血流感染金黄色葡萄球菌毒力基因、agr分型及生物膜形成能力调查

目的探讨血液来源金黄色葡萄球菌耐药性、毒力基因、agr分型、生物膜形成能力,并比较甲氧西林敏感株与耐药株间的差异。方法收集2019年1月—2020年12月102株血液分离非重复金黄色葡萄球菌菌株,采用全自动微生物鉴定药敏分析系统进行药物敏感性检测;采用PCR及多重PCR分析菌株毒力基因携带情况及agr基因多态性;采用96孔板结晶紫染色法检测生物膜形成能力。采用卡方检验和Fisher精确概率法比较分析甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌(MRSA)和甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)菌株间耐药性、毒力基因、agr分型及生物膜形成能力的差异。结果102株金黄色葡萄球菌中,43株为MRSA,59株为MSSA。毒力基因普遍表达葡萄黄质蛋白基因crtN(99.0%)、溶血素基因(hla 97.1%、hlb 98.0%、hld 96.1%),其次为表面因子CP8合成酶基因cap8H(34.3%)、中毒性休克综合征毒素-1基因tst(21.6%),其中携带crtN/hla/hlb/hld 4种毒力基因组合的菌株最多(48株)。agr分型阳性率为97.1%,其中agrⅠ型占56.9%,agrⅡ型占36.3%,agrⅢ型占4.9%,未检测出agrⅣ型,agr未获分型3株。生物膜形成阳性共28株,其中12株可形成强生物膜。MRSA菌株对环丙沙星、四环素、红霉素、克林霉素、左氧氟沙星、莫西沙星的耐药率高于MSSA菌株(P<0.05);MRSA菌株tst基因携带率高于MSSA(P<0.01),cap8H基因携带率低于MSSA(P<0.05),差异有统计学意义;MRSA菌株中agrⅠ和agrⅡ型各占46.51%和48.84%;MRSA菌株更倾向形成中等或弱生物膜,与MSSA菌株相比在生物膜形成能力上差异无统计学意义。结论临床分离血流感染金黄色葡萄球菌存在多种毒力基因、agr分型、生物膜形成能力,需加强监测。

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的临床分布及agr基因分型调查

目的了解我院金黄色葡萄球菌的临床分布、耐药性变迁及agr基因分型。方法我院临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌,采用微量肉汤法进行药敏试验和结果判断;采用多重PCR法进行agr基因分型测定。结果 2015年10月至2017年3月分离的183株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌主要来源于24个科室,感染标本来源主要是分泌物、深部痰及非开放性脓液标本,药敏试验提示万古霉素、利奈唑胺、替加环素、复方新诺明、利福平、莫西沙星、左氧氟沙星、环丙沙星、红霉素对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌敏感率分别为100%、100%、100%、83.06%、62.29%、57.38%、55.19%、53.0%和12.57%;agr基因分型以Ⅰ型为主,其次为Ⅱ型、Ⅲ型。结论我院耐甲氧西林金黄色葡萄球菌于全院均匀分布,对红霉素耐药率较高,未发现对万古霉素、利奈唑胺、替加环素耐药株。

trap基因表达在表皮葡萄球菌生物膜形成及附属基因调节(agr)系统活化中的作用

目的研究表皮葡萄球菌trap基因表达与生物膜形成的相关性及其对agr系统的活化作用。方法采用微量板半定量法检测表皮葡萄球菌生物膜表型,二维电泳和高灵敏度的基质辅助激光解吸附飞行时间质谱分析比较表皮葡萄球菌标准株蛋白质表达谱,实时定量逆转录PCR检测trap基因和RNAⅢ的转录水平,CLUSTAL X对表皮葡萄球菌trap基因与金黄色葡萄球菌序列进行分析,Mega软件构建进化树。结果比较分析形成生物膜的表皮葡萄球菌ATCC 35984株与不形成生物膜的ATCC 12228株生长中期的蛋白质组,发现ATCC 35984株的TRAP蛋白量明显高于ATCC 12228株。转录水平的检测显示ATCC 12228株和生物膜阳性临床SE1457、SE671株的trap基因均低转录,但RNAⅢ的转录水平未降低。SE1457株agr系统突变后,RNAⅢ的转录明显降低,trap基因的转录无变化。RNAⅢ的转录随细菌生长变化而增加,trap基因转录保持不变。trap序列分析显示其在表皮葡萄球菌与金黄色葡萄球菌中较为保守,但存在明显的进化距离。结论在本论文所研究的表皮葡萄球菌菌株中,trap基因的转录和翻译与细菌生物膜的形成不存在直接的调控相关性;并提示TRAP蛋白不是表皮葡萄球菌agr系统活化所必需的细菌产物;表皮葡萄球菌trap基因序列与金黄色葡萄球菌之间存在差异,可能与其功能差异相关。

血液来源表皮葡萄球菌生物被膜形成能力及agr基因多态性调查

目的 探讨临床分离血液来源表皮葡萄球菌附属基因调节因子(agr)基因多态性,了解其分子特征与生物被膜形成能力。方法 收集2012年3月~2015年2月四川省人民医院临床分离血液来源的菌株,表皮葡萄球菌经过全自动微生物鉴定系统鉴定后通过分子生物学方法做进一步鉴定确认。采用半定量黏附实验检测生物被膜形成能力,采用多重PCR分析agr基因多态性。结果 实验期间收集到81株表皮葡萄球菌,并全部纳入了下一步的鉴定和分型实验中。血液来源的表皮葡萄球菌中,agrⅠ型51株(62.96%),agrⅡ型6株(7.41%),agrⅢ型7株(8.64%),agr未分型17株(20.99%)。生物被膜阳性菌株54株,占66.67%。结论 临床分离血液来源表皮葡萄球菌agr基因存在明显多态性,以agrⅠ型为主,agr未分型较普遍;血液来源表皮葡萄球菌具有较强的生物被膜形成能力,即具备强致病率,应引起临床重视。

牛源金黄色葡萄球菌生物被膜与毒素基因检测及agr分型

旨在对牛源金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)的生物被膜、耐药性、毒素基因和agr基因型进行研究,并分析agr基因型与毒素基因之间的相关性。分别用微量滴定板法、药敏纸片法和PCR对S.aureus的生物被膜、耐药性和毒素基因进行检测,用多重PCR对S.aureus进行agr分型。结果表明,336株牛源S.aureus均能形成生物被膜,其中,形成中等(++)和强(+++)生物被膜的S.aureus分别占52.1%和47.9%。药敏试验结果显示,S.aureus对青霉素耐药最为严重,耐药率达91.7%,其次是红霉素、卡那霉素、克林霉素和庆大霉素,耐药率分别为89.6%、72.9%、66.7%和60.4%,而所有S.aureus对呋喃妥因和利奈唑胺均表现为敏感。PCR检测结果显示,黏附素基因fnbA检出率最高,达99.7%,其次是icaD、icaA、clfA和cna,检出率分别为98.2%、89.6%、86.0%和56.0%,bap基因检出率最低,为14.6%。肠毒素基因sea的检出率为26.5%,其次是seb(8.3%)和sec(6.8%),毒素基因tst的检出率占8.3%。分型结果显示,agrⅠ型S.aureus是主要的流行菌株,占77.1%,agrⅡ、agrⅢ和agrⅣ型S.aureus流行率分别为14.0%、4.8%和2.1%。统计分析结果表明,agrⅠ型S.aureus更具有携带多种毒素基因的潜力,而agrⅣ型S.aureus无毒素基因携带潜力。综上表明,牛乳腺炎性S.aureus对常见的抗菌药物耐药严重,毒素基因分布多样,agrⅠ型是奶牛乳腺炎性S.aureus主要的基因型,且具有携带多种毒素基因的能力,其潜在威胁应引起重视。

生鲜猪肉中金黄色葡萄球菌的耐药特征、毒力基因及agr分型

为研究市售生鲜猪肉中金黄色葡萄球菌的污染状况,分两个季节从雅安市雨城区采集351份生鲜猪肉样本,采用K-B法检测分离株的耐药性,PCR技术对分离株的mecA基因、传统肠毒素基因、中毒休克综合征毒素基因、杀白细胞毒素基因、溶血素基因和脱皮毒素基因进行分析和agr分型。结果表明,夏、冬季总体检出率分别为15.28%和28.69%;分离株对青霉素、四环素、红霉素的耐受性最强;5种传统肠毒素的检出率为80%,sea、sed的检出率均为4.11%,seb、sec的检出率均为12.33%;中毒休克综合征毒素基因的检出率为15.07%,溶血毒素基因检出率最高,杀白细胞毒素基因和脱皮毒素基因检出率最低。分离株以agrⅠ型为主(50.68%),未检测出agrⅣ。综上表明,该地区生鲜猪肉中金黄色葡萄球菌的污染较为严重,分离株呈多重耐药谱,毒力基因分布多样,部分菌株致病性较强,具有的潜在危险应引起重视。

tst和pvl基因阳性金黄色葡萄球菌流行情况及分子特征

目的了解中毒性休克综合征毒素-1的tst基因和杀白细胞素的pvl基因阳性金黄色葡萄球菌(金葡菌)流行情况及其附属基因调节子(agr)和葡萄球菌盒式染色体(SCCmec)型别。方法收集上海市及浙江省共7所医院的916株金葡菌,聚合酶链反应(PCR)检测tst、pvl、mec A和mec C基因,并对tst或pvl基因阳性菌株作agr及SCCmec(针对甲氧西林耐药金葡菌,MRSA)遗传学分型。结果 916株金葡菌中tst阳性208株,阳性率22.7%;pvl阳性35株,阳性率3.8%;mec A阳性665株(MRSA),未检测到mec C基因。在665株MRSA中,tst阳性198株(29.8%),agr和SCCmec分型均以2/Ⅱ型为主,分别占97.0%和94.4%;pvl阳性14株(2.1%),agr分型以1型(85.7%)为主,SCCmec分型以Ⅲ型(42.9%)和Ⅳa型(28.6%)为主。在251株甲氧西林敏感金葡菌(MSSA)中,tst阳性10株(4.0%);pvl阳性21株(8.4%)。tst阳性率在MRSA菌株中较MSSA中高,而pvl检出率则在MSSA菌株中较高,且浙江地区MRSA中pvl的阳性率高于上海菌株,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 tst基因在MRSA菌株中阳性率较MSSA高;pvl阳性率相对较低,但因其与某些严重的金葡菌感染相关,临床应予以关注。

4种方法检测表皮葡萄球菌生物膜形成能力的应用价值探讨

目的比较4种方法检测表皮葡萄球菌体外生物膜形成能力的应用价值,帮助临床选择检测生物膜形成能力的可靠方法。方法用刚果红实验、半定量粘附实验、扫描电镜实验、PCR扩增icaA分别检测临床分离的45株表皮葡萄球菌生物膜的形成能力,经行×列表χ2检验比较阳性检出率,并以扫描电镜检测法为"金标准"计算其他3种方法的灵敏度和特异性。结果 4种方法检出表皮葡萄球菌生物膜形成的阳性率分别为31.1%、40.0%、40.0%、28.9%,无统计学差异(χ2=1.80,P>0.05)。刚果红实验、半定量粘附实验、PCR扩增icaA检测生物膜形成能力的灵敏度分别为77.8%、100%、77.2%,而特异性均为100%。结论 4种方法均可用于体外生物膜检测。

异质性万古霉素中介的金黄色葡萄球菌的分子特征

目的了解我院异质性万古霉素中介的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的分布及分子学特征。方法对2015年10月至2016年5月我院临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌,采用菌群分析策略-曲线下面积法(PAP-AUC)筛选异质性万古霉素中介的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌;采用多重PCR法对hVISA进行agr、spa、SCC基因分型测定,对PCR产物进行测序确定spa分型。结果分离的79株MRSA经筛选获得9株h VISA;9株hVISA中有7株为agr-Ⅰ型,2株为agr-Ⅲ型;有6种spa克隆型,包括t437(4株),t114(1株)、t2310(1株)、t14062(1株)、t030(1株)、t16472(1株)。SCCmec分型以Ⅳa型为主,占55.56%,其次为Ⅲ型33.33%、Ⅱ型11.11%。结论我院hVISA检出率为11.39%,呈多克隆流行。

《农业环境科学学报》2020年刊出论文简评

本文对《农业环境科学学报》2020年全年发表的文章作了评述,总结分析了与2019年相比各栏目刊登内容上的一些变化,并按当前农业环境领域关注的热点研究对象:重金属、温室气体、面源污染、抗生素和抗生素抗性基因(AGRs)、微塑料等分别进行了其研究内容评述,指出了各方面未来研究中应重点关注的问题及《农业环境科学学报》的未来刊登重点。

葡萄球菌生物膜形成影响因素的研究进展

细菌感染已成为临床中不能完全避免的情况,包括致病菌和条件致病菌。细菌生物膜成为细菌的有效保护途径,增强了细菌对抗机体的免疫防御作用及对抗生素的抵抗性。葡萄球菌生物膜形成受多因素及多基因调控,外部环境因素主要是机体免疫反应及外界有机物,内部基因调控主要是sar A、agr、aap、ica。本文就葡萄球菌生物膜的形成及影响生物膜形成的外部环境因素和内部基因调控因素进行综述,为葡萄球菌生物膜的靶向药物研究与治疗提供参考。

金黄色葡萄球菌Agr群体感应系统及其抗毒力治疗研究进展

辅助基因调控(Auxiliary gene regulation,Agr)群体感应系统广泛存在于金黄色葡萄球菌中,是研究最广泛的细菌双组分调节系统之一,在金黄色葡萄球菌定植、感染过程中通过调控大量毒力因子、生物膜形成等起着至关重要的作用;抗毒力治疗是一种通过降低或阻断病原体感染后的毒力表达但不影响细菌生存能力,使其易被宿主的免疫防御系统杀死的治疗方法。本文通过对金黄色葡萄球菌Agr群体感应的表达调控与阻断Agr表达抑制其毒力产生的抗毒力治疗等两个方面进行阐述,以期为金黄色葡萄球菌的治疗提供新的研究思路。

agrC对表皮葡萄球菌生物膜形成作用机制的研究进展

表皮葡萄球菌在医用生物材料表面形成的生物膜可有效抵御抗生素的治疗,导致感染迁延不愈,已成为近年来的研究热点.影响生物膜形成的众多基因构成了复杂的调控网络,在生物膜形成的不同阶段发挥不同的作用,其中表皮葡萄球菌附属基因调节子（agr）系统是调节生物膜形成的最重要基因之一.就细菌生物膜的形成过程、agr系统及其相关基因对生物膜形成调控机制的研究现状进行综述,为研究以agr为靶点治疗表皮葡萄球菌生物膜引发的相关感染提供参考.

金黄色葡萄球菌生物被膜基因型的分子鉴定

本文选用常见的典型食源性微生物金黄色葡萄球菌,从食品微生物安全角度出发,采用生物被膜菌落结晶紫染色法定量检测58株金黄色葡萄球菌菌株生物被膜的形成能力。并对金黄色葡萄球菌生物被膜相关基因型进行分型研究,包括ica调控子分型(ica A、ica D、ica BC)与粘附特性分型(agr、atl E和aap)研究。结果显示,所有检测菌株均能生成生物被膜,其中3株能生成强粘附性生物被膜,占5.2%;生成中等生物被膜能力菌株有23株,占39.7%;32株金黄色葡萄球菌生成弱粘附生物被膜,占55.2%。实验所用的58株菌株中有48株能扩增出ica A基因,56株扩增出ica D基因,57株扩增出ica BC基因,56株扩增出agr,分别有53株和57株染色体中存在aap和atl E基因。本实验的结论:ica操纵子为金黄色葡萄球菌生物被膜形成所必须,aap基因可能作为促进金黄色葡萄球菌生物被膜形成的一个独立因素。而atl E,agr基因是金黄色葡萄球菌生物被膜粘附过程中形成所必须的调节因子。

MALDI-TOFMS鉴定一株小菌落变异型金黄色葡萄球菌

目的探讨运用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)技术对金黄色葡萄球菌小菌落变异型的特征性蛋白指纹图谱进行深度研究的价值。方法分别采用传统生化鉴定、16S r RNA测序技术和MALDI-TOF MS技术对1株小菌落变异型金黄色葡萄球菌进行鉴定,通过质谱鉴定系统VITEK MS的质谱科研模式获取金黄色葡萄球菌小菌落突变株(small colony variants,SCV)的质谱图,分析代表金黄色葡萄球菌agr和sig B系统的m/z表达强度,并用SARAMIS软件构建基于质谱峰谱特征的系统发育树。结果使用MALDI-TOF MS技术鉴定该菌株为金黄色葡萄球菌,与传统生化鉴定、16S rRNA测序技术的鉴定结果一致。其菌落形态符合典型SCV菌株的特征,预示生物膜形成的PSMα3(m/z 2634.4)、PSMα1(m/z 2286.8)和PSMα4(m/z 2198.6)的表达强度分别为100%、76.1%和32.3%,反映急性早期感染状态的agr调控系统的delta毒素强度只有10%;反映慢性、复发性感染的sigB调控系统的峰谱相对强度均<25%,该菌株和科研菌种库SCV的系统发育树近似度>70%。结论 MALDI-TOF MS技术不仅能够快速准确鉴定不典型金黄色葡萄球菌,且生成的质谱图能够初步提示菌株在宿主体内的感染状态,表明该技术具有极大的应用前景。

生物材料植入感染与表皮葡萄球菌生物膜形成的相关基因调控

表皮葡萄球菌是寄居于人体皮肤和黏膜表面的共生菌群,现已发现其是引发临床生物材料相关感染的主要条件致病菌,在生物材料植入感染中占有重要地位.医用生物材料表面细菌生物膜的形成是其主要致病因素,细菌生物膜可有效抵御机体的防御反应和抗生素治疗,导致生物材料植入感染难以彻底治愈,使感染呈慢性、持续性和反复性特点,从而在临床上造成了极高的死亡率.就表皮葡萄球菌生物膜的形成、胞间黏附素基因（ica）操纵子和附属基因调节子（agr）基因对表皮葡萄球菌生物膜的调控及其在临床生物材料植入感染中的作用等方面作一综述.