大叶女贞抗寒基因AmEBP1高效转化体系的研究

本研究以大叶女贞为受体材料,利用农杆菌浸染方法对沙冬青抗寒基因AmEBP1进行转化试验,通过对不同的受体材料浸染部位、菌液浓度和浸染时间对转化材料的死亡率%、分化率%、分化芽数(个)、芽苗长度(cm)以及芽苗颜色影响进行了分析,结果表明:转化材料为茎段,菌液浓度稀释为50%,浸染时间15 min;其中浸染部位是影响基因高效转化的最主要因素,菌液浓度和浸染时间的作用次之;方差分析进一步发现,浸染部位的三个水平对于外源基因在植物体内的转化显著差异,因此选择合适的浸染部位、适宜的菌液浓度和浸染时间能提高基因转化效率;经在50 mg/L浓度的卡那霉素培养基筛选培养,获得一批抗性植株,经PCR检测获得5株转化株系。

利用沙冬青抗寒基因AmEBP1转化杏的研究

利用花粉管导入法,将沙冬青抗寒基因AmEBP1转化到‘大果’杏幼胚中,在改良WPM培养基上经卡那霉素筛选,PCR、Southern检测,结果得到5个转基因阳性株系;组培苗抗寒试验结果表明,相同低温(–4和–8℃)条件下,转基因植株均比对照表现出较高的成活率;随着处理温度的降低,转基因株系REC与MDA含量始终低于对照植株;转基因植株的低温半致死温度(LT50)比未转基因对照低2.13℃。试验结果表明导入的AmEBP1基因提高了‘大果’杏的抗寒性。