变中的表达变化,探讨其病理诊断意义。方法收集1994年6月至2017年10月经临床和病理明确诊断的神经变性病脑组织标本共11例,包括阿尔茨海默病5例(其中2例合并嗜银颗粒病)、帕金森病3例、进行性核上性麻痹2例、多系统萎缩1例;另以3例无神经变性病的脑组织标本为对照。分别进行HE、卢卡斯快蓝及Gallyas-Braak银染,以及β-淀粉样蛋白、AT8、α-突触核蛋白和P62抗体免疫组织化学染色,显微镜下观察不同神经变性病的特征性病理改变和P62蛋白表达变化。结果阿尔茨海默病神经原纤维缠结、帕金森病路易小体和路易轴索、进行性核上性麻痹丛状星形细胞、嗜银颗粒病的嗜银颗粒,以及多系统萎缩少突胶质细胞内包涵体均表达P62蛋白,且形态特征与其特异性抗体染色结果相一致;另外,阿尔茨海默病神经炎性斑仅少量表达P62蛋白,而弥散斑表达阴性;淀粉样小体P62蛋白表达亦呈阳性;正常对照脑组织不表达P62蛋白。结论P62蛋白在阿尔茨海默病、帕金森病、进行性核上性麻痹、多系统萎缩等疾病特征性病理改变和淀粉样小体中均表达阳性,且形态与各种神经变性病组织学及相应特异性蛋白表达结果一致,推荐P62抗体作为神经变性病的辅助病理诊断。

宫颈癌组织STAT3和MMP-2表达及意义

目的探讨信号转导和转录激活因子3（STAT3）与基质金属蛋白酶-2（MMP-2）在宫颈癌组织表达及意义。方法采用免疫组织化学SP法分别检测16例正常组织、50例宫颈上皮内瘤变（CIN）、50例宫颈癌组织中STAT3与MMP-2的表达水平。结果正常宫颈、CIN及宫颈癌组织中STAT3、MMP-2表达水平逐渐增高,各组间差异均有统计学意义（χ2=6.417~27.097,P〈0.05）。STAT3异常表达与宫颈癌的病理分级和临床分期及淋巴结转移有关（χ2=4.778~13.651,P〈0.05）;MMP-2的异常表达与临床分期及淋巴结转移有关（χ2=9.039、5.003,P〈0.05）,而与病理分级无关;两者与病人年龄、肿瘤大小及肿瘤类型均无相关性。宫颈癌组织STAT3与MMP-2的表达呈正相关（r=0.398,P〈0.05）。结论宫颈癌组织STAT3与MMP-2表达密切相关,两者表达水平可能与宫颈癌浸润转移有关,STAT3可能通过调控其下游靶基因MMP-2的表达影响宫颈癌的浸润转移。

骨桥蛋白与基质金属蛋白酶2在卵巢癌中的研究进展

卵巢癌是常见的妇科恶性肿瘤之一,其死亡率在妇科三大恶性肿瘤中居首位。具有起病隐匿、发展迅速及化疗耐药等特点,多数患者预后不良。骨桥蛋白(osteopontin,OPN)及基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)是新型肿瘤标志物,近年发现OPN和MMP-2在卵巢癌组织中高表达。OPN是一种分泌型磷酸化糖蛋白,可通过核因子κB(NF-κB)等途径抑制卵巢癌细胞凋亡,激活丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导途径及改变细胞骨架,并且可通过激活磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)途径诱导卵巢癌细胞生长和增殖,促进细胞黏附及转移。MMP-2是一种Ⅳ型胶原酶,主要通过降解细胞外基质蛋白并参与细胞信号转导,与卵巢癌发生、发展、侵袭和转移密切相关。另外,OPN可通过多种信号途径激活MMP-2表达,加快卵巢癌细胞周围细胞外基质降解,二者联合检测能够提高卵巢癌诊断的敏感度和特异度,且对于评估卵巢癌的治疗预后方面也有应用价值。本文综述OPN与MMP-2在卵巢癌的转移、侵袭等生物学行为中的作用及其分子机制。

磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路在肝胆恶性肿瘤发生发展中的作用

磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/m TOR)信号通路参与调节细胞代谢、生长、增殖、血管生成等多种重要生物过程,其高度激活的状态与多种恶性肿瘤的发生、发展相关。对PI3K/Akt/m TOR信号通路及m TOR蛋白进行了简单的介绍,并阐述了其在肝细胞癌、胆管细胞癌、胆管癌及胆囊癌发生发展中的作用机制,进一步简述了m TOR抑制剂在肝胆恶性肿瘤治疗中的作用。认为PI3K/Akt/m TOR信号通路为晚期肝胆恶性肿瘤提供了新的治疗靶点,新型m TOR抑制剂的不断研发将为晚期肝胆恶性肿瘤患者带来新的希望。

环境理化因素对表皮生长因子受体及其信号通路的影响

表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)为典型的受体酪氨酸激酶,能够与多种配体结合,在细胞增殖、存活、黏附、分化和凋亡等生命活动中发挥重要作用。EGFR及其介导的信号通路的异常与肿瘤的发生发展密切相关。很多环境理化因素可通过影响EGFR磷酸化、或其结构功能和细胞分布、或其配体和其它相关分子表达,干预EGFR信号转导过程、影响靶基因的表达从而最终影响细胞生命活动。文中就此做一简要综述,以期更好地理解环境理化因素引起的细胞应激以及致突变致癌的表遗传分子机理。

高强度聚焦超声通过TRIF介导的ERK通路增强乳腺癌的顺铂化疗敏感性

目的探究高强度聚焦超声(HIFU)通过β干扰素TIR结构域衔接蛋白(TRIF)介导的细胞外调节蛋白激酶(ERK)通路增强乳腺癌顺铂(DDP)化疗敏感性的作用机制。方法依次增加DDP浓度间歇作用的方法诱导乳腺癌细胞(MDA-MB-231、MCF-7)/DDP耐药细胞;将MDA-MB-231/DDP、MCF-7/DDP细胞分为control组、HIFU组、HIFU+二甲基亚砜(DMSO)组、HIFU+漆黄素(fisetin)组。CCK-8检测细胞活力;集落形成实验检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞周期及凋亡情况;Western blot检测细胞TRIF蛋白、耐药相关蛋白及ERK通路蛋白表达;体内成瘤实验检测肿瘤生长情况;免疫组化染色法检测肿瘤组织Ki-67的表达。结果与亲本MDA-MB-231及MCF-7细胞相比,在相同浓度DDP处理下MDA-MB-231/DDP及MCF-7/DDP细胞活力更高,且半数抑制浓度(IC50)显著增加(P<0.05),成功建立了稳定的DPP耐药细胞系;与control组相比,HIFU组MDA-MB-231/DDP及MCF-7/DDP细胞IC50、OD450值、克隆细胞数、S期细胞百分比、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、TRIF、p-糖蛋白(p-gp)、多药耐药基因1(MDR1)、p-ERK1/2/ERK1/2表达水平显著降低,G0/G1期细胞百分比、细胞凋亡率、Bcl-2关联X蛋白(Bax)表达水平显著增加(P<0.05);与HIFU组相比,HIFU+fisetin组细胞IC50、OD450值、克隆细胞数、S期细胞百分比、Bcl-2、TRIF、pgp、MDR1、p-ERK1/2/ERK1/2表达水平显著增加,G0/G1期细胞百分比、细胞凋亡率、Bax表达水平显著降低(P<0.05)。与control组相比,HIFU组肿瘤体积、肿瘤质量、TRIF及p-ERK1/2/ERK1/2表达水平、Ki-67阳性表达显著降低(P<0.05);与HIFU组相比,HIFU+fisetin组肿瘤体积、肿瘤质量、TRIF及p-ERK1/2/ERK1/2表达水平、Ki-67阳性表达显著增加(P<0.05)。结论HIFU通过抑制TRIF表达来抑制其介导的ERK通路,从而增强乳腺癌DDP化疗敏感性。

STYK1激活Akt信号通路促进肺癌细胞增殖

目的探讨酪氨酸蛋白激酶1(tyrosine-protein kinase 1,STYK1)在肺癌组织中的表达水平、对肺癌细胞生存的影响及其作用机制。方法定量PCR检测STYK1在35例肺癌组织中的表达水平,分析其与患者临床病理特征间的关系。沉默肺癌细胞A549和HCC827中STYK1基因,定量PCR检测mRNA表达水平,Western blot检测蛋白表达水平,CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡。结果STYK1在肺癌组织中表达水平升高(P<0.01)。其表达水平在肺癌病理分期方面比较,差异具有统计学意义(P<0.01)。沉默STYK1后,肺癌细胞增殖活性降低,细胞凋亡率升高,差异均具有统计学意义(均P<0.01)。沉默STYK1抑制Akt磷酸化,下调Bcl-2和Bcl-xL表达水平(均P<0.01)。结论STYK1在肺癌组织中呈高表达。其可能通过激活Akt信号通路,促进肺癌细胞增殖。

干扰素基因刺激蛋白信号通路与HBV感染的相互作用

干扰素基因刺激蛋白(STING)是新发现的天然免疫系统中的重要接头蛋白,在细胞质DNA介导天然免疫反应中发挥重要作用。胞内双链DNA识别受体均通过STING介导产生Ⅰ型干扰素以及其他细胞因子。天然免疫和抗HBV特异免疫应答不足是HBV慢性感染的关键原因。介绍了STING的发现及其结构研究的最新进展,并简要阐述了STING信号通路的活化机制。总结了国内外研究团队在STING信号通路与HBV相互作用方面的研究进展,并指出了其在临床治疗方面的潜在价值。

实验性高血压大鼠左心室肥大心肌细胞中黏着斑激酶的表达

目的研究黏着斑激酶(FAK)在高血压心室肥大发生发展机制中的作用。方法以特发性高血压心力衰竭(SHHF)大鼠为研究对象,通过免疫荧光标记、共聚焦显微镜及 Western blot等方法,检测不同月龄 SHHF 大鼠左心室心肌细胞中 FAK 的表达及其分布。结果实验组 SHHF 大鼠与对照组 WKY 大鼠比较,FAK 的表达在2月龄时无明显变化(50.5±6.9比49.8±5.0,n=6,P>0.05),而6、12、18月龄的 SHHF 大鼠心肌细胞中,FAK 表达明显增加(130.6±3.0比47.3±1.3,144.7±5.4比46.4±3.1,141.4±9.8比48.5±2.2,各组 n=6,P<0.05),并且聚集在心肌细胞两端的闰盘和细胞核等部位。结论在心肌肥大的发展过程中,FAK 表达增加并有闰盘及核内的聚积,提示 FAK 与心肌肥大关系密切,可能参与了心肌肥大细胞信号转导的调控。

大鼠局灶性脑缺血后FADD和Daxx的表达

目的探讨大鼠脑缺血再灌注后 Fas 相关蛋白 FADD 和 Daxx 在缺血半暗带的表达变化。方法①将 SD 大鼠随机分为假手术组和模型组。线栓法制备大鼠大脑中动脉梗阻(MCAO)模型,缺血2 h 后恢复再灌注,再灌注后1、3、6、12和24 h 处死动物。RT-PCR、免疫组织化学、Westernblot 等方法分别检测缺血半暗带 FADD、Daxx mRNA 和蛋白的表达变化;②免疫荧光双标分别标记神经元核区和 FADD 及 Daxx 蛋白染色区,激光扫描共聚焦显微镜观察二者在缺血再灌注前后神经元的定位。结果再灌注3 h 假手术组可以检测到少量的 FADD mRNA 和蛋白表达(mRNA:0.441±0.038;蛋白:156.78±13.04),模型组 FADD mRNA 和蛋白表达变化一致,在再灌注3 h 开始上升(mRNA:0.628±0.059,P<0.0l;蛋白:131.28±5.99,F=15.692,P<0.01),12 h 达到高峰(mRNA:0.971±0.070,F=56.233,P<0.01;蛋白:104.36±8.55,P<0.01),24 h 显著下降(mRNA:0.551±0.042,P<0.05;蛋白:123.01±11.87,P<0.01),模型组 FADD mRNA 和蛋白表达变化一致,在再灌注3 h 开始上升(P<0.01),12 h 达到高峰(P<0.01),24 h 显著下降(P<0.05);假手术组可以检测到较高的 Daxx mRNA 和蛋白表达;模型组 Daxx mRNA 和蛋白表达变化一致,再灌注3 h 开始上升(P<0.01),此后持续上升,一直至24 h 仍维持较高水平表达(P<0.01);激光扫描共聚焦显微镜显示脑缺血再灌注后 FADD 的免疫活性位于胞质,Daxx 的免疫活性从胞核向胞质移位。结论大鼠脑缺血急性期 FADD、Daxx mRNA 和蛋白表达增加,可能参与了脑缺血后促凋亡作用。