KLIANNTRV是结核抗原Ag85A的HLA-A*0201限制性CTL表位

目的鉴定结核杆菌抗原Ag85A的HLA-A*0201限制性CTL优势表位。方法采用数据库SYFPEITHI初步预测结核抗原Ag85A的HLA-A*0201限制性CTL表位;经流式细胞术分析抗原肽与HLA-A*0201的亲和力;经时间荧光分辨法检测患者外周血单个核细胞(PBMCs)对抗原肽的增殖反应;最后通过细胞毒实验逐步鉴定Ag85A的HLA-A*0201限制性CTL预测的表位。结果实验证明,预测的位于Ag85A氨基酸序列(242-250aa)的肽表位与HLA-A*0201具有较高的亲和力。结论筛选出的KLIANNTRV(242-250aa)是结核杆菌抗原Ag85A的HLA-A*0201限制性CTL优势表位。

结核分枝杆菌重组Ag85A蛋白抗原诱发豚鼠迟发型超敏反应的研究

目的 :结核分枝杆菌重组Ag85A抗原诱发豚鼠迟发型超敏 (DTH)反应。Ag85A剂量、观察时间对DTH的影响。方法 :常规皮肤实验法 :灭活H37Rv全菌体致敏豚鼠 ,皮肤试验以生理盐水为阴性对照 ,5IUPPD标准品为阳性对照 ,0 .1、0 .2、0 .4、0 .6、0 .8及 1.0 μg重组抗原分别于背部皮内注射 ,注射后 2 4、4 8及 72h分别测量红肿或硬结反应横、纵直径 (mm) ,取两者的平均值。皮肤试验轮圈法 :生理盐水、5IUPPD及 0 .4、0 .6、0 .8、1.0 μgAg85A抗原 ,以轮圈法注射于同一只豚鼠背部一侧 ,每批 6只 ,共 3批。于注射后 2 4、4 8、72h分别测量红肿或硬结反应横、纵直径 (mm) ,取两者的平均值。结果 :常规皮肤试验 0 .1、0 .2 μg重组Ag85A抗原诱发DTH的平均直径与PPD相比有显著差异 (P <0 .0 5 ) ,而 0 .4、0 .6、0 .8、1.0重组Ag85A抗原诱发豚鼠DTH的平均直径与PPD相比 ,无显著差异 (P >0 .0 5 ) ,2 4h平均直径显著高于 4 8h平均直径 (P <0 .0 5 ) ,2 4h测量效果较好。轮圈法皮肤试验排除个体差异后结果与常规皮肤试验结果一致。结论

结核分枝杆菌Ag85A DNA疫苗抗结核作用的研究

结核病是由Mtb引起的一种呼吸道传染病,全球结核病疫情仍然十分严峻,而卡介苗预防结核病的效果并不理想,研究新型结核病疫苗已成为国内外结核病研究的热点之一。将本课题组自1998年至今研究MtbAg85ADNA疫苗的免疫原性、治疗效果进行综合与概述,结果表明Mtb Ag85ADNA疫苗可诱导小鼠体液免疫和Th1型细胞免疫应答,可减少小鼠组织中的Mtb尤其是耐多药Mtb的数目,该疫苗与常规化疗联合不仅可提高机体免疫力,并可有效地杀灭或抑制Mtb,从而提高化疗效果。

肿瘤特异性结核抗原Ag85A基因慢病毒表达载体构建

目的构建小鼠端粒酶催化亚单位启动子(murine telomerase catalytic subunit promoter,PmTERT)调控的结核杆菌抗原基因Ag85A肿瘤特异性慢病毒表达载体,为肿瘤靶向性免疫基因治疗的研究奠定基础。方法用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)方法克隆PmTERT用荧光素酶(luciferase)活性检测方法研究PmTERT在小鼠和人肿瘤细胞及正常细胞中的转录活性。通过核酸分子克隆方法分别构建巨细胞病毒(cytomegalo virus,CMV)启动子和PmTERT调控的Ag85A基因慢病毒表达载体并用基因测序和Western blot方法对重组载体进行鉴定。结果本研究克隆的331 bp大小的PmTERT在小鼠Lewis肺癌细胞、人A549肺癌细胞、EC-109食管癌细胞中均有转录活性在小鼠NIH3T3胚胎成纤维细胞和人MRC-5胚肾成纤维细胞中无转录活性;成功构建分别由CMV启动子和PmTERT调控的Ag85A基因慢病毒表达载体pLVX-Ag85A-CMV和pLVXAg85A-PmTERT;感染pLVX-Ag85A-CMV的Lewis细胞和NIH3T3细胞均有Ag85A蛋白表达感染pLVX-Ag85APmTERT的Lewis细胞有Ag85A表达感染pLVX-Ag85A-PmTERT的NIH3T3细胞无g85A表达。结论PmTERT具有肿瘤特异性转录活性,其驱动的结核杆菌抗原基因可以在肿瘤细胞中靶向性表达。

泛素-结核抗原融合基因DNA疫苗诱导的小鼠细胞免疫应答

目的 构建结核杆菌Ag85A抗原DNA疫苗（pA）和泛素基因与Ag85A抗原基因融合的DNA疫苗（pUA）,观察疫苗在小鼠中的免疫应答.方法 将构建的DNA疫苗pA和pUA分别肌肉注射免疫BALB/c雌性小鼠,检测小鼠的血清抗体（IgG、IgG1、IgG2a）、细胞因子（IFN-γ、IL-4）和细胞毒性T淋巴细胞反应,比较融合基因DNA疫苗和单基因DNA疫苗诱导的免疫应答的强度.结果 pA组小鼠血清IgG水平高于pUA组（P＜0.01）,但IgG2a/IgG1比值（4.16±0.20）低于pUA组（7.88±0.30）（P＜0.01）.与pA组比较,pUA组小鼠IFN-γ分泌水平增高（P＜0.01）,IL-4分泌水平下降（P＜0.01）;pUA组的CTL活性高于pA组.结论 融合的DNA疫苗pUA诱生的抗原特异的体液免疫应答不及单基因DNA疫苗pA,但其能诱导更强的细胞免疫应答.提示泛素-Ag85A融合基因DNA疫苗对于防治结核病比单基因DNA疫苗更为有效.