ELISA方法检测呋喃妥因代谢物1-氨基乙内酰脲

建立了一种检测呋喃妥因代谢物1-氨基乙内酰脲(1-aminohydantoin,AHD)的酶联免疫方法,并对其进行了优化;得到IC50为3.6ng/mL,检测限为0.085ng/mL。此外,检测了与其他类似物的交叉反应率,显示了很好的特异性;并且通过对猪肉样品添加回收率的测定,证明了该方法的准确性。

猪肉中1-氨基乙内酰脲的胶体金免疫层析法快速检测

基于免疫竞争胶体金免疫层析原理,研制了检测食用肉中呋喃妥因代谢物1-氨基乙内酰脲(AHD)的免疫试纸条。用柠檬酸钠还原法制备胶体金颗粒,标记抗1-氨基乙内酰脲的衍生物(CPAHD)的单克隆抗体并喷于玻璃纤维上,CPAHD-BSA(Bovine serum albumin)抗原和羊抗鼠IgG分别结合于硝酸纤维膜上,依次将样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水纸组装切割成AHD胶体金免疫层析快速检测试纸条。在5 min内肉眼观察结果,该试纸条对AHD的最低检测限为2.33μg/L,除与呋喃妥因有弱交叉反应外,与其他同类物均无交叉反应,用该试纸条和ELISA(Enzyme linked immunosorbent assay)检测猪肉中添加的AHD,结果呈现很好的相关性。该方法灵敏度高,简便快速,无需特殊仪器设备,可作为呋喃妥因残留批量检测的筛选方法。

呋喃妥因残留代谢物人工抗原的合成与鉴定

利用对醛基苯甲酸对呋喃妥因代谢物1-氨基乙内酰脲(1-Aminohydantoin hydrochloride,AHD)进行衍生化,衍生物1-氨基乙内酰脲-4-羧苯基肟(CPAHD)通过混合酸酐法与牛血清蛋白(bovine serum albumin,BSA)偶联,用紫外扫描(UV)和变性凝胶电泳(SDS-PAGE)对偶联物进行验证。将偶联成功的人工全抗原(CPAHD-BSA)免疫BALB/c小鼠,通过间接酶联免疫吸附法(ELISA)测定小鼠血清抗体效价为1:32 000。用间接竞争ELISA鉴定抗体特性,结果显示:抗体对AHD与对硝基苯甲醛的衍生物(NPAHD)的灵敏度高,IC50为30.63μg/L,特异性好,与CPAHD有部分交叉反应外,与其他3类硝基呋喃类药物及代谢产物无交叉反应(交叉反应率<0.01%)。结果表明,用CPAHD-BSA作免疫原免疫小鼠可诱导产生针对AHD衍生物(NPAHD)的特异性抗体,为进一步制备AHD单克隆抗体和研制快速筛选检测试剂盒奠定了基础。

双标记1-氨基乙内酰脲盐酸盐-(2-^(13)C,^(15)N_3)的合成

以氨基脲盐酸盐-(2-13C,15 N3)为原料,经与苯甲醛缩合,在乙醇钠催化作用下,与氯乙酸乙酯缩合环化制得1-苯亚甲基氨基乙内酰脲,最后盐酸水解,制得1-氨基乙内酰脲盐酸盐-(2-13 C,15 N3)。合成路线优势在于反应条件温和,产物总收率高于65%。产品经IR、HPLC、NMR和MS表征结果表明:化学纯度>98.4%,13C同位素丰度>98%,15 N同位素丰度>99%。

1-氨基乙内酰脲芳香醛类席夫碱的有效合成

以1-氨基乙内酰脲与芳香醛为原料,合成了6种1-氨基乙内酰脲芳香醛类席夫碱,收率为72．6%-89．2%,并对其反应条件进行了优化,得出在回流温度下,1-氨基乙内酰脲与芳香醛的投料摩尔比为1∶1（对苯二甲醛为2∶1）时反应1．5~2h产率最高。通过IR、1 HNMR和元素分析表征了目标化合物的结构。

呋喃妥因代谢物海特因单克隆抗体的制备

通过制备单克隆抗体能够高效准确的检测呋喃妥因代谢物海因特。把间羧基苯甲醛跟海特因的衍生物接到牛血清白蛋白上作为免疫原,接到卵清蛋白上作为检测抗原,制备了特异的单克隆抗体。利用7号细胞株产生的抗体,Elisa检测海特因的邻硝基苯甲醛衍生物,灵敏度达到0.1 ng/m L,对呋喃唑酮的代谢物AOZ、呋喃它酮的代谢物AMOZ、呋喃西林的代谢物SEM的邻硝基苯甲醛衍生物交叉反应性<0.1%。

利用单克隆抗体检测呋喃妥因代谢物海特因方法的研究

[目的]建立敏感、快速、特异的呋喃妥因代谢物海特因的检测方法。[方法]通过将间羧基苯甲醛和海特因的衍生物接种到牛血清白蛋白上免疫Balb/C小鼠,应用杂交瘤技术制备单克隆抗体,采用ELISA检测海特因的邻硝基苯甲醛衍生物。[结果]采用ELISA检测海特因的邻硝基苯甲醛衍生物,灵敏度达到0.1 ng/ml。制备的单克隆抗体具有特异性高、灵敏的优点。[结论]该研究可为酶联免疫试剂盒的研制奠定基础。

水杨醛缩1-氨基乙内酰脲的晶体结构及其金属配合物的合成与表征

在甲醇与冰醋酸的混合溶剂中通过溶剂蒸发法得到了水杨醛缩1-氨基乙内酰脲的单晶,通过X射线单晶衍射法测定了单晶结构。标题化合物(C48H48N12O20),晶胞参数:a=14.247(12)A,b=7.092(6)A,c=13.302(11)A,α=90.0°,β=108.361(11)°,γ=90.0°,V=1275.6(19)A3,Z=1,R=0.0602,wR=0.1667。该化合物是一种靠分子间氢键形成的立体层状结构的超分子化合物。水杨醛缩1-氨基乙内酰脲中的氧原子及氮原子都具有孤对电子,因而具有与金属离子配位的可能。合成出了4种水杨醛缩1-氨基乙内酰脲的过渡金属配合物,通过元素分析、IR及UV表征了配合物的结构。

1-[5-(4-氯苯基)呋喃甲亚基氨基]海因的合成研究

以对氯苯胺为原料,经重氮化反应、置换反应制得5-(4-氯苯基)-2-呋喃甲醛(2);以水合肼(50%)为原料,经缩合反应、环合反应及水解反应制得1-氨基海因盐酸盐(4);化合物2与4经缩合反应合成Azimilide盐酸盐的关键中间体1-[5-(4-氯苯基)呋喃甲亚基氨基]海因(1)。总收率为34.4(%以对氯苯胺计),纯度为99.3%(HPLC)。

高效液相色谱串联质谱法测定水体中氨基脲、5-甲基吗啉-3-氨基-2-恶唑烷基酮、1-氨基乙内酰脲和3-氨基-2-唑烷基酮

建立了高效液相色谱三重四极杆串联质谱检测水体中痕量氨基脲(SEM)、5-甲基吗啉-3-氨基-2-恶唑烷基酮(AMOZ)、1-氨基乙内酰脲(AHD)和3-氨基-2-唑烷基酮(AOZ)的分析方法。水样在pH 1.5～3条件下衍生8 h,经乙酸乙酯萃取,氮吹浓缩,流动相溶解后,内标法定量。分析条件为:CAPCELLPAK C18色谱柱,以甲醇和2 mmol/L乙酸铵(含0.1%甲酸)溶液为流动相进行梯度洗脱。结果表明:AMOZ、AHD和AOZ在0.005～1μg/L范围内,SEM在0.01～1μg/L范围内呈现良好的线性关系,相关系数均大于0.9980。AMOZ、AHD和AOZ的定性检测限和定量检测限为分别为0.0025μg/L和0.005μg/L;SEM的定性检测限和定量检测限为分别为0.005μg/L和0.01μg/L。4种化合物在水体中3个不同浓度添加水平下的平均回收率为84.9%～110.4%,相对标准偏差为1.2%～7.8%。方法可用于分析环境水体中4种化合物的残留。

呋喃妥因代谢物AHD单抗的制备及鉴定

将呋喃妥因代谢物1-氨基-乙内酰胺脲(AHD)的衍生物1-氨基乙内酰脲-4-羧苯基肟(CPAHD)分别与牛血清蛋白(BSA)和Jeffamine修饰的卵清蛋白(OVA)偶联,经紫外光谱扫描鉴定,成功合成了免疫抗原CPAHD-BSA和包被抗原CPAHD-Jeffamine-OVA。应用杂交瘤技术将免疫鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,获得了稳定分泌抗4-NPAHD单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为B10E7。使用本细胞株制备的McAb对4-NPAHD的半数抑制质量浓度(IC50)为3.65 ng/mL,与同类抗生素及其代谢物未发现交叉反应,显示高度的灵敏性和特异性。本抗体的研制为建立间接竞争酶联免疫方法奠定了基础。

氨基乙内酰脲类BACE1抑制剂的特征结构与作用机制

对BACE1抑制剂的研究与开发已成为目前治疗阿尔兹海默症的主要研究方向之一。本文选取105个氨基乙内酰脲类BACE1抑制剂作为研究对象,借助比较分子相似性指数(Comparative Molecular Similarity Index,CoMSIA)和分子对接方法建立定量构效关系预测模型,研究影响化合物抑制活性的特征结构信息,揭示该类抑制剂与靶标之间的作用模式。结果表明,模型具有较强的预测能力(Q^2=0.45,R^2ncv=0.87,R^2pre=0.85),抑制剂主要占据了靶标的S3、S1和S2′位点,其主要作用力类型为氢键力。实验所得模型和信息可为日后研究开发新型高效的BACE1抑制剂提供一定的理论指导,节省研究时间与费用。