EXPRESSION OF PLACENTAL ALKALINE PHOSPHATASE IN ESOPHAGEAL CANCER CELL LINE Eca109

The expression and properties of alkaline phosphatase (ALP) in Eca109 cells, a cell line derived fromhuman esophageal cancer were studied with specific inhibition assay and polyacrylamide gel electrophoresis.The results showed that ALP of Eca109 cells was heat stable and was strongly inhibited by L-pheuylalanine, but slightly inhibited by urea. Preduisolone could causedramatic increase in activity of ALP, but no change in ALP isozyme and concomitant increase in lactic dehydrogenase activity were found after prednisolone treatment. The results suggested that placental alkaline phosphatase as an oncodevelopmental gene product could be expressed ectopically by Eca109 cells and prednisolone could specifically induce increase in its activity.

毛叶苕子磷获取特征及根际特性的基因型差异

毛叶苕子是我国重要的肥饲兼用绿肥作物,研究毛叶苕子磷获取特征及根际特性的基因型差异,为毛叶苕子磷高效利用提供理论支撑。在青海西宁开展盆栽试验,设置毛叶苕子品种和磷肥种类双因素,毛叶苕子品种为大田试验筛选的磷高效及磷低效品种(系)各2个,磷肥种类为过磷酸钙和磷矿粉,设置不施磷肥对照,共12个处理。盛花期测定分析毛叶苕子磷素积累量、土壤磷组分、土壤有机酸、根系酸性磷酸酶(RACP)、土壤酸性及碱性磷酸酶活性(ACP、ALP)、土壤酸性及碱性磷酸酶(phoC、phoD)基因丰度。结果显示,不同磷效率毛叶苕子品种(系)总磷吸收量和磷肥利用率分别为7.45~46.07 mg·盆^(-1)和7.12%~22.49%;磷高效品种(系)总磷吸收量和磷肥利用率均显著高于磷低效品种(系),增幅分别为0.91%~61.20%和12.52%~60.25%。相比磷低效品种(系),磷高效品种(系)提高了活性磷(labile P)和中等活性磷(moderately labile P)的比例,降低了稳定性磷(stable P)的比例,后者的活性磷和中等活性磷的比例分别是前者的6.14~26.14倍和1.04~1.54倍,前者的稳定性磷库比例是后者的2.92~7.91倍。磷高效品种(系)土壤总有机酸(TOA)、草酸(OXA)含量、RACP、ACP、ALP活性均显著高于磷低效品种(系),分别提高117.45%~254.60%、19.40%~50.75%、16.37%~146.40%、6.19%~104.19%和6.16%~35.06%。磷高效品种(系)phoC和phoD丰度分别是磷低效品种(系)的1.07~2.58倍和1.46~3.64倍。线性回归分析表明,土壤TOA、OXA、RACP、ACP与活性磷均呈显著或极显著正相关,决定系数分别为0.40、0.46、0.13、0.19;与stable P均呈显著或极显著负相关,决定系数分别为0.75、0.58、0.41和0.49。综上,磷高效毛叶苕子品种(系)活化难溶性磷的能力较强,具有更高的磷素积累量和磷肥利用率。其主要通过增加有机酸(主要是草酸)含量、磷酸酶活性、phoC和phoD基因丰度活化难溶性磷,提高土壤中活性磷和中等活性磷的比例,促进对磷的吸收利用。

骨碎补UPLC指纹图谱与人骨肉瘤细胞MG63中碱性磷酸酶活性的谱效关系研究

建立骨碎补生品和砂烫品提取物的UPLC指纹图谱,并研究骨碎补提取物与人骨肉瘤细胞MG63中碱性磷酸酶(ALP)活性之间的谱效关系。采用UPLC法建立骨碎补生品和烫品的指纹图谱并通过UPLC-Q-TOF MS法对其化学成分进行鉴别;通过测定MG63细胞中ALP活性检测骨碎补提取物对MG63细胞成骨分化的影响;采用灰色关联度分析、双变量相关性分析以及偏最小二乘回归分析法分析骨碎补生品和烫品的UPLC特征指纹峰与其促ALP活性之间的谱效关系。在标定的12个共有峰中,确定了4、5、12号峰与ALP活性呈正相关,其对应的物质依次是咖啡酸-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、儿茶素7-葡糖苷、柚皮苷,为深入研究骨碎补的促成骨分化活性物质基础提供依据。

长穗偃麦草酸性磷酸酶与碱性磷酸酶编码基因的染色体定位

以一套中国春-长穗偃麦草二体异附加系与二体异代换系为材料,用等电聚焦(IEF)研究长穗偃麦草基因组中酸性磷酸酶(AcPh)与碱性磷酸酶(APH)编码基因的染色体定位。结果表明,AcPh大多聚焦于pH5～7范围内,其编码基因位于3E染色体,而APH编码基因则位于4E染色体。由于5E染色体的附加,AcPh活性带强度显著减弱。

葛根素对UMR106细胞增殖及碱性磷酸酶活性的影响

目的:研究葛根素对UMR106细胞增殖及碱性磷酸酶活性的影响。方法:UMR106细胞培养于-αMEM培养基中,葛根素处理后光学显微镜下观察其形态学变化,绘制细胞生长曲线,并采用对硝基苯磷酸钠基质动力学法测定UMR106细胞内、外碱性磷酸酶活性。结果:UMR106细胞经葛根素和10-8mol.L-1雌二醇处理后d1,d2和d3,与空白对照组相比,增殖速度均加快,d2差异最显著。与对照组相比,10-8,10-7,10-6mol.L-1葛根素组的增殖率分别为9.3%,23.3%和40.9%,10-8mol.L-1雌二醇组增殖率为49.7%。与对照组相比,细胞经10-6mol.L-1葛根素处理后1 d和2 d时,细胞内ALP活性显著增加(P<0.01);细胞经10-6mol.L-1葛根素处理1 d后,细胞外ALP活性显著增加(P<0.05)。结论:葛根素可以促进成骨样细胞UMR106细胞合成和分泌ALP,提示其具有促进成骨细胞增殖和分化的作用。

葛根素对成骨细胞增殖能力及靶向Runx2的miRNA的影响

目的研究葛根素作用成骨细胞MC3T3-E1后对细胞的增殖能力和靶向Runx2基因的miRNA的影响。方法 1MTT法检测葛根素作用于MC3T3-E1细胞后对成骨细胞增殖能力的影响。2碱性磷酸酶活性检测葛根素对于成骨细胞活力影响。3葛根素作用于成骨细胞后,采用荧光实时定量PCR(Q-PCR)和蛋白印迹法(Western blot)法检测Runx2的mRNA表达水平和蛋白表达水平。4采用Target Scan、Pic Tar等靶点预测软件预测靶向Runx2的miRNA,并与表达谱测定的葛根素作用MC3T3-E1前后miRNA变化作比较。5采用Q-PCR法验证葛根素作用MC3T3-E1前后靶向Runx2基因的miRNA表达量。6构建Runx2 3'UTR/突变型Runx2 3'UTR重组质粒、合成miRNA-204mimics、miRNA-204inhibitor、miRNA-204NC共转染MC3T3-E1细胞,用双荧光素酶报告基因系统验证Runx2与miRNA-204的靶向关系。结果葛根素作用后,与空白对照组比较,细胞增殖活性提高,Runx2的mRNA和蛋白表达水平上升,miRNA-204和miRNA-344f-5p表达水平下降,miRNA-2861表达水平上升,miRNA-23a-5p、miRNA-770-5p、miRNA-871-5p表达水平无明显改变。细胞转染48h后,只有Runx2 3'UTR+miRNA-204 mimics组荧光素蛋白的表达水平明显降低,说明只有miRNA-204可抑制Runx2 3'UTR报告基因的表达。结论葛根素可促进成骨细胞增殖,并通过下调靶向Runx2的miRNA的表达来提高Runx2表达水平。

低磷营养胁迫条件下小麦RNA酶与酸性磷酸酶活性的变化

低磷营养胁迫条件下，长穗偃麦草一中国春二体异附加系的RNA酶（RNase）活性显著提高，RNase的IEF研究结果表明，对照条件下只有极微弱的活性带，而磷饥饿状态下则诱导出明显的特异活性带，但诱导出的活性带无基因型间的差异。长稳偃麦草－中国春和灯芯偃麦草－中国春两套二体异附加系根系分泌的酸性磷酸酶（AcPh）活性不同程度的显著提高。IEF结果表明，低磷胁迫诱导出低pH范围内（PH3－5）的特异活性带，且活性带无基因型间的差异。

不同磷效率玉米自交系根系形态与根际特征的差异

通过三室根袋栽培试验,对3种磷高效型和3种磷低效型的玉米自交系在2种不同磷水平下的植株生物量、吸磷量、根系形态、根际pH值以及根际磷酸酶进行研究,比较不同磷利用率基因型玉米自交系的根系形态及根际特征的差异。结果表明,在低磷情况下,磷利用率高的玉米自交系其植株生物量中的根干重、植株的吸磷量、根系形态中的根尖数与根长以及根际磷酸酶的活性方面均高于磷利用率低的玉米自交系。植株的根部干重:磷高效的1号品种(hp1)显著高于磷低效的2号品种(lp2),hp2显著高于lpl、lp2、lp3;hp1、hp2的地上部与根系的吸磷量均显著高于lp2、lp3。hp1、hp2根尖数、根长显著高于磷低效型的lp2、lp3。hp1、hp2、hp3根际土壤的酸性磷酸酶活性显著高于lp2、lp3。其他指标如植株地上部分干重、pH值,磷高效型玉米自交系也存在一定优势。所有品种中hp2与lp3的差异最为显著。

三角帆蚌内脏团不同插核部位对机体生理代谢的影响

研究旨在探明内脏团不同插核部位对三角帆蚌机体生理代谢的影响。试验选取2龄三角帆蚌180只,随机分成5个实验组和1个对照组,实验组按内脏团5个部位(Ⅰ.斧足内脏团前端;Ⅱ.斧足内脏团中部;Ⅲ.近生殖腺部;Ⅳ.近胃部;Ⅴ.近肾部)进行插核,并分别在插核后第5、10、20、50天(thd)采集蚌体淋巴血样,检测机体的尿酸及肝、肾生理指标的变化,以及插核对珍珠质沉积相关的钙含量和碱性磷酸酶活力的影响。结果表明:(1)与对照组相比,插核手术处理的蚌体与对照组机体生理指标有显著差异(P<0.05)。(2)5个插核组试验蚌术后5—20thd尿酸含量显著高于50thd时(P<0.05),且Ⅴ组尿酸含量在10—50thd显著高于其余各组。(3)各插核组尿素氮、肌酐含量5thd时均显著高于50thd(P<0.05),其中Ⅰ、Ⅲ组20—50thd无显著变化,Ⅴ组的尿素氮含量除5thd外,其余各个时期均显著高于其他各组(P<0.05)。(4)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组谷丙和谷草转氨酶活性在20thd前均显著低于50thd时(P<0.05),Ⅳ组谷丙和谷草转氨酶活力除了10thd外,均显著高于其余插核组,Ⅴ组的谷丙和谷草转氨酶活力,在20thd之后均仅次于Ⅳ组,并显著高于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组。(5)Ⅰ组插核后10thd血液钙含量显著低于5thd时,10—50thd间无显著变化;Ⅱ、Ⅲ组血液钙含量变化呈先增大后降低的趋势,在20thd达到峰值;Ⅳ组血液钙含量随着试验期的延长显著降低,Ⅴ组血液钙含量10、50thd时显著高于其余4组。Ⅱ、Ⅲ组碱性磷酸酶活力无显著变化,Ⅰ、Ⅳ组显著降低(P<0.05),而Ⅴ组在5—20thd显著升高,20—50thd显著降低,20thd时出现峰值。研究结果显示,三角帆蚌内脏团插核后20d内机体各生理指标显著变化,之后趋于稳定,表明其术后20d可能是机体损伤的修复和功能恢复以及钙性磷酸酶含量逐步稳定的关键时期。

鸡肝碱性磷酸酶提取及在线固定化研究

分别用有机溶剂沉淀法和盐析法从大骨鸡肝中提取出碱性磷酸酶,并考察了提取酶液的酶促反应动力学性质.在此基础上,利用顺序注射系统将提取酶在线固定于XC—72导电炭黑表面,制备了固定化碱性磷酸酶.结果表明,大骨鸡肝碱性磷酸酶催化磷酸苯二钠分解的最佳pH=10.8,最适温度为50℃,米氏常数为1.62 mmol/L.相比游离酶,所得固定化酶的比活力显著提高.

异硫氰酸苯乙酯通过上调PTEN表达诱导肺癌细胞凋亡

目的研究异硫氰酸苯乙酯(phenethyl isothiocyanate,PEITC)抑制肺癌细胞NCI-H446生长的机制。方法体外培养肺癌NCI-H446细胞,并分为对照组和PEITC处理组。对照组细胞给予0.1%二甲基亚砜处理,PEITC组分别用10μmol/L、30μmol/L和50μmol/L PEITC作用24 h,噻唑蓝法和流式细胞术分别检测细胞的增殖与凋亡;Western blot检测Akt磷酸化、细胞内活性caspase-3和caspase-9的表达以及胞浆中细胞色素C的含量;Real time PCR检测磷酸酯酶与张力蛋白同源物(phosphatase and tensin homologue,PTEN)mRNA水平。结果PEITC可显著抑制肺癌NCI-H446细胞增殖(P<0.05),并诱导其凋亡。PEITC处理后,肺癌细胞内活性caspase-3和caspase-9含量显著高于对照组(P<0.05);同时,PEITC处理后,肺癌细胞质中细胞色素C含量明显增高(P<0.05)。PEITC也能抑制NCI-H446细胞中Akt的磷酸化水平。此外,PEITC处理后,可明显诱导肺癌细胞内PTEN表达的增加(P<0.05),其中50μmol/L PEITC处理后,PTEN mRNA含量增高了4.6倍。结论PEITC能抑制NCI-H446肺癌细胞生长,其机制可能通过上调PETN表达,从而抑制PI3K/Akt的活性有关。

四个达摩凤蝶新孵幼虫细胞系的建立及其生物学特性

[目的]建立达摩凤蝶Papilio demoleus Linnaeus新孵幼虫细胞系,并对其生物学特性进行研究。[方法]使用改良配方的Grace培养基并辅以20%胎牛血清,通过原代和传代培养建立达摩凤蝶新孵幼虫细胞系。通过显微观察、细胞活力分析、核型分析和分子鉴定,获得4个新建细胞系的生物学特性数据。使用Bac-To-Bac杆状病毒表达系统构建重组分泌型碱性磷酸酶杆状病毒（Ac MNPV-SEAP）。使用有限稀释法测定达摩凤蝶细胞系对Ac MNPVSEAP的半数组织培养感染剂量（TCID50）,比较达摩凤蝶细胞系对Ac MNPV-SEAP的敏感性。[结果]建立了4个贴壁生长的达摩凤蝶新孵幼虫细胞系（RIRI-Pa De-1,RIRI-Pa De-2,RIRI-Pa De-3及RIRI-Pa De-4）,且均传至60代以上。形态学方面,细胞系RIRI-Pa De-1和RIRI-Pa De-4较为相近,均由圆形、梭形以及多边形细胞组成,细胞系RIRIPa De-2主要为圆形细胞,而RIRI-Pa De-3主要为类似表皮细胞和纤维状细胞。细胞增殖动力学方面,4个细胞系的群体倍增时间分别为69.77,67.42,81.48及65.43 h。核型分析显示4个细胞系染色体数量均呈正态分布,其中RIRI-Pa De-2,RIRI-Pa De-3以及RIRI-Pa De-4的染色体数目分布区间比较接近,在45～97条之间,RIRI-Pa De-1的染色体条数相比偏少,在36～90条之间。通过比对4个达摩凤蝶细胞系和虫卵的细胞色素c氧化酶亚基I（COI）基因序列,证明4个新建细胞系来源于达摩凤蝶组织。比较4个细胞系对Ac MNPV-SEAP敏感性发现RIRI-Pa De-3对此病毒较为敏感,可作为重组杆状病毒表达的宿主。[结论]虽然4个新建达摩凤蝶细胞系的来源相同,具有相同的遗传背景,但其生物学特征仍有明显差异,具有进一步研究的价值。

酪氨酸磷酸酶抑制剂正矾酸钠对Raji淋巴瘤细胞增殖与凋亡的影响及机制探讨

为了探讨蛋白酪氨酸磷酸酶(PTPase)通路在淋巴瘤细胞增殖与凋亡中的作用及机制,应用细胞培养结合MTT检测,光镜及电镜形态学观察,DNA凝胶电泳,流式细胞术和RT-PCR研究了特异的酪氨酸磷酸酶抑制剂正矾酸钠(Na_3VO_4)对Burkitt淋巴瘤细胞系Raji的影响。结果:MTT检测及CFU-Raji培养显示Na_3VO_4对Raji细胞呈浓度依赖性抑制作用;倒置显微镜下原位观察发现随Na_3VO_4浓度增加,细胞体积明显缩小,核固缩、核染色质核膜下聚集,呈典型凋亡小体状;细胞胞体出芽,核染色质凝聚、核碎裂,电镜观察出现典型凋亡细胞;膜联蛋白染色显示Na_3VO_4诱导Raji细胞凋亡,线粒体跨膜电位下降,且在一定范围内呈浓度依赖性;DNA凝胶电泳出现DNA梯形条带;流式细胞术及RT-PCR示Na_3VO_4下调Bcl-2蛋白及mRNA的表达;细胞周期分析显示经Na_3VO_4处理的细胞出现G_2-M期阻滞、细胞周期蛋白B1(cyclin B1)及mRNA的表达下调。结论:PTPase通路信号传导参与了Raji细胞增殖与凋亡过程的调节,加入其特异抑制剂Na_3VO_4可通过下调细胞周期蛋白B1的表达引起G_2-M期阻滞抑制增殖、下调Bcl-2的表达及降低线粒体跨膜电位诱导Raji细胞凋亡。

籼型两用核不育系水稻培矮64S的育性表达──幼穗发育过程中的NAD^+-MDH和AP同工酶的变化

以籼型两用不育系水稻培矮645和常规稻粳籼89为材料，采用PAGE分析同工酶的方法，比较水稻幼穗发育过程中花粉母细胞形成期、减数分裂期和花粉完熟期NAD＋-MDH和AP同工酶的变化，以期了解不育系的育性转换与表达机理。结果表明，在1993年2月25日、3月10日和3月30日三期播种的水稻培矮645均表现不育，花粉不育度在99.7％以上，结实率在0.3％以下，1994年8月1日播种的培矮645表现可育，结实率在19％以上，而同期播种的常规稻粳籼89均能得到正常结实，结实率在68％以上。同时发现1993年培矮645的不育性在花粉完熟期与颖花及花药的NAD＋-MDH活性的显著降低关系较大。在花粉母细胞形成期一减数分裂期与颖花AP的活性及同工酶组成的变化关系较密切。1994年表现可育的培矮645与粳籼89相比不存在这种差异。由此可认为培矮645育性表达可能与花粉发育前期的脂肪代谢以及花粉发育后期的呼吸代谢有关。

金属烤瓷冠对龈沟液中IL-1β、AST及ALP水平的影响

目的:了解不同金属烤瓷冠对局部牙周组织造成的影响,以及龈沟液中白细胞介素(IL)-1β、天冬氨酸转氨酶(AST)和碱性磷酸酶(ALP)水平与牙周组织健康状况的关系。方法:选择28例接受金属烤瓷冠修复患者的上颌切牙(共34颗)为实验对象,其中镍铬合金烤瓷冠19颗,金铂合金烤瓷冠15颗。以患牙的对侧同名健康牙为对照组,在烤瓷冠戴入6～8个月后复诊,并对龈沟液中IL-1β、AST、ALP水平进行分析。结果:镍铬合金烤瓷组IL-1β及ALP水平均高于对照组,差异有统计学意义;金铂合金烤瓷组IL-1β、ALP与对照组差异无统计学意义;两种金属烤瓷冠AST水平均普遍高于对照组,差异有统计学意义。结论:镍铬合金烤瓷冠对牙周组织的不利影响较明显,而金铂合金烤瓷冠修复前后各项指标变化不明显。龈沟液中IL-1β、AST及ALP的浓度水平可以较敏感地反应金属烤瓷冠对牙周组织的影响。

乙型肝炎病毒DNA转染细胞的一种内参标准:真核细胞报告基因SEAP

目的建立用真核细胞报告基因ＳＥＡＰ转染人肝癌细胞系（Ｈｕｈ７、ＨｅｐＧ２）及鸡肝癌细胞系（ＬＭＨ）的表达系统，供研究ＨＢＶ基因功能应用。方法分别将带有分泌性碱性磷酸酶（ＳＥＡＰ）报告基因的ｐＢＣ１２／ＰＬ／ＳＥＡＰ及ｐＢＣ１２／ＣＭＶ／ＳＥＡＰ质粒ＤＮＡ转染Ｈｕｈ７、ＨｅｐＧ２及ＬＭＨ细胞，并用ｐＢＣ１２／ＣＭＶ／ＳＥＡＰ质粒ＤＮＡ与Ｓ基因区变异体的克隆ＨＢＶＤＮＡ共转染ＨｅｐＧ２细胞。培养后收取细胞培养液，用ＥＬＩＳＡ法测定ＳＥＡＰ活性及ＨＢｓＡｇ。结果在三种细胞中ｐＢＣ１２／ＣＭＶ／ＳＥＡＰ均可表达，以７２小时表达的酶活性测定最为适宜；而ｐＢＣ１２／ＰＬ／ＳＥＡＰ表达仅处于低水平。以ＳＥＡＰ表达量作为内参对ＨＢｓＡｇ的表达量进行比较，发现Ｓ基因１２９Ｌ变异体表达ＨＢｓＡｇ量显著高于野毒株。结论ＳＥＡＰ作为内参具有快速简便，不需同位素及特殊仪器的优点，有较高的实用价值。

人正常早孕滋养细胞体外培养株的系统鉴定

目的建立人早孕滋养细胞株(HPT-8)的系统鉴定方法。方法通过光镜、扫描电镜、透射电镜、免疫组化和免疫荧光激光共聚焦的方法对体外培养出的HPT-8进行系统鉴定评价。结果电镜下可见细胞表面微绒毛丰富;胞质丰富;内质网扩张明显,细胞间紧密的桥粒样结构连接;检测细胞胞浆中角蛋白18和波形蛋白均为阳性,细胞胞浆中角蛋白7为阳性,细胞膜上移动相关蛋白为阳性。表皮生长因子受体、滋养细胞趋化因子和胎盘碱性磷酸酶结果均阳性,而人绒毛促性腺激素和胎盘催乳素结果均为阴性。结论通过多种方法对HPT-8进行形态、超微结构、蛋白骨架和功能指标的综合评价,可以较全面的确定体外传至72代的细胞株HPT-8为具有部分内分泌功能的滋养细胞株,为进一步开展实验研究建立细胞模型。

林蛙油治疗绝经后骨质疏松症的临床研究

目的:观察林蛙油治疗绝经后骨质疏松症的临床疗效,并探讨其作用机制。方法:将60例绝经后骨质疏松症患者随机分为治疗组和对照组,每组30例,治疗组采用口服林蛙油治疗,对照组采用口服仙灵骨葆胶囊治疗。治疗6个月后,观察2组患者治疗前后临床症状体征评分改变及骨密度、骨代谢指标变化情况。结果:①症状体征评分。治疗前2组患者症状体征评分比较,差异无统计学意义(t=1.781,P=0.113);治疗6个月后,2组患者症状体征评分均较治疗前降低[(17.67±3.67)分,(6.44±2.46)分,t=13.808,P=0.000;(20.22±2.17)分,(11.89±1.90)分,t=15.811,P=0.007],治疗组降低更明显[(11.23±2.44)分,(8.33±1.58)分,t=2.760,P=0.025]。②骨密度。治疗前和治疗6个月后,2组患者骨密度比较,组间差异均无统计学意义(t=0.824,P=0.425;t=0.767,P=0.457);治疗6个月后,2组患者骨密度与治疗前比较,差异均无统计学意义[(-2.37±0.84)g·cm-2,(-2.65±0.91)g·cm-2,t=0.811,P=0.432;(-2.19±0.83)g·cm-2,(-2.41±0.56)g·cm-2,t=0.727,P=0.479]。③骨代谢指标。治疗前2组患者骨碱性磷酸酶、雌二醇、白细胞介素-6、骨钙素血清含量比较,组间差异均无统计学意义(t=1.622,P=0.127;t=1.114,P=0.284;t=1.554,P=0.143;t=1.185,P=0.160)。治疗6个月后,2组患者血清骨碱性磷酸酶含量[(17.13±2.13)单位·L-1,(7.80±1.82)单位·L-1,t=12.594,P=0.000;(16.40±1.80)单位·L-1,(10.73±2.12)单位·L-1,t=8.324,P=0.000]、血清白细胞介素-6含量[(125.20±13.86)μg·L-1,(88.13±10.20)μg·L-1,t=5.795,P=0.000;(131.93±11.07)μg·L-1,(107.40±7.74)μg·L-1,t=9.648,P=0.000]、血清骨钙素含量[(6.19±0.96)ng·L-1,(3.54±1.12)ng·L-1,t=6.504,P=0.000;(5.80±0.56)ng·L-1,(5.15±0.51)ng·L-1,t=6.733,P=0.000]均较治疗前降低,治疗组降低更明显[(9.33±2.87)单位·L-1,(5.67±2.64)单位·L-1,t=7.416,P=0.000;(37.17±19.08)μg·L-1,(24.53±9.85)μg·L-1,t=2.253,P=0.041;(2.65±1.53)ng·L-1,(0.64±0.37)ng·L-1,t=4.820,P=0.000];2组患者血清雌二醇含量均较治疗前升高[(21.73±5.55)pg·mL-1,(43.40±5.65)pg·mL-1,t=8.208,P=0.000;(24.27±7.72)pg·mL-1,(34.13±5.75)pg·mL-1,t=5.006,P=0.000],治疗组升高更明显[(21.67±10.22)pg·mL-1,(9.87±7.63)pg·mL-1,t=4.209,P=0.001]。结论:林蛙油在短期内未能提高绝经后骨质疏松症患者的骨密度,但可以明显提高其血清雌二醇水平,降低其血清骨碱性磷酸酶、白细胞介素-6和骨钙素水平,这可能是林蛙油可以明显改善PMOP患者的临床症状与体征的作用机制之一。

慢病毒介导的PRL-3shRNA对结肠癌细胞增殖、侵袭、凋亡的影响

目的观察慢病毒介导的sh RNA沉默肝再生磷酸酶-3(PRL-3)基因对结肠癌SW480细胞增殖、侵袭、凋亡的影响。方法实验分组为空白对照组、阴性对照组、转染组。将携带PRL-3 sh RNA的慢病毒载体转染结肠癌SW480细胞,建立稳定沉默PRL-3的细胞株,real-time PCR检测转染后PRL-3 m RNA的相对表达水平。采用MTT法、平板克隆形成实验检测转染后细胞增殖能力;采用Transwell侵袭实验、侵袭小室法检测转染后细胞迁移及侵袭能力;采用流式细胞术检测转染后细胞凋亡率变化。结果稳定沉默PRL-3的细胞株构建成功,转染组PRL-3m RNA的相对表达水平低于空白对照组、阴性对照组(P<0.05),空白对照组、阴性对照组比较差异无统计学意义。PRL-3 sh RNA转染SW480细胞72 h后,转染组与空白对照组、阴性对照组比较,细胞增殖能力受到抑制,转染120 h时最明显(P<0.05)。转染组克隆形成能力较空白对照组、阴性对照组下降(P<0.05)。转染组与空白对照组、阴性对照组比较,细胞迁移、侵袭能力下降,凋亡率增加(P<0.05)。结论结肠癌SW480细胞转染PRL-3 sh RNA可减少PRL-3的表达,有效抑制SW480细胞增殖,促进其凋亡,PRL-3可能成为治疗结肠癌的靶基因。

脂质体槲皮素对食管癌细胞增殖及蛋白表达的影响及机制

目的比较不同脂质体槲皮素对人食管癌Eca109和Eca9706细胞增殖的作用,并初步探讨其作用机制。方法采用旋转蒸发法制备氯仿和甲醇溶解类脂物质的脂质体槲皮素LQ1和按同比例的氯仿和DMSO作为溶剂的脂质体槲皮素LQ2,用DMSO直接溶解槲皮素制备非脂质体槲皮素nLQ,分别作用于Eca109和Eca9706细胞(分别作为LQ1、LQ2及nLQ组),同时设立对照组。MTT实验检测各组细胞抑制率,免疫组织化学染色和免疫印迹法检测磷酸酶基因(PTEN)和细胞周期素D1(Cyclin D1)蛋白表达。结果各组细胞增殖的抑制效应、上调PTEN和下调Cyclin D1蛋白表达的效应呈现同一趋势,即LQ2组>LQ1组>nLQ组>对照组,P<0.05。结论脂质体槲皮素对食管癌细胞增殖有抑制作用,LQ2的抑制率高于LQ1;上调PTEN表达、下调Cyclin D1表达可能为其作用机制之一。