铜绿假单胞菌phoQ基因敲除对氨基糖苷类抗生素耐药性的影响

目的分析氨基糖苷类抗生素敏感或耐药铜绿假单胞菌菌株二元信号系统PhoQ/PhoP编码基因序列并确定该系统与耐药性关系。方法采用PCR获得铜绿假单胞菌菌株全长phoQ和phoP基因片段，T—A克隆后测序。构建phoQ和phoP基因原核表达系统，Ni-NTA亲和层析法提纯目的重组表达产物rPhoQ和rPhoP，皮内注射免疫法制备兔抗血清，免疫双扩散法测定抗血清效价。采用Red重组系统敲除氨基糖苷类抗生素耐药铜绿假单胞菌菌株phoQ基因，采用PCR、测序和Westernblot对phoQ。突变株进行鉴定。采用试管稀释法测定各铜绿假单胞菌野生株和突变株对4种氨基糖苷类抗，丰素的最低抑菌浓度（MIC）。结果与GenBank中相关序列比较，所克隆的phoP和phoQ基因核苷酸和氨基酸相似性分别为98．7％一99．6％和98．7～100％、98．4％～99．8％和99．1％～100％。采用pET-42a和E．coliB121DE3系统成功地表达了rPhoQ和rPhoP。rPhoQ和rPhoP兔抗血清免疫双扩效价分别为1：4和1：8抗血清。经PCR、测序和Westernblot鉴定，两株phoQ^-突变株phoQ基因及产物均缺失。上述phoQ^-突变株对4种氨基糖苷类抗生素的MIC值分别为其野生株的1／512～1／2048。结论PhoQ／PhoP是序列保守的铜绿假单胞菌二元信号转导系统，该系统介导细菌对氨基糖苷类抗生素的耐药性。

感音神经性聋并迟发性眩晕(附13例报告)

报告感音神经性聋并迟发性眩晕（SHL－DV）14耳。其中由中耳炎及其有关手术所致者8耳，突聋和原因不明各3耳。14耳由耳聋至眩晕发作相隔期平均22．6年，眩晕病程平均6．2年。2耳行内淋巴囊减压术；3耳由中耳炎所致者严重耳聋，行迷路切除术；3耳行庆大霉素鼓室灌注术；6耳行链霉素外半规管灌注术。14耳平均随访2．3年。迷路切除术者眩晕消除，听力丧失；氨基糖甙类药物灌注者眩晕控制，听力有不同程度保存。提示重症SHL－DV药物治疗无效者，化学性迷路切除术是可取的。