生物技术对黄曲霉毒素B_(1)的脱除及机制研究进展

黄曲霉毒素是危害最大的真菌毒素之一,而黄曲霉毒素B_(1)(AFB_(1))是黄曲霉毒素中毒性最大的一种,具有高毒性、致癌、致畸和致突变的作用,对动物和人类健康造成危害。为了有效脱除AFB_(1),综述了近年来研究的具有解毒作用的微生物,介绍了采用生物技术脱除AFB_(1)的方法,重点探讨了生物脱除AFB_(1)机制。用于脱除AFB_(1)的菌株有芽孢杆菌、假单胞菌、乳酸菌、非产毒曲霉等,可采用单菌种发酵、多菌种协同发酵和菌-酶协同作用脱除AFB_(1)。生物脱除AFB_(1)机制主要为降解脱除和吸附脱除。可进一步筛选具有高优良能力的菌株以及更深层次地研究微生物脱毒的机制,探索微生物制剂对AFB_(1)的降解作用。

山东省市售花生及其制品中黄曲霉毒素B_(1)污染状况与膳食暴露风险评估

为了解山东省市售花生及其制品中黄曲霉毒素B_(1)(AFB_(1))污染状况,评估其暴露水平及潜在的健康风险,并为有关部门采取控制措施提供依据,2015—2020年于山东省16市生产环节、流通环节(农贸市场、商店)随机采集花生、花生酱、花生油共计246份样品,采用高效液相色谱-柱后衍生法测定其AFB_(1)含量,计算AFB_(1)平均膳食暴露量和暴露限值(MOE),评估山东省市售花生及其制品中AFB_(1)膳食暴露风险。结果表明,花生及其制品中AFB_(1)总检出率为28.46%,不合格率为7.72%。花生酱和花生油中AFB_(1)检出率显著高于花生;散装花生酱、花生油中AFB_(1)检出率显著高于预包装产品;一般消费居民通过花生、花生酱和花生油AFB_(1)平均膳食暴露量分别为0.01、0.61、1.09 ng/(kg·d),肝癌发病风险分别为0.000、0.019、0.034例/10万人,其MOE分别为30500、500和280;高消费居民通过花生、花生酱和花生油AFB_(1)平均膳食暴露量分别为0.23、6.64、8.90 ng/(kg·d),肝癌发病风险分别为0.007、0.205、0.274例/10万人,其MOE分别为1326、46和34。严格执行限量标准后经花生酱和花生油AFB_(1)平均膳食暴露量、肝癌发病风险降幅均达50%以上。为了更大限度地保护人群健康,有必要采取有效的监管和风险管理措施控制山东省市售花生及其制品中AFB_(1)含量,特别是散装花生酱和花生油。

二乙烯三胺脱除花生粕中黄曲霉毒素B1的工艺优化及机制研究

旨在为霉变花生粕中黄曲霉毒素B1(AFB1)的脱除提供技术支持,以自然霉变花生粕为实验材料,用二乙烯三胺脱除花生粕中的AFB1。采用单因素实验优化脱毒条件,并对二乙烯三胺脱除AFB1的机制进行研究。结果表明:二乙烯三胺脱除花生粕中AFB1的最佳工艺条件为液料比5∶1、处理温度50℃、处理时间45 min、二乙烯三胺溶液质量浓度10 mg/mL,在此条件下AFB1脱除率为95.5%;高效液相色谱和高分辨质谱分析表明,AFB1可能的降解机制是其酮羰基与二乙烯三胺发生脱水反应,并且反应产物通过离心随着上清液被脱除。二乙烯三胺具有应用于花生粕中AFB1脱除的潜力。

黄曲霉毒素B1高效降解菌株的筛选鉴定及其降解

以香豆素为唯一碳源,利用微生物去毒法,初步筛选出32株生长良好的活性菌株,再添加AFB1标准品(菌液毒素终质量浓度2.5μg/m L),通过高效液相色谱(HPLC)检测AFB1降解率,结果显示,从鸡粪中分离并命名为F6的菌株高效降解黄曲霉毒素B1,降解率达83%。对菌株F6进行细胞形态及生理生化特性鉴定,初步判断为芽胞杆菌属,16S rRNA序列同源性比对分析,与蔬菜芽胞杆菌国际标准株ATCC700005(登录号NR043325.1)核苷酸同源性为99.3%,由此可确定,F6菌株为蔬菜芽胞杆菌,命名为Bacillus oleronius GX01(登录号KP297896)。分离菌株F6发酵液各组分,检测得上清液AFB1降解率达83%,而菌悬液、胞内液的AFB1分别仅为22.8%、17.4%,初步鉴定其降解活性成分可能为胞外酶。

酶联免疫吸附法(ELISA)测定黄曲霉毒素B_1的样品基质效应研究

为了探寻与免疫分析相配套的简易前处理方法,以黄曲霉毒素B1(AFB1)为靶标,花生样品为对象,研究了可能影响ELISA测定结果的样品前处理方法;采用实际样品加标回收的方法,研究比较了4种不同浓度(5%、10%、20%和30%)甲醇稀释的样品基质同源ELISA灵敏度。结果表明,甲醇稀释度越小基质效应越明显;样品前处理中除油处理可显著提高回收率;样品前处理中免疫亲和柱净化后可消除相当一部分基质效应的影响,提高了回收率。研究结果为进一步开发简单快速的前处理方法提供了借鉴。

微波辅助碱法降解稻米粉中的黄曲霉毒素B_1

针对稻米粉中可能存在的黄曲霉毒素污染问题,考察了微波辅助碱法处理对稻米粉中黄曲霉毒素B1(AFB1)的降解效果。研究结果表明:稻米粉中AFB1的初始浓度对其降解率的影响不显著;在碱处理pH10.0、料液比1∶25、单位质量微波功率7.5W/g和处理时间9min的条件下,稻米粉中AFB1的降解率为98.5%,AFB1残留量为1.32μg/kg,符合国家标准(<10μg/kg);经该法制备的稻米粉,其基本成分变化不大,营养成分损失较少。由于微波辅助碱法降解条件温和、操作简单、降解效率高,可应用于受黄曲霉毒素污染的粮食物料。

食品中黄曲霉毒素B_1的抽查检验与安全评价

采用酶联免疫法对市售几类食品花生油、花生糖、月饼等的黄曲霉毒素B1(简称AFTB1)进行检测,分析其AFTB1超标的原因及安全性,结果表明大部分食品中AFTB1的含量在安全限量之内,少数几类产品存在安全隐患。

人工制备黄曲霉毒素B_1抗原的研究

在AFB_1分子上引入羧甲氧基氨,将其转化成AFB_1肟,用硅胶H柱色层层析对转化物进行分离,并用红外光谱、质谱鉴定,AFB_1肟的收率为理论产率的89%.并用碳二亚胺法将AFB_1肟成功地偶联到BSA上制成人工抗原AFB_1-oxime-BSA,研究了溶剂对偶联作用的影响.结果表明DMA-水体系比乙醇-水省时、省试剂.

酶联免疫法(ELISA)测定月饼中黄曲霉毒素B_1

采用酶联免疫法对月饼中黄曲霉毒素B_1含量进行测定,并对该方法的线性、灵敏度、回收率和重现性进行验证;黄曲霉毒素B_1标准品在1.00~50.00 g/kg范围内线性良好,Y=-40.291C+88.365,R^2=0.998 4,该方法对黄曲霉毒素B_1的最低检出含量为1.00 g/kg,不同含量添加所得回收率为96.7%~105.0%,重复性好,精密度为1.96%。通过对9个不同产品特性月饼中黄曲霉毒素B_1的测定,发现所有样品均有检出,但黄曲霉毒素B_1的含量均小于5.00 g/kg。结果表明,酶联免疫检测方法测定快速、定量准确、重现性好,可高效率地定量检测大量市售月饼中黄曲霉毒素B_1的含量。

超导量点—免疫荧光法快速测定粮食中黄曲霉毒素B1的方法验证

以超导量点为荧光探针,建立了一种超导量点-免疫荧光快速测定粮食中黄曲霉毒素B1的方法。采用多种方式评价了该方法与高效液相色谱法及酶联免疫吸附法检测稻谷及玉米样品的结果一致性,以验证该方法的准确性,同时对该方法的重复性和台间差异进行了考察。结果表明,超导量点-免疫荧光法对稻谷和玉米等粮食样品的检测结果与高效液相色谱法和酶联免疫法一致,表明该方法准确可靠,同时该方法两台仪器间的检测结果无显著性差异,且重复性好。

我国农户2016年储藏玉米黄曲霉毒素B_1污染情况调查

对采集自我国17个省市自治区、5个生态储量区、14种装具中的农户储藏玉米的271个样品中黄曲霉毒素B_1含量进行测定。217个样品中24.7%为检出含有黄曲霉毒素B_1,其中98.5%的含量低于食品安全国家标准的限量,100%低于饲料卫生标准的限量;第Ⅱ和第Ⅵ储粮生态区的玉米样品的黄曲霉毒素B_1含量低于食品安全国家标准的限量。

高效液相色谱串联质谱法测定花生及制品中的五种真菌霉素

建立了高效液相色谱-串联质谱（HPLC．MS／MS）测定花生及制品中黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素M1、脱氧雪腐镰刀菌烯醇、赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮五种真菌霉素的快速分析方法。用甲醇．水（55：45，V／V）对样品进行提取，采用真菌毒素免疫亲和柱萃取，在ESI＋模式下采用多反应监测（MRM）模式进行检测。目标物在C18色谱柱上实现了有效分离，在6minffq完成一个样品的分析，相关系数（r2，n=6）大于0．999，检测结果稳定，灵敏。黄曲霉毒素Bl、黄曲霉毒素Ml、脱氧雪腐镰刀菌烯醇线性范围0．5-50．0μg／L，检出限为0．05μg／kg（LOD，S／N=3），赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮线性范围5．0---100．0μg／L，检出限为0．5μg／kg（LOD，S／N=3），方法回收率为86．8～102．7％，精密魔RsD为0．360．79％。该方法快速、灵敏，适用于花生及制品中黄曲霉毒素Bl、黄曲霉毒素M1、脱氧雪腐镰刀菌烯醇、赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮五种真菌霉素的检测与确证。

解毒酶基因谷胱甘肽硫转移酶M1多态性与黄曲霉毒素B1相关性肝细胞癌易患性研究

目的探讨解毒酶基因谷胱甘肽硫转移酶M1(GSTM 1)多态性与黄曲霉毒素B1(AFB1) 相关性肝细胞癌(HCC)风险的相关性。方法应用聚合酶链反应技术对广西地区AFB1高污染区140 例HCC患者和536例对照人群的GSTM1基因多态性进行检测,进行以医院为基础的病例对照研究。结果(1)GSTM1-present基因型为HCC保护基因型,而GSTM1-null基因型为HCC风险基因型,其校正风险值OR(95%可信区间CI)为2.07(1.20-3.5 7);(2)在AFB1暴露中低度与高度两个层次, GSTM1基因多态性均增加HCC危险性,其校正OR(95%CI)分别为1.92(0.92-4.00)和1.80(0.77- 4.17)。结论解毒酶基因GSTM1多态性与HCC易患性相关,其缺失型增加患HCC风险;GSTM1在中低度和高度AFB1暴露时均与HCC易患性相关,但在中低度暴露时更明显。

ELISA测定苦荞中黄曲霉毒素B_1影响因素的研究

试验主要研究采用ELISA测定苦荞中黄曲霉毒素B1过程中,pH、NaCl含量、油脂含量、蔗糖含量和芦丁含量对试验结果的影响。结果表明,在中性偏酸性环境（pH 6-7）,待测样品的油脂含量小于20%,NaCl含量小于6%,蔗糖含量小于20%及芦丁含量小于3.0%的条件下采用ELISA测定苦荞中黄曲霉毒素B1能够得到比较准确的结果,若样品中这些因素含量过高时就需要采用脱盐、脱脂和调整pH等方法预处理后,方能进行黄曲霉毒素B1的测定。