新的尖吻蝮蛇蛇毒类凝血酶Agacutin止血作用的实验研究

目的:研究类凝血酶Agacutin的止血效果.方法:新西兰白兔静脉注射Agacutin,观察血凝和纤溶指标;小鼠皮下注射Agacutin,采用小鼠剪尾试验测定其止血效果.结果:静脉注射Agacutin 0.01～0.05U·kg-1后,各组全血凝固时间与给药前相比均有不同程度的缩短(44.9%～60.5%),给药后30 min药效达高峰,药效持续24h.与给药前比较,各组兔血纤维蛋白原含量和血粘度在给药后有不同程度的降低,这与血液凝固时间缩短一致.试验结果显示,Agacutin对部分凝血活酶时间、血小板数量、血小板释放活性、血小板体外聚集、优球蛋白凝固时间均无明显影响,但对优球蛋白溶解时间有不同的缩短,显示有弱的溶栓活性.腹腔注射Agacutin0.5～2 U·kg-1剂量后,小鼠剪尾出血时间有不同程度的缩短(24%～66%).结论:Agacutin在血管内引起较高浓度的可溶性纤维蛋白且不激活凝血因子Ⅱ和XIII,在伤口部位加速止血,在正常的血管内,不会造成血栓形成.

类凝血酶Agacutin的质量标准的研究

为研究止血活性的Agacutin的质量标准,通过鉴别试验、人血浆和牛纤原凝结活性、HPLC、SDS-PAGE、鲎试剂和其它体内试验等方法,研究了Agacutin的酶活性,纯度,分子量,内毒素,异常毒性,过敏试验和出血毒性等质量标准指标。结果显示,HPLC法纯度平均为98%,SDS-PAGE电泳显示了异二聚体和31733±1157 Da的全分子量。1单位酶的人血浆和牛纤原凝结时间为60±20 s和188±20 s.0.25 KU的异常毒性和过敏剂量、0.2 KU/0.2 ml出血毒测试、低于10 EU/KU内毒素的热源测试、磷脂酶A、L一氨基酸氧化酶和磷酸酶活性等显示了阴性反应。根据实验结果,初步确定了Agacutin的质量指标:正相HPLC纯度≥95%,SDS-PAGE为异二聚体和全分子量31±2 kDa,1单位酶的人血浆和牛纤原凝结时间为60±20 s和188±20 s,内毒素<10 EU/KU,异常毒性和致敏剂量为0.25单位,出血毒剂量0.2单位/0.2 ml.

一个新的尖吻蝮蛇类凝血酶对血液活性的研究

目的研究蛇毒类凝血酶Agacutin的止血效果。方法新西兰白兔静脉注射Agacutin,观察新西兰白兔的血凝和纤溶指标;小鼠皮下注射,采用小鼠剪尾试验测定其止血效果。结果静脉注射Agacutin0.01～0.05U·kg-1剂量后,各剂量组全血凝固时间与给药前相比均有不同程度的缩短(44.9%～60.5%),给药后30min药效达高峰,药效持续24h。与给药前比较,各实验组兔血纤维蛋白原含量和血黏度在给药后有不同程度的降低,这与血液凝固时间缩短一致。试验结果显示,Agacutin对活化部分凝血活酶时间、血小板数量、血小板释放活性均无明显影响,但对优球蛋白溶解时间有不同的缩短,显示有弱的溶栓活性。腹腔注射Agacutin0.5～2.0U·kg-1剂量后,小鼠剪尾出血时间有不同程度的缩短(24%～66%)。结论Agacutin在血管内引起较高浓度的可溶性纤维蛋白和不激活凝血因子Ⅱ和,当有伤口时,在伤口部位加速止血,在正常的血管内,不会造成不溶性纤维蛋白和血栓的形成。所有实验结果显示,Agacutin是一个有效的潜在止血剂。