Livin与肿瘤研究新进展

Livin是凋亡抑制蛋白家族的新成员,具有凋亡抑制蛋白家族的特征性结构——BIR结构域。这一结构域介导了Livin与Caspase-3、7、9的直接结合,从而阻断caspase凋亡作用的发挥,达到抑制细胞凋亡的作用。Livin基因定位于染色体20q13,编码Livinα和β两种蛋白。亚细胞定位显示,在细胞质和细胞核均有表达,羧基末端的RING结构域介导了Livin的亚细胞定位。目前的研究表明,Livin可表达于消化系统的胃癌、泌尿系统的膀胱癌、呼吸系统肺癌和血液系统的淋巴细胞性白血病等多个系统的肿瘤中,也存在于乳腺癌及黑色素瘤中,在肿瘤的细胞系中也有较广泛的表达,但在各系统的正常组织中却很少表达。研究还表明,在药物诱导凋亡时,Livin的表达有明显升高。用RNA干扰技术对Livin基因的表达进行干预后,细胞对诱导凋亡药物和放射线的敏感性增加。根据Livin设计的抗原肽可以特异性诱导肺癌患者杀伤性T细胞的活化。目前的研究已表明,Livin在肿瘤的发展和耐药中都有重要作用。Livin特异表达于肿瘤组织的特性有可能为肿瘤的早期诊断、基因治疗和细胞治疗提供新靶点。

稳定表达Keap1的H460-N5细胞株的建立及增敏抗肿瘤药物作用的研究

目的:建立野生型Keap1过表达的H460细胞株降表达Nrf2,检测Nrf2-ARE信号通路对肿瘤细胞耐药性的影响。方法:H460细胞转染mKeap1-pEGFP后经过长期筛选得到稳定表达Keap1蛋白质的细胞株,通过Western blotting和荧光定量PCR的方法进行检测;并通过多次继代培养,细胞株H460-N5稳定表达mKeap1,Nrf2及其调控基因均显著降表达;用MTS法检测抗癌药物奥沙利铂、阿霉素和依托泊苷对细胞增殖抑制率。结果:H460细胞转染mKeap1-pEGFP后筛选建立Nrf2降表达的稳定细胞株H460-N5。MTS数据显示,与对照组相比,抗癌药物奥沙利铂、阿霉素和依托泊苷对H460-N5细胞的抗增殖作用更显著。当奥沙利铂和依托泊苷分别在93μmol/L和100μmol/L浓度作用于对照组细胞株H460-N0时,药物作用接近半数抑制率(IC50);而在H460-N5细胞株中,两种抗癌药物的IC50分别为42μmol/L和30μmol/L。阿霉素对H460-N0细胞的IC50>3 mg/L,而对H460-N5细胞的IC50约为2 mg/L。结论:Keap1过表达的H460-N5细胞Nrf2及调控基因显著降低并增敏抗癌药物奥沙利铂、阿霉素和依托泊苷对肿瘤细胞的增殖抑制作用。

浆细胞性乳腺炎物质交换通道转运障碍的病理机制研究进展

浆细胞性乳腺炎(PCM)是以乳腺导管扩张、浆细胞浸润为主要病理表现的非哺乳期乳腺炎。目前关于PCM的病因不明,临床采用抗生素、抗结核、激素、手术等治疗方式治疗效果欠佳,且药物副作用、术后外形损伤、复发等给女性患者的身心造成重创。逐步完善PCM发病机制研究,实现精准有效治疗,减少复发是目前亟待解决的重点。多数学者认为PCM乳腺导管内的脂肪性物质堆积、外溢会引起导管周围的化学性刺激和免疫性反应,导致多种炎细胞浸润。乳腺导管分泌物堆积可能与乳腺导管上皮细胞物质交换异常有关,最终引起上皮细胞坏死。物质交换通道实现细胞间物质转运的同时维持内环境稳态,新的研究表明物质交换通道与炎症和免疫密切相关。离子通道通过调节离子-水平衡和免疫启动等多种机制参与乳腺生理及病理反应,机械敏感性离子通道Piezo1作为机械力相关慢性炎症中的力传感器,探究机械力损伤和僵硬环境诱导促炎因子分泌和炎细胞迁移,对PCM外伤后出现的乳腺局部炎症反应有提示意义。水通道蛋白(AQP)动态调节水和溶质的转运,PCM乳腺局部病变组织迅速红肿、液化,可能由AQP介导的快速水流变化,固有免疫和适应性免疫参与的炎症反应所导致;部分具有甘油转运能力的AQP作用于脂肪分解和脂质沉积,也可以为PCM乳腺导管内大量脂质样分泌物堆积的机制提供参考。细胞外囊泡(EV)包围并携带各种生物分子,保护它们不在恶劣的细胞外环境中降解,从而实现短距离和长距离的信息传递的功能。当内容物具有促炎性时,EV传播破坏性炎症的能力可用于解释PCM乳腺局部炎症同时出现发热、咳嗽、下肢结节性红斑等全身炎症反应的原因。PCM患者乳腺导管内分泌物聚集,管腔高度扩张,导管周围大量炎细胞浸润,因脓肿内含有大量坏死的细胞及组织碎片,若治疗延误,反复不愈者可形成瘘管。本文从离子通道、AQP和EV等物质交换通道障碍角度探讨PCM的发病机制,希望能为后续PCM关键病理机制和干预靶点的研究提供新思路。

CIN和宫颈浸润癌中Livin、Survivin的表达与意义

目的探讨凋亡抑制蛋白Livin、Survivin在CIN和宫颈癌中的表达与意义。方法采用免疫组织化学和原位杂交法分别检测Livin和Survivin在81例宫颈癌、74例CIN、20例正常宫颈组织中的表达情况，并结合临床病理特征进行分析。结果Livin、Survivin在正常宫颈组织中不表达、在CIN和宫颈癌中表达上调，并随CIN级别和肿瘤临床分期的升高、组织分化程度的降低、淋巴结转移而上升（P〈0．05）；与宫颈癌的病理类型、肿瘤生长类型无关。二者在宫颈癌中的表达有相关性。结论Livin、Survivin在CIN和富颈癌的发生发展中起重要作用，与肿瘤的恶性程度及不良预后有关，可成为宫颈癌的合适瘤标和基因治疗的新靶点。

1型糖尿病大鼠肾脏衔接蛋白p66Shc的表达

目的观察1型糖尿病大鼠肾脏衔接蛋白p66Shc的表达及活性氧的水平。方法以链脲佐菌素制备糖尿病大鼠模型，分为糖尿病组和正常对照组。采用双缩脲法检测24h尿蛋白；免疫组化、Westem blot方法检测肾脏p66Shc表达；二氢乙啶染色检测肾组织活性氧。结果与对照组相比，糖尿病大鼠24h尿蛋白明显增高（P〈0．01），肾脏特别是肾小管p66Shc的表达显著增高（P〈0．05），活性氧含量明显增高。结论糖尿病大鼠肾脏p66Shc表达增强，活性氧含量增加，p66Shc可能在糖尿病肾病肾组织氧化损伤的发生发展过程中扮演重要角色。

儿童急性白血病Livin基因表达及意义

目的探讨Livin基因的表达与儿童急性白血病发生以及临床治疗效果的关系及意义。方法采用逆转录聚合酶链式扩增反应对53例急性白血病患儿骨髓液细胞中的LivinmRNA的表达进行检测。结果53例急性白血病患儿中Livin基因的表达率高于对照组（P〈0.05）；初治组中Livin阳性率低于复发组（P〈0.05）；Livin表达阳性组的耐药率高于阴性组（P〈0.05）。结论Livin基因的过表达可能与儿童急性白血病的发生有关，并可能是影响其治疗效果和预后的重要因素。

COG6基因复合杂合突变所致先天性糖基化障碍一例并文献复习

目的分析COG6基因复合杂合突变所致先天性糖基化障碍(congenital disorder of glycosylation caused by compound heterozygous mutation of the COG6 gene,COG6-CDG)的临床表现和基因突变特点。方法回顾解放军总医院第七医学中心附属八一儿童医院2019年8月收治的1例COG6-CDG患儿的临床资料。以"先天性糖基化障碍ⅡL型、先天性糖基化缺陷ⅡL、COG6、COG6-CDG、congenital disorders of glycosylation typeⅡL、congenital disorders of glycosylationⅡL"为关键词,检索中国知网、万方数据库、维普数据库、Pubmed及Web of Science等数据库自建库以来至2020年7月收录的文献。总结COG6-CDG的临床特征及基因突变特点。结果(1)临床资料:患儿为男婴,胎龄27周+5,出生体重1180 g,生后59 d入院,主要表现多系统受累,包括不明原因进行性肝脾肿大伴黄疸、腹水,血小板持续低下,小头畸形、四肢张力低,皮肤少汗、角化过度,反复发热、感染、低血糖,合并心、胃肠道、肺、肾、眼底、凝血系统等功能异常。转入本院后予呼吸机辅助呼吸、抗感染、腹腔穿刺置管引流、输注血制品等积极对症支持治疗,患儿临床表现进行性加重,于生后192 d死于多器官功能衰竭。核心家系全外显子组检测发现COG6基因(NM_020751.2)存在复合杂合突变,外显子7存在c.662C>T(p.T221M)错义突变,来源于母亲;外显子5存在c.443T>C(p.I148T)错义突变,来源于父亲。这2个突变均未在人类基因突变库中收录,为未报道的新突变。(2)文献复习:共检索到8篇相关文献。文献报告的20例主要表现为不同程度的神经系统异常和生长发育迟缓,合并肝脏、心脏、胃肠道、血液、免疫、牙齿和骨骼等系统功能异常,且均有智力障碍和生长发育落后,9例至文献报道时已死亡。文献共报道了11个基因突变位点,深度内含子c.1167-24A>G的剪接突变最多(7例),其次分别是c.1646G>T(4例)和c.511C>T(3例)。结论COG6-CDG临床上主要表现为多系统、多器官功能障碍,总体临床预后不良,基因检测有助于明确诊断。本例的基因突变为c.662C>T(p.T221M)和c.443T>C(p.I148T)复合杂合突变,为未报道的新突变,拓宽了COG6基因的突变谱。