不同中药材对三七黑斑病病原Alternaria panax Whetz抑制作用研究

通过不同中药材对黑斑病病原Alternaria panax Whetz.室内抑菌试验研究及病原田间致病性鉴定,筛选出可与三七混种的中药材品种泽兰、山萘、麦冬、玉竹。

Antibiotic Activity of Seven Fungicides against Alternaria panax Whetz

[Objective] This study was conducted to screen suitable fungicides to con-trol ginseng leaf blight caused by Alternaria panax_Whetz. [Method] The antifungal activity of seven fungicides against A. panax_ was determined based on mycelial growth rate in vitro. [Result] The results of in vitro antibiotic activity assay showed that there were significant differences in inhibition rate among different concentration treatments of each of the seven fungicides. Toxicity test results showed that among the seven fungicides, difenoconazole had the smal est EC50 （0.61 mg/L）, fol owed by streptomycin and captan, with EC50 value lower than 100 mg/L. [Conclusion] A fungicide which had strong antifungal activity on A. panax was screened out, and the results wil provide a theoretical basis for further field trial.

丁子香酚对人参黑斑病菌的抑制活性及其作用机制研究

黑斑病是人参上最重要的真菌病害之一,严重影响人参的产量与品质。本文采用菌丝生长速率法和孢子萌发法,研究了丁子香酚对人参黑斑病菌的抑制活性,并评价了对病菌相对电导率、丙二醛含量及抗氧化酶活性的影响。结果表明:丁子香酚对人参黑斑病菌的抑制作用显著,0.30 mg/mL时,对菌丝生长和孢子萌发的抑制率分别高达90.14%和94.40%;丁子香酚处理病原菌菌丝12 h后,其相对电导率和丙二醛(MDA)含量明显升高,分别为66.18%和1.83nmol/g;抗氧化酶过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)的活性峰值出现在24 h,分别为379.80、38.80和305.10 U/g。丁子香酚能够破坏细胞膜完整性、增强膜脂质过氧化反应、促使活性氧大量积累,从而诱导细胞死亡,发挥抑菌功能。本研究可为丁子香酚在人参黑斑病绿色防控中的合理应用提供参考,同时为人参黑斑病防控增加了用药选择。

外源茉莉酸对三七根系代谢物的影响及关键代谢物诱导三七抗病性分析

【目的】揭示叶部喷施茉莉酸(Jasmonic acid,JA)诱导三七根系的代谢变化,明确显著变化的代谢物,为三七病害的生物防治提供理论基础。【方法】以三七为试验材料,在叶部接种黑斑病菌(Alternaria panax)菌株SL17,于接种4和8 d时测定三七植株内源JA含量;于三七叶片外源喷施不同浓度的JA后,利用气相色谱—质谱联用仪(GC-MS)分析三七根系代谢物变化,并检测显著变化代谢物对主要根腐病菌的抑制活性及其灌根后诱导三七叶部抗黑斑病的效果。【结果】叶部接种黑斑病菌4 d时,三七叶部JA和茉莉酸亮氨酸螯合物(JA-ile)的含量增加而在根系减少;接种8 d时,叶部JA含量显著增加(P<0.05,下同),而根系中2种物质的含量均极显著增加(P<0.01)。外源喷施不同浓度JA后三七根系代谢变化测定结果显示,三七根系中共检测出125种代谢物,主要分为有机酸类、氨基酸类、酯类、糖类、胺类、核苷酸及其衍生物和酮类等,其中有机酸类、氨基酸类和糖类是根系代谢物中的主要成分。与对照相比,叶部施用JA后三七根系中的草酸和氢化乳清酸含量显著增加。进一步测定显著变化的差异代谢物功能发现,草酸和氢化乳清酸对三七主要根腐病菌具有一定的抑制活性,其中氢化乳清酸在浓度为0.001μg/mL时对茄腐镰刀菌(Fusarium solani)菌株F3和锈腐病菌(Ilyonectria destructans)菌株RS6的抑制效果最佳,浓度为0.010μg/mL时对锈腐病菌菌株RS8的抑制效果最佳,浓度为0.100μg/mL时对恶疫霉(Phytophthora cactorum)菌株D-6的抑制效果最佳;草酸浓度为0.001μg/mL时对菌株F3的抑制效果最佳,浓度为10.000μg/mL时对菌株D-6的抑制效果最佳;草酸和氢化乳清酸灌根后还能明显减小三七叶部黑斑病的病斑面积,且均在浓度10.000μg/mL时诱导抗病效果最佳。【结论】外源喷施JA可改变三七根系代谢,促进氢化乳清酸和草酸的积累,进而增强三七对黑斑病的抗性,并对三七主要根腐病菌具有一定的抑制活性。

木醋液对人参黑斑病菌和人参灰霉病菌的抑菌作用

目的:生产上用于生物防治人参黑斑病菌和灰霉病菌的药剂种类较少,本试验为将木醋液作为一种新型植物源杀菌剂提供理论依据。方法:采用菌丝生长速率法和孢子萌发法,测试了木醋液对人参黑斑病菌和灰霉病菌的离体抑菌活性。结果:木醋液的浓度在3.0%及以上时,对人参黑斑病菌的菌丝生长抑制率为100%,而木醋液的浓度在2.25%时,菌丝生长抑制率和孢子萌发抑制率分别为70.68%和84.47%;木醋液的浓度在2.25%及以上时,对人参灰霉病菌的菌丝生长抑制率和孢子萌发抑制率均为100%。结论:2.25%以上浓度的木醋液可作为生物防治人参黑斑病菌和灰霉病菌的药剂,为进一步田间药效试验奠定了基础。

三七黑斑病抗性人工鉴定方法的建立

三七黑斑病(Alternaria panaxW hetz)是影响三七生产尤其是GAP规范化生产的重要病害,建立三七黑斑病抗性人工鉴定方法是开展三七抗病育种必备环节。分别以室内离体叶片和田间在体叶片进行不同接种方法的试验,明确了通过针刺叶片接种浓度为1.0×107个/mL的三七黑斑病孢子悬浮液是诱导发病有效途径。室内离体接种和田间接种对比,同一植株室内离体叶片接种与田间接种的相关系数0.954 8**,达到极显著水平。对个体基因型还有变异的三七栽培群体进行人工抗性鉴定的初步研究发现,不同个体三七对黑斑病接种的发病程度有明显的差异,说明黑斑病抗病性与三七个体遗传特性有关。测定田间接种发病程度不同的三七叶片的苯丙氨酸解氨酶活性,发现三七对黑斑病的抗性与三七植株叶片苯丙氨酸解氨酶活性有明显的关系。

5种中药提取物对人参黑斑病菌的抑制作用

采用生长速率法测定了苦参、黄连、丁香、藿香、细辛5种中药提取物对人参黑斑病菌的生物活性。研究结果表明:在质量浓度为1.0kg/L下,丁香、藿香和苦参对人参黑斑病菌的菌丝生长抑菌率达100%、92.2%和89.2%;丁香最小抑制质量浓度为0.0625kg/L,藿香和苦参分别为0.125kg/L和0.5kg/L。

人参黑斑病生防用内生拮抗菌分离鉴定及发酵浓缩液的性质

采用平板稀释法在几种中药材中分离内生拮抗细菌,结果人参根中分离到的内生拮抗细菌菌株数较多.采用平板对峙法筛选高效拮抗菌菌株,其中菌株BJ33对人参黑斑病具有很强的抑菌活性,其抑制率达到了80％.根据BJ33菌株的形态和生理生化特征以及采用16S rDNA同源性分析方法鉴定为解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens.BJ33菌株及发酵浓缩液对供试的6种植物病原菌菌丝生长均具有较强的抑制作用;BJ33菌株发酵浓缩液在15 ～ 35℃和pH5～11均具有较强的抑菌活性;BJ33菌株发酵浓缩液对高温、紫外线以及蛋白酶等具有较强的稳定性.

三七NAC转录因子基因PnNAC1的克隆及表达特性分析

为了揭示三七抗病防卫反应的调控机制,对三七的一个NAC转录因子的全长cDNA进行了克隆和表达特性分析。以一年生三七幼苗为材料,根据编码NAC转录因子的三七转录组Unigene设计引物,采用快速扩增cDNA末端技术,克隆得到一个新的NAC转录因子基因,命名为PnNAC1。序列分析表明,该基因全长815 bp,含有24 bp的5'非翻译区和215 bp的3'非翻译区,以及576 bp开放阅读框,共编码191个氨基酸,具有保守的NAC结构域。实时荧光定量PCR结果显示茉莉酸甲酯预处理三七根部大幅提高了PnNAC1在根中的转录水平,接种茄腐镰刀菌后,PnNAC1的表达进一步上升,在接种后4 h转录水平达最大值;无菌水预处理的三七中,PnNAC1也快速响应茄腐镰刀菌的侵染,但表达水平明显低于茉莉酸甲酯预处理的样品。接种人参链格孢后PnNAC1在叶片的表达量受抑制。茉莉酸甲酯、乙烯利、水杨酸和过氧化氢4种信号分子处理三七根部均诱导PnNAC1的表达。表明PnNAC1响应几种逆境相关信号分子,并参与三七对茄腐镰刀菌和人参链格孢的防卫反应。

文山三七根腐病病原真菌的鉴定与药剂防治

从云南文山三七药材基地感染根腐病的三七组织获得分离物,并对其进行培养和纯化,并运用科赫法则(Koch’s Postulate)进行病原菌回接感染,得3株致病明显的菌株,后对此菌株进行生物学和18S-rDNA全序列分析鉴定及室内药效防治。结果表明,此3株菌分别是尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum),茄病镰刀菌(Fusarium solani)和链格孢菌(Alternaria alternata)。甲基硫菌灵、根康、多菌灵对茄孢镰孢菌、尖镰孢菌的抑菌效果最好,腐霉利、甲基硫菌灵对链格孢菌的抑菌效果最好。该研究可为尖孢镰刀菌、茄病镰刀菌和链格孢菌引起的三七根腐病的防治提供参考。

人参病害生防微生物菌剂的抑菌活性评价

目的:明确12种市售微生物菌剂产品中分离菌株对人参黑斑病菌和人参灰霉菌的抑菌效果,为人参病害绿色防控提供参考依据。方法:采用稀释平板法从微生物菌剂中分离活体菌株;对峙培养法评价分离菌株的抑菌活性;十字交叉法测量菌落直径。结果:5种木霉菌剂产品中仅有1种分离到活体菌株,尽管该菌株对人参黑斑菌和人参灰霉菌的抑菌活性较高(抑菌率分别为65. 18%和76. 82%),但菌剂中活菌的分离数偏低。7种芽孢杆菌菌剂中均能分离到活体菌株,除微囊粒剂和水剂外,其他菌剂产品中活体菌株分离数均较高;上述分离菌株对人参黑斑菌和人参灰霉菌的抑菌活性低于木霉菌,抑菌率分别为27. 21%～33. 04%和10. 74%～29. 40%。结论:芽孢杆菌和木霉杀菌剂均具有防治人参病害的生防潜力,考虑菌剂产品的稳定性和环境耐受力,芽孢杆菌类微生物菌剂更适合人参病害的田间防控。

广西田七重要病害的防治药剂初步筛选

以广西田七发生较严重的黑斑病(Alternaria panax)、炭疽病(Colletotrichum gloeosporioides)和根腐病(Fusarium solani)3种主要病害的病原菌为靶标,采用菌丝生长速率法,测试了20种化学药剂对各病原菌的抑菌效果。结果表明,45%恶霉灵·甲霜可湿性粉剂1000倍液、250 g/L丙环唑乳油1000倍液等7种药剂对A.panax的抑菌率达100%;15%咪鲜胺微乳剂3000倍液、30%氟硅唑微乳剂7000倍液等9种药剂对C.gloeosporioides的抑菌率达100%;15%咪鲜胺微乳剂3000倍液、50%多菌灵纯白可湿性粉剂1500倍液等5种药剂对F.solani的抑菌率达100%。

一株拮抗人参灰霉病菌和黑斑病菌的细菌鉴定

利用梯度稀释法从人参种植地土壤中分离出1株对人参灰霉病和黑斑病病原菌均有良好抑制作用的菌株JL2011。该菌株在天然固体培养基中菌落呈浅黄色,隆起,黏稠状,表面湿润光滑。对该菌株进行16S序列测定。结果表明:16S扩增片段大小为1 428 bp;MEGA4.0软件对序列进行比较分析,鉴定出所分离菌株为多粘芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa),同源性达到99%。

人参黑斑病低毒化学杀菌剂的室内筛选

目的:室内筛选对人参黑斑菌有理想抑菌活性的低毒化学杀菌剂,为人参黑斑病防控提供参考依据。方法:采用平板培养法结合抑菌率及毒力测定,明确不同杀菌剂的抑菌效果。结果:新益甲托、金万霉灵和多菌灵对人参黑斑菌的毒力较好,EC50值分别为199. 5、181. 97和96. 83μg·m L-1;其次为代森锰锌、阿米西达和世高,EC50值分别为2041. 7、3162. 3和1258. 9μg·m L-1;其余杀菌剂的EC50值均偏高。结论:新益甲托对人参黑斑菌有较好的防病潜力,在确保病害防治效果及农药残留达标的前提下,可考虑将其用于人参黑斑病的田间防治。

丁香和藿香不同溶剂提取物对人参黑斑病菌的抑制效果

为给研制和开发防治人参黑斑病新型植物源农药提供依据,采用生长速率法和倍比稀释法研究了丁香和藿香不同溶剂提取物对人参黑斑病菌的抑制效果。结果表明:质量浓度为1g/mL的丁香95%乙醇、丙酮和乙醚粗提物对人参黑斑病菌有较好的抑制作用,抑菌率分别达100%;藿香的95%乙醇、丙酮和乙醚的粗提物抑菌率分别为73.8%、48.7%和40.0%。稀释后的丁香95%乙醇和丙酮提取液第6天的最小抑制浓度为0.062 5g/mL,丁香乙醚提取液第6天的最小抑制浓度为0.125g/mL。田间小区试验表明,丁香和藿香95%乙醇提取液的防效分别为67.8%和46.8%。结论:丁香和藿香的95%乙醇提取液中具有抑制人参黑斑病的活性成分,可进一步研究为高效无毒的杀菌剂。

不同农药对梨黑斑病的毒力测定及与三七提取物复配的研究

以不同农药药剂与三七提取物为试材,在室内离体条件下,采用菌丝生长速率法对梨黑斑病菌的毒力进行测定,以期获得最优农药与三七提取物复配的最佳比例。结果表明:43%戊唑醇与三七提取物在1∶1与1∶2复配比例下,SR分别为3.15和4.29,表现为增效作用;2∶1比例下SR为0.55,表现为相加作用,对梨黑斑病均表现出较好抑制作用。

两株内生细菌在人参体内和根区土壤的消长动态研究

目的:研究内生生防细菌在人参根、茎、叶和根区土壤中的消长动态。方法:采用浓度梯度筛选法获得抗利福平标记菌株,灌根法接种标记菌株,稀释平板法计数标记菌株在人参根、茎、叶和根区土壤的分布情况。结果:通过抗生素诱导培养,最终获得了能够耐受120μg·mL-1利福平的标记菌株,其对人参黑斑病菌和人参疫病菌的抑制作用与诱导前未见明显改变。内生菌株ge15和ge25在人参根、茎中的初始菌落数最高,随后ge15和ge25在人参根、茎中的菌落数逐渐平稳并维持特定浓度;在人参叶中,两株菌在接种3天后菌落数达到最高,后逐渐降低直至趋于平稳;在人参根区土壤,ge15的菌落数往复变化,ge25的菌落数先上升后下降,最后菌落数趋于平稳。结论:两株内生菌均能够在人参根茎叶和根区土壤中维持特定菌群浓度,基于上述菌株的生防制剂将有助于人参病害的田间防治。

培养条件对人参黑斑病菌生长发育的影响

人参黑斑病菌（Alternaria panax Whetz）菌丝生长、产孢及分生孢子萌发最适温度为25℃,最适宜pH值为5~6.对碳源的利用以蔗糖和麦芽糖最佳,其次为葡萄糖和果糖;氮源以蛋白胨最佳,其次为牛肉膏、酵母汁、丙氨酸,硝铵;不同的培养基以PDA培养基培养的菌丝生长最快,菌落浓密.病菌菌丝的致死温度为65℃,分生孢子的致死温度为50℃.

3种新型杀菌剂对人参黑斑病菌的抑制作用及田间防病效果

选用新型杀菌剂25%啶菌恶唑悬浮剂、40%氟硅唑乳油、40%嘧霉胺悬浮剂对人参黑斑病菌进行了抑制作用实验和田间病害防治实验。结果表明,以上3种药剂对人参黑斑病菌具有很强的抑制作用,EC50分别为0.329μg/mL、2.832μg/mL和14.025μg/mL;啶菌恶唑2 000倍液的田间防治效果达86.5%,氟硅唑2 000倍液次之,防效达到83.4%,嘧霉胺1 500倍液的防效达到82.1%。