Biocatalytic synthesis of (R)-(-)-mandelic acid from racemic mandelonitrile by a newly isolated nitrilase-producer Alcaligenes sp. ECU0401

By using acetonitrile as the sole nitrogen source, a microbial strain with high nitrilase activity, named as Alcaligenes sp. ECU0401, was newly isolated from soil, which could enantioselectively transform racemic mandelonitrile into (R)-(?)-mandelic acid, with an enantiomeric excess of >99.9%.

响应面法优化Alcaligenes sp.产脂肽生物破乳剂培养基的研究

生物破乳剂是应用于石油开采业中的新型破乳剂之一,本研究对筛选得到的一株破乳剂产生菌(鉴定为Alcaligenessp.)产生的脂肽类生物破乳剂进行了发酵培养基的优化,采用SAS软件的响应面回归方法对培养基中主要因素进行了研究,试验结果表明,在碳源石蜡为4.76%、氮源牛肉膏为0.12%、磷源K2HPO4/KH2PO4为0.53/0.8%时,破乳剂的产生量为最大,比优化前提高了近一倍。

Alcaligenes sp.碱性脂肪酶产生条件及酶学性质的研究

对Alcaligenessp .产碱性脂肪酶的工艺条件进行了研究。结果表明 ,适宜产酶培养基为 :3 %黄豆粉 ,1%果糖 ,0 .2 %K3 PO4,1%NaNO3 ,0 .6%柠檬酸钠 ,0 .0 3 %FeSO4,0 .5 %聚乙烯十八烷基醚 ;最佳培养条件为 2 5℃ ,初始pH9.0。脂肪酶活力可高达 12 0IU/mL。该酶在5 5℃以下 ,pH6.0～ 10 .5范围内稳定 ;酶反应适宜温度为 40℃ ,适宜pH9.0。该酶制剂在洗涤和制革工业中有良好的应用前景。

Alcaligenes sp. CGMCC2428产威兰胶的分批发酵动力学模型

利用分批发酵研究Alcaligenes sp. CGMCC2428产微生物多糖威兰胶的合成特性,结果表明威兰胶的合成和菌体生长模型为部分偶联型.菌体和威兰胶质量浓度分别达到3.30和26.50 g/L,威兰胶对细胞干质量得率系数(YP/X)为8.20.根据分批发酵实验结果采用Logistic方程、Luedeking-Piret方程和Luedeking-Piret相似方程,得到了描述Alcaligenes sp. CGMCC2428生长、威兰胶以及葡萄糖底物消耗分批发酵动力学模型.同时改变初始葡萄糖质量浓度,实验数据与模型预测值进行了比较拟合,平均相对误差小于10%,表现出很好的适用性.

生物破乳菌Alcaligenes sp. S-XJ-1氮源利用特性

以六种氨基酸及硝酸铵为氮源培养胞壁结合型生物破乳剂产生菌Alcaligenes sp.S-XJ-1,进而分析菌体对谷氨酸和硝酸铵的利用过程,并建立菌体的生长及氮源利用模型.结果表明:氮源种类和投量是影响菌体产量和性能的重要因素;菌体对氮源的利用顺序依次为有机氮、氨态氮、硝态氮;谷氨酸为氮源时对生物破乳菌产量的促进效果最佳,相比于硝酸铵为氮源时,菌体最大比增长速率和产率系数更高,用于菌体代谢供能的氮源消耗量更低.

产碱杆菌Alcaligenes sp.P156中龙胆酸1,2-双加氧酶GdoP的研究

龙胆酸是芳香族化合物微生物降解的核心代谢产物,龙胆酸降解研究对于芳香族化合物的降解研究具有重要意义。龙胆酸1,2-双加氧酶是催化龙胆酸降解的关键酶。本研究利用双加氧酶催化保守结构域在产碱杆菌P156的基因组上通过多序列比对找到一个龙胆酸双加氧酶基因gdoP;利用分子生物学技术对该基因进行异源表达;并利用重组蛋白对酶学性质和动力学参数进行测定。酶学性质研究表明,GdoP催化反应的最适pH为7.5,最适温度为40℃。GdoP是一个Fe2+依赖型双加氧酶,含有Fe2+离子结合结构域。Fe2+离子能够明显促进GdoP酶活,Cu2+、Cd2+离子对GdoP的酶活有明显抑制。以龙胆酸为底物,GdoP的Km值和Vmax值分别为641μmol/L和23.9U/mg。GdoP具有较强的底物特异性,能够催化龙胆酸开环生成3-马来酰丙酮酸,不能催化5-氨基水杨酸、水杨酸和1-羟基-2-萘酸的转化。本研究系统的研究了龙胆酸1,2-双加氧酶GdoP的酶学性质,有助于更好的研究芳香族化合物的微生物降解过程。

产碱菌Alcaligenes sp. qz-1对铬污染土壤中玉米生长和铬累积的影响研究

通过盆栽试验研究了铬(Cr_2O_7^(2-))污染土壤中接种铬耐受细菌Alcaligenes sp. qz-1对玉米株高、茎粗、叶绿素含量、地上部分和地下部分干重以及铬含量的影响。结果表明,在重金属铬(Cr_2O_7^(2-))胁迫(50 mg·kg^(–1),100 mg·kg^(–1))下,玉米生长显著受到抑制(P<0.05)。与对照相比,株高分别减少9.92%和18.97%,茎粗分别降低了13.36%和14.24%,叶绿素含量分别降低了10.46%和13.25%。接种Alcaligenes sp. qz-1,可以显著缓解重金属胁迫对玉米生长的不利影响(P<0.05)。铬(Cr_2O_7^(2-))胁迫(50 mg·kg^(–1),100 mg·kg^(–1))下,接种Alcaligenes sp. qz-1的植株与未接种的玉米植株相比,株高分别增加了6.36%和10.91%,茎粗分别增加了10.17%和8.01%,叶绿素含量分别提高了9.16%和2.64%。同时,接种Alcaligenes sp. qz-1,可显著提高玉米(尤其是根系部分)对土壤铬的吸收量,吸收总量较未接种的增加13.9%—36.9%。综上所述,接种Alcaligenes sp. qz-1改善了铬(Cr_2O_7^(2-))胁迫下玉米生长特性,增加了玉米根部对铬(Cr_2O_7^(2-))的吸收,降低了铬(Cr_2O_7^(2-))对玉米的毒害,为该菌株进一步应用农田重金属污染进行治理提供一定理论依据和实践指导。

Alcaligenes sp. YBY降解吲哚的特性研究

该研究从近海泥沙样品中,分离纯化得到1株能以吲哚为唯一碳源生长的菌株,经16S rRNA基因序列分析鉴定为产碱杆菌(Alcaligenes),命名为YBY。考察影响菌株生长和降解吲哚的环境因素,并对菌株降解吲哚的机理进行推测。结果表明,菌株YBY生长和降解吲哚的最佳条件为pH 6.77,转速150 r/min。菌株具有较好的底物广谱性,能以柠檬酸钠、2-吲哚酮、苯酚、苯甲酸、邻氨基苯甲酸等物质为唯一碳源生长。利用液相色谱、飞行时间、质谱联用对菌株代谢吲哚的产物进行分析,发现中间产物主要为靛红、靛蓝和龙胆酸,由此推测的代谢途径为:吲哚首先被羟化成吲哚酚,吲哚酚二聚成靛蓝或者氧化成靛红,靛红进一步转化成龙胆酸。

喹啉高效降解菌株Alcaligenes sp. WUST-qu的筛选、鉴定及降解特性

从某焦化厂污水处理系统的活性污泥中筛选到一株喹啉高效降解菌WUST-qu,对其形态、分类地位、降解特征和生长动力学进行表征。结果表明,该菌株为革兰氏阴性菌,有芽孢,长为1.15μm±0.08μm(n=20),宽为0.26μm±0.01μm (n=20);16S rRNA基因核苷酸序列比对结果表明,该菌株属产碱杆菌属微生物(Alcaligenes sp)。菌株WUST-qu能在初始pH为5.0～9.0内有效降解喹啉,最适初始pH为中性到略偏碱性(7.0～8.0)。在该条件下,菌株能在接种后的48 h内将最高初始质量浓度为700 mg·L^(-1)的喹啉完全降解。进一步研究表明,菌株WUST-qu不仅能够有效降解喹啉,还能有效降解苯酚,在MSM初始pH为8.0的条件下,菌株WUST-qu能在32 h内将初始质量浓度为700 mg·L^(-1)的苯酚完全降解。其以喹啉为唯一碳源生长时的动力学参数为μ_(max)=1.657 6 h^(-1),K_s=36.42 mg·L^(-1),K_i=81.418 mg·L^(-1)。

菌株Alcaligenes sp.P156中一个新型烟酸羟化酶的克隆与功能验证

本研究预测naa cluster中的naaB基因负责催化烟酸到6-羟基烟酸的反应。通过对NaaB的蛋白序列进行分析,发现该酶含有三个亚基,分别由naaB_(L1)、naaB_(S)、naaB_(L2)基因编码,其中naaB_(L1)和naaB_(L2)分别编码2个含有钼辅因子结合结构的大亚基,naaB_(S)基因编码一个含有[2Fe-2S]簇的小亚基。本研究对naaB基因进行了克隆,将构建的重组质粒pME6032-naaB_(L1SL2)分别转化到无色杆菌(Achromobacter sp.)和大肠杆菌(Escherichia coli)中,通过HPLC和LC-MS检测验证了NaaB负责催化烟酸到6-羟基烟酸,并且在无色杆菌和大肠杆菌中NaaB均能够转化烟酸,这与之前报道烟酸羟化酶不能在大肠杆菌表达的结果不同,说明NaaB的基因编码和催化功能具有独特性。通过序列分析推测NaaB的这一特性可能跟该酶同时含有两个钼结合结构域的大亚基有关。

反硝化产碱菌Alcaligenes sp.TB氧化亚氮还原酶基因的克隆表达及酶学性质研究

氧化亚氮(N_(2)O)是一种重要的温室气体,对全球温室效应的贡献非常显著,反硝化细菌中存在氧化亚氮还原酶(nitrous oxide reductase,Nos)能将其最终还原成氮气。将生物转鼓反应器中筛选得到的一株高效反硝化产碱菌Alcaligenes denitrificans TB作为供试菌株,构建含有nosZ基因序列的原核重组表达菌株,经IPTG诱导完成在大肠杆菌中的表达,其最佳诱导条件为:诱导剂IPTG终浓度为0.5 mmol·L^(-1),诱导温度为28℃,诱导时间为6 h,菌体初始浓度(OD_(600))为0.67。再利用亲和层析分离纯化得到重组蛋白,通过检测显示重组菌E.coli BL21(DE3)-pET28b-nosZ酶活力是出发菌株Alcaligenes sp.TB的2.09倍,蛋白相对含量是其10.58倍。进而考察了反应体系pH和反应温度对酶催化反应的影响,结果显示,当pH为7.0,温度为40℃时得到最佳酶活。

CBL+PBL联合SP教学法在神经外科研究生培养中的探索

目的探索案例教学法(case-based learning,CBL)及基于问题的教学法(problem-based learning,PBL)联合标准化病人(standardized patient,SP)教学法在神经外科研究生培养中的应用效果。方法 选取2020年8月—2022年8月昆明医科大学第一附属医院神经外科专业3个年级研究生共60名,按入科顺序分为传统教学组、CBL+PBL组及CBL+PBL+SP组,每组20名。进行3个月的入科培训后对学生的综合考核成绩、临床技能、病历质量、SP评价及自我感知能力进行评价。结果 CBL+PBL组、CBL+PBL+SP组课后的基本理论、病例分析成绩均优于传统教学组,差异有统计学意义(P <0.05)。CBL+PBL+SP组的查体、腰穿及影像资料判读均优于其他2组,差异有统计学意义(P<0.05)。CBL+PBL组与CBL+PBL+SP组的病历书写成绩均优于传统教学组,差异有统计学意义(P <0.05)。CBL+PBL组与CBL+PBL+SP组的SP综合评价成绩、学生满意度、技能和知识吸收能力、医患沟通技巧、学习动机、理解力、师生互动、课程所花时间、课后考试、临床思维能力、自学能力、团队合作能力及完成课题能力均优于传统教学组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 CBL+PBL联合SP教学法在提高研究生临床操作技能、医患沟通技巧、知识理解及吸收能力等方面具有一定优势,是一种更有效的研究生培养方法。

牙体牙髓病根管治疗应用iRoot SP冷侧法的效果

目的探讨牙体牙髓病根管治疗应用iRoot SP冷侧法的效果。方法筛选2018-06至2020-06在解放军总医院京南医疗区就诊的牙体牙髓病患者100例,随机分为对照组和试验组,每组50例,均进行根管治疗,其中对照组充填根管采用热牙胶垂直加压法,试验组采用iRoot SP冷侧法。比较两组根管充填效果、临床总有效率、疼痛视觉模拟评分(VAS)及咀嚼功能。结果两组治疗后根管充填效果和临床总有效率比较,差异无统计学意义(P>0.05);试验组治疗后1周[(4.13±0.79)vs.(5.11±0.98)]及1个月[(2.45±0.37)vs.(3.11±0.67)]VAS评分低于对照组,治疗后咬合力[(131.25±11.21)lbs vs.(120.34±14.09)lbs]及咀嚼效率[(90.12±4.13)%vs.(78.98±7.45)%]均优于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论根管治疗牙体牙髓病中应用iRoot SP冷侧法的充填效果和疗效与热牙胶垂直加压法基本相同,但iRoot SP冷侧法在减轻患者疼痛,改善咀嚼功能方面更具优势。

SPS监管差异对中国果蔬类农产品出口贸易的影响——基于农药最大残留限量标准视角

利用2022年中国对157个国家(地区)出口50种果蔬类农产品贸易数据,采用Heckman两阶段模型,基于农药最大残留限量(MRLs)视角,实证分析SPS监管差异对中国果蔬类农产品出口贸易的影响。结果表明:SPS监管差异抑制中国果蔬类农产品出口的二元边际,即贸易成本效应大于竞争优势效应,贸易成本效应抑制扩展边际和集约边际,而竞争优势效应仅促进集约边际;SPS监管差异对中国向发达国家出口以及对蔬菜农产品出口的抑制作用更大;杀菌剂监管差异对集约边际和扩展边际均具有抑制作用,而杀虫剂监管差异仅抑制集约边际。据此,提出对标国际高标准SPS措施、帮助中小型企业克服技术难关、宣传食品安全理念等政策建议。

退火对SP-700合金板材组织、织构和力学性能各向异性的影响

通过光学显微镜(OM)、电子背散衍射(EBSD)及单向拉伸测试等方法,研究了退火温度对SP-700合金板材微观组织、织构和力学性能各向异性的影响。结果表明:随退火温度的升高,SP-700合金板材的晶粒等轴化程度提高;当退火温度为780℃时,退火织构类型基本不变;当退火温度为860℃时,初生α相向次生α相的转变形成了新的织构;经900℃退火后,组织类型转变为网篮组织,织构类型为棱锥织构和R型织构。α相的棱锥织构取向是造成原始板材力学性能各向异性的原因;晶内亚结构在变形初期对滑移系的阻碍作用影响了板材在不同方向上的室温强度;随退火温度的升高,晶内亚结构的消除和新的织构取向的产生导致力学性能各向异性增强。此外,晶粒形貌和相含量的差异也会导致各向异性的变化。原始板材的断裂机制均为韧性断裂,且不同方向的断口特征略有不同。

基于针灸推拿专升本专业教学特点探讨PBL联合SP教学法在针灸临床学的应用

随着我国中医学的迅速发展,对高等医学的教育要求越来越高,各大高校也逐步认识到教学方法改革创新的必要性,我国的医学教育已经逐步将重点放到对学生职业素质和职业能力的培养之上。针灸推拿专升本专业学生学情分析有别于其他全日制本科生,生源的特殊性决定了其教学过程应有别于其他专业学生。针对针灸推拿专升本专业学生开设针灸临床学这门综合性和临床实践性较强的专业课程,用问题式学习(PBL)教学法提出问题,培养学生自主学习能力,并结合相关的学情分析,提高学生的学习主观能动性、培养学生的临床综合应用能力,以期培养真正的实用型人才;同时联合标准化病人(SP)教学法模拟问题,培养学生实际临证思辨能力,进而加强学生理论与临床的衔接能力,增强学生的针灸综合临证思辨能力及医患沟通能力等。

情景模拟案例结合SP教学法在妇科见习教学中的应用

目的:探究情景模拟案例结合SP教学法在妇科见习教学中的应用效果。方法:选取2020年1月—2020年12月期间84名妇科见习生,采用简单随机化分组方式,将见习生分为两组,分别为对照组(42名)以及观察组(42名)。对照组见习生接受情景模拟案例教学方式,观察组见习生接受情景模拟案例结合SP教学法,比较两组见习生以下指标:理论成绩、实践成绩、学习积极主动性、教学满意程度。结果:对比两组见习生理论成绩与实践成绩,观察组明显较高(P<0.05)。对比两组见习生学习积极主动性,观察组明显较高(P<0.05)。对比两组见习生教学满意程度,观察组明显较高(P<0.05)。结论:对妇科见习教学中实行情景模拟案例结合SP教学法,能显著提升见习生实践成绩与理论成绩,能提升见习生学习积极主动性,并能促使见习生对教师教学工作满意度提升,故具有较高应用推广价值。

SP联合PBL教学法对护理教学质量的提升评价

本研究旨在评估明确标准化病人(SP)联合以问题为导向(PBL)教学方法对护理教学质量提升的效果。方法 研究期间从2021年1月开始,直至2023年3月结束,研究主体选择:在我院的70名护理实习护生。根据是否实施SP联合PBL教学法的情况将护生分为对照组和探究组,旨在了解SP联合PBL教学方法对护理教学质量提升的具体影响。结果 分析:探究组护生自我管理能力为(89.73±5.13)分,对照组为(82.34±5.76)分,t值为5.599,P值为0.000;探究组护生信息能力为(94.43±4.82)分,对照组为(88.79±5.04)分,t值为4.784,P值为0.000;探究组护生学习合作能力为(86.27±5.01)分,对照组为(80.12±5.82)分,t值为4.737,P值为0.000,探究组在自我管理能力、信息能力和学习合作能力方面表现出较高水平。与对照组护生相比较,对比差异有统计价值(P<0.05)。探究组护生的理论成绩为(95.12±4.62)分,对照组为(89.73±5.76)分,t值为4.318,P值为0.000;探究组护生实践成绩为(93.24±5.73)分,对照组为(88.12±6.42)分,t值为3.520,P值为0.000实习考核理论与实践成绩探究组护生高于对照组,对比差异有意义(P<0.05);探究组教学满意度为94.29%,对照组为77.14%,卡方值为4.200,P值为0.040,探究组护生教学满意度明显高于对照组,差异有对比意义(P<0.05)。结论 在临床护理教学过程中选用SP与PBL联合教学法,可以良好提升护理教学质量,表现在提高护生自主学习能力、实习考核成绩和教学满意度三方面,可见其在临床中的应用价值,可以在临床护理带教中广泛推荐应用。

海洋真菌Phaeosphaeriopsis sp. ZYX-Z-811次生代谢产物研究

对海洋真菌Phaeosphaeriopsis sp. ZYX-Z-811发酵液中次生代谢产物进行分离鉴定,并评价其生物活性。采用正相硅胶柱色谱、反向C18柱色谱、高效液相色谱、SephadexLH-20凝胶柱色谱等技术进行分离纯化,共分离得到10个化合物,利用核磁及红外和紫外波谱技术对分离的单体化合物进行结构鉴定,分别为4-epi-lignicol(1)、lignicol(2)、6-demethylkigelin(3)、6,8-dihydroxy-3,4,7-trimethylisocoumarin(4)、6,7-dimethoxymellein(5)、musaone A(6)、2-(4-hydroxyphenyl)ethylacetate(7)、3-吲哚甲醛(8)、吲哚-3-乙酸甲酯(9)、对羟基苯甲酸甲酯(10),其中化合物1为未发表的化合物,文章通过电子圆二色谱(electrostatic circular dichroism, ECD)计算确定了其绝对构型。对这些化合物分别进行抗氧化和α-糖苷酶抑制活性评价,发现化合物10有弱的抗氧化活性。

西沙马尾藻共附生真菌Aspergillus sp.SYPUF41304次级代谢产物的分离与鉴定

目的对西沙马尾藻共附生真菌Aspergillus sp.SYPUF41304的次级代谢产物进行分离与鉴定。方法利用硅胶柱色谱、凝胶柱色谱、中压反相柱色谱及半制备高效液相色谱等分离手段对马尾藻共附生真菌Aspergillus sp.SYPUF41304的液体发酵提取物进行分离纯化,并利用核磁共振、质谱等波谱学方法,结合文献对照,确定化合物结构。结果最终从提取物中分离得到10个化合物,经鉴定为吲哚-3-甲醛(1H-indole-3-carboxaldehyde)(1)、吲哚-3-乙酸甲酯(methyl indole-3-acetate)(2)、环(L-脯氨酸-L-缬氨酸)(cyclo-L-prolyl-L-valine)(3)、brevianamide F(4)、asperterreusine A(5)、talaisocoumarin A(6)、3-甲基-6-羟基-8甲氧基-3,4-二氢异香豆素(3-methyl-6-hydroxy-8-methoxy-3,4-dihydroisocoumarin)(7)、3-甲氧基-6,8-二羟基-3-甲基-3,4-二氢异香豆素(3-methoxy-6,8-dihydroxy-3-methyl-3,4-dihydroisocoumarin)(8)、4-hydroxykigelin(9)和de-O-methyldiaporthin(10)。结论化合物按结构类型可分为生物碱和聚酮类等,化合物4~8均为首次从该属真菌中分离得到。所有化合物在4 mg·mL^(-1)浓度下,均未显示出抗细菌活性。