玉米AAP基因密码子偏性与进化分析

氨基酸透性酶(AAP)通过参与植物体内氨基酸吸收和转运,从而改变植物生长发育。研究其密码子偏好性,对AAP基因异源表达、功能验证及完善其遗传转化体系具有指导意义。使用Codon W、EMBOSS、Origin 2021以及SPSS等程序软件,对25个物种的AAP基因密码子进行聚类、中性、ENC以及PR2绘图分析,选择玉米AAP最佳异源表达受体及遗传转化受体。结果表明:玉米AAP基因的CAI、ENc、GC值分别为0.269、35.48、65.3%,表明其密码子偏好性较弱,且在编码蛋白过程中偏好以G/C结尾;RSCU聚类分析表明,玉米AAP基因与单子叶禾本科植物的使用偏好性相近,且同源关系也较近;而中性、ENC以及PR2绘图分析显示,玉米AAP基因密码子偏好性受自然选择影响较大;密码子使用频率分析表明,大肠杆菌比酵母表达系统更适合作为玉米AAP基因的异源表达受体,水稻更适合作为遗传转化受体。本研究为今后玉米AAP的功能验证及转基因植物培育等提供了研究基础。

我校与企业合作开发的国家化学1类新药“注射用AAPB”获得药物临床试验批准通知书

近日,由多靶标天然药物全国重点实验室、江苏省代谢性疾病药物重点实验室张奕华/黄张建教授团队与江苏康缘药业股份有限公司合作的国家化学1类新药“注射用AAPB”获得国家药品监督管理局的药物临床试验批准通知书,适应症为急性缺血性脑卒中。AAPB项目采取校企联合的方式,由我校张奕华教授、黄张建研究员、吴建兵副研究员的团队设计并确定优势候选物,江苏康缘药业进行后期的临床前研究与评价,双方共同推进、共享成果。2024年1月,学校和企业共同提交临床申请(两个注射剂规格);3月获得药物临床试验批准通知书(中国药科大学排名第一)。

过二硫酸铵氧化4－AAP光度法测定环境水质中挥发酚

讨论了用过二硫酸铵作氧化剂，４－个氨基安替比林作显色剂的分光光度法测定废水中挥发酚的方法．该法所生成的有色络合物在水溶液中可稳定３ｈ．该法最低检测浓度为９μｇ／Ｌ，测定上限为１８００μｇ／Ｌ对环境水样的测定结果与推荐的标准方法测定结果相吻合．

抗碱性磷酸酶单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立及其APAAP的制备与初步鉴定

本文报道用碱性磷酸酶Sigma Ⅰ型粗酶免疫Balb/c小鼠,采用酶联免疫吸附反应筛选细胞融合后杂交瘤培养上清,最后获7株稳定分泌抗碱性磷酸酶单抗的杂交瘤细胞株,对其中6株进行了特性鉴定。取其中1株AAP1/323腹水制成APAAP试剂盒,应用于ELISA和免疫组化染色表明:该试剂盒灵敏度高,本底低,无内源性酶干扰现象,对比好,背景清晰,结果容易判断,能满足临床检测的要求。

血清丙氨酸氨基肽酶(AAP)测定在诊断肝胆疾病中的应用

为观察血清丙氨酸氨基肽酶 (AAP)水平对肝胆疾病的临床诊断价值。用自动分析仪速率法测定 2 2 9名肝胆疾病患者和 70名健康人血清AAP活力。结果显示肝癌、各类肝炎、胆道阻塞病人血清AAP活力明显高于健康对照组 (P <0 0 1) ,且与γ -谷氨酰转肽酶 (γ -GT)、碱性磷酸酶 (ALP)活力呈正相关 ;与血清总胆红素 (T -Bil)、丙氨酸转氨酶 (ALT)不存在明显相关性。结论 :在肝胆疾病诊断中 。

尿AAP测定在紫癜性肾炎中的初步观察

为探讨尿 AAP测定在紫癜性肾炎中的临床意义 ,本文应用速率法和放射免疫法测定 32例紫癜性肾炎患儿尿AAP和 m Alb。经观察尿 AAP与 m Alb呈正相关 (γ=0 .712 ) ,2 0例对照组尿 AAP活性为 8.84± 2 .6 1u/ g.Cr,患儿组尿 AAP活性为 16 .6± 5 .94u/ g.Cr,两者有非常显著性差异 (P<0 .0 0 1)。 14例患儿治疗前与缓解后尿 AAP分别为 19.40± 5 .6 8,11.0 8±4.72 u/ g.Cr,差异非常显著 (P<0 .0 0 1)。4例尿检阴性紫癜性肾炎患儿与对照组相比有显著性差异 (P<0 .0 5 )。资料显示 :尿 AAP活性可较特异的反应肾脏早期损伤情况 。

贵州产黄珠子草总黄酮毒性及抗CCl_4、AAP中毒小鼠肝损伤实验

黄珠子草为大戟科叶下珠属(Phyllanthus)植物,贵州产叶下珠属植物黄珠子草(Phyllanthus Virgatus Forst.f.)广泛分布于兴义、兴仁、织金、贞丰等地[1].我们采用贵州产黄珠子草已进行其总黄酮的提取分离方法与含量测定[2],但资料查新未见有关贵州产黄珠子草总黄酮毒性与抗肝损伤等方面的研究报道.为此我们特进行了贵州产黄珠子草总黄酮毒性及抗CCl4、AAP中毒小鼠肝损伤实验,现将其研究结果报告如下.

树枝状胺基聚合物(AAP)的界面性质研究

以10%孤岛原油模拟油为油相,蒸馏水为水相,研究了树枝状胺基聚合物(AAP)支化代和浓度对油水界面张力和界面剪切黏度的影响。结果表明,AAP可降低水的表面张力和油水界面张力。随着AAP浓度的增加,水溶液表面张力降低。半代AAP水溶液的表面张力随支化代的增加而降低。在整代AAP浓度低于50 mg/L时,随着支化代的增加,水的表面张力降低;当浓度大于50 mg/L时,由于空间位阻效应,3.0G AAP水溶液的表面张力高于2.0G AAP水溶液。随着AAP支化代、浓度的增加,油水界面张力降低。AAP使油水界面剪切黏度大幅降低。在剪切速率为0.3 rad/s时,界面剪切黏度降至最低,约0.015 mN.s/m(空白值为0.017 mN.s/m)。AAP浓度的增加有利于界面剪切黏度的降低。

AAP延衰胶囊的药效学研究

目的观察AAP对家蚕生长发育和生命周期的影响。方法将同种同龄且生长发育相似的三眠蚕200只随机均分为4组。两个组分别喂饲1%和2%的AAP溶液;另两个组,一个喂饲1%的参茸丸溶液作药物对照,另外一组喂饲同容积的蒸馏水作空白对照。药和水均涂在桑叶上。给药前及给药后每隔4天分别称体重和量身长1次。记录幼蚕龄期(孵出至结茧)、蛹期(结茧后第三天至蛹羽化)以及蚕蛾寿期(蛹羽化至死亡时间)。最后计算各组的全生育期。结果AAP对家蚕的体重和身长无明显影响,但能显著延长家蚕各龄期的时间(P<0.01),其中以延长蚕蛾寿期最显著。此外,研究还发现AAP同时具有显著提高红细胞超氧化物歧化酶的活性和降低血浆脂质的过氧化作用以及显著提高实验动物的非特异性(巨噬细胞的吞噬)和特异性(体液和细胞免疫)的免疫功能。参茸丸也具有上述相似的药效。结论 AAP能明显延长家蚕各阶段的生命周期、提高实验动物体内的抗氧化能力以及增强机体的免疫力。

表皮葡萄球菌8-32-B株aap基因domain B的原核表达

为获得表皮葡萄球菌aap基因domain B片段的原核表达产物,采用PCR方法扩增引起新疆南疆地区奶牛乳房炎的表皮葡萄球菌株aap基因domain B片段,并克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,构建重组质粒pET-32a(+)-aap,将重组质粒转化至宿主菌E.coli BL21中诱导表达。结果表明,克隆得到aap基因domain B片段为2 316bp,Aap蛋白分子质量184.5ku。在宿主菌E.coli BL21中表达的最佳诱导时间为4h,IPTG最佳诱导浓度为0.75mmol/L;纯化时洗杂缓冲液中咪唑浓度为40mmol/L,洗脱缓冲液中咪唑浓度为200mmol/L时可以获得单一Aap蛋白。

槟榔AcAAP3基因cDNA克隆及其组织表达特性分析

【目的】克隆槟榔氨基酸通透酶(AAP3)基因(AcAAP3),分析其生物学信息,并检测其组织表达特性,为探究AAP3在氨基酸转运及氮素利用机制提供理论依据。【方法】利用反转录PCR(RT-PCR)从槟榔品种热研1号中扩增AcAAP3基因cDNA序列,利用生物信息学方法对其编码蛋白的理化性质、亲疏水性、亚细胞定位、功能域及二、三级结构等进行预测分析,并利用实时荧光定量PCR检测AcAAP3基因在槟榔根、叶、茎、雄花和雌花中的表达特异性。【结果】克隆获得AcAAP3基因cDNA序列全长为1440 bp,编码479个氨基酸,蛋白理论分子量为52.834 kD,等电点(pI)为8.76,具有9个跨膜结构域,定位在细胞质膜上,为疏水性非分泌蛋白,具有1个保守的PF01490结构域(氨基酸转运结构域Aa_trans),属于氨基酸转运蛋白家族和APC超家族成员,其二级结构主要由α螺旋(45.72%)和不规则卷曲(34.66%)构成。AcAAP3蛋白氨基酸序列与椰枣(XP008799058.1)、油棕(XP010912574.1)、香蕉(XP009404321.1)和菠萝(XP020107563.1)AAPs蛋白的氨基酸序列相似性分别为91%、90%、84%和83%,说明不同植物的AAPs蛋白具有高度保守性。植物AAPs蛋白家族可分成两个亚类,即单子叶亚类和双子叶亚类,其中,AcAAP3蛋白与单子叶亚类的椰枣(XP008799058.1)和油棕(XP010912574.1)AAPs的亲缘关系较近。AcAAP3基因在槟榔各组织均有表达,表达量依次为根>叶>茎>雄花>雌花。【结论】AcAAP3基因具有明显的组织特异性,其编码蛋白可能在槟榔从外界吸收氨基酸及其体内氨基酸转运中发挥重要作用。

测定挥发酚时提纯4-AAP的方法及应注意的问题

针对 4- AAP易潮解氧化不易保存 ,优质的 4- AAP不易购买等情况 ,用氯仿提纯 4- AAP可以有效降低空白值 ,满足方法的灵敏度 ,且快捷、方便 ,同时提出在提纯 4- AAP时 。

应用AAP塔芯新技术改造冷却塔

介绍了洛阳石化总厂供水车间三循 2 # 冷却塔应用 AAP塔芯新技术改造情况 ,从运行观察和测试结果表明 ,改造后2 # 塔的水处理能力提高了 1 0 0 % ,经济效益显著。

4－AAP萃取光度法以蒸馏水代替无酚水测定地面水中挥发酚

４－氨基安替比林（简称４－ＡＡＰ）萃取光度法测酚是灵敏度很高的标准分析方法。该方法要求使用无酚水。本文经过实验分析提出以蒸馏水代替无酚水测定地面水中挥发酚，结果表明，本方法检出限为０．０１７ｍｇ／ｌ，具有较高的精密度和准确度。本法省略了制备无酚水的程序，从而使实验分析得到简化。

水稻氨基酸透性酶基因OsAAP14启动子克隆及时空表达特性分析

【目的】克隆水稻氨基酸透性酶基因OsAAP14的启动子序列并分析其时空表达特性,为解析氨基酸转运基因生物学功能及了解水稻对有机氮源的响应和氨基酸吸收利用提供理论依据。【方法】PCR扩增OsAAP14基因的启动子序列,并与p CAMBIA1391Z空载体质粒连接构建出启动子-GUS表达载体,并通过农杆菌介导侵染水稻中花11愈伤组织,获得OsAAP14基因的启动子-GUS转基因植株,通过对转基因植株不同组织部位进行GUS染色,并采用石蜡切片技术观察各组织细胞部位表达,经5种不同氨基酸处理后进行根部GUS染色,结合实时荧光定量PCR检测OsAAP14基因在GUS染色部位的相对表达量,最后综合分析该基因的时空表达特性。【结果】克隆获得OsAAP14基因启动子序列为1993 bp,与参考序列日本晴OsAAP14(LOC_Os04g56470)序列一致。该启动子序列含有MBS、P-box、ABRE、CGTCA-motif等激素或胁迫响应元件。从OsAAP14基因的启动子-GUS植株T0代中鉴定获得16个阳性转基因株系。T1代材料不同组织部位GUS染色及实时荧光定量PCR结果均显示,OsAAP14基因在水稻芽伸长的基部和叶片相对表达量较高,在根、叶鞘和穗也有一定表达,但在茎中的相对表达量最低。石蜡切片分析结果显示,OsAAP14基因在根部皮层薄壁细胞、叶片的叶肉细胞、穗的颖壳内部细胞有较高的表达。碱性氨基酸的组氨酸处理下根中的OsAAP14基因表达量随着处理时间的增加显著提高(P<0.05,下同),且赤霉素和脱落酸处理下,根中的OsAAP14基因相对表达量也显著提高。【结论】OsAAP14基因在水稻不同组织均有表达,正常情况(未处理)下在水稻基部和叶片中相对表达量较高,但外源氨基酸和激素处理时,在根中该基因被诱导表达上调,说明OsAAP14基因正常情况下可能主要参与调控水稻地上部分氨基酸的运输,但当外界氨基酸和激素含量增加时则参与调控水稻根部氨基酸的运输。

7AAP/PTA自组装复合胶体微球的制备及其性能研究

在水相中利用七肽7AAP与磷钨酸(PTA)进行自组装,制备了7AAP/PTA复合胶体球形颗粒。采用红外光谱(FTIR)、扫描电镜(SEM)和紫外可见分光光谱(UV-Vis)等分析方法对自组装行为进行了研究。实验结果表明,7AAP与PTA在酸性条件下能自组装形成球形颗粒。当pH为5、PTA与7AAP的物质的量比为1∶4.5时,获得的球形颗粒分散性良好,形状规整。此外,该颗粒具有较好的温度敏感性,可能在药物缓释方面具有潜在应用。

尿GAL、NAG、AAP及LAP联合检测在肾脏功能损伤中的应用

目的探讨尿β-半乳糖苷酶(GAL)、N-乙酰β-D氨基葡萄糖苷酶(NAG)、丙氨酸氨基肽酶(AAP)和亮氨酸氨基肽酶(LAP)活性联合检测对肾功损伤诊断的应用价值。方法采用速率法测定GAL、NAG、AAP及LAP活性,同时进行肌酐(Cr)测定,计算酶活力与Cr比值,以U/gCr表示。结果各组肾功损伤患者的GAL、NAG、AAP及LAP活性明显高于正常对照组。不同的肾功损伤GAL、NAG、AAP及LAP活性有不同程度的升高,在肾功损伤早期,GAL、NAG、AAP及LAP的敏感性为93.8%、96.9%、92.5%、92.9%,特异性为96.7%、90.2%、90.8%、91.2%,准确性为96.1%、91.6%、91.1%、90.5%。结论尿GAL、NAG、AAP及LAP酶活性联合测定对肾脏功能损伤诊断有重要意义。

茶树CsAAPs亚家族基因的克隆与表达分析

采用RT-PCR技术,从龙井43中成功克隆了5个茶树AAPs(Amino acid permeases,氨基酸通透酶)基因。氨基酸序列比对结果表明,5个CsAAPs亚家族蛋白的序列同源性较高,为70.27%。根据氨基酸序列同源性构建系统发育树,结果显示5个CsAAPs分属3组。生物信息学分析表明,CsAAPs均含有9~10个跨膜区域和16~18个AAP保守基序。为了研究该亚家族对氮素的响应情况,选用3个茶树品种的扦插苗为试验材料,氮饥饿两周后,分别供应不同浓度的NH4NO3,然后利用qRT-PCR对CsAAPs在不同组织、氮素水平及茶树品种中的表达情况进行分析。研究发现CsAAPs在营养组织中均有表达,但是存在一定的组织表达差异,其中CsAAP3在茎中表达量最高,CsAAP8的主要表达部位为根和茎。在给氮素饥饿处理的茶苗从新供氮之后,CsAAP3的基因表达在3个氮素利用效率不同的品种间差异较大;在氮高效品种中茶302茎中表达的CsAAP3和CsAAP8,可以快速地对低氮条件做出响应,在低氮处理3 h后,基因表达水平明显增加。此研究预示着CsAAPs亚家族在茶树体内可能通过复杂的氨基酸转运参与氮代谢调控。