肺癌组织中α_1-抗胰蛋白酶的表达及生物学特征

目的 研究α1AT(α1 -antitrypsin)在肺癌组织中的表达及其病理学意义。方法 检测 141例肺癌患者及 162例正常对照血清α1AT活性。通过免疫组化方法研究α1AT在肺癌组织中的表达,分析其与肺癌组织分型、分化程度及临床分期的关系。结果 α1AT活性在肺癌患者中明显降低,α1AT活性低者肺癌发生的危险性升高。肺癌组织α1AT表达显著升高,α1AT表达与肺癌的临床分期相关,但与肺癌组织类型无关。结论 α1AT在肺癌的发展与演进中可能具有重要的意义。

高表达α1-AT基因抑制肺腺癌细胞VEGFm RNA表达

目的:观察高表达α1-AT基因对肺腺癌细胞生长曲线以及血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达水平的影响,探讨高表达α1-AT基因在肺腺癌血管生成中的作用。方法:以脂质体为载体将重组质粒pcDNA3.1(+)-α1-AT转染至人腺癌细胞株A549,利用G418筛选获得阳性克隆;采用细胞计数法绘制转染前后细胞生长曲线;RT-PCR法半定量分析转染前后细胞中VEGF的表达水平的变化。结果:转染α1-AT基因后,A549细胞生长受到抑制,VEGFmRNA表达水平下降,较未转染α1-AT的细胞有显著性下降。结论:高表达α1-AT基因能够抑制肺腺癌细胞VEGFmRNA表达,抑制肿瘤血管的形成。

人α_1抗胰蛋白酶(α_1-AT)基因cDNA的克隆与序列分析

目的:克隆人α1抗胰蛋白酶基因的cDNA并进行序列分析。方法:以人胚肾细胞系HEK293的mR-NA为模板,采用RT-PCR方法得到人α1-AT基因的cDNA,克隆至载体pUC19中,酶切鉴定后进行序列分析。结果:获得人α1-AT基因的cDNA和重组质粒pUC19-AT,DNA序列分析证实获得的α1-AT基因cDNA,其序列和文献报道一致。结论:采用基因克隆的方法得到人α1-AT基因cDNA,为进一步进行其结构和功能研究打下了基础。

α_1AT基因对人肺腺癌细胞株A549裸鼠皮下移植瘤的作用

目的探讨α1AT基因对人肺腺癌细胞株A549裸鼠皮下移植瘤的作用。方法离体途径将α1AT基因转染人肺腺癌细胞株A549,然后接种于裸鼠皮下,观察肿瘤体积的变化,并计算抑瘤率。结果经α1AT基因转染后的人肺腺癌细胞株在裸鼠皮下成瘤能力降低,裸鼠成瘤潜伏期延迟,最大抑瘤率可达55.5%。结论高表达α1AT基因能降低A549的成瘤能力,抑制肿瘤生长。

血清α_1—抗胰蛋白酶变异体的薄层等电聚焦电泳分析

薄层等电聚焦电泳分析血清抗胰蛋白酶α_1-RT变异体,具有操作简便、分辨率高、重复性好等优点。α_1-AT的遗传缺陷与慢性阻塞性肺气肿、肝硬化等疾病的发生有关。本文报告利用薄层等电聚焦电泳技术对泸州地区362例入血清α_1-XT的遗传类型进行分析的结果。发现在受检人群中,MM型纯合子占97.79％(354/362),MS型杂合子占1.10％(4/362),MZ型杂合子占0.83％(3/362),其余0.28％(1/362)为ME型杂合子。此外,作者还对薄层等电聚焦电泳技术进行改良,使分辨率进一步提高。

草鱼α1-抗胰蛋白酶基因cDNA全长克隆与表达分析

采用RACE技术获得α1-抗胰蛋白酶基因cDNA全长序列为1 469 bp,开放阅读框为1 329 bp,可编码442个氨基酸。5′非编码区长19 bp,3′非编码区长121 bp。核苷酸序列分析表明,在N端可能存在一个由1～21位氨基酸残基组成的信号肽;与斑马鱼的同源性最好,其次是虹鳟;在系统进化上,与在斑马鱼、虹鳟共聚为一个大支。用半定量RT-PCR分析正常及细菌诱导下草鱼α1-抗胰蛋白酶基因在不同组织中的表达分布。结果显示:正常情况下,草鱼α1-抗胰蛋白酶在肝脏表达最丰富,在脾脏、前肾、前肠、中肠、后肠和也有少量表达;细菌诱导下,肝脏中表达最强,前肾、脾脏、肠道中表达均明显提高,心脏和后肾中也出现较高表达。提示α1-抗胰蛋白酶可能参与了机体对嗜水气单胞菌感染的免疫应答。

慢性阻塞性肺疾病血清中性粒细胞弹性蛋白酶和α1-抗胰蛋白酶的检测及其意义

目的 检测慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary disease,COPD）患者急性加重期、稳定期和健康对照者血清中的中性粒细胞弹性蛋白酶（neutronphil elastase，NE）和α1-抗胰蛋白酶（alphal antitrypsin,α1-AT）的水平变化，统计分析其与肺功能指标和吸烟等危险因素的关系，探讨蛋白酶/抗蛋白酶失衡在COPD发病中的意义。方法收集2007年12月至2010年10月河北医科大学第一医院呼吸内科住院的COPD患者56例和健康对照组21名的血清标本。COPD患者又分为急性加重期30例和稳定期26例两组。采用酶联免疫吸附法检测各组血清中NE、α1-AT水平。结果 ①COPD急性加重期血清NE水平显著高于对照组，差异有统计学意义（t =3.91，P＜0.01）;COPD稳定期也高于对照组，差异有统计学意义（t =2.02，P＜0.05）；COPD急性加重期高于稳定期，差异无统计学意义（t=1.91，P＞0.05）。COPD急性加重期α1-AT血清水平显著低于对照组，差异有统计学意义（t=-4.45，P＜0.01）；稳定期也低于对照组，差异有统计学意义（t=-2.73，P＜0.05）；COPD急性加重期低于稳定期，差异有统计学意义（t =-3.19，P＜0.01）。②COPD急性加重期组α1-AT血清水平与NE呈明显负相关（r=-0.71，P＜0.01）；稳定期组两者无相关性（r=0.33,P＞0.05）。③COPD急性加重期血清NE水平与第1秒用力呼气容积占预计值百分比（FEV1％pred）呈明显负相关（r=-0.82，P＜0.01）；与RV/TLC或吸烟程度呈正相关（r=0.74,0.73，P＜0.01）。COPD稳定期血清NE水平与FEV1％ pred或RV/TLC无相关性（r=0.25，-0.23，P＞0.05）；与吸烟程度呈正相关（r=0.42，P＜0.05）。④COPD急性加重期血清α1-AT水平与FEV1％ pred呈明显正相关（r=0.86,P＜0.01）；与RV/TLC或吸烟程度呈负相关（r=-0.83，-0.80，P＜0.01）。COPD稳定期血清α1-AT水平与FEV1％ pred呈正相关（r=0.47，P＜0.05）；与RV/TLC呈负相关（r=-0.46,P＜0.05）；与吸烟程度无相关性（r =0.34,P＞0.05）。结论①NE与α1-AT的失衡在COPD发病中起重要作用。②NE分泌增多和α1-AT含量的相对不足与气道炎症及气道阻塞具有显著相关性，是肺气肿形成的重要因素。③吸烟可导致NE水平升高、α1-AT活性下降及含量相对不足，是COPD的高危因素之一。