一株昆虫内生真菌Alternaria sp.次级代谢产物研究

采用硅胶柱色谱,Sephadex LH-20凝胶柱色谱及HPLC等方法从昆虫共生真菌Alternaria sp.(Be-1)的发酵液分离得到7个代谢产物,经NMR,MS及理化性质等确定为4个环肽和3个聚酮类化合物,4-甲氧基格链孢酚(1),5'-methoxy-6-methyl-biphenyl-3,4,3'-triol(2),altenusin(3),二氢腾毒素(4),腾毒素(5),环(4-羟基-脯-亮)二肽(6)和cyclo(L-Phenylalanine-trans-4-hydroxy-L-proline)(7)。测定了化合物1-7对抗肿瘤治疗靶点-受体酪氨酸激酶的抑制活性,药理实验结果表明,化合物1-6对三种酪氨酸激酶(EGFR,VEGFR-1,c-Met)具有不同程度的抑制活性,化合物1,3,6对EGFR,VEGFR-1,c-Met均具有强的抑制作用,而且化合物6还有选择性抑制EGFR和c-Met的活性。

柑橘褐斑病室内快速评价方法的研究

【目的】柑橘褐斑病是我国柑橘上一种严重危害嫩叶、嫩梢及果实的病害,研究拟建快速、可靠、稳定及操作简便的柑橘褐斑病菌室内评价方法。【方法】在‘温州蜜柑’离体叶片和果实上造成不同伤口,用强致病菌hjx接种,【结果】25℃保湿培养后调查发现不接菌对照有、无伤口不发病;各种伤口接种病原菌均能发病,但伤口类型对病害影响很大。叶片反面较叶片正面更易于发病,叶片反面10针、1针及无伤接种发病无明显差异;果实表面针刺1针、10针及去除果皮接种对发病影响很大,差异极显著。进一步用6个不同柑橘品种及Alternaria citri ZYF,Alternaria sp.MP3 2个菌株验证方法的可靠性和稳定性,发现菌株hjx在不同品种上致病力存在差异,2个菌株之间的致病力存在差异。【结论】以离体柑橘叶片或果实为材料,叶片反面1针接种或果实去皮接种,25℃保湿培养2 d后调查病斑大小,可作为室内准确、快速评价柑橘褐斑病致病力的方法。该方法可用于筛选抗病材料,评价分离菌株的致病性和药剂的防病效果等。

山豆根、肉豆蔻提取液对西兰花主要致腐菌抑菌效果研究

为探讨山豆根、肉豆蔻中草药提取液对西兰花2种主要致腐真菌抑菌效果的影响,配制了山豆根、肉豆蔻提取液,添加到马铃薯葡萄糖液体培养基中,制成带药培养基,分别接种2种致腐菌—链格孢菌、核盘菌,28℃下恒温培养。通过测定培养液菌体湿重、电导率、蛋白质含量以及菌体蛋白SDS-PAGE电泳,研究了中草药提取液处理对西兰花主要致腐菌抑菌效果的影响。结果表明:与对照相比,2种处理均能抑制菌体湿重的增加,增大培养液电导率,延缓培养液中蛋白质的消耗,减少菌体蛋白的含量及种类。其中,山豆根提取液抑菌效果最好。

大肠杆菌中表达外源重组蛋白的研究

通过聚合酶链式反应(PCR),扩增出交链孢菌激活蛋白辅助蛋白基因p42A,并将该基因按正确阅读框克隆到表达载体pGEX-KG中谷胱甘肽转移酶(GST)基因的下游。重组质粒转化大肠杆菌BL21,通过建立重组菌生长时间与OD600值的关系,及对菌液密度、诱导剂浓度、诱导时间和温度等条件的摸索,根据SDS-PAGE电泳检测结果判断融合蛋白的最佳表达条件。实验结果表明,最适诱导时期为重组菌生长对数中期;IPTG的最佳浓度为1.0mmol/L;37℃下诱导培养4h时产物表达量最高。超声波破碎菌体细胞,离心及电泳结果表明,表达产物为可溶性蛋白。

与黄瓜抗黑斑病基因连锁的SCAR标记及抗病资源筛选

为建立黄瓜抗黑斑病分子标记辅助育种体系,以黄瓜感黑斑病母本L 63和抗黑斑病父本L 9及其F1、F2分离群体为试材,将与黑斑病抗性相关基因连锁的一个共显性AFLP标记E-CC/M-CAT进行了测序,根据序列特点设计了特异的SCAR引物SCEM126/122,成功地转换成了简单实用的共显性SCAR标记,经验证该标记与黄瓜抗黑斑病相关基因连锁遗传距离为4.4 cM,可以作为黄瓜抗黑斑病辅助选择的标记。且该标记具有迅速、简便、成本低、不受环境条件限制的优点,扩增条带清晰,无杂带和拖尾现象,适合用于大量样本分析。利用引物SCEM126/122对290份材料进行抗病性检测,结果表明有64份抗病材料,为进行抗黑斑病黄瓜新品种的选育奠定了基础。

肉桂精油对东陵枣采后病害的防治效果

通过离体和活体试验,研究不同浓度的肉桂精油对东陵枣采后致病菌链格孢(Alternaria alternata)的抑制效果。离体试验结果表明,肉桂精油对链格孢具有较强的抑制活性,300μL/L肉桂精油可以完全抑制链格孢病菌生长。活体试验结果表明,100μL/L与500μL/L肉桂精油均能显著地抑制链格孢病菌在东陵枣上的生长。20℃条件下贮藏15天后,用100μL/L处理的东陵枣发病率比对照(ck)减少13%,用500μL/L处理的东陵枣发病率比对照(ck)减少33%。

杀菌剂对太子参黑斑病菌的毒力作用机理初探

通过用多种杀菌剂对太子参黑斑病菌进行室内毒力测定。结果表明:70%的甲基托布津的抑制效果最好,12.5%戊唑醇和舒米的抑制率达90%以上。杀菌剂处理前后该菌菌丝发生明显的变化,且最佳杀菌剂甲基托布津对太子参黑斑病菌的作用位点不在细胞膜上。

链格孢属一新种——竹链格孢

从华西箭竹病理组织上分离到一株真菌,通过对其产孢模式和分生孢子特点等的形态学研究,发现该菌为链格孢属小孢子种群成员。然而该菌具有区别于已知种的特征,如分生孢子梗常单生,少数成簇,无分枝;分生孢子大多单生,较少链生,孢身较大;寄主为华西箭竹,故立为竹链格孢新种。该模式标本保藏于山东理工大学生命科学学院实验室。

甜罗勒根际细菌的筛选鉴定及其对烟草赤星病菌的抑制作用

从甜罗勒(Ocimum basilicum)根际分离得到的28株细菌菌株,通过平板对峙试验筛选出对烟草赤星病菌(Alternaria alternata)抑制作用最强的菌株LL-16,其平均抑菌带宽度为7.77 mm。对LL-16菌株进行生理生化鉴定和16S r DNA序列分析,表明其与Bacillus subtilis(JQ978219)聚类成为一支,支持强度达到71%,同源性为98.9%,鉴定其属于枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。采用菌落直径法和凹玻片法测定不同浓度的菌液、无菌滤液和灭活滤液对烟草赤星病菌的菌丝生长和孢子萌发的影响。结果表明,一定浓度范围内,菌液、无菌滤液和灭活滤液均能抑制赤星病菌丝生长和孢子芽管伸长,形成泡状芽管,致使病菌丧失侵染能力。同一种处理随着其浓度的降低对赤星病菌的抑制作用减弱。相同浓度的3种处理抑制作用从强到弱依次为菌液、无菌滤液、灭活滤液。

黄瓜黑斑病抗性遗传分析

以感黑斑病自交系L63和抗黑斑病自交系L9为亲本建立了6个世代联合群体(P1、P2、F1、BC1S、BC1R、F2),采用植物数量性状主基因+多基因混合遗传模型对群体的黑斑病抗性进行多世代联合分析。结果表明,黄瓜抗黑斑病性状符合D-2遗传模型,受1对加性主基因+加性-显性多基因控制;BC1S、BC1R、F2的主基因遗传率分别为60.23%、60.23%、75.18%,多基因遗传率均为0。说明控制黄瓜黑斑病的抗性为主基因遗传,并且遗传稳定,环境方差占表型方差的比例大于24.82%、小于39.77%,也受到外界环境的影响。

水稻新病害——水稻褐变穗

依据柯赫氏法则,对水稻的一种新病害—水稻褐变穗进行分离培养及病原菌鉴定,按照Ainsworth分类系统进行鉴定,确定分离得到的菌种是链格孢(Alternariaalternata(Fr.)Keissl),通过回接证明了水稻褐变穗确实是由链格孢引起的。其水稻褐变穗的症状是水稻出穗后不久遇强风易发生,粒上出现褐色斑点,严重时变浓褐或黑褐色,病斑不规则形,但水稻叶鞘几乎没有褐变。

亚硝基胍对链格孢菌LD2-13的诱变改造

为了获得对小蓟致病力强的生防菌株,采用亚硝基胍对出发菌株LD2-13进行化学诱变。筛选出突变株LD2-13-4,其菌丝生长速率、分生孢子产量以及对小蓟的致病力较野生菌株LD2和出发菌株LD2-13均有明显的提高,可作为小蓟生物防治的潜力菌株。

几种药剂对烟草赤星病菌的抑制作用

本文为了向田间防治烟草赤星病提供高效、安全的杀菌剂,在室内研究了4种杀菌剂对赤星病病原菌的毒力试验。结果表明:不同浓度的杀菌剂对烟草赤星病菌丝的生长抑制效果不同。40%的菌核净WP EC50值为29.84 mg/L,抑制效果最好;50%的腈菌三唑酮EC和10%多抗霉素B WP次之,其EC50分别为33.01 mg/L和30.02 mg/L;10%的多抗霉素(宝丽安)WP的抑制效果最差,其EC50为139.42mg/L。当浓度达到100 mg/L时,50%的腈菌三唑酮EC、10%多抗霉素BWP和40%的菌核净WP对烟草赤星病病原菌的抑制率分别达到了57.23%、66.52%和67.44%,而10%的多抗霉素(宝丽安)WP的抑制率只有45.39%。在一定范围内,各种药剂随着浓度的增大其抑制率也随之增大。

SCAR标记与人工接种鉴定黄瓜种质黑斑病抗性

利用SCAR引物862对288份黄瓜自交系进行黑斑病抗性检测,结果有32份资源抗病。通过对36份资源与人工接种抗性鉴定结果相比较,二者的符合率达94.44%;对76份田间表现感病的材料进行标记检测,4份材料具有抗病带,符合率达94.74%。在育种应用中,可先通过标记初步进行大量材料的抗性检测,在此基础上根据需要有针对性地做人工接种抗病性鉴定,该方法可以有效提高黄瓜种质资源抗性筛选的效率。抗黑斑病资源的获得,为进行抗黑斑病黄瓜新品种的选育奠定基础。

黑胚小麦主要致病菌链格孢霉蛋白酶部分酶学性质研究

黑胚是小麦在成熟期或收获期籽粒受霉菌感染,在小麦胚部形成的明显灰褐色至黑色大小不一的斑块[1],黑胚小麦主要致病菌有蠕孢霉、链格孢霉等[2]。通过对从黑胚小麦中分离出来的链格孢霉的蛋白酶进行酶学性质的研究,从而了解该菌对小麦蛋白的影响程度。结果表明:该酶在经过110h的固态发酵,其酶活力达到最大值,最适作用温度约为40℃左右,最适pH值为7.5左右,最适反应温度为45℃。固态发酵时,培养基的含水量为80%时蛋白酶活力最高。

极细链格孢蛋白激发子对抗虫杂交棉生理特性和产量影响的研究

研究了极细链格孢蛋白激发子对"湘杂棉3号"主要生理特性和产量的影响,探讨抗虫杂交棉高产措施的生理机制,为高产栽培提供理论依据。分析极细链格孢蛋白激发子对棉花生理特性的影响。结果表明,在湖南气候条件与栽培技术体系下,细极链格孢菌蛋白激发子(PEAT)能显著提高棉花叶片光合速率,果枝叶叶绿素含量,同时提高了叶片可溶性蛋白质、可溶性糖含量,增强棉花生理机能;从生理生化活性来分析,极细链格孢菌蛋白激发子诱导后SOD、POD及MDA含量均有不同程度的变化,SOD、POD活性增强,而MDA活性降低,能起到延缓植株衰老的作用;从产量分析来看,极细链格孢菌蛋白激发子诱导后,显著提高单铃重、棉花产量,浸种+幼苗期喷施+现蕾期喷施+初花期喷施处理产量为1 781.44 kg/hm2,浸种+幼苗期喷施+现蕾期喷施处理产量为1 767.61 kg/hm2,比清水对照分别高出43.7%、42.5%,达到极显著水平。说明极细链格孢蛋白激发子能增强抗虫杂交棉生理机能、延缓棉株衰老、提高产量。

一株具有好氧反硝化能力真菌的筛选及脱氮性能研究

利用综合筛选法从河流底泥中筛选出一株具有好氧反硝化能力的真菌,通过18S rDNA测序及形态观察,该菌被鉴定为链格孢属真菌。结果表明:该菌碳源底物利用范围广泛,能够利用多种有机碳源进行生长和反硝化。该菌对氨氮的去除主要通过该菌对氨氮的同化作用,而对亚硝酸盐和硝酸盐的去除是同化和反硝化共同作用的结果。当氨氮、亚硝酸盐和硝酸盐同时存在时,该菌优先利用氨氮,但对亚硝酸盐和硝酸盐并无明显的选择性。初始氮浓度和碳氮比对培养基pH和氮素的去除率均有一定的影响。当初始氮浓度和碳氮比合适时,该菌对3种氮素均有很高的去除效率,是一种具有应用前景的除氮菌属。

30%戊唑·多菌灵悬浮剂对苹果斑点落叶病室内抑菌效果研究

利用生长速率法测定30%戊唑·多菌灵悬浮剂等不同药剂不同倍数对苹果斑点落叶病菌的室内抑菌效果,结果表明：30%戊唑·多菌灵悬浮剂1 000~8 000倍液对苹果斑点落叶病菌的抑菌率均极显著高于10%多抗霉素可湿性粉剂1 500倍液、70%甲基硫菌灵可湿性粉剂1 000倍液。因此,30%戊唑·多菌灵悬浮剂抑菌效果显著,值得在生产上推广应用。

大蒜提取液防治白菜黑斑病的初步研究

测定了大蒜提取液对白菜黑斑病菌的抑制作用和对白菜苗期黑斑病的防治效果。结果表明，0．4g／mL浓度的大蒜提取液可以完全抑制病菌菌丝的生长和分生孢子的萌发，该浓度的大蒜提取液可以有效预防病菌的侵染，优于多菌灵的作用效果，但是其治疗作用较差。

钼酸铵和焦亚硫酸钠对采后苹果青霉病和黑斑病的控制

研究了GRAS物质钼酸铵和焦亚硫酸钠处理对苹果青霉病和黑斑病的控制,结果表明在离体条件下,钼酸铵和焦亚硫酸钠均能抑制Penicillium expansum和Alternaria alternate菌落的生长,其中7.5 g/L钼酸铵、0.3 g/L焦亚硫酸钠抑制效果最佳,其抑菌率分别达到78.7%、72.7%、81.3%、56.3%。体内试验表明,钼酸铵和焦亚硫酸钠对损伤接种苹果的青霉病和黑斑病也有一定的控制作用,其中7.5 g/L的钼酸铵对苹果青霉病的抑制效果最佳,0.25 g/L的焦亚硫酸钠对苹果黑斑病抑制效果最佳。