植物肌动蛋白研究进展

植物肌动蛋白是植物细胞骨架的重要组成成份之一,它在维持植物细胞正常生长、分化、繁殖等方面都具有重要意义。综述植物肌动蛋白的保守性、组织表达特异性、生物学功能及其研究方法。

抗纤复方Ⅰ号对酒精性肝病大鼠α-SMA的影响

目的:探讨抗纤复方Ⅰ号对酒精性肝病时α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的影响。方法:63只大鼠随机分为正常组,酒精组,中药组。酒精组及中药组分别用酒精和中药灌胃,在4、8、12周分别处死3组大鼠,观察肝脏病理改变及肝组织中α-SMA的表达。结果:随着酒精性肝病的发展,中药组病理改变及α-SMA的表达与酒精组相比明显减弱。结论:α-SMA表达的强弱反映了酒精性肝病时星状细胞活化及酒精肝病的程度;抗纤复方Ⅰ号能防止酒精性肝损害,有效地抑制α-SMA的表达。

阿托伐他汀对兔动脉粥样硬化的作用及其机制

目的：观察阿托伐他汀对动脉粥样硬化（AS）早期病变的作用。方法：雄性新西兰白兔随机分为正常对照组（正常饮食）、动脉粥样硬化组（高脂饮食）和阿托伐他汀组,10周后测定血清中血脂、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、C反应蛋白（CRP）及白介素-10（IL-10）水平,H-E染色测定胸主动脉内膜及中膜厚度,免疫组织化学法测定胸主动脉环氧化酶2（COX-2）、氧化低密度脂蛋白受体1（LOX-1）及α肌动蛋白（α-actin）的表达。结果：高脂饮食后兔血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）,低密度脂蛋白胆固醇（ox-LDL）浓度升高,胸主动脉形成典型脂质条纹。与动脉粥样硬化组相比,阿托伐他汀组血清血脂、ox-LDL、 TNF-α、 CRP水平降低,IL-10水平则增高。胸主动脉内膜厚度和内膜/中膜厚度比下降,主动脉COX-2、 LOX-1、 α-actin的表达降低。结论：阿托伐他汀通过抑制血管炎症反应及平滑肌细胞增殖、降脂等多环节抑制动脉粥样硬化斑块的早期形成。

1,25-二羟维生素D_3抑制慢性哮喘模型小鼠肺组织 α-平滑肌肌动蛋白的表达及气道重塑

目的:探讨1,25-二羟维生素D3[1,25-(OH)2D3]对慢性哮喘模型小鼠肺组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达及气道重塑的影响。方法:卵白蛋白致敏激发建立慢性哮喘小鼠模型,将小鼠随机分为对照组、哮喘组及VD组。HE染色及天狼星红染色观察各组气道结构及上皮下纤维化,并用计算机图像分析系统评价各组气道重塑;Western blot法及实时荧光定量PCR法检测各组的α-SMA表达。结果:(1)哮喘组出现炎性细胞浸润增多、上皮细胞脱落、上皮下纤维化及平滑肌细胞层增厚等气道重塑的结构改变,而1,25-(OH)2D3的干预可有效减轻上述病理改变;(2)VD组肺组织α-SMA的mRNA及蛋白表达水平均显著低于哮喘组,但仍高于对照组(P<0.05)。结论:1,25-(OH)2D3能降低哮喘小鼠肺组织α-SMA的表达并有效抑制哮喘气道重塑。

荧光金逆行标记观察正常大鼠视网膜神经节细胞及轴突

使用荧光金通过立体定位仪逆行标记对正常大鼠视网膜神经节细胞及其轴突进行观察研究。成年SD大鼠6只(12眼),体重250±20g,按照标记后1周,2周分为2组,每组3只(n=6眼)。将荧光金注射到大鼠的外侧膝状体和上丘,观察视网膜神经节细胞(RGCs)的数量和视网膜神经节细胞及其轴突的形态。结果显示:视网膜铺片的节细胞边界清楚,易于观察和计数。荧光金标记1周后,RGCs密度为2210±128个/mm2;标记后2周,RGCs密度为2164±117个/mm2。视网膜神经节细胞的轴突内荧光分布均匀,呈线性。结论是使用荧光金逆行标记能够可靠、有效地研究视网膜神经节细胞及其轴突。

强化铁营养对铁缺乏大鼠耳蜗膜性结构基因表达的影响

目的 应用基因表达谱芯片研究强化铁营养对铁缺乏耳聋Wistar大鼠耳蜗膜性结构基因表达的影响.方法体重28～45 g、健康、无耳疾、ABR反应阈值正常的幼龄Wistar大鼠66只,随机分成正常对照组12只,标准饲料喂养12周;缺铁大鼠组54只,以缺铁饲料喂养法建立缺铁模型,饲养8周后,复制出至少有一耳ABR阈值改变≥15 dB的大鼠共21只,再将该21只大鼠随机分成缺铁耳聋组11只,补铁治疗组10只,缺铁耳聋组继续喂以缺铁饲料4周,补铁治疗组喂以强化铁饲料4周.将包含了4096条的大鼠靶基因用点样仪点在特制玻片上制备成表达谱芯片,分别取缺铁耳聋组（与正常对照组比较）、强化铁治疗组（与缺铁耳聋组比较）的耳蜗膜性组织mRNA,通过逆转录方法,将Cy3和Cy5两种荧光分别标记到两种组织的cDNA上,制成cDNA探针,并与表达谱芯片进行杂交及扫描.筛选出部分差异表达基因,另用RT-PCR验证.结果缺铁耳聋组与正常对照组比较：前者筛选出差异表达基因896条,其中上调基因447条,下调基因449条.肌动蛋白基因及其相关调节蛋白基因的表达发生了改变,其中肌动蛋白基因Arpclb、Actcl、Actb、Actal都表现为下调,肌动蛋白的抑制蛋白基因ProfilinⅡ上调.细胞骨架蛋白Tubulin、Myosin和热休克蛋白（heat shock protein,HSP）下调.强化铁治疗组与缺铁耳聋组比较：前者筛选出差异表达基因355条,其中上调基因128条,下调基因227条.细胞骨架蛋白Tubulin、Myosin和热休克蛋白（HSP）上调,肌动蛋白基因表达没有发生明显改变.从中选取5条差异表达基因：BC072490（Ctsb）、CF111145（Actb）、NM013146（Cald1）、AB011679（Tubb5）、BC063175（ctsl）,用RT-PCR验证,RT-PCR结果与基因芯片结果基本一致.结论铁缺乏通过影响耳蜗膜性结构中多种基因的表达,包括肌动蛋白基因及其相关调节蛋白基因的表达,从而导致感音神经性聋.强化铁营养可能通过调节机体的整体代谢而有助于改善听力,但对肌动蛋白基因表达没有明显影响.

细胞骨架和高等植物的向重力性

细胞骨架被认为在调控向重力性反应早期的信号感受和传导过程中起着重要的作用。大量的研究证据表明,微丝在生长素极性运输中起调控作用,并最终引起植物表现出向重力性的不对称生长。在植物向重力性生长过程中微管排列发生重组,但是微管重组在调控不对称生长中的作用仍不清楚。当前的细胞、分子和生物化学技术的发展为研究这一困难问题提供了可能,同时大量最新发现的植物细胞骨架结合蛋白为分析植物向重力性过程中信号传导的调控因子提供了丰富的信息。本文着重介绍植物细胞骨架的功能及其在植物向重力性反应中的作用,以及空间植物生物学研究的最新进展。

益肾保真方对慢性肾衰竭大鼠肾纤维化干预作用的实验研究

目的探讨益肾保真方对慢性肾衰竭(CRF)大鼠肾纤维化的干预作用及其机制。方法采用两步分肾切除法复制5/6肾切除大鼠慢性肾衰竭模型,随机分为假手术组、模型组、益肾保真方高剂量组、益肾保真方低剂量组及尿毒清组。各组均干预6周,观察大鼠的血肌酐、尿素氮、尿蛋白定量及肾组织病理变化情况,检测肾小球硬化指数、肾组织Ⅳ型胶原含量及结缔组织生长因子(CTGF)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达。结果与模型组比较,益肾保真方组尿蛋白、血肌酐、尿素氮、肾组织IV型胶原含量均显著降低,与尿毒清组比较差异无统计学意义(P>0.05);与模型组比较,益肾保真方组大鼠肾小球硬化指数降低,肾组织CTGF、α-SMA表达下调,与尿毒清组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论益肾保真方能延缓肾衰竭进展,干预肾纤维化进程,其机制可能与下调肾组织CTGF、α-SMA的表达,抑制肾脏固有细胞的转分化,从而减少细胞外基质成分的合成和积聚有关。

沙利度胺对大鼠肝纤维化基质金属蛋白酶-13及其抑制因子-1表达的影响

目的观察沙利度胺逆转大鼠肝纤维化的疗效和对基质金属蛋白酶-13(MMP-13)及金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)表达的影响。方法大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、自动逆转组和沙利度胺组。四氯化碳腹腔注射诱导大鼠肝纤维化模型,造模成功后用沙利度胺100 mg/kg灌胃治疗。观察肝组织病理学改变,检测肝功能、血清学肝纤维化指标及肝组织羟脯氨酸含量,免疫组化方法检测MMP-13、TIMP-1、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在肝内表达和分布,RT-PCR检测肝组织MMP-13、TIMP-1 mRNA表达。结果与自动逆转组相比,沙利度胺可显著降低肝脏炎症活动度和肝纤维化程度,降低ALT、AST并升高前白蛋白(PA),降低羟脯氨酸含量,增加肝组织MMP-13蛋白和mRNA表达,降低肝组织α-SMA蛋白、TIMP-1蛋白和mRNA表达。结论沙利度胺可有效地逆转实验性大鼠肝纤维化,通过降低α-SMA表达的途径来调节MMP-13和TIMP-1的表达可能是其重要作用机制。

肝纤维化大鼠肝脏血管紧张素Ⅱ受体1型的表达及其与α-平滑肌肌动蛋白表达相关性研究

目的了解血管紧张素Ⅱ受体1型(angiotensinⅡtype 1receptor,AT1R)在肝纤维化大鼠肝脏的表达及其与胶原纤维含量和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的关系。方法将30只SD大鼠随机分成正常组(n=10)和肝纤维化组(n=20)。正常组正常饲养,肝纤维化组给予40%四氯化碳(CCL4)橄榄油0.4mL/100g体质量背部皮下注射,每3d注射1次,第5w末处死两组大鼠,肝组织制备成石蜡切片后进行Masson三色染色、AT1R和α-SMA免疫组织化学染色,采集图片后用image pro plus 6.0软件对阳性表达进行累计光密度测定。对所得数据进行相关和回归分析。结果 AT1R在正常组大鼠肝脏不表达或血管周围弱表达,在肝纤维化组肝脏汇管区周围和纤维间隔周围大量表达,其主要在肝细胞浆和(或)膜表达,肝星状细胞未见表达;半定量测定及相关分析结果显示,α-SMA与胶原纤维、AT1R与胶原纤维、AT1R与α-SMA的相关系数分别为0.958、0.971、0.990(P<0.01)。结论 AT1R在肝纤维化大鼠肝细胞大量表达,在肝星状细胞不表达,AT1R的含量与胶原纤维含量、α-SMA表达量存在正相关性。

人类α-actin启动子真核表达载体的构建

目的利用PCR技术克隆了人类-αactin基因的启动子(约450 bp)。方法将PCR产物连接到pMD-18T载体上,酶切鉴定后测序,并进行软件分析。结果与结论序列分析表明,扩增片段虽然与GenBank里登陆的序列同源性仅为72%,但包含有完整的启动子元件和转录专一调节因子相应的识别序列。用去掉启动子的pEGFP-N1作为框架结构,尝试构建真核表达载体,并获得了含人类心肌-αactin启动子的真核表达载体pEGFP-N1--αactin-P。

相对定量RT-PCR法中内对照基因表达水平的稳定性及其应用评价

目的评价相对定量RT-PCR方法中不同内对照基因表达水平的稳定性及其对靶基因预后判断的影响程度。方法以36例食管癌患者为例,收集其手术前(B-1)、手术刚结束时(B0)和术后第三天(B+3)的外周血样品。利用实时定量RT-PCR技术,分别检测内对照基因Beta-actin和GAPDH在不同时间的表达水平,并以CEA mRNA作为靶基因,比较基于这两种内对照得出的靶基因相对定量结果用于患者预后判断的差异;标准化的绝对定量结果被作为"预后判断的参照标准"。结果在三个取样时间点,两种内对照基因表达水平的标准偏差依次分别为Beta-actin mR-NA:1.44,1.56和1.92;GAPDH mRNA:3.16,3.28和4.04;两者的总体变异程度分别为9.9%和17.3%。术后一年的复发结果表明,绝对定量法和基于Beta-actin mRNA的相对定量法在预后判断中能够得到一致的结果,而GAPDH mRNA的相对定量结果与复发之间未显示统计学意义的相关性(P>0.05)。结论相对定量RT-PCR法中内对照基因表达水平的变异程度低于10%时,才能保证内对照的有效性以及靶基因测定结果的可比性。基因表达研究时应对所用的内对照基因表达稳定性进行前期评估。

兔上唇唇裂术后创口愈合过程中增生性瘢痕的变化趋势

目的:观察兔唇裂术后瘢痕增生的变化趋势,探讨唇裂术后瘢痕最大增生程度发生时间,为后续研究基因治疗增生性瘢痕最有效时机的选择提供依据。方法:选用同一子代近交系纯种新西兰白兔40只,采用Millard唇裂修复术,制造出创伤愈合的瘢痕模型,分别在术后第2、3、4、5周进行肉眼观察和瘢痕体积测量,切取上唇瘢痕组织进行免疫组织化学石蜡切片染色(IHC-P)、肌成纤维细胞(MFB)计数,提取瘢痕组织中α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)进行蛋白质免疫印迹实验。所得数据采用SPSS 18.0软件包进行t检验。结果:肉眼观察,兔上唇唇裂术后创口愈合在不同时期有不同变化,术后第3、4周,瘢痕收缩较为明显,其中瘢痕体积、MFB细胞计数及α-SMA的表达与术后第2、5周相比,有显著差异(P<0.01)。结论:唇裂术后瘢痕增生严重程度大致呈正态分布,α-SMA作为MFB的分化标志物,为在蛋白水平测定瘢痕严重程度提供了客观依据。

Drebrin在神经元发育过程中的分布变化

目的:探讨肌动蛋白结合蛋白Drebrin在神经元发育过程中的分布情况。方法:采用免疫细胞化学方法检测原代培养大脑皮层神经元内Drebrin的分布。结果:体外培养1天(DIV,day in vitro)时,Drebrin主要分布在神经元胞体;3和7 DIV时,Drebrin分布在神经元胞体、突起末端和分支处;14和21 DIV时,Drebrin主要呈斑点状分布在神经元突起。结论:随着原代培养神经元和树突棘的发育成熟,Drebrin分布从神经元胞体向突起内转移,并逐渐在突起上密集呈斑点状分布。提示在神经元发育过程中,Drebrin表达可能和神经元突起形成及树突棘发育成熟密切相关。

人β-actin蛋白原核表达及其单克隆抗体制备

为获得分泌抗人β-actin蛋白单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞,通过在大肠杆菌中原核表达人β-actin蛋白,以纯化的人β-actin蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠。经过细胞的融合及筛选获得1株能稳定分泌抗人β-actin蛋白McAb的杂交瘤细胞,命名为2B4。采用间接ELISA和Western blot方法对McAb的特异性、稳定性和适用范围进行鉴定。结果显示:蛋白的相对分子质量为43 kDa,可溶于8 mol/L尿素;杂交瘤细胞上清的抗体效价为1×105,腹水的抗体效价为1×107;间接ELISA结果表明,杂交瘤细胞在体外传20代或液氮冻存3个月后,分泌的抗体效价不变;37℃保存24 h后,抗体的效价开始下降。Western blot结果显示,单克隆抗体识别人、鼠、兔和鱼的β-actin蛋白,与其发生特异性反应。2B4分泌的单克隆抗体可以广泛的应用于细胞生物学和免疫学试验,具有良好的应用价值。

反义cortactin基因真核重组质粒的构建及鉴定

目的:构建一个包含人皮层肌动蛋白(cortactin)反义基因的全部功能区的重组真核表达载体pcDNA3.0/cortac-tin,为进一步研究人皮层肌动蛋白对人肝癌细胞的转移影响的研究奠定基础.方法:Trizol试剂法提取体外培养的人肝癌高转移细胞株MHCC97总RNA,经逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增目的片段,PCR产物及真核表达载体分别双酶切后进行连接,并转化入大肠杆菌Ecoli.Dh5α扩增以获得重组载体.结果:RT-PCR获得预期大小的特异性DNA片段,经PCR、双酶切鉴定及测序证实已将人皮层肌动蛋白基因cDNA片段正确的反向插入真核表达载体中.结论:成功获得反义pcDNA3.0/cortactin重组质粒.

β族胸腺素研究进展

胸腺素(Thymosins)主要是由胸腺产生的一种淋巴细胞生长因子,目前β族胸腺素(β-Thymosins, Tβ)越来越引起人们的关注。尽管其分子水平作用机制尚未阐明,但Tβ却与人类的许多生理及病理过程关系密切。随着研究的进一步深入,Tβ家族的潜在临床应用价值将被开发,这对某些疾病的诊断、治疗及预后均具有重要意义。现详细综述近5年国内外关于Tβ的最新研究进展,包括其与肌动蛋白、肿瘤、炎症反应、细胞调亡、血管生成及创伤愈合的关系。

水花生Actin基因片段的克隆及序列分析

肌动蛋白基因编码生物体内一种很重要的组成型表达蛋白质,常被看作看家基因。为分离水花生肌动蛋白基因,根据GenBank上一藜科植物的———Actin基因的EST序列,分别设计引物,提取水花生根的总RNA,对上述的基因片断进行RT—PCR,扩增后测序得到230bp长的核苷酸序列。经同源性比较,这条序列与上述藜科植物Actin的EST序列基本一致,表明获得了水花生肌动蛋白序列。

尼罗罗非鱼MyD88基因荧光定量PCR检测方法的建立

为了准确分析尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)髓样分化因子(myeloid differentiation factor88,MyD88)在天然免疫反应中的作用,根据MyD88EST序列(GenBank登录号:GR679416.1)和β-actin基因序列(GenBank登录号:AB037865.1),分别在保守区域设计并合成引物。实验利用5倍系列稀释的尼罗光罗非实鱼时肝定脏量cPDCNRA检样测品方构法建。标应准用曲2线-ΔΔ并Ct分进析行方融法解初曲步线检分测析了,建尼立罗尼罗罗非罗鱼非肝鱼脏M、脾yD脏88、的血S液Y和BR肌G肉re等en不Ⅰ荧同组织中的MyD88相对表达量。扩增结果表明,MyD88和β-actin基因标准曲线CT值检测范围分别为24～35和19～30,扩增效率分别为100%和96.7%,相关系数分别为0.998和0.995;熔解曲线分析显示产物均形组织成肝单脏一、特脾异脏峰和,血Tm液值中分高别丰为度78表.5达℃和。77.5℃。定量分析结果显示。

肝脏血管平滑肌脂肪瘤临床病理分析

目的:探讨肝脏血管平滑肌脂肪瘤(hepatic angiomyolipoma,HAML)的病理形态学、免疫组化特征以及诊断、鉴别诊断要点。方法:对18例HAML病例进行组织学观察,HMB-45、Melan-A、Actin、Desmin、S-100、CK、Hep、AFP等免疫组织化学检测,并结合文献讨论。结果:18例HAML,位于肝左叶6例,右叶9例,双侧3例;镜下肿瘤由畸形厚壁血管、血管周梭形或上皮样细胞和脂肪细胞3种成分不同比例混合存在,可有某种成分的缺如;免疫组织化学检测显示血管周梭形或上皮样细胞HMB-45(+),Melan-A(+),Actin(+),Desmin(+),S-100(+),CK(-),Hep(-),AFP(-)。结论:HAML由多种成分组成,形态变化多样,血管周梭形或上皮样细胞表达HMB45或Melan-A(+)是诊断HAML的可靠证据。