钙对成釉细胞系ALC细胞生物学特性的影响

目的观察钙对成釉细胞系ALC细胞增殖、凋亡及细胞周期等生物学特性的影响。方法培养ALC细胞系,在高糖DMEM培养基中配制0、2.0、2.5、3.0、3.5 mmol/L CaCl2溶液,利用倒置显微镜检测在两种培养时间(24、48 h)下ALC细胞形态是否改变。通过CCK-8法分析钙离子对ALC细胞增殖的作用,运用Hoechst染色观察钙离子对ALC细胞凋亡的影响;通过PI染色FCM法分析钙离子对ALC细胞生长周期的干预。利用Western blot检测钙离子对ALC细胞中周期蛋白Cyclin A、Cyclin B、Cyclin D表达的调节。结果0 mmol/L CaCl2组,ALC细胞形态呈卵圆或多边形,细胞间连接紧密呈铺路石样生长。其他不同浓度的钙干预24、48 h后,ALC细胞形态未见明显变化;CCK-8法结果显示钙干预24、48 h后,随着钙浓度增加,ALC细胞的存活率呈微弱降低趋势,但此趋势无统计学意义;Hoechst染色结果显示不同浓度的钙干预24、48 h后,ALC细胞的凋亡数目随时间延长可见增加,但不同钙离子浓度组间差异并不显著;PI染色FCM检测显示随着钙离子浓度的升高,ALC细胞的细胞周期中S期逐渐增加,G1期、G2期呈下降趋势;Western blot结果表明钙干预24、48 h后,ALC细胞中的周期蛋白Cyclin A、Cyclin B表达呈下降趋势,Cyclin D表达呈上升趋势。结论在本研究条件下,钙对ALC细胞增殖、凋亡未见明显影响,但改变了细胞周期。通过实验研究结果发现本实验中的钙离子浓度对成釉细胞无明显毒副作用,可用于进一步探讨钙对氟牙症治疗的可能机制及作用。

来那度胺联合R-CHOP治疗DLBCL改善ALC/AMC比值的研究进展

弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphomas,DLBCL)是非霍奇金淋巴瘤的主要亚型。DLBCL在临床表现、基因表达、治疗反应及预后方面均存在差异,外周血绝对淋巴细胞(ALC)/单核细胞(AMC)比值(ALC/AMC)作为宿主免疫和肿瘤微环境的替代指标,是预测DLBCL患者临床疗效的生物标志物。来那度胺是一种免疫调节药物,对DLBCL患者有效,对肿瘤微环境及宿主免疫反应有多种作用机制。来那度胺联合标准R-CHOP治疗以前未经治疗的DLBCL患者,似乎克服了单用R-CHOP治疗患者ALC/AMC比值的不良预后价值,本文对这一观点进行综述。

钙离子调控KLK4表达对成釉细胞生长的影响

目的探讨钙离子对成釉细胞中激肽释放酶4(kallikrein-4,KLK4)表达及细胞生长的影响,为钙离子促进牙釉质正常矿化提供实验依据。方法采用不同浓度CaCl_(2)(0、2.0、2.5、3.0、3.5 mmol/L)处理成釉细胞株ALC(ameloblast-lineage cell)24 h、48 h,q RT-PCR和Western blot检测KLK4 mRNA和蛋白表达水平;CCK-8检测细胞相对活力;流式细胞术、Hoechst 33342染色检测钙离子对细胞周期和细胞凋亡的影响;Western blot检测葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)的蛋白表达水平。结果与对照组(0 mmol/L CaCl_(2))相比,2.5、3.0、3.5 mmol/L CaCl_(2)处理细胞24 h后,KLK4 mRNA表达上升(P<0.05),2.0、2.5、3.0、3.5 mmol/L CaCl_(2)处理细胞24 h后,KLK4蛋白表达上升(P<0.05);3.0、3.5 mmol/L CaCl_(2)处理细胞48 h后,KLK4 mRNA和蛋白表达上升(P<0.05)。与对照组相比,2.0、2.5、3.0 mmol/L CaCl_(2)处理ALC细胞24 h、48 h后,细胞活力增加(P<0.05),其中2.5 mmol/L CaCl_(2)组中细胞活力最高。Hoechst 33342染色结果显示,3.0、3.5 mmol/L CaCl_(2)促使ALC细胞发生凋亡。流式细胞仪检测结果显示,与0、2.0、2.5、3.0 mmol/L CaCl_(2)组相比,3.5 mmol/L CaCl_(2)处理ALC细胞24 h后,G2/M期细胞比例增加,细胞凋亡率上升(P<0.05)。3.0、3.5 mmol/L CaCl_(2)处理细胞24 h后,与对照组相比,GRP78蛋白表达下降(P<0.05);2.5 mmol/L CaCl_(2)处理细胞48 h后,与对照组相比,GRP78蛋白表达下降(P<0.05)。结论钙离子促进ALC细胞中KLK4表达上升、细胞活力增加,但较高浓度的钙离子可使ALC细胞的G2/M期阻滞,诱发ALC细胞凋亡,降低凋亡相关蛋白GRP78的表达。

ALC对缺氧精原细胞线粒体呼吸功能及自噬的影响

为了探讨乙酰左旋肉碱(ALC)对缺氧条件下小鼠精原细胞线粒体呼吸功能与自噬的影响,试验以GC-1精原细胞系为研究对象,将其分为3组,分别为对照组(5%CO2和95%空气)、缺氧组(5%CO2和3%O2)和缺氧+ALC组(5%CO2和3%O2,培养基中添加150 mmol/L的ALC),各组细胞经相应条件处理24 h后,以高分辨率呼吸仪检测线粒体呼吸功能相关指标的变化,使用实时荧光定量PCR方法检测自噬相关基因的相对表达量,通过Western-blot法检测自噬相关蛋白的表达情况。结果表明:与对照组相比,缺氧组GC-1精原细胞线粒体基础呼吸、质子漏、ATP相关呼吸、线粒体最大呼吸、备用呼吸能力和呼吸控制比率均极显著降低(P<0.01),剩余氧通量升高但差异不显著(P>0.05),而添加ALC后对缺氧诱导的上述指标的变化无明显改善作用(P>0.05)。与对照组相比,缺氧组ATG5、Beclin1、p62基因相对表达量极显著下调(P<0.01),LC3b基因相对表达量轻微上调但差异不显著(P>0.05),Beclin1、ATG5、LC3b/LC3a蛋白相对表达量显著下调(P<0.05)。与缺氧组相比,添加ALC显著或极显著逆转缺氧诱导的自噬相关基因ATG5、Beclin1、p62相对表达量的下调(P<0.05或P<0.01),同时添加ALC显著上调LC3b基因相对表达量(P<0.05);LC3b/LC3a蛋白相对表达量极显著上调(P<0.01),而ATG5、Beclin1蛋白相对表达量呈上调趋势但差异不显著(P>0.05)。说明ALC可能激活缺氧环境下诱导的GC-1精原细胞自噬抑制,但不能逆转线粒体呼吸功能障碍。

免疫化疗的弥漫大B细胞淋巴瘤预后因素分析

目的探讨免疫化疗的弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)患者的国际预后指数(IPI)、生发中心型(GC型)、非生发中心型(non-GC型)及外周血淋巴细胞绝对计数(ALC)与预后的关系。方法回顾性分析78例免疫化疗的DLBCL患者入院时的IPI评分、ALC和免疫组化检查结果,并结合随访资料,应用统计学软件进行生存分析。结果预后分析显示,IPI评分与3年总生存期(OS)和3年无进展生存期(PFS)有关(P=0.025,0.01);GC型、non-GC型及治疗前ALC高低与预后无明显的相关性。non-GC型的低ALC组DLBCL患者OS(55.3%,P=0.034)和PFS(47.7%,P=0.006)与其他3组比较显著降低。结论 IPI评分与免疫化疗的DLBCL患者的预后相关;治疗前ALC与免疫化疗的DLBCL患者预后无关,但低ALC的non-GC型是行免疫化疗的DLBCL的独立预后不良因素。

Tet-on Advanced调控Amelotin基因表达成釉细胞系的建立

目的应用Tet-on Advanced基因表达系统构建由强力霉素(Dox)诱导Amelotin基因表达的成釉细胞系,为进一步研究Amelotin基因的生物学功能奠定基础。方法通过RT-PCT法从出生后7d的小鼠牙胚中克隆得到Amelotin的全长基因,测序正确后将其亚克隆入pTRE-Tight载体中,利用Tet-on Advanced基因表达系统先后将调控质粒pTet-on Advanced和反应质粒pTRE-Tight-Amelotin转入成釉细胞,分别用G418和潮霉素进行筛选,克隆扩增得到可诱导表达Amelotin基因的成釉细胞系。用RT-PCR法检测不同Dox浓度下转染成釉细胞中Amelotin基因的表达。结果连续两个回合的转染及筛选后获得了引入pTet-on Advanced系统的细胞系,能够高诱导低背景表达Amelotin,在强力霉素诱导48h可以使Amelotin的表达显著增加,强力霉素在一定浓度范围内可以诱导Amelotin的表达呈剂量依赖性增加。结论成功构建了受强力霉素调控的双重稳定表达Amelotin成釉细胞系,为进一步研究Amelotin与釉质矿化之间的关系奠定了基础。

不同HbA1c水平2型糖尿病患者的胰岛细胞功能比较

目的比较不同糖化血红蛋白(Hb A1c)水平2型糖尿病患者的胰岛α、β细胞功能。方法回顾性分析2016年1月至2017年7月在南通市第一人民医院内分泌科住院就诊且资料完整的2型糖尿病患者467例的临床资料。根据Hb A1c水平将患者分为3组:Hb A1c≤7%组(低Hb A1c组)117例、7.0%<Hb A1c<9.0%组(中Hb A1c组)149例、Hb A1c≥9.0%组(高Hb A1c组)201例。统计各组一般临床指标,记录空腹及口服75 g葡萄糖耐量试验(OGTT)后30、60、120、180 min的血糖(GLU)、C肽和胰高血糖素(GLA)。比较各组各时间点C肽、GLU/GLA、C肽曲线下面积(AUCC肽)、GLU/GLA曲线下面积(AUCGLU/GLA)的变化,并对Hb A1c、AUCC肽、AUCGLU/GLA等行相关性分析。结果随着Hb A1c的升高,空腹及OGTT后各时间点的C肽、AUCC肽均明显下降,差异有统计学意义(P<0.05),低Hb A1c组、中Hb A1c组、高Hb A1c组C肽峰值均出现在口服75 g葡萄糖后120 min,分别为6.56(5.02,9.32)ng/m L、4.58(2.96,6.22)ng/m L、2.46(1.45,3.78)ng/m L。随着Hb A1c的逐步升高,除空腹及OGTT后30 min时中Hb A1c组与高Hb A1c组GLU/GLA比较虽逐步上升,但差异无统计学意义(P>0.05),其余各组各时间点的GLU/GLA、AUCGLU/GLA呈逐步上升趋势,差异亦有统计学意义(P<0.05)。各组均于口服75 g葡萄糖后120min达高峰,峰值分别为0.105(0.067,0.144)mmol/ng、0.146(0.102,0.209)mmol/ng、0.181(0.138,0.246)mmol/ng。Pearson相关分析示Hb A1c与AUCC肽呈负相关(r=-0.6093,P<0.05),与AUCGLU/GLA呈正相关(r=0.3679,P<0.05);AUCC肽与AUCGLU/GLA呈负相关(r=-0.3230,P<0.05)。多元逐步回归分析示Hb A1c与AUCC肽呈负相关[β(SE)=-0.0031(0.0002),P<0.05],与AUCGLU/GLA呈正相关[β(SE)=0.0359(0.0057),P<0.05];AUCC肽与AUCGLU/GLA呈负相关[β(SE)=-0.0133(0.0023),P<0.05],且AUCC肽每下降10%,AUCGLU/GLA上升7.8%。结论 2型糖尿病患者Hb A1c与胰岛细胞功能密切相关。

外周血细胞计数及其比值对初诊伴非骨相关髓外病变的多发性骨髓瘤患者预后的评估价值

目的探讨外周血淋巴细胞计数(ALC)、单核细胞计数(AMC)、淋巴细胞与单核细胞比值(LMR)、血小板与淋巴细胞比值(PLR)与初诊时伴非骨相关髓外病变(sEMD)的多发性骨髓瘤(MM)患者临床病理特征的相关性以及对疗效和生存的影响。方法收集81例初诊时伴sEMD的MM患者临床病理资料,分别分析外周血ALC、AMC、LMR、PLR与血红蛋白、肌酐水平、乳酸脱氢酶水平、β2微球蛋白水平、治疗疗效、预后生存情况等指标关系。以ALC、AMC、PLR、LMR中位数为界值进行分组。Kaplan-Meier法分析ALC、AMC、PLR、LMR与生存及预后之间的关系;预后多因素分析采用Cox风险回归模型。结果 81例患者ALC、AMC、PLR、LMR中位数分别为1.38×10~9/L、0.48×10~9/L、134.9、3.11,多因素分析结果显示:LMR≤3.11(P=0.021)、PLR≥134.9(P=0.019)、LDH≥247U/L(P=0.041)、Hb≤110 g/L(P=0.004)是初诊伴sEMD的MM患者预后不良的影响因素。结论对于初诊伴sEMD的MM患者,LMR≤3.11、PLR≥134.9、LDH≥247 U/L、Hb≤110 g/L可能是其影响预后不良的独立因素。