利用CRISPR/Cas9技术将LoxP序列靶向引入小鼠Alk1基因

目的将LoxP序列靶向引入小鼠4腩1基因，拟通过Cre／LoxP系统条件性敲除4腩1基因建立脑动静脉畸形小鼠模型。方法利用CRISPR／Cas9技术编辑小鼠Alkl基因：①设计和选择两个单导向RNA（sgRNA）分别识别外显子3—4和8～9的非编码区位点；②设计带有2个LoxP序列且与靶基因同源的供体载体；⑧将体外合成的sgRNA，Cas9mRNA~I]供体载体注射到小鼠受精卵；④受精卵经假孕小鼠代孕出生后，经PcR和测序筛选目标小鼠。结果小鼠Alkl等位基因的特定位点插入了LoxP序列。结论CRISPR／Cas9技术能成功将LoxP序列靶向引入小鼠Alkl基因，为建立脑动静脉畸形小鼠模型创造条件。