AFP介导慢病毒载体治疗荷人肝癌裸鼠移植瘤的实验研究

目的构建甲胎蛋白(AFP)介导的以沉默胰岛素样生长因子1型受体(IGF1R)和表达野生型p53(Wtp53)的重组慢病毒,探讨该慢病毒载体对肝癌干细胞CD45^-CD90^+双靶点基因系统(IGF1R和Wtp53)和对体内肝癌生长的抑制作用。方法从肝癌细胞Hep3B系中分离出肝癌干细胞CD45^-CD90^+细胞亚群,用携带AFP-Wtp53-pPRIME-miR30-shRNAIGF1R融合基因的慢病毒进行体外转染。利用RT-PCR和Western blotting检测IGF1R、Wt P53在细胞内的表达,将荷人肝癌的移植瘤裸鼠随机分为空白对照组(腋下接种未感染任何病毒的CD45^-CD90^+细胞)、空载体对照组(腋下接种感染空载体慢病毒pPRIME的CD45^-CD90^+细胞)和实验组(腋下接种感染空载体慢病毒AFP-Wt P53-pPRIME-miR30-shRNA-IGF1R的CD45^-CD90^+细胞),检测各组的IGF1R表达,微血管密度和细胞凋亡程度。结果成功构建anti-AFP介导的慢病毒;qRT-PCR和Western blotting检测显示,anti-AFP介导的慢病毒能表达Wtp53并同时干扰IGF1R的表达。体内实验显示,与空白对照组和空载体对照组相比,实验组肿瘤的潜伏期较长,肿瘤体积较小,瘤组织的IGF1R水平、微血管密度较低,但凋亡指数较高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 anti-AFP介导的慢病毒可高效特异性转染肝癌干细胞CD45^-CD90^+双靶点基因系统,起到杀伤肝癌干细胞及抑制肝癌体内生长的作用。