细胞外泌体蛋白AGR2表达差异与上皮性卵巢癌获得性耐药关系及机制研究

目的:探讨细胞外泌体蛋白AGR2表达差异与上皮性卵巢癌获得性耐药的关系。方法:用不同浓度顺铂(6、12、18、24μg/mL)处理细胞,筛选出大鼠卵巢癌耐药细胞株,MTT法检测细胞存活率。用超速差速离心法获得外泌体蛋白,纳米流式检测外泌体蛋白的粒径大小及颗粒浓度。通过qRT-PCR技术比较两组细胞系AGR2相关mRNA的转录情况,并通过Western blot实验对外泌体中AGR2蛋白表达水平进行比较,分析细胞外泌体中蛋白AGR2表达差异与上皮性卵巢癌获得性耐药的关系。结果:NUTU-19肿瘤细胞生存率与化疗药浓度呈负相关;药物浓度的升高与耐药细胞株(NUTU-19R)死亡率相关性不明显。NUTU-19R细胞株AGR2相关mRNA表达水平高于NUTU-19细胞株,差异有统计学意义(P<0.05);NUTU-19R细胞株AGR2蛋白表达高于NUTU-19细胞株,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:细胞外泌体蛋白AGR2高表达促进了上皮性卵巢癌获得性耐药的形成。

血流感染金黄色葡萄球菌毒力基因、agr分型及生物膜形成能力调查

目的探讨血液来源金黄色葡萄球菌耐药性、毒力基因、agr分型、生物膜形成能力,并比较甲氧西林敏感株与耐药株间的差异。方法收集2019年1月—2020年12月102株血液分离非重复金黄色葡萄球菌菌株,采用全自动微生物鉴定药敏分析系统进行药物敏感性检测;采用PCR及多重PCR分析菌株毒力基因携带情况及agr基因多态性;采用96孔板结晶紫染色法检测生物膜形成能力。采用卡方检验和Fisher精确概率法比较分析甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌(MRSA)和甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)菌株间耐药性、毒力基因、agr分型及生物膜形成能力的差异。结果102株金黄色葡萄球菌中,43株为MRSA,59株为MSSA。毒力基因普遍表达葡萄黄质蛋白基因crtN(99.0%)、溶血素基因(hla 97.1%、hlb 98.0%、hld 96.1%),其次为表面因子CP8合成酶基因cap8H(34.3%)、中毒性休克综合征毒素-1基因tst(21.6%),其中携带crtN/hla/hlb/hld 4种毒力基因组合的菌株最多(48株)。agr分型阳性率为97.1%,其中agrⅠ型占56.9%,agrⅡ型占36.3%,agrⅢ型占4.9%,未检测出agrⅣ型,agr未获分型3株。生物膜形成阳性共28株,其中12株可形成强生物膜。MRSA菌株对环丙沙星、四环素、红霉素、克林霉素、左氧氟沙星、莫西沙星的耐药率高于MSSA菌株(P<0.05);MRSA菌株tst基因携带率高于MSSA(P<0.01),cap8H基因携带率低于MSSA(P<0.05),差异有统计学意义;MRSA菌株中agrⅠ和agrⅡ型各占46.51%和48.84%;MRSA菌株更倾向形成中等或弱生物膜,与MSSA菌株相比在生物膜形成能力上差异无统计学意义。结论临床分离血流感染金黄色葡萄球菌存在多种毒力基因、agr分型、生物膜形成能力,需加强监测。

三种表面活性剂对表皮葡萄球菌生物膜渗透性及成膜关键基因agr表达的影响

目的 通过探究三种类型表面活性剂(十二烷基羟丙基磺基甜菜碱、十二烷基苯磺酸钠、溴化十六烷基吡啶)分别对表皮葡萄球菌(Se)生物膜渗透性及成膜关键基因——附属基因调节子(agr)表达的影响,为临床利用表面活性剂控制由Se生物膜引起的相关感染提供依据。方法 建立Se生物膜渗透模型,检测经表面活性剂处理后对生物膜渗透性的影响;选择在不同时间段,观察三种表面活性剂对悬浮状态下产膜Se的agr转录水平的影响,从分子水平评估表面活性剂对产膜Se黏附及毒力等可能的作用。结果 三种类型表面活性剂在最低抑菌浓度(MIC)分别为2、1、1/2浓度时,均明显影响Se生物膜的渗透性(P<0.001),增强药物对生物膜的渗透作用。与阴性对照组比较,十二烷基羟丙基磺基甜菜碱在0.5、4、12 h时间段,对agr表达有显著上调作用(P<0.001);十二烷基苯磺酸钠在0.5、4、24 h时间段,对agr表达有显著下调作用(P<0.001),在12 h时间段对agr表达有显著上调作用(P<0.001);溴化十六烷基吡啶在0.5 h时间段对agr表达有显著上调作用(P<0.01),在12、24 h时间段,对agr表达有显著下调作用(P<0.001)。结论 三种不同类型的表面活性剂对Se生物膜渗透作用均有较强的影响,在不同时间段对agr表达有显著调节作用,因而可能在Se生物膜的形成、防止感染的扩散并导致细菌毒力减弱等方面发挥作用。

agr系统在单核增生细胞李斯特菌耐药及生物被膜形成中的作用

研究agr系统在单核增生细胞李斯特菌(Lm)对不同抗菌剂耐药及生物被膜形成中的作用。构建agr基因缺失突变株,测定突变株对抗菌药物的敏感性;微孔板定量法检测Lm在不同温度下生物被膜的形成量并利用倒置显微镜观察生物被膜结构;采用软平板法测定细菌的群集及泳动运动能力;通过实时荧光定量PCR检测运动相关基因的转录水平。缺失agr系统导致Lm对头孢噻肟、环丙沙星及苯扎氯铵的耐药性降低。与野生株EGD-e相比,突变株在37℃、20℃以及4℃条件下生物被膜形成量均明显降低;?agrC的群集运动能力增强。RT-qPCR结果显示,缺失agr系统后flaA的转录水平下降。agr系统参与Lm耐药及生物被膜的形成。

EBV-DNA、AGR、IL-6与老年鼻咽癌同步放化疗口腔感染的关系

目的探讨EB病毒DNA(EBV-DNA)、白蛋白/球蛋白比值(AGR)、白细胞介素-6(IL-6)与老年鼻咽癌同步放化疗口腔感染的关系。方法选取2020年2月至2023年2月于我院进行同步放化疗的164例老年鼻咽癌患者,根据是否发生口腔感染将患者分为感染组(31例)和未感染组(133例)。比较两组一般临床资料,比较两组治疗前EBV DNA、AGR、IL-6水平,Logistic回归分析老年鼻咽癌同步放化疗患者发生口腔感染的危险因素,分析治疗前EBV DNA、AGR、IL-6水平联合检测对老年鼻咽癌同步放化疗患者发生口腔感染的预测价值。结果两组糖尿病、吸烟、使用抗生素、使用口腔保护剂情况比较,差异有统计学意义(P<0.05);与治疗前未感染组相比,治疗前感染组EBV-DNA、IL-6水平较高,AGR较低,差异具有统计学意义(P<0.05);糖尿病、吸烟、治疗前EBV-DNA、IL-6水平为同步放化疗老年鼻咽癌患者发生口腔感染的危险因素,使用抗生素、使用口腔保护剂、治疗前AGR水平保护因素(P<0.05);治疗前EBV-DNA、AGR、IL-6水平联合预测老年鼻咽癌同步放化疗患者发生口腔感染的曲线下面积(AUC)大于各单独指标(P<0.05)。结论糖尿病、吸烟、使用抗生素、使用口腔保护剂情况、EBV-DNA、AGR、IL-6均为老年鼻咽癌同步放化疗患者发生口腔感染的影响因素,临床应强化对上述因素的控制,严密监测口腔变化,减少口腔感染发生。

FAR、AGR、PNI及SII与ⅠA~ⅡA期宫颈癌临床病理特征的关系

目的 分析纤维蛋白原-白蛋白比值(FAR)、白蛋白-球蛋白比值(AGR)、预后营养指数(PNI)、系统性免疫炎症指数(SII)与ⅠA~ⅡA期宫颈癌患者临床病理特征的联系。方法 回顾性分析63例ⅠA~ⅡA期宫颈癌患者临床资料,并纳入观察组,同期就诊的宫颈癌前病变的60例患者纳入对照组,同期健康女性65例纳入健康组。对比3组的FAR、AGR、PNI、SII,另分析几项指标与ⅠA~ⅡA期宫颈癌患者临床病理特征的关系。结果 观察组的FAR(0.89±0.25)、SII(606.95±26.78)高于对照组[(0.71±0.21)、(526.77±23.59)]与健康组[(0.51±0.06)、(423.89±19.44)],PNI(51.35±6.77)低于对照组[(54.89±7.89)]与健康组[(59.76±8.24)],差异有统计学意义(P<0.05);观察组AGR(1.36±0.27)与对照组(1.30±0.21)、健康组(1.28±0.20)相比,差异无统计学意义(P>0.05)。FAR、PNI、SII与ⅠA~ⅡA期宫颈癌患者的年龄、组织学类型、肿瘤浸润深度、肿瘤直径有关(P<0.05),与脉管浸润、神经侵犯无关(P>0.05)。结论 ⅠA~ⅡA期宫颈癌患者术前的FAR、SII较高,PNI较低。三项指标与ⅠA~ⅡA期宫颈癌患者年龄、组织学类型、肿瘤浸润深度等临床病理特征密切相关,可为临床治疗方案的制定提供可靠的参考依据。

针对不同来源金黄色葡萄球菌分离菌株的agr Ⅰ-Ⅳ分型初探

目的:金黄色葡萄球菌附属基因调节子(agr)位点是一个全面的群集感应系统并且控制着毒力因子的产生,本研究旨在针对不同来源的金黄色葡萄球菌分离菌株进行agr Ⅰ-Ⅳ基因分型研究.方法:根据金黄色葡萄球菌agrⅠ-Ⅳ基因组别类型的引物,对五种不同来源的169株金黄色葡萄球菌DNA模板进行多重PCR扩增,获得目的基因,以判断agr基因型.结果:169株分离菌株中,agrⅡ型的检出率为19%(32/169),agrⅢ型检出率为12%(20/169),agrⅣ型检出率为8%(14/169),五种不同来源的金黄色葡萄球菌均有检出agrⅡ型,均未检出agrⅠ型,并且都含有未能分型的agr阴性菌株.研究结果表明不同来源金黄色葡萄球菌分离菌株中agr Ⅰ-Ⅳ基因型的流行情况.该方法对于金黄色葡萄球菌菌株分子分型有一定的借鉴意义,也为金黄色葡萄球菌菌株分子流行病学调查奠定一定的基础.

结肠癌中AGR2和S100A4的表达及临床意义

目的探讨AGR2和S100A4在结肠癌中的表达及与临床病理特征的关系。方法采用免疫组化SP法检测50例结肠癌组织及其相对应癌旁正常结肠组织中AGR2和S100A4的表达,分析两者在结肠癌中表达的相关性及其临床意义。结果 AGR2和S100A4在结肠癌中的阳性率均明显高于癌旁正常组织(P<0.01)。AGR2及S100A4在结肠癌中的表达与肿瘤分化程度、淋巴结转移及肿瘤TNM分期有关(P<0.05);与患者性别、年龄、肿瘤直径、浸润深度的差异均无统计学意义(P>0.05)。AGR2与S100A4在结肠癌中表达呈正相关关系(r=0.538,P<0.01)。Kaplan-Meier生存曲线示:AGR2、S100A4均阴性的患者中位生存时间42个月,明显较单独AGR2阳性患者(27个月)、单独S100A4阳性患者(32个月)、AGR2、S100A4均阳性患者(27个月)长,且差异有统计学意义(χ~2=25.378,P<0.001;χ~2=9.533,P=0.002;χ~2=26.331,P<0.001)。结论 AGR2和S100A4在结肠癌中均高表达且关系密切,在结肠癌的发生、发展中起重要作用,联合检测两者有助于指导结肠癌患者术后治疗及预后判定。

茶碱类药物对哮喘小鼠肺组织AGR2和Muc5ac蛋白表达的影响

目的观察氨茶碱、多索茶碱对支气管哮喘(简称哮喘)小鼠肺组织中AGR2蛋白和Muc5ac蛋白表达的影响,探讨茶碱类药物在哮喘气道黏液过度分泌中的作用。方法 32只雌性小鼠随机分为哮喘组、正常对照组、氨茶碱组和多索茶碱组,每组8只。免疫组织化学法分别检测4组小鼠肺组织AGR2和Muc5ac蛋白的表达。收集支气管肺泡灌洗液(BALF),酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测其中白细胞介素(IL)-13的水平。结果哮喘小鼠肺组织中AGR2蛋白(0.544±0.039)和Muc5ac蛋白(0.556±0.045)的表达,较正常对照组(0.388±0.053,0.188±0.086)均明显升高(P<0.01)。多索茶碱组AGR2蛋白(0.491±0.029,P<0.05)和Muc5ac蛋白(0.446±0.044,P<0.01)的表达水平与哮喘组比较明显下降。结论多索茶碱可能通过下调哮喘小鼠AGR2、Muc5ac蛋白的表达,缓解哮喘气道黏液过度分泌。

抗AGR2单克隆抗体的制备、鉴定及初步应用

目的:制备鼠抗AGR2单克隆抗体(mAb)并对其特性进行鉴定及其初步应用研究。方法:以AGR2-MBP融合蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备鼠抗AGR2的mAb,并用Protein-G亲和层析法纯化mAb。用间接ELISA法测定mAb的效价,以Western blot鉴定mAb的特异性。用免疫荧光、免疫沉淀和MTT法对mAb进行初步应用研究。结果:获得1株可持续、稳定分泌抗AGR2的mAb的杂交瘤细胞。杂交瘤细胞分泌的mAb的Ig亚类(型)为IgG1(κ),腹水mAb的效价达1×10-6。Western blot检测显示,在Mr为20000处有1条清晰的带。免疫荧光显示,该mAb可与乳腺癌细胞中的AGR2蛋白结合。免疫沉淀证实该mAb可与天然状态的AGR2有效结合。MTT实验显示该mAb对乳腺癌细胞MCF7的生长有抑制作用。结论:制备出的鼠抗AGR2的mAb效价高、特异性良好,可抑制细胞的生长,有一定的应用价值,为进一步研究AGR2的功能及其在乳腺癌、前列腺癌等癌症的诊断和治疗中的作用提供了工具。

AGR2、Lgr5在结直肠癌中的表达及其临床意义

目的探讨AGR2和Lgr5在人CRC中表达及其与临床病理特征的关系,评价二者联合检测对CRC诊断的意义。方法采用免疫组化SABC法检测70例CRC组织和20例癌旁正常组织中AGR2和Lgr5的表达情况。结果①CRC组织中AGR2阳性表达率较癌旁正常组织显著性增高(68.57%、25.00%,P﹤0.01)。在CRC组织中,AGR2的阳性表达率与肿瘤分化程度与淋巴结转移呈显著相关(P﹤0.05)。②CRC组织中Lgr5阳性表达率较癌旁正常组织显著性增高(74.29%、40.00%,P﹤0.01)。在CRC组织中,Lgr5的阳性表达率与肿瘤分化程度、浸润深度和淋巴结转移有显著相关性(P﹤0.05)。③联合检测AGR2、Lgr5曲线下面积与单独检测比较,差异有统计学意义(P均﹤0.05)。结论 AGR2、Lgr5在CRC的发生、发展过程中发挥了重要作用,两者联合检测有助于对CRC患者肿瘤进展的判断,为CRC患者的分子诊断和治疗提供了理论支持。

AGR2蛋白在前列腺癌组织中的表达及意义

目的探讨AGR2蛋白在前列腺癌组织中的表达及意义。方法利用Real-time RT-PCR、RT-PCR和免疫组织化学方法检测AGR2在不同的细胞系以及前列腺癌组织中的表达。结果 AGR2的表达与前列腺癌的进展呈正相关。结论 AGR2蛋白可作为前列腺癌进展诊断的候选分子标志物。

前列腺癌中AGR2蛋白的表达及临床意义

目的探讨AGR2在前列腺癌中的表达及意义。方法应用免疫组化方法检测AGR2和AR在61例前列腺癌和33例良性前列腺增生症中的表达状况。结果 AGR2在前列腺癌中阳性率为68.9%,其在前列腺增生症中的阳性率为36.4%,两组中的差异有显著性(P<0.01)。前列腺癌中AGR2和AR的表达呈正相关(r=0.323,P=0.011)。AGR2与患者的临床分期、年龄、Gleason分级及术前患者血清的PSA及cPSA水平均无相关性(P>0.05)。结论 AGR2可能与前列腺癌的发生有关,该蛋白的表达可能受AR调控。

二亚硝基哌嗪上调AGR2促进鼻咽癌细胞转移

目的：探讨二亚硝基哌嗪（DNP）通过调控AGR2表达参与鼻咽癌转移的分子机制。方法：以具有低转移潜能的鼻咽癌细胞6-10B作为研究材科,应用四甲基噻唑蓝（MTT）法检测DNP对6-10B细胞的非毒性浓度;分别采用间接免疫荧光法、Western blot和实时荧光定量PCR法检测DNP对6-10B细胞中AGR2蛋白及m RNA表达的影响;采用针对AGR2基因的特异性小干扰RNA（si RNA）沉默6-10B细胞AGR2的表达,并用Transwell小室法检测其对细胞侵袭和迁移能力的影响。结果：MTT法检测DNP对6-10B细胞的非毒性浓度为0-10.0μmol/L;8.0μmol/L DNP处理6-10B细胞后,间接免疫荧光法检测发现AGR2蛋白表达明显上调,且以在细胞质中表达为主;不同浓度的DNP处理6-10B细胞24 h或用8.0μmol/L的DNP处理6-10B细胞不同时间后,Western blot结果发现AGR2蛋白的表达水平增加且呈浓度和时间依赖性（P〈0.05）;siRNA-AGR2沉默6-10B细胞屮AGR2基因的表达后,DNP诱导6-10B细胞的侵袭及迁移能力较干扰前明显降低（P〈0.05）。结论：DNP可能通过在转录水平上调AGR2的表达,影响鼻咽癌细胞的侵袭和转移能力。

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的临床分布及agr基因分型调查

目的了解我院金黄色葡萄球菌的临床分布、耐药性变迁及agr基因分型。方法我院临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌,采用微量肉汤法进行药敏试验和结果判断;采用多重PCR法进行agr基因分型测定。结果 2015年10月至2017年3月分离的183株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌主要来源于24个科室,感染标本来源主要是分泌物、深部痰及非开放性脓液标本,药敏试验提示万古霉素、利奈唑胺、替加环素、复方新诺明、利福平、莫西沙星、左氧氟沙星、环丙沙星、红霉素对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌敏感率分别为100%、100%、100%、83.06%、62.29%、57.38%、55.19%、53.0%和12.57%;agr基因分型以Ⅰ型为主,其次为Ⅱ型、Ⅲ型。结论我院耐甲氧西林金黄色葡萄球菌于全院均匀分布,对红霉素耐药率较高,未发现对万古霉素、利奈唑胺、替加环素耐药株。

新型药物靶点agr群体感应系统的研究进展及其应用

病原菌能够引起人类疾病,引起疾病的原因是因为其具有毒力因子和致病力。为了感染宿主引起疾病,致病菌要针对宿主信号,准确调控毒力基因的表达。在病原菌中存在复杂的调节致病因子分泌的机制,附属基因agr系统是金黄色葡萄球菌中研究最多的毒力响应调节因子。综述了金黄色葡萄球菌agr系统的最新研究进展,并阐述了其在新型抗菌药物开发中的应用前景。

重复序列致agrC突变对金黄色葡萄球菌致病性的影响

目的探讨金黄色葡萄球菌XQ株毒力变异的机制。方法以金黄色葡萄球菌ATCC25923为对照,采用动物实验观察临床分离的金葡菌XQ株在体外传代后的毒力改变;通过聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分析菌体及培养上清的蛋白谱变化,应用PCR进行金葡菌附属调节基因agr扩增并测序,分析菌株毒力变异的机制,并进一步通过qRT-PCR检测XQ株agr调控的毒力因子变化情况。结果动物毒力实验证实XQ株的毒力较对照菌ATCC25923强,体外传代培养后,XQ株第180代菌株（XQ180）的毒力明显下降,SDS-PAGE分析发现毒力下降的XQ株（XQM株）培养上清的蛋白表达谱较XQ株有明显改变,对金葡菌agr基因进行测序分析发现XQM株的agr C基因第443位有一段188 bp的序列插入,而该插入序列就是agr C基因255~442间序列,正是该188 bp重复序列导致Agr C蛋白的截短型突变,引起新桥株的致病性降低,qRT-PCR检测结果证实XQM株中受agr调控的毒力基因表达水平显著下降。结论临床分离的金葡菌XQ株毒力强,在体外传代中易发生毒力变异,这种变异与重复序列导致的agr C突变有关。

新磷氮霉素A生产菌Streptomyces auratus AGR0001的遗传操作研究

目的建立新磷氮霉素A产生菌金黄色链霉菌AGR0001(Streptomyces auratus AGR0001)的遗传操作体系,为阐明其生物合成的调控和后修饰机制,并通过遗传改造提高其产量和获得更多的新化合物奠定基础,同时可为其它链霉菌的遗传操作研究提供新的参考。方法筛选了S.auratus AGR0001生长、产孢的最佳培养基,检测了其对11种不同抗生素的敏感性,探索了将外源DNA导入该菌的最适方法。结果 ISP4和MS培养基分别是S.auratus AGR0001的最佳产孢和生长培养基;该菌对壮观霉素等7种抗生素敏感,对氨苄和羧苄西林具有抗性,对萘啶酮酸和阿伯拉霉素在低浓度有抗性,而在高浓度敏感;使用PEG介导的原生质体转化、电转菌丝体、接合转移等方法均能将外源DNA导入S.auratus AGR0001中。利用接合转移将携带透明颤菌血红蛋白基因vhb(Vitreoscilla hemoglobin)的自杀型质粒p SET152导入S.auratus AGR0001中并整合至其染色体上进行表达,提高了发酵液的抗真菌活性。结论建立了S.auratus AGR0001的遗传操作体系。

IL-13对小鼠AGR2表达的影响及其在哮喘气道黏液过度分泌中的作用

目的研究白细胞介素-13(IL-13)对AGR2mRNA和蛋白在哮喘小鼠肺组织中表达的影响,探讨AGR2在哮喘气道黏液过度分泌中的作用。方法 18只雌性小鼠随机分为哮喘组、对照组和IL-13组,IL-13组于26d-28d激发前经鼻滴入100μg重组小鼠IL-13。收集支气管肺泡灌洗液(BALF)计嗜酸性细胞分类计数。Real time-PCR方法检测肺组织AGR2mRNA表达。免疫组化法分别检测AGR2蛋白和Muc5ac蛋白在小鼠肺组织的表达。结果哮喘组BALF中嗜酸性细胞分类计数(19.1±6.34)%较正常组(0.28±0.29)%明显增多(P<0.01);IL-13组BALF中嗜酸性细胞分类计数(30.05±9.32)%较哮喘组明显升高(P<0.01)。IL-13组小鼠肺组织中AGR2mRNA(1.702±0.046)和蛋白(0.617±0.028)的表达较哮喘组(1.52±0.071,P<0.01;0.505±0.078,P<0.05)升高,IL-13组AGR2mRNA与Muc5ac蛋白的表达水平呈直线正相关(r=0.862,P<0.05);AGR2蛋白与Muc5ac蛋白水平呈直线正相关(r=0.847,P<0.05)。结论 AGR2可能参与了哮喘气道黏液过度分泌发病机制,IL-13可通过上调其表达,进一步促进黏蛋白Muc5ac表达。

AGR元模型到组织抽象模型的建模方法

将目标驱动思想引入AGR中,提出一种从AGR元模型到多Agent系统(MAS)组织抽象模型的建模方法。对AGR进行综述,给出该方法的具体步骤和形式化过程。应用于某智能故障诊断系统的结果表明,该建模方法有利于设计人员直接利用AGR元模型构建MAS组织抽象模型,可适用于各种AGR扩展。