日本血吸虫成虫和虫卵排泄分泌抗原对Ⅰ型糖尿病模型小鼠的影响

目的观察日本血吸虫成虫排泄分泌抗原(adult-worm excretory-secretory protein,AES)和虫卵排泄分泌抗原(excretory-secretory antigen of eggs,ESA)对Ⅰ型糖尿病小鼠的影响,并初步探讨其作用机制。方法将24只雄性昆明鼠随机分为空白对照组、PBS组、AES组和ESA组,每组6只。空白对照组不作任何处理,后3组给予链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)溶液注射制备Ⅰ型糖尿病模型,建模成功后分别用PBS、AES、ESA腹部皮下多点免疫,1周免疫1次,持续免疫4周。免疫干预1周后开始检测小鼠血糖,持续检测4周;免疫干预4周后采用ELISA法测定小鼠血清中IL-4和IFN-γ水平变化,采用HE染色法检测小鼠胰腺组织病理变化。结果与PBS组相比,AES组和ESA组小鼠血糖水平从免疫后第2周起出现下降趋势,且ESA组小鼠血糖水平低于AES组,免疫后第2、3、4周小鼠血糖水平组间差异有统计学意义(F=1214.00、1055.00、683.64,P均<0.05)。各组小鼠血清IL-4和IFN-γ水平组间差异有统计学意义(F=146.84、21.11,P均<0.05),ESA组小鼠血清中IL-4水平[(61.45±6.14)pg/mL]高于PBS组[(21.96±3.98)pg/mL]和AES组[(49.31±3.19)pg/mL],IFN-γ水平[(129.48±36.75)pg/mL]低于PBS组[(316.43±66.38)pg/mL]和AES组[(212.09±70.89)pg/mL],差异均有统计学意义(P均<0.05)。PBS组小鼠的胰岛萎缩,数量减少,空泡样变性;ESA组小鼠有轻微胰岛萎缩;AES组介于PBS组和ESA组之间。结论日本血吸虫ESA对Ⅰ型糖尿病小鼠有一定保护作用,其机制可能是ESA刺激机体导致Th1反应抑制和Th2反应增强,表现为IL-4升高和IFN-γ下降,在一定程度上减轻小鼠胰腺组织的病理损伤。

日本血吸虫尾蚴成虫及虫卵的早期诊断组分抗原分析

目的寻找具有血吸虫病早期诊断价值的组分抗原。方法以感染后不同时间的兔血清,用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹试验(Westernblotting)方法,对日本血吸虫尾蚴、成虫和虫卵中的可溶性抗原的成分进行免疫分析。结果可溶性尾蚴抗原(SCA)94、48、41、40kDa和38kDa组分抗原最早出现免疫印迹反应,能被感染后2周兔血清所识别,可被感染后3周兔血清识别的SCA71、23kDa组分抗原反应最强。可溶性成虫抗原(AWA)最早出现反应的组分抗原是71、58kDa,能被感染后3周兔血清所识别。可溶性虫卵抗原(SEA)最早出现反应的组分抗原是270、151、73、69、50kDa和24kDa,能被感染后4周兔血清所识别。结论SCA94、71、48、41、40、38、23kDa,AWA71、58kDa和SEA270、151、73、69、50、24kDa能被急性感染兔血清所识别,是具有潜在早期诊断价值的组分抗原。

旋毛虫成虫可溶性粗抗原对小鼠的免疫保护作用

本文应用人工感染的方法从大白鼠获得大量成虫。经冻融、超声粉碎、高速离心制备出成虫可溶性粗抗原。将不同剂量的抗原与等体积弗氏完全佐剂乳化后间隔1周共免疫小白鼠3次。最后一次免疫后间隔1周每鼠攻击感染130条感染性肌幼虫,攻击感染后1周剖检成虫、新生幼虫,攻击感染后35天剖检肌幼虫。试验结果表明,以每只小白鼠免疫200μg成虫可溶性粗抗原所诱导的免疫力最好,诱导成虫减虫率达94.65％,肌幼虫减虫率达95.60％。初步研究表明,旋毛虫成虫可溶性抗原是很好的免疫原。

日本血吸虫成虫及虫卵可溶性抗原的早期诊断分子筛选

为获取有效的日本血吸虫病早期诊断靶抗原分子。以感染前和感染后2周、4周、6周兔混合血清以及急性、慢性日本血吸虫病人和正常人血清,用Westernblot对日本血吸虫成虫可溶性抗原(AWA)和虫卵可溶性抗原(SEA)进行了全面的分析与筛选。SEA140kDa和AWA54kDa、21kDa、20kDa分子出现最早,能被感染后2周兔血清所识别;SEA69kDa、50kDa、45kDa、38kDa和AWA72kDa、45kDa、34kDa、15kDa相继能被感染后4周兔血清所识别;其中SEA140kDa、50kDa、45kDa、38kDa和AWA34kDa、21kDa、54kDa、15kDa与病人血清反应同6周兔血清反应效果相仿,均为免疫反应主带,且在SDS-PAGE上有对应的蛋白主带,具有潜在的早期诊断价值。进一步对SEA进行抗体类型的分析,发现SEA能刺激机体产生IgG、IgM和IgA反应,其中SEA50kDa、45kDa、38kDa三个抗原分子均能被IgG、IgM、IgA三种抗体所识别,且均为反应主带;SEA140kDa以IgM反应带最深;SEA100kDa反应带仅出现于病人血清,以IgM反应最强,且其与IgM反应带在急性病人血清明显深于慢性病人血清,表明针对IgM的SEA100kDa分子也具有一定的早期诊断和区分病程的价值。SEA140kDa、50kDa、45kDa、38kDa和AWA34kDa、21kDa、54kDa、15kDa和针对IgM的SEA100kDa分子是具有潜在早期诊断价值的优势靶抗原分子。

纯化31/32kDa抗原和成虫粗抗原诊断日本血吸虫病的比较

用纯化的日本血吸虫成虫３１／３２ｋＤａ抗原（Ｓｊ３１／３２）与成虫粗抗原（ＡＷＡ）对不同类型日本血吸虫病患者血清抗体进行检测，结果３种不同类型（急性、慢性和晚期）血吸虫病患者血清抗Ｓｊ３１／３２抗体水平（ＯＤ值）分别为２．７７±０．２５、２．６７±０．３０和２．４６±０．１９（Ｐ＜０．０１），抗ＡＷＡ抗体水平分别为３．２７±０．１６、３．２８±０．１６和３．２０±０．１７（Ｐ＞０．０５）。慢性血吸虫病患者血清抗Ｓｊ３１／３２抗体与每克粪便虫卵数（ＥＰＧ）之间有高度的相关性（ｒ＝０．９３），明显高于抗ＡＷＡ抗体与ＥＰＧ的相关性（ｒ＝０．４５）。结果表明，利用纯化Ｓｊ３１／３２诊断血吸虫病能较好地区别不同的感染类型和感染度。

日本血吸虫成虫和虫卵可溶性抗原及其组分抗原的研究

目的:探讨日本血吸虫雄虫、雌虫、虫卵的可溶性抗原雄虫(AWA-m、雌虫AWA-f、虫卵SEA)及其组分抗原的特性。方法:用DE22纤维素层析柱对日本血吸虫AWA-m,AWA-f,SEA抗原进行纯化,得到相应组分抗原。分别以SDS-PAGE和W estern b lot对组分抗原进行全面分析,并与相应未经纯化的可溶性抗原作比较。结果:经DE22纤维素层析处理的AWA-m,AWA-f,SEA,均能获得含多种蛋白的组分抗原。SDS-PAGE结果表明,AWA-m见10条主带和9条次带,其中Mr37 000,28 000,25 000为特异性条带,出现8条免疫反应阳性带;而AWA-m组分抗原为9条蛋白带和6条免疫反应阳性带。AWA-f见15条蛋白带,其中Mr26 500为特异性条带,组分抗原为8条蛋白带。AWA-f粗抗原及其组分抗原均见9条反应带。SEA见8条主带和10条次带,13条为免疫反应阳性条带;SEA组分抗原见11条带,其中9条为免疫反应阳性带。结论:AWA-m,AWA-f,SEA经DE22纤维素层析纯化获得组分抗原,方法简单、可靠。该组分抗原含有粗抗原的主要免疫反应成分,去除了多种与日本血吸虫病免疫反应无关的蛋白。

旋毛虫成虫抗原和肌幼虫抗原保护性免疫的比较研究

目的:比较旋毛虫成虫抗原和肌幼虫抗原诱导小鼠产生保护性免疫效果的异同。方法:制备旋毛虫成虫抗原和肌幼虫抗原,分组免疫小鼠,并于末次免疫后10d用旋毛虫感染性幼虫对各组小鼠实施攻击感染,检测攻击感染后各组小鼠肠道成虫和肌肉幼虫数并计算减虫率,同时采用ELISA法检测各组小鼠血清IgG抗体水平。结果:成虫抗原免疫组小鼠和肌幼虫抗原免疫组小鼠检获的肠道成虫数和肌幼虫数均显著少于对照组(P<0.05),其中以成虫抗原免疫组小鼠减虫率最高(P<0.01)。成虫抗原免疫组和肌幼虫抗原免疫组小鼠于实施旋毛虫感染性幼虫进行攻击感染的当日所检测的血清IgG抗体水平与其免疫前相比均升高(P<0.01,P<0.05),与对照组相比亦升高(P<0.01,P<0.05),其中也以成虫抗原免疫组小鼠血清IgG抗体升高最为显著(P<0.01)。结论:旋毛虫成虫抗原和肌幼虫抗原均能激发小鼠产生保护性免疫,其中成虫抗原免疫组小鼠显示出更好的抗感染保护性。

日本血吸虫成虫组分抗原的分离及小鼠免疫试验

目的 分离日本血吸虫可溶性成虫抗原 (AWA)中的组分抗原 ,分析其诱导的抗血吸虫的免疫保护性。方法 电泳层析法分离日本血吸虫AWA中的组分抗原 ,计算各组分抗原的分子量 ,并分析其免疫学活性。将各组分抗原分别免疫小鼠 ,攻击感染日本血吸虫尾蚴 ,感染后 4 5d剖杀 ,观察各组分抗原的免疫保护效果。结果 采用电泳层析法分离获得多个组分抗原 ,选择收集其中 4个较纯的组分抗原 ,分子量分别为 5 2kD、6 3kD、6 7kD和 74kD ;其中 6 3kD和 6 7kD抗原与感染血清有强的反应 ,而 5 2kD和 74kD抗原则反应弱 ;4种组分抗原均与AWA的免疫血清反应。 6 3kD抗原诱导的免疫保护力水平较5 2kD、6 7kD和 74kD抗原好。结论 电泳层析法分离的 4个血吸虫组分抗原有良好的免疫原性 ,且 6 3kD抗原有一定的免疫保护性。

日本血吸虫成虫67kD蛋白的分离与鉴定

目的 :分离日本血吸虫感染及免疫血清识别的成虫抗原 (AWA)中的特异蛋白带 ,为血吸虫病免疫诊断提供新的抗原分子。方法 :免疫印迹法分析AWA的特异蛋白带 ,电泳层析法分离靶抗原。结果 :获得了感染血清和免疫血清识别的 6 7kD蛋白。结论

日本血吸虫卵与卫氏并殖吸虫成虫可溶性抗原内的共同抗原组分研究

应用凝胶电泳和免疫印斑技术对日本血吸虫卵与卫氏并殖吸虫成虫的水溶性抗原(JSEA、PAA)和尿素溶性抗原(JEA-u、PAA-u)进行了抗原蛋白组分比较分析。结果显示:两者的特异性抗原显色主带,JSEA、JEA-u分别有8条和3条,PAA、PAA-u分别有9条和2条;其中JSEA、JEA-u分别有1条和2条,PAA、PAA-u分别有1条和2条对异种抗血清呈现交叉反应显色带。表明两种吸虫的可溶性抗原均存在共同抗原组分。慢性血吸虫病患者血清与并殖吸虫成虫抗原的交叉反应仅见于PAA,而未见于PAA-u,提示PAA-u在避免交叉反应和抗原纯化方面比PAA较为优越。

应用日本血吸虫成虫31/32KD抗原诊断血吸虫病

采用IHA和ELISA对纯化的日本血吸虫成虫31/32KD抗原与虫卵可溶性抗原的诊断特异性和敏感性进行比较。结果表明,前者的特异性高,检测正常人血清未见假阳性反应,与肝吸虫或肺吸虫病人血清无交叉反应;治后一年的阴转率达70％,故疗效考核价值较高。二种抗原的敏感性无显著差异。

卫氏并殖吸虫成虫的特异性诊断抗原

目的 :寻找诊断并殖吸虫病的特异性抗原。方法 :应用SDS PAGE和Westernblot对卫氏并殖吸虫成虫可溶性抗原中的蛋白组分进行分析。结果 :卫氏并殖吸虫成虫可溶性抗原蛋白经SDS PAGE后显示 14条蛋白带 ,其中相对分子质量为 5 30 0 0、310 0 0、2 5 0 0 0、16 0 0 0、110 0 0是主带 ;相对分子质量为 5 30 0 0和 340 0 0的条带可与华支睾吸虫病患者血清反应 ;10 80 0 0、94 0 0 0、6 5 0 0 0的条带可与血吸虫病患者血清反应 ;5 80 0 0、5 30 0 0、4 30 0 0的条带可与旋毛虫感染的大鼠血清、小鼠血清及旋毛虫病患者血清反应。 370 0 0的蛋白带只能被斯氏狸殖吸虫感染的大鼠血清和并殖吸虫病患者血清所识别 ,而不与华支睾吸虫病、血吸虫病患者血清、旋毛虫感染的大鼠和小鼠血清、旋毛虫病患者血清、正常大鼠、小鼠血清及正常人血清发生交叉反应。结论 :卫氏并殖吸虫成虫可溶性抗原中相对分子质量为 370 0 0的蛋白组分为卫氏并殖吸虫成虫的特异性抗原 。

华支睾吸虫未脱脂和脱脂成虫抗原的免疫印迹分析

目的寻找华支睾吸虫成虫抗原中具有特异性诊断价值的抗原组分。方法应用SDS-PAGE和Westernblot分析华支睾吸虫成虫未脱脂、脱脂的可溶性抗原蛋白组分的血清学反应特征。结果未脱脂成虫抗原有14条蛋白带可与华支睾吸虫病病人血清反应,其中分子质量单位为180、170、100、67、41、37、35、322、6 ku是主带,180、170、37、35 ku条带还可与日本血吸虫病、卫氏并殖吸虫病病人血清发生交叉反应。脱脂成虫抗原有10条蛋白带可与华支睾吸虫病病人血清反应,其中分子质量单位为180、100、67、37、35、242、0 ku是主带,此外,180 ku带可与日本血吸虫病和卫氏并殖吸虫病病人血清发生交叉反应,78 ku带可以与血吸虫病病人血清发生交叉反应。结论华支睾吸虫成虫抗原经脱脂处理后可减少与日本血吸虫病和卫氏并殖吸虫病病人血清交叉反应的蛋白组分数量。华支睾吸虫未脱脂和脱脂成虫抗原中主要的特异性抗原组分分别是100、67、41、32、26 ku和100、67、37、35、242、0 ku,这些组分抗原可用于华支睾吸虫病的免疫诊断。

旋毛虫成虫三种抗原SDS-PAGE及Western-blot比较研究

目的研究大理猪源旋毛虫(Trichinella spiralis)成虫虫体可溶性抗原、表面抗原和排泄分泌抗原3种抗原的蛋白组分及其之间的差异,比较分析其免疫反应性。方法以十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和蛋白印迹对成虫3种抗原进行蛋白组分及其免疫反应性分析。结果十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果:虫体可溶性抗原显示29条蛋白带,分子量范围在112kDa^10kDa之间,其中主带13条;表面抗原显示4条主要蛋白带,分子量分别为50、48、40、34kDa;排泄分泌抗原显示17条蛋白带,分子量范围在120~14kDa之间,其中主带6条,分子量分别为120、64、43、40、35、33kDa。蛋白印迹结果:虫体可溶性抗原出现13条反应条带,其中分子量为81、40、37、33、30kDa的条带着色明显;表面抗原出现4条反应条带,其分子量分别为50、48、40、34kDa;排泄分泌抗原显示7条反应带,其中43、40、27、18kDa着色明显。结论旋毛虫成虫虫体可溶性抗原与排泄分泌抗原较表面抗原蛋白组分复杂,3者主带部分属低分子量区;免疫反应性的强度表面抗原和排泄分泌抗原高于虫体可溶性抗原,说明前两种抗原是旋毛虫成虫刺激机体产生免疫应答的主要靶抗原。

卫氏并殖吸虫成虫重组抗原的表达与鉴定

目的 表达已转化入大肠杆菌的卫氏并殖吸虫成虫抗原 (Pw Ag)基因 ,并评价其应用于免疫学诊断的价值。 方法 用 IPTG诱导表达已亚克隆入表达载体 p RESETB的卫氏并殖吸虫成虫抗原基因 ,以 SDS- PAGE和 Western blot分析鉴定表达产物。 结果 SDS- PAGE电泳可见 32 ku处有 1条明显的蛋白质带 ,该带只被卫氏并殖吸虫成虫免疫兔、感染犬和病人血清识别。 结论 成功构建重组克隆 Pw Ag,其表达产物具有卫氏并殖吸虫成虫期特异性 ,推测可用于并殖吸虫病的免疫学诊断。

日本血吸虫成虫31/32KD抗原的纯化及其免疫化学特性

本文采用超凝胶柱层析法分离纯化日本血吸虫成虫31/32KD抗原。分离的抗原经银染色及免疫印迹法分析证明已达免疫纯及生化纯级。该抗原PAS染色呈阴性,经过碘酸钠处理后不失去活性,在琼脂糖凝胶电泳中趋向阳极。鉴于血吸虫成虫31/32KD组分是一种主要血清学抗原,它的分离纯化为改进和标化血吸虫病的诊断提供了条件。

Dipstick法检测斯氏狸殖吸虫病血清抗体的建立及应用

目的建立简便的斯氏狸殖吸虫病Dipstick快速诊断法。方法以纯化的斯氏狸殖吸虫成虫可溶性抗原22kD为诊断抗原,胶体金标记的羊抗人IgG为显色剂,建立Dipstick快速诊断方法;检测斯氏狸殖吸虫病患者血清58例,日本血吸虫病患者血清32例,华支睾吸虫病患者血清23例,健康者血清28例。结果检测58例斯氏狸殖吸虫病患者血清IgG抗体,其阳性率为98.3%(57/58),分别检测健康者血清28例、日本血吸虫病患者血清32例和华支睾吸虫病患者血清23例,前者均为阴性,后两者的交叉反应率分别为3.1%(1/32)和0%(0/23)。结论斯氏狸殖吸虫成虫可溶性抗原22kD Dipstick快速诊断法具有较高的敏感性和特异性,简便快捷,勿须特殊仪器设备,是一种检测斯氏狸殖吸虫病患者血清IgG抗体较好的免疫诊断方法。

日本血吸虫可溶性成虫抗原和可溶性虫卵抗原对小鼠1型糖尿病的拮抗作用研究

目的探讨日本血吸虫可溶性成虫抗原(SWA)和可溶性虫卵抗原(SEA)对小鼠1型糖尿病的拮抗作用。方法把24只成功建模的1型糖尿病小鼠随机分3组(A、B、C组),每组8只小鼠。同时制备日本血吸虫SWA和SEA。A组模型鼠经腹部皮下多点注射日本血吸虫SWA进行免疫;B组模型鼠经腹部皮下多点注射日本血吸虫SEA进行免疫;C组模型鼠用PBS代替抗原腹部皮下免疫,1周免疫1次,共4次,4周后,颈椎脱臼处死各组小鼠,留取血清,采用ELISA双抗夹心法测定各组小鼠血清中IL-4和IFN-γ的水平,并取胰腺观察病理改变。结果免疫4周后,B组小鼠血清IL-4水平[(23.87±4.85)pg/mL]高于C组[(4.39±0.56)pg/mL],差异有统计学意义(P<0.01),而IFN-γ水平[(271.85±26.04)pg/mL]低于C组[(362.79±32.50)pg/mL],差异也具有统计学意义(P<0.01)。但是A组小鼠IL-4水平[(5.09±0.37)pg/mL]和IFN-γ水平[(379.56±34.47)pg/mL],与C组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。B组小鼠的胰岛结构虽没有保持完整,但淋巴细胞浸润较C组少,胰岛内部也未见大量淋巴细胞浸润。与C组小鼠胰腺相比,A组小鼠胰腺未见明显变化,胰岛仍可见大量淋巴细胞浸润,残余胰岛细胞数量减少,并可见少数胰岛结构被破坏。结论日本血吸虫SEA对糖尿病1型小鼠具有一定拮抗作用,其作用机制可能是通过使IL-4升高和IFN-γ下降,调节Th1/Th2免疫偏移,导致Th1反应下调,Th2反应增强。

旋毛虫成虫可溶性抗原和排泄分泌抗原对小鼠免疫保护作用的比较研究

目的 比较旋毛虫成虫可溶性抗原和排泄分泌抗原对小鼠的免疫保护作用。方法 收集人工感染大鼠小肠内的成虫， 经研磨和冻融制备成虫可溶性抗原。采用体外培养的方法从培养液中提取旋毛虫成虫排泄分泌抗原。分别用两种抗原免疫小鼠， 间隔１ 周共免疫３ 次， 末次免疫后１ 周， 每只小鼠攻击感染１００ 条旋毛虫感染性肌肉幼虫。感染后１ 周检查小鼠小肠内成虫数量和雌虫生殖力， 感染后５ 周检查肌肉幼虫负荷。结果 成虫可溶性抗原诱导的成虫减虫率、新生幼虫减虫率和肌肉幼虫减虫率分别为７９５５ ％ 、６２２５ ％ 和６５０ ％ 。成虫排泄分泌抗原诱导的成虫减虫率、新生幼虫减虫率和肌肉幼虫减虫率分别是９７２７ ％ 、８６６０ ％ 和９００ ％ 。结论 实验结果表明旋毛虫成虫可溶性抗原和成虫排泄分泌抗原均能够诱导宿主产生较强的抗攻击感染的免疫力， 但后者的免疫原性更强。

旋毛虫成虫、新生幼虫和肌幼虫抗原的保护性免疫研究

目的 比较旋毛虫成虫抗原、新生幼虫抗原和肌幼虫抗原接种小鼠诱导产生的保护性免疫。方法 检查肠道成虫、肌幼虫和血液中嗜酸性细胞数 ;用ELISA测血清中抗旋毛虫肌幼虫IgG抗体滴度。 结果 成虫、新生幼虫和肌幼虫抗原免疫组的成虫减虫率分别为 82 19%、72 31%和 42 88% ;肌幼虫减虫率分别为 6 8 83%、78 19%和 5 1 96 %。血清IgG抗体滴度明显升高 ,成虫、新生幼虫和肌幼虫抗原免疫组的GMRT分别为对照组的 7 46倍、5 2 8倍和 4 92倍。血液嗜酸性粒细胞明显增多。结论 旋毛虫成虫抗原、新生幼虫抗原和肌幼虫抗原均可激发特异性体液免疫和细胞免疫 ,诱导小鼠对攻击感染产生保护性。其中 ,成虫抗原和新生幼虫抗原显示出更好的免疫原性 ,而成虫抗原有可能成为较理想的免疫疫苗来源。