Alexa Fluor 488 NHS Ester染料提高流式细胞周期检测结果的可行性

目的:探讨Alexa Fluor 488 NHS Ester染料用于提高流式细胞周期检测结果的可行性。方法:以293细胞作为研究对象,采用两种方案进行细胞周期检测,每种方案设4组;方案一,按照细胞周期检测试剂盒的说明书对4组细胞进行染色;方案二,先对4组细胞用0.0、0.4、2.0及10.0 mg/L的Alexa Fluor 488 NH S Ester染料染色15 min,然后将4组细胞混合在一支试管中再用碘化丙啶(PI)进行染色;将两种染色方案获得的细胞上流式细胞仪检测,分析比较两种方案的4组细胞检测结果。结果:方案一染色的4组细胞,流式细胞仪检测结果不尽一致,个别组间由于细胞密度不同导致染色结果存在差异;方案二经不同浓度Alexa Fluor 488 NHS Ester染色的4组细胞虽然混合于一支试管,检测结果经Flowjo X软件分析时能明显分出4群细胞,对4群细胞分别进行细胞周期分析比较,结果一致。结论:采用不同浓度Alexa Fluor 488 NHS Ester染料预染细胞后混合在一起进行PI染色能够提高细胞周期检测结果的可信度,在神经退行性疾病研究中可节约病人的取样次数及数量。

应用Alexa Fluor488与BHQ1双标记寡核苷酸荧光探针测量辐射吸收剂量的可行性研究

目的 研究荧光探针Alexa Fluor 488-DNA-BHQ1用于辐射吸收剂量测量的可行性。方法 在寡核苷酸的5＇与3＇端分别标记荧光分子Alexa Fluor 488与其特异性荧光抑制剂BHQ1,制备Alexa Fluor 488-DNA-BHQ1的DNA双标记荧光探针。用X射线照射其水溶液,检测照射后溶液的荧光强度。结果 浓度为0.5~1μmol/L时,该荧光探针对剂量0.1~30 Gy之间线性响应最好（R2=0.99）。在辐照后40~80 min检测探针,荧光强度基本不变。4℃条件下保存受照后的荧光探针的荧光稳定性较好。结论 荧光探针Alexa Fluor 488-DNA-BHQ1可以应用于0.1~30 Gy范围内辐射吸收剂量的测量。

大鼠“承山”穴的神经解剖学特征——霍乱毒素亚单位B结合荧光素488法

目的：应用霍乱毒素亚单位B结合荧光素488（CTB—Alexa 488）新一代荧光示踪技术研究大鼠“承山”穴神经解剖学特征。方法：用微量注射器将5μL0．05％CTB—Alexa 488分别注入4只雄性SD大鼠“承山”穴。在40～48h后将动物灌流固定，取出脑、脊髓和双侧腰部脊神经节，并制成组织切片，后直接用荧光显微镜系统观察和记录被CTB-Alexa 488显示的神经标记。结果：被CTB-Alexa 488标记的神经元在荧光光栅450～490的条件下呈绿色，均位于示踪剂注入侧的相关神经组织中。其中标记的一级感觉神经元分布在L4-L5的脊神经节，而被标记的一级运动神经元呈柱状分布在L4-L5节段脊髓前角第Ⅸ层的中外侧部。结论：应用CTB-Alexa 488荧光示踪技术成功揭示了与“承山”穴相关的初级感觉和运动神经元在脊神经节和脊髓的分布规律。

P物质在大鼠“三阴交”穴区相关感觉神经元和神经纤维中的表达

目的:运用神经示踪技术结合荧光免疫组织化学技术揭示"三阴交"穴区神经支配的显微结构,探讨腧穴的神经解剖学和化学特征。方法:以5只雄性SD大鼠为实验对象,在其后足内踝尖上相当于三阴交穴区的部位注入荧光素488结合霍乱毒素亚单位B(AF 488-CTB),3d后将大鼠灌流固定,分别取出穴区局部组织及其神经支配相对应节段的脊神经节和脊髓进行组织学观察和分析,并进一步采用免疫荧光组织化学技术显示P物质在相关神经组织和穴区局部组织中的表达。结果:AF 488-CTB仅在穴区局部皮下和肌肉组织中极小的范围内扩散。AF 488-CTB标记的感觉和运动神经元分别存在于示踪剂注入侧腰(L)3至L 6节段的脊神经节和脊髓前角,主要集中在L 4和L 5节段。P物质免疫阳性标记主要集中在脊神经节中的小型感觉神经元和脊髓背角浅层的神经纤维终末以及穴区局部皮下的游离神经纤维。对比发现,有一部分(24.1%)AF 488-CTB标记的感觉神经元同时呈P物质免疫阳性表达。结论:本研究从显微结构角度揭示了与"三阴交"穴区相关的感觉和运动神经元在神经系统中呈节段或区域性分布,其中部分感觉神经元为P物质免疫反应阳性,这进一步从感觉神经通路方面提供了针刺可能影响P物质的形态学依据。