罕见的AEL.05亚型等位基因的鉴定及家系分析

目的Ael是中国人群中1种较为常见的ABO亚型,其分子机理尚未完全阐明。本文对1例Ael亚型家系进行分子机制研究。方法在常规血型血清学鉴定的基础上,应用吸收放散法鉴定弱血型抗原;PCR-SSP方法进行ABO基因初步分型;PCR方法扩增ABO基因的7个外显子;对扩增产物进行直接测序和克隆后测序分析。构建3D分子模型,并就突变对α-1,3-N-乙酰半乳糖胺基转移酶稳定性改变(ΔΔG)的影响进行预测。结果吸收放散试验证明患者红细胞上存在弱A抗原,血清学定型为典型的Ael表型;ABO基因初步分型为A1/O型,测序发现第7外显子767位碱基T>C突变,导致A糖基转移酶第256位异亮氨酸被苏氨酸替换,血型基因型为ABO*AEL.05/O.01.01。分子模建与分析提示突变导致蛋白局部氢键作用力改变不显著,但突变导致ΔΔG值的升高,表明蛋白稳定性降低。结论α-1,3-N-乙酰半乳糖胺基转移酶p.I256T突变可能通过降低了酶的稳定性导致Ael表现型。

Ael亚型基因多态性研究

目的研究Ael亚型基因多态性及对应的突变机制。方法利用试管法检测出9例疑似为Ael/AelB亚型的血液标本,分别采用吸收放散试验、实时荧光定量PCR及基因测序的方法鉴定ABO血型。通过对基因序列的分析,探讨Ael亚型等位基因的突变机制。结果9例标本的血清学结果和基因检测结果一致。通过序列分析与比对,共发现Ael02、Ael04、Ael05和Ael104种等位基因,分别以基因重组、剪切拼接错误、点突变以及移码突变的方式发生突变。结论Ael亚型具有丰富的基因多态性,并通过不同的突变机制影响A型糖基转移酶的活性,形成Ael亚型。

Ael亚型个体的分子机制研究——附1例Ael亚型鉴定

目的探讨血清学检测为疑似Ael亚型个体的分子机制,以确保临床准确定型及安全输血。方法采用试管法及吸收放散试验等血清学检测方法鉴定1名44岁女性患者ABO血型;根据其血清学疑似结果,经患者同意后抽EDTA抗凝血2mL进一步采用分子生物学方法,以序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)做基因分型,并对第1—7外显子和第1—6号内含子测序。结果该患者血清学血型正反定型:正定型O、反定型A型;吸收放散试验:红细胞上出现弱A抗原符合Ael亚型血清学表现。PCR-SSP基因分型为A/002,测序体现为IVS6+5G>A杂合突变(外显子6下游5位,位于内含子6上);符合Ael04/002亚型特征性突变。结论血型血清学方法结合分子生物学手段可准确鉴定输血患者Ael亚型,从而保障患者输血安全、有效。

罕见Ael亚型2例的遗传学分析

目的分析2例罕见血清学放散型Ael亚型的基因测序结果。方法选取2019年6月和2020年9月分别因"子宫腺肌瘤"和"胃炎"就诊的2例女性患者作为研究对象。采用常规盐水试管凝集法和吸收放散试验鉴定Ael亚型,用Sanger法对ABO基因进行测序,用PyMOL软件构建蛋白预测结构模型,预测变异对于α-1,3-N-乙酰半乳糖氨基转移酶(GTA)结构稳定性的影响。结果2例患者血清学检测均为Ael亚型。例1测序结果为ABO*O.01.02/ABO*O.01.02,即存在p.Thr88Profs*31变异。例2测序结果为ABO*Ael.06/ABO*O.01.02,发现第7外显子存在c.425C>T(p.Met142Thr)、c.467C>T(p.Pro156Leu)变异,蛋白预测模型提示p.Met142Thr替换可能影响GTA蛋白与水分子的结合,同时改变GTA局部的氢键网络,导致酶活性下降,p.Pro156Leu替换对GTA的结构稳定性无明显影响。结论Ael亚型分子结构可能存在多样性的特点。例1基因型为261G缺失的O02/O02,例2基因型为Ael 06/O02。

A放散型血型分子遗传结构的研究

目的研究A放散型血型的分子生物学特性。方法对5例血清学定为Ael或AelB的个体,采用4对特异性引物进行PCR扩增后,对其ABO基因的第6、7外显子进行序列测定。且对其中1例表型为AelB样本的ABO基因转录结构进行序列分析。结果1例表型为Ael的样本含已报道的Ael01基因,1例表型为Ael的样本含Ael05基因,2例表型为AelB和1例表型为Ael的样本未测出任何A等位基因,而是含有261G缺乏的O01或O02基因。结论A放散型血型分子结构呈多样性,含261G缺失的O等位基因的样本有弱A抗原表达的机理有待说明。