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Optimization of Agrobacterium tumefaciens-Mediated Immature Embryo Transformation System and Transformation of Glyphosate-Resistant Gene 2mG2-EPSPS in Maize(Zea mays L.) 被引量:4
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作者 YU Gui-rong LIU Yan +8 位作者 DU Wen-ping SONG Jun LIN Min XU Li-yuan XIAO Fang-ming LIU Yong-shengKey Laboratory for Bio-Resource and Eco-Environment Ministry of Education/State Key Laboratory of Hydraulics and Mountain River Engineering College of Life Science Sichuan University 《Journal of Integrative Agriculture》 SCIE CAS CSCD 2013年第12期2134-2142,共9页
Since maize is one of the most important cereal crops in the world,establishment of an efficient genetic transformation system is critical for its improvement.In the current study,several elite corn lines were tested ... Since maize is one of the most important cereal crops in the world,establishment of an efficient genetic transformation system is critical for its improvement.In the current study,several elite corn lines were tested for suitability of Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation by using immature embryos as explants.Infection ability and efficiency of transformation of A.tumefaciens sp.strains EHA105 and LBA4404,different heat treatment times of immature embryos before infection,influence of L-cysteine addition in co-cultivation medium after transformation,and how different ways of selection and cultivation influence the efficiency of transformation were compared.Glyphosate-resistant gene 2mG2-EPSPS was transformed into several typical maize genotypes including 78599,Zong 31 and BA,under the optimum conditions.Results showed that the hypervirulent Agrobacterium tumefaciens sp.strain EHA105 was more infectious than LBA4404.Inclusion of L-cysteine(100 mg L-1) in co-cultivation medium,and heating of the immature embryos for 3 min prior to infection led to a significant increase in the transformation efficiency.Growth in resting medium for 4-10 d and delaying selection was beneficial to the survival of resistant calli.During induction of germination,adding a high concentration of 6-BA(5 mg L-1) and a low concentration of 2,4-D(0.2 mg L-1) to regeneration medium significantly enhanced germination percentage.Using the optimized transformation procedure,more than 800 transgenic plants were obtained from 78599,Zong 31 and BA.By spraying herbicide glyphosate on leaves of transgenic lines,we identified 66 primary glyphosate-resistant plants.The transformation efficiency was 8.2%.PCR and Southern-blot analyses confirmed the integration of the transgenes in the maize genome. 展开更多
关键词 MAIZE immature embryo agrobacterium tumefaciens-mediated transformation transgenic approach glyphosate resistance
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Establishment of Agrobacterium tumefaciens-Mediated Transformation System for Rice Sheath Blight Pathogen Rhizoctonia solani AG-1 IA 被引量:3
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作者 YANG Ying-qing YANG Mei +3 位作者 LI Ming-hai LI Yong HE Xiao-xia ZHOU Er-xun 《Rice science》 SCIE 2011年第4期297-303,共7页
To construct the T-DNA insertional mutagenesis transformation system for rice sheath blight pathogen Rhizoctonia solani AG-1 IA,the virulent isolate GD118 of this pathogen was selected as an initial isolate for transf... To construct the T-DNA insertional mutagenesis transformation system for rice sheath blight pathogen Rhizoctonia solani AG-1 IA,the virulent isolate GD118 of this pathogen was selected as an initial isolate for transformation.The conditions for transformation of isolate GD118 were optimized in five aspects,i.e.pre-induction time,co-culture time,acetosyringone(AS) concentration at the co-culture phase,co-culture temperature and pH value of induction solid medium(ISM) at the co-culture phase.Finally,a system of Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation(ATMT) for R.solani AG-1 IA was established successfully.The optimal conditions for this ATMT system were as follows:the concentration of hygromycin B at 30 μg/mL for transformant screening,8 h of pre-induction,20 h of co-culture,200 μmol/L of AS in ISM,co-culture at 25 ℃ and pH 5.6 to 5.8 of ISM at the co-culture phase.The transformants still displayed high resistance to hygromycin B after subculture for five generations.A total of 10 randomly selected transformants were used for PCR verification using the specific primers designed for the hph gene,and the results revealed that an expected band of 500 bp was amplified from all of the 10 transformants.Moreover,PCR amplification for these 10 transformants was carried out using specific primers designed for the Vir gene of A.tumefaciens,with four strains of A.tumefaciens as positive controls for eliminating the false-positive caused by the contamination of A.tumefaciens.An expected band of 730 bp was amplified from the four strains of A.tumefaciens,whereas no corresponding DNA band could be amplified from the 10 transformants.The results of the two PCR amplifications clearly showed that T-DNA was indeed inserted into the genome of target isolate GD118. 展开更多
关键词 rice sheath blight Rhizoctonia solani agrobacterium tumefaciens-mediated transformation T-DNA insertional mutagenesis METHODOLOGY
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Scarabaeid Larvae- and Herbicide-Resistant Transgenic Perennial Ryegrass (Lolium perenne L.) Obtained by Agrobacterium tumefaciens-Mediated Transformation of cry8Ca2, cry8Ga and bar Genes 被引量:3
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作者 WU Jin-xia ZHANG Zhi-guo +2 位作者 ZHANG Qian LANG Zhi-hong SUN Xue-hui 《Journal of Integrative Agriculture》 SCIE CSCD 2012年第1期53-61,共9页
Insect pest and weeds are two major problems for forage and turf grasses. In this study, scarab larvae- and herbicide-resistant transgenic perennial ryegrass (Lolium perenne L.) was obtained by transforming it with ... Insect pest and weeds are two major problems for forage and turf grasses. In this study, scarab larvae- and herbicide-resistant transgenic perennial ryegrass (Lolium perenne L.) was obtained by transforming it with cry and bar genes simultaneously via the Agrobacterium-mediated method. To optimize the callus induction and plant regeneration conditions, various concentrations of 2,4-dichlorophenoxyacetic acid and 6-benzylaminopurine were assayed. The transformation efficiencies of different Agrobacterium suspension media, used during Agrobacterium-mediated transformation, were compared. Then, plasmids of pCAMBIA3301 containing cry gene (cry8Ca2 or cry8Ga) and bar gene, driven by ubiquitin promoter, were transformed into perennial ryegrass. The transformants were generated and confirmed by both Southern hybridization analysis and Western hybridization analysis. Further, the resistance of transgenic perennial ryegrass plants to scarab larvae and herbicide were analyzed. After 30 d of co-cultivation with scarab larvae, the damage to the root system of transgenic plants was less than that of non-transgenic control plants. Additionally, the leaves of transgenic plants were resistant to Basta, while leaves of the wild plants wilted after Basta spraying. These results show that cry gene and bar gene were successfully transferred into perennial ryegrass by the Agrobactgerium-mediated method, and convey resistance to scarab larvae and herbicide in transgenic perennial ryegrass plants. 展开更多
关键词 agrobacterium tumefaciens-mediated transformation transgenic perennial ryegrass scarab larvae resistance herbicide resistance
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Establishment of Agrobacterium tumefaciens-mediated Genetic Transformation System for Aspergillus awamori
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作者 Feng CHEN Kun WANG +3 位作者 Chao YIN Deming LI Nan REN Junxing LI 《Agricultural Biotechnology》 CAS 2012年第3期44-48,51,共6页
[ Objective ] This study aimed to establish Agrobacterium tumefaciens-mediated genetic transformation system for Aspergillus awamori and investigate the feasibility of expressing heterologous proteins in A. awamori. [... [ Objective ] This study aimed to establish Agrobacterium tumefaciens-mediated genetic transformation system for Aspergillus awamori and investigate the feasibility of expressing heterologous proteins in A. awamori. [ Method] Appropriate A. awamori host strains were determined according to the secretory protein profile. Selectable marker was selected for genetic transformation by drug sensitivity analysis. The established A. awamori genetic transformation system was used for transformation and expression analysis of Rhizomucor miehei lipase (RML). The feasibility of using A. awamori to express heterologous proteins was investigated by identification of transformants and property analysis. [ Result~ Based on the analysis of secretory protein profile, A. awamori strains CBS115.52 and CICC2257 were determined as the host strains for heterologous protein expression ; drug sensitivity analysis shows that hygromycin B resistance gene ( HygBr ) is an effective ge- netic seleetable marker; by using Agrobacterium tumefaciens-mediatcd transformation (ATMT) method, the plasmid pHGW-amdS containing HygBr was successfully transformed into A. awamori strain CBS115.52 to establish the genetic transformation system ofA. awamorl with HygBr as selectable marker. RML was transformed into A. awamori and its expression was validated by substrate hydrolysis test, SDS-PAGE and Western blot. [ Conclusion] This study demonstrates that the genetic transformation system of A. awamori mediated by Agrobacterium tumefaciens has potential feasibility for expression of heterologous proteins. 展开更多
关键词 Aspergillus awamoH agrobacterium tumefaciens-mediated transformation (atmt Hygromycin B resistant gene (HygBr) Rhizomucor miehei lipase (RML)
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Development of Alfalfa (Medicago sativa L.) Regeneration System and Agrobacterium-Mediated Genetic Transformation 被引量:10
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作者 ZHANG He HUANG Qi-man SU Jin 《Agricultural Sciences in China》 CAS CSCD 2010年第2期170-178,共9页
The regeneration ability of four alfalfa (Medicago sativa L.) cultivars, Xinjiang Daye, Longdong, Gannong 1 and Gannong 3, was studied, and the effects of various cultivars, explant sources and medium recipes on reg... The regeneration ability of four alfalfa (Medicago sativa L.) cultivars, Xinjiang Daye, Longdong, Gannong 1 and Gannong 3, was studied, and the effects of various cultivars, explant sources and medium recipes on regeneration were compared. The better callus forming frequency obtained from hypocotyls of Xinjiang Daye is 88.5% and regeneration frequency is 9.8% in our initial experiments. To further optimize regeneration system for genetic transformation, we therefore changed concentrations of plant growth regulators and supplemented with glutamine into callus-induction and shoot-regeneration media. Callus forming frequency and shoot differentiation frequency were increased to 100%. The time taken to generate transgenic plants (16 weeks) was shorter than that for previouse procedure (25 weeks) and regeneration frequency was promoted to 15.1%. The results show that addition of glutamine is particularly important for shortening period of regeneration and promoting regeneration frequency. For study of genetic transformation of alfalfa, Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation of Xinjiang Daye was developed based on this optimized regeneration system. The plant expression vector carrying two glutamine synthetases (GS 1 and GS2) and △1-pyrroline-5-carboxylate synthetase (P5CS) gene was used for alfalfa in vitro transformation. Six transgenic alfalfa plantlets with resistance to PPT were obtained. The introduction of foreign genes into plants was assessed in the transformants by PCR analysis and Southern hybridizations. 展开更多
关键词 alfalf glutamine synthetases △1-pyrroline-5-carboxylate synthetase agrobacterium tumefaciens-mediated transformation transgenic alfalfa
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紫花苜蓿尖孢镰刀菌ATMT遗传转化体系的建立 被引量:1
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作者 王乐 贾瑞芳 +2 位作者 于飞 张园园 林克剑 《中国草地学报》 CSCD 北大核心 2022年第9期11-18,共8页
为研究紫花苜蓿尖孢镰刀菌致病的分子机理,将带有潮霉素抗性标记和绿色荧光蛋白报告基因的双元载体,采用根癌农杆菌转化法(ATMT法)转入紫花苜蓿尖孢镰刀菌Ms210分生孢子中,共获得137株阳性转化子。随机挑选15株阳性转化子研究其菌落形... 为研究紫花苜蓿尖孢镰刀菌致病的分子机理,将带有潮霉素抗性标记和绿色荧光蛋白报告基因的双元载体,采用根癌农杆菌转化法(ATMT法)转入紫花苜蓿尖孢镰刀菌Ms210分生孢子中,共获得137株阳性转化子。随机挑选15株阳性转化子研究其菌落形态、菌丝生长速率、产孢量、粗毒素分泌量和致病力,结果表明15株转化子中有3株的生长速率比对照显著降低(P<0.05),其中转化子Ms210-04生长速率降低最显著,仅为11.08 mm/d,其余转化子与野生型菌株Ms210差异不显著;15株转化子中有3株的产孢量显著低于菌株Ms210,其中转化子Ms210-14产孢量最低,为7.05×10^(6)个/mL,其余转化子与野生型菌株Ms210差异不显著;15株转化子中仅有2株的粗毒素分泌量与菌株Ms210无显著差异,有1株(1.41 mg/mL)显著升高,其余均较菌株Ms210显著降低,转化子Ms210-01粗毒素分泌量最低,仅为0.81 mg/mL;15株转化子中只有4株转化子的致病力较菌株Ms210显著降低,其余均与菌株Ms210无显著差异;说明转化子的生长速率、产孢量、粗毒素分泌量和致病力会因外源基因的随机插入而产生变化。同时,获得1株在上述各方面同菌株Ms210无显著差异的转化子Ms210-03。 展开更多
关键词 紫花苜蓿 尖孢镰刀菌 农杆菌转化法 生物学特性 致病力
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甘蔗镰孢菌插入突变体库的构建、致病变异突变体筛选及突变基因定位
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作者 蒙姣荣 黄海娟 +3 位作者 杨惠贞 曾泉 李珅雨 陈保善 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2023年第2期233-245,共13页
由镰孢菌复合种引起的甘蔗梢腐病(pokkah boeng disease,PBD)是甘蔗的主要病害之一。在广西,甘蔗镰孢菌(Fusarium sacchari)是PBD的优势病原菌。尽管PBD的研究已有较长的历史,但甘蔗镰孢菌的致病分子机理远未得到阐明。为研究甘蔗镰孢... 由镰孢菌复合种引起的甘蔗梢腐病(pokkah boeng disease,PBD)是甘蔗的主要病害之一。在广西,甘蔗镰孢菌(Fusarium sacchari)是PBD的优势病原菌。尽管PBD的研究已有较长的历史,但甘蔗镰孢菌的致病分子机理远未得到阐明。为研究甘蔗镰孢菌的致病分子机理,本研究采用农杆菌介导的遗传转化(Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation,ATMT)技术构建甘蔗镰孢菌FF001菌株的T-DNA插入突变体库。采用携带潮霉素B磷酸转移酶基因pTHR1-AH双元载体的农杆菌菌株AGL-1介导转化F.sacchari分生孢子,获得3018个转化子;随机选取12个转化子进行PCR检测和Southern杂交分析,结果显示所有检测突变株均插入潮霉素B磷酸转移酶基因,多数为单拷贝插入。采用离体叶片接种评价转化子的致病力,获得致病力明显减弱21个和致病力增强9个,共30个突变体。通过TAIL-PCR扩增测序并与甘蔗镰孢菌基因组序列比对,确定了其中27个突变株的T-DNA插入位点。观察到多个插入位点伴随有基因组片段缺失,导致1个插入位点可以影响1个以上的功能基因。T-DNA插入位点多为编码区和启动子区,少数为终止子区和间隔区。受影响的基因分别编码α-甘露糖苷酶(alpha-mannosidase)、中性氨基酸渗透酶(neutral amino acid permease)、寡聚高尔基复合体成分4(oligomeric golgi complex component 4)、寡肽转运蛋白(oligopeptide transporter)、酰基辅酶A脱氢酶(acyl-CoA dehydrogenase)、乙酰乙酰-CoA合成酶(acetoacetyl-CoA synthetase)、碳酐酸酶(carbonic anhydrase)、Bud 10蛋白(Bud 10 protein)、类驱动蛋白bimC(kinesin-related protein bimC)、锌指蛋白ASD4(zinc finger protein ASD4)、转录起始因子TFIID(transcription initiation factor TFIID)、角质酶G-box结合蛋白(cutinase G-box binding protein)、吖啶黄素敏感性控制蛋白(acriflavine sensitivity control protein ACR-2)、核类VCP蛋白(nuclear VCP-like protein)、热激蛋白HSP30(heat shock protein 30)、硫氧还蛋白(thioredoxin)、2C型蛋白磷酸酶(type 2C protein phosphatase)、核糖核酸外切酶(exoribonuclease)、硒蛋白(selenoprotein)、DNA聚合酶η(DNA polymerase eta)、存活因子1(survival factor 1)和乙醛脱氢酶(aldehyde dehydrogenase)等22个已知功能蛋白和16个未知功能蛋白。部分突变基因,如锌指蛋白ASD4、角质酶G-box结合蛋白、寡肽转运蛋白和2C型蛋白磷酸酶等,已分别在稻瘟病菌、稻曲病菌、胶孢炭疽菌和尖孢镰孢菌等植物病原真菌中证实为致病相关基因。多种类型致病相关突变体的获得,为深入研究甘蔗镰孢菌致病分子机理提供了新的材料。 展开更多
关键词 甘蔗镰孢菌 农杆菌介导 遗传转化 致病力相关基因 侧翼序列 甘蔗梢腐病
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农杆菌介导水稻遗传转化的影响因素及应用研究进展 被引量:3
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作者 陈思 张从合 +4 位作者 王慧 吴浩然 杨力 黄艳玲 管昌红 《现代农业科技》 2023年第5期1-4,8,共5页
在水稻遗传转化过程中,农杆菌介导转化法与其他方法相比优势较多,比如转入的外源DNA结构完整及表达比较稳定、操作简便、转化率高等,已被广泛应用于转基因技术中。本文对根癌农杆菌介导水稻遗传转化的原理、影响遗传转化的因素进行了综... 在水稻遗传转化过程中,农杆菌介导转化法与其他方法相比优势较多,比如转入的外源DNA结构完整及表达比较稳定、操作简便、转化率高等,已被广泛应用于转基因技术中。本文对根癌农杆菌介导水稻遗传转化的原理、影响遗传转化的因素进行了综述,并探讨了农杆菌介导转化法的应用前景。 展开更多
关键词 水稻 根癌农杆菌 农杆菌介导转化法 遗传转化
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尖孢镰刀菌ATMT体系的构建及其对甘草的促生效果评价
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作者 陈嘉欣 朱泓宇 +3 位作者 任广喜 左鑫 姜丹 刘春生 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第11期2882-2888,共7页
该研究旨在通过耐盐能力、产吲哚乙酸(IAA)能力、溶磷能力、产铁载体能力等指标评价一株甘草内生尖孢镰刀菌的体内功能,通过根癌农杆菌介导的遗传转化技术建立该菌的稳定遗传转化体系,并通过标记基因绿色荧光蛋白(GFP)的克隆和β-葡萄... 该研究旨在通过耐盐能力、产吲哚乙酸(IAA)能力、溶磷能力、产铁载体能力等指标评价一株甘草内生尖孢镰刀菌的体内功能,通过根癌农杆菌介导的遗传转化技术建立该菌的稳定遗传转化体系,并通过标记基因绿色荧光蛋白(GFP)的克隆和β-葡萄糖苷酸酶(GUS)染色的效率检测转化子的稳定性与染色高效性,筛选出高效稳定的转化子用于回染甘草,评价其对甘草幼苗生长的影响。研究结果表明该菌耐盐性较好,在含7%氯化钠的马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基上仍能生长,但生长速度随着PDA培养基中氯化钠含量的增高而减缓;该菌具有产吲哚乙酸的功能,其发酵液中IAA的质量浓度约为3.32mg·m L^(-1)。该研究成功构建了该菌的遗传转化体系,且其根癌农杆菌介导的遗传转化(ATMT)体系高效而稳定。筛选获得1株兼具染色高效性和遗传稳定性的转化子,该转化子在甘草植株中的回染率为76.92%,能够显著提高一月龄甘草幼苗的主根长,促进甘草幼苗根部的生长发育。该研究结果可以为生物菌肥的开发及优质甘草的生长调控奠定基础。 展开更多
关键词 尖孢镰刀菌 根癌农杆菌介导的遗传转化(atmt) 体内功能 转化子 甘草 促生
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红曲霉过表达orf5基因对洛伐他汀含量的影响 被引量:1
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作者 王娇 桂艳玲 +1 位作者 韩洁 赵杰宏 《中国农学通报》 2023年第12期93-98,共6页
为研究红曲霉过表达orf5基因对洛伐他汀含量的影响,丰富洛伐他汀代谢调控机制。用ATMT和REMI法将gus-orf5融合基因转化红曲霉,并对ATMT法的共培养条件和REMI法的内切酶进行优化筛选,对获得的潮霉素抗性菌株进行GUS染色和PCR鉴定,并检测... 为研究红曲霉过表达orf5基因对洛伐他汀含量的影响,丰富洛伐他汀代谢调控机制。用ATMT和REMI法将gus-orf5融合基因转化红曲霉,并对ATMT法的共培养条件和REMI法的内切酶进行优化筛选,对获得的潮霉素抗性菌株进行GUS染色和PCR鉴定,并检测阳性菌株的洛伐他汀含量变化。结果筛选出20μg/mL潮霉素的培养基作为转基因红曲霉的抗性筛选浓度,补充1/10 LB的Co-IM共培养基有利于ATMT法转化,在REMI法中Xba I介导的转化效果较好。用ATMT和REMI法均获得抗性菌落,经PCR检测表明orf5和hyg基因均已导入红曲霉,GUS染色呈蓝色。过表达菌株的洛伐他汀含量比对照明显提高,高达36.89%。红曲霉过表达orf5有利于增加洛伐他汀的积累,为深入研究红曲霉orf5基因的功能提供参考。 展开更多
关键词 紫色红曲霉 ORF5基因 农杆菌介导遗传转化(atmt) 限制性内切酶介导基因整合(REMI) 洛伐他汀
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樱桃砧木叶片再生系统建立及抗菌肽基因转化 被引量:28
11
作者 王关林 夏秀英 +2 位作者 钟文田 方宏筠 姜明兰 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期209-211,共3页
以优良樱桃砧木新品系 98 1、Colt、大青叶为试材进行叶片离体再生及根癌农杆菌介导遗传转化 ,建立了高频率再生系统 ,并获得抗菌肽转基因植株。诱导叶片再生的最佳培养基为MS附加BA 1.0~2 .0mg/L、NAA 0 .3~ 0 .5mg/L、GA 0 .5mg/L、... 以优良樱桃砧木新品系 98 1、Colt、大青叶为试材进行叶片离体再生及根癌农杆菌介导遗传转化 ,建立了高频率再生系统 ,并获得抗菌肽转基因植株。诱导叶片再生的最佳培养基为MS附加BA 1.0~2 .0mg/L、NAA 0 .3~ 0 .5mg/L、GA 0 .5mg/L、AgNO3 5 .0~ 10 .0mg/L。农杆菌及受体感受态是影响转化的关键 ,延迟筛选可提高叶片中转化细胞对卡那霉素的抗性而利于再生。PCR及SouthernBlot检测为阳性 ,表明抗菌肽基因已整合到樱桃砧木 98 1基因组。 展开更多
关键词 樱桃 砧木 叶片再生系统 抗菌肽 基因转化
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农杆菌介导玉米遗传转化影响因子的研究 被引量:25
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作者 袁鹰 李启云 +4 位作者 郝文媛 谭化 孔祥梅 张光弟 刘德璞 《分子植物育种》 CAS CSCD 2006年第2期228-232,共5页
以东北春玉米自交系7922、340、78599、921及美国杂交种H99等幼胚愈伤组织为受体,利用农杆菌介导法转化Bt(CryIA.)基因,研究菌液预处理、愈伤组织状态、侵染培养基、侵染时间及共培养条件等因素对转化频率的影响。根据转化愈伤组织的除... 以东北春玉米自交系7922、340、78599、921及美国杂交种H99等幼胚愈伤组织为受体,利用农杆菌介导法转化Bt(CryIA.)基因,研究菌液预处理、愈伤组织状态、侵染培养基、侵染时间及共培养条件等因素对转化频率的影响。根据转化愈伤组织的除草剂(Basta)抗性筛选结果评估转化率,表明继代培养3 ̄5d的愈伤组织适于转化,其中以继代5d的7922愈伤组织转化率最高,为46.6%;不同基因型对农杆菌转化率存在差异,H99的抗性愈伤组织率为34.57%,7922为26.27%、340为21.36%、78599和921抗性愈伤组织率仅为8.02%和6.78%。基因型间差异显著;浸染培养基中加入(AS100 ̄200mg/L)抗性愈伤转化率明显提高;菌液浓度OD6000.5 ̄0.6、侵染时间5 ̄10min、共培养时间3d最佳。 展开更多
关键词 农杆菌介导法 转化频率 影响因素 抗性愈伤组织
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细菌几丁质酶基因转化番茄的研究 被引量:10
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作者 任春梅 高必达 +2 位作者 张学文 何迎春 苏建明 《湖南农业大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期298-301,共4页
为了获得抗真菌病的番茄材料 ,采用农杆菌介导法将细菌几丁质酶基因转化番茄子叶 ,获得了抗卡那霉素的转化植株 ,PCR检测初步证明细菌几丁质酶基因已整合到番茄的基因组 .同时对番茄耐 Kan水平、转化受体的预培养以及共培后洗涤抑菌进... 为了获得抗真菌病的番茄材料 ,采用农杆菌介导法将细菌几丁质酶基因转化番茄子叶 ,获得了抗卡那霉素的转化植株 ,PCR检测初步证明细菌几丁质酶基因已整合到番茄的基因组 .同时对番茄耐 Kan水平、转化受体的预培养以及共培后洗涤抑菌进行了研究 .结果表明 :卡那霉素质量浓度为 5 0 m g/ L 时就能完全抑制番茄子叶再生 ;共培后直接用抑菌剂洗涤的抑菌效果较好 ;番茄子叶预培养 展开更多
关键词 细菌 几丁质酶 基因转化 番茄 农杆菌介导法
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农杆菌介导的稻瘟病菌转化及致病缺陷突变体筛选 被引量:23
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作者 刘朋娟 王政逸 +1 位作者 王秋华 李德葆 《中国水稻科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期231-237,共7页
在构建了两个含有潮霉素B磷酸转移酶基因双元载体的基础上,成功地实现了农杆菌介导的稻瘟病菌转化,转化效率达每1×106个分生孢子>300个转化子,并得到了4000多个转化子。通过继代培养和PCR检测,证明插入到稻瘟病菌基因组中的潮... 在构建了两个含有潮霉素B磷酸转移酶基因双元载体的基础上,成功地实现了农杆菌介导的稻瘟病菌转化,转化效率达每1×106个分生孢子>300个转化子,并得到了4000多个转化子。通过继代培养和PCR检测,证明插入到稻瘟病菌基因组中的潮霉素抗性基因可稳定遗传。Southern杂交分析表明,大约有2/3转化子的T-DNA插入是单拷贝的。用大麦叶片离体接种的方法快速测定部分稻瘟病菌转化子的致病性,发现一个致病缺陷突变体:A1-412。该突变体不能侵入水稻叶片及擦伤的大麦或水稻叶片,说明A1-412突变体在寄主组织中扩展进程被阻断。进一步的表型分析发现A1-412突变体的产孢量显著下降,仅为野生菌株的7%,在疏水表面不能形成附着胞,部分分生孢子萌发也略有延迟。Southern杂交显示A1-412基因组中T-DNA插入是单拷贝的。上述结果表明,A1-412突变体表型的改变可能是由于T-DNA插入而使某一具有重要生物学功能的基因失活所致。 展开更多
关键词 稻瘟病菌 根癌农杆菌介导转化 插入突变 致病缺陷突变体
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转harpin_(Xooc)蛋白编码基因hrf2对油菜抗菌核病的影响 被引量:12
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作者 马玲莉 霍蓉 +3 位作者 高学文 何丹 邵敏 王琦 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期1655-1660,共6页
【目的】尝试利用转基因方法提高油菜抗病性。【方法】将来自水稻细菌性条斑病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzicola)编码harpinXooc蛋白的hrf2基因插入植物表达载体pCAMBIA1301中,构建了植物重组表达质粒pCAMBIA1301-hrf2。由根癌农杆菌... 【目的】尝试利用转基因方法提高油菜抗病性。【方法】将来自水稻细菌性条斑病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzicola)编码harpinXooc蛋白的hrf2基因插入植物表达载体pCAMBIA1301中,构建了植物重组表达质粒pCAMBIA1301-hrf2。由根癌农杆菌LBA4404介导,将重组表达质粒pCAMBIA1301-hrf2转化甘蓝型油菜杨油4号子叶节。【结果】获得了抗潮霉素的再生转基因油菜植株,经PCR,RT-PCR和GUS染色检测证明hrf2基因已整合到油菜基因组中。抗病性鉴定结果表明,转基因油菜对油菜菌核病有较好的抗性,在转基因植株叶片上油菜菌核病菌菌丝的生长受到明显抑制。【结论】利用农杆菌转化法可将hrf2基因导入油菜基因组中,并使转基因油菜对菌核病的抗性提高。 展开更多
关键词 hrf2基因 农杆菌介导转化法 转基因油菜 抗病性
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农杆菌介导法将β-1,3-葡聚糖酶基因导入油菜的研究初报 被引量:35
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作者 蓝海燕 王长海 +1 位作者 陈正华 田颖川 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第1期6-10,共5页
将克隆的烟草 β-1 ,3 -葡聚糖酶基因插入双子叶植物高效表达载体 p Bin4 3 8中 ,构建了植物表达载体 p BLG。利用农杆菌介导法 ,将此抗真菌基因导入甘蓝型双低油菜品种 H1 65中 ,得到了抗卡那霉素的再生植株 ,并探讨了影响油菜分化的... 将克隆的烟草 β-1 ,3 -葡聚糖酶基因插入双子叶植物高效表达载体 p Bin4 3 8中 ,构建了植物表达载体 p BLG。利用农杆菌介导法 ,将此抗真菌基因导入甘蓝型双低油菜品种 H1 65中 ,得到了抗卡那霉素的再生植株 ,并探讨了影响油菜分化的几个要素。结果表明 :乙酰丁香酮及硝酸银等物质对油菜分化及绿苗的形成具有重要作用 ;油菜对卡那霉素十分敏感 ,提高卡那霉素浓度有可能将一部分转化体淘汰。对 8株再生植株进行了 PCR检测 ,其中 4株表现为阳性。进一步的点杂交分析表明 ,有 3株表现出较强的杂交信号 。 展开更多
关键词 β1 3-葡聚糖酶 基因 农杆菌介导 抗真菌病 油菜
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棉花黄萎病菌致病的分子机理 被引量:11
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作者 汪敏 焦睿 +2 位作者 邢小萍 房卫平 李洪连 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2011年第3期272-278,共7页
阐述了大丽轮枝菌(Verticillium dahliae Kleb)产生的细胞壁降解酶、蛋白酶和毒素在致病中的作用及微菌核形成机制,全面分析了基因组学途径、RNA干涉和农杆菌介导的转化等真菌功能基因组学技术在大丽轮枝菌致病分子机理研究上的进展。
关键词 棉花 大丽轮枝菌 致病机理 基因组学途径 RNA干涉 农杆菌介导转化
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农杆菌介导冷调节基因(Cbcor15a)遗传转化甘蔗体系的建立 被引量:10
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作者 滕峥 李鸣 +7 位作者 崔永祯 方位宽 梁朝旭 何姗珊 梁俊 吴凯朝 叶燕萍 李容柏 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期1333-1339,共7页
【目的】利用农杆菌介导法,将外源冷调节基因Cbcor15a导入甘蔗愈伤组织,建立快速、高效的甘蔗遗传转化体系,为培育具抗寒性甘蔗品种奠定基础。【方法】以新台糖22号(ROC22)为材料,通过对愈伤组织诱导、分化、生根等培养基进行优化,筛选... 【目的】利用农杆菌介导法,将外源冷调节基因Cbcor15a导入甘蔗愈伤组织,建立快速、高效的甘蔗遗传转化体系,为培育具抗寒性甘蔗品种奠定基础。【方法】以新台糖22号(ROC22)为材料,通过对愈伤组织诱导、分化、生根等培养基进行优化,筛选出外源基因转化甘蔗的适合激素种类与用量、PPT用量、抗生素种类与用量;利用甘蔗转基因二元植物表达载体pCambia1300-Cbcor15a-bar,通过农杆菌介导法将目的基因Cbcor15a导入甘蔗愈伤组织。【结果】当农杆菌菌液OD600为0.4、侵染20 min时有利于愈伤组织分化;甘蔗愈伤组织诱导和分化培养阶段的最佳PPT为0.50mg/L。侵染后在共培养中添加500.00 mg/L抗生素Cef能有效抑制农杆菌,添加300.00 mg/L抗生素Cef能促进愈伤组织分化成苗,添加200.00 mg/L抗生素Cef能促进幼苗生根。MS培养基中添加低量NAA更有利于甘蔗愈伤组织的分化;在促进细胞分裂时KT的效果明显优于6-BA。MS培养基中添加5.00 mg/LNAA和70.00g/L蔗糖能有效促进分化苗生根。利用建立的遗传转化体系可获得286株转冷调节基因Cbcor15a的甘蔗转化植株;选取83株通过PPT抗性筛选后长势良好的转化植株进行阳性检测,其中有4株呈阳性。【结论】利用农杆菌介导的Cbcor15a基因转化甘蔗的遗传转化体系能成功将Cbcor15a基因整合到甘蔗基因组。 展开更多
关键词 农杆菌介导 冷调节基因 甘蔗遗传转化体系 建立
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紫花苜蓿基因转化的影响因素分析 被引量:15
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作者 马晖玲 卢欣石 +1 位作者 曹致中 余密密 《草业学报》 CSCD 2006年第5期94-102,共9页
通过农杆菌介导法对紫花苜蓿不同品种植株进行了抗旱基因转化的研究.得到了一套紫花苜蓿基因转化的优化体系。研究表明.100mg/L的卡那霉素对苜蓿愈伤组织的生长有着显著的抑制效应。250mg/L头孢霉素能够有效地抑制农杆菌菌株LBA440... 通过农杆菌介导法对紫花苜蓿不同品种植株进行了抗旱基因转化的研究.得到了一套紫花苜蓿基因转化的优化体系。研究表明.100mg/L的卡那霉素对苜蓿愈伤组织的生长有着显著的抑制效应。250mg/L头孢霉素能够有效地抑制农杆菌菌株LBA4404的生长。紫花苜蓿供试材料被切后直接用OD600值为0.3~0.5的农杆菌LBA4404菌液侵染10~15min;培养材料共培养3d后在愈伤组织诱导培养基MS+2mg/L2.4-D+0.5mg/LKT+30g/L蔗糖+9g/L琼脂+250mg/L Cef上诱导出愈伤组织;在体细胞胚分化培养基MS+1.0mg/LBA+0.3mg/LNAA+30g/L蔗糖+9g/L琼脂+50mg/LKan+250mg/LCef上促进体细胞胚的分化;分化出的体细胞胚在再生培养基上(同分化培养基.Kan为80mg/L)进一步发育成抗性转化苗;转化的无根小苗在生根培养基1/2MS+1.0mg/LIBA+1%蔗糖+0.8%琼脂+100mg/L卡那霉素上可生长出根系。 展开更多
关键词 紫花苜蓿 基因转化 农杆菌介导法
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棉花黄萎病菌T-DNA插入突变体库的构建及其表型分析 被引量:11
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作者 贾培松 丁丽丽 +2 位作者 周邦军 郭惠珊 高峰 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2012年第1期62-70,共9页
以棉花强致病力黄萎病菌株V592为材料,利用农杆菌介导的T-DNA插入技术构建了一个含15000个转化子的突变体库,对突变体的生物学特性、致病力及T-DNA插入拷贝数进行研究,结果显示:(1)突变体的菌落形态分为菌核型、中间型、菌丝型和菌膜型... 以棉花强致病力黄萎病菌株V592为材料,利用农杆菌介导的T-DNA插入技术构建了一个含15000个转化子的突变体库,对突变体的生物学特性、致病力及T-DNA插入拷贝数进行研究,结果显示:(1)突变体的菌落形态分为菌核型、中间型、菌丝型和菌膜型,分别占92.12%,4.54%,3.19%和0.15%;(2)菌核型、中间型和菌丝型菌株,在菌落生长速度和孢子大小方面无明显差异;而在产孢量方面,菌核型普遍强于中间型和菌丝型;(3)致病性测定显示,菌核型的致病力普遍强于中间型和菌丝型;(4)Southern杂交显示,T-DNA单拷贝数插入的突变体比率约为70.99%,而菌核型的单插入率为80.00%,明显高于中间型(69.23%)和菌丝型(64.71%)。以上结果表明,农杆菌介导转化技术可用于棉花黄萎病菌突变体库的快速构建,突变体的菌落表型与其产孢能力、致病力及T-DNA插入拷贝数等之间存在一定的相关性。 展开更多
关键词 棉花黄萎病菌 农杆菌介导转化 突变体库 菌落表型 致病力
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