MiR-145靶向作用激活素受体ⅠB抑制小鼠卵巢颗粒细胞增殖

目的探讨miR-145对小鼠卵巢颗粒细胞增殖的调控作用。方法制备Ad-miR-145重组腺病毒,分离培养3周龄的SPF级ICR雌性小鼠卵巢颗粒细胞(mGC),以不同浓度的Ad-miR-145(0 mol、50 mol、100 mol)感染m GC,48 h后通过CCK-8增殖实验检测细胞的增殖活力;收集细胞通过TRIZOL法提取细胞总RNA,反转录后进行实时定量PCR检测细胞增殖相关基因细胞周期蛋白cyclin D2 mRNA的表达情况;提取细胞蛋白,通过Western blot检测其中cyclin D2的蛋白水平;同时采用双荧光素酶报告基因调查miR-145对其预测靶基因激活素受体ⅠB(ACVRⅠB)的调控作用。结果成功获得滴度为8.91×10^(10) ifu/mL的高表达miR-145腺病毒,该腺病毒可在mGC中高表达miR-145;腺病毒介导的miR-145高表达可抑制m GC的增殖活力,并可抑制m GC中cyclin D2的m RNA和蛋白的表达;miR-145可抑制ACVRⅠB 3’-UTR的荧光素酶活性。结论 miR-145通过靶向作用ACVRⅠB抑制小鼠m GC增殖。