唐氏筛查临界风险的非高龄孕妇有必要行无创性产前检测：6804例结果分析

目的探讨无创性产前基因检测技术对血清学筛查阳性的非高龄孕妇血浆胎儿游离DNA进行染色体非整倍体检测的有效性。方法选择2011年10月~2018年6月于佛山市妇幼保健院行无创性产前基因检测的6804例非高龄孕妇(预产期年龄<35岁)为研究对象,孕周:12~24周,预产期年龄:21~34岁,均为单胎。按照血清学指标分为高风险组和临界风险组,血清学筛查高风险组3763例(21三体风险值≥1/270或18三体风险值≥1/350),临界风险组3041例(1/1000≤21三体风险值<1/270或1/1000≤18三体风险值<1/350)。对无创性产前基因检测结果阳性的孕妇行羊膜腔穿刺或脐静脉血穿刺,行常规染色体核型分析和/或高通量测序检测。对所有检测孕妇行电话随访,并统计分析无创性产前基因检测的准确性在两组差别有无统计学意义。结果6801例成功完成无创性产前基因检测,3例样本由于血浆游离DNA浓度过低检测失败。3761例血清学筛查高风险组中产前基因检测染色体拷贝数异常高风险者共70例,其中53例行进一步产前诊断,结果显示高风险组无创性产前检测技术对21三体检测的灵敏度为95.65%,特异度99.91%,阳性预测值88.0%,假阳性率0.09%,假阴性率4.35%;对18三体检测的灵敏度100%,特异度100%,阳性预测值100%,假阳性率0,假阴性率0。对13三体检测的假阳性率0.09%,假阴性率0;对性染色体异常检测的灵敏度100%,特异度99.80%,阳性预测值30.0%,假阳性率0.2%,假阴性率0;对其他染色体异常检测的灵敏度100%,特异度99.88%,阳性预测值16.60%,假阳性率0.18%,假阴性率0。3040例血清学筛查临界风险组产前基因检测染色体拷贝数异常高风险者共54例,其中的36例行进一步产前诊断,结果显示临界风险组孕妇无创性产前检测技术对21三体检测的灵敏度为100%,特异度100%,阳性预测值100%,假阳性率0,假阴性率0;对18三体检测的假阳性率0.11%,假阴性率0。13三体检测的假阳性率0.04%,假阴性率0;对性染色体异常检测的灵敏度100%,特异度99.79%,阳性预测值50%,假阳性率0.21%,假阴性率0;对其他染色体异常检测的假阳性率0.18%,假阴性率0。高风险组和临界风险组对21三体和性染色体非整倍体检测敏感度、特异度,假阳性率,阳性预测值差别均无统计学意义(P>0.05)。结论唐氏筛查高风险但拒绝产前诊断和临界风险的非高龄孕妇很有必要进一步行无创性产前检测。该技术检测胎儿染色体非整倍体具有高敏感度和特异度,假阳性率和假阴性率很低。

胎儿染色体非整倍体无创产前基因检测技术在周口市的临床应用分析

目的探讨胎儿染色体非整倍体无创产前基因检测(non-invasive prenatal testing,NIPT)技术在周口市胎儿染色体非整倍体疾病筛查中的临床应用。方法选取2014年1月-2015年11月间,在周口市中心医院进行唐氏综合征筛查结果提示高风险(RISK>1/275)、高龄孕妇(孕龄≥35岁)、有既往不良孕产史以及超声检查提示胎儿异常的共计829例孕妇,进行胎儿染色体非整倍体无创产前基因高通量测序分析,结果提示高风险的孕妇手术抽取羊水后核型分析。结果 612例唐氏筛查高风险孕妇组经外周血胎儿游离DNA检测结果提示高风险者共计7例(6例21-三体、1例18-三体);169例高龄孕妇组共检出1例18-三体结果高风险者;7例既往不良孕产史孕妇组检出1例21-三体结果高风险者;41例超声检查提示胎儿异常孕妇组共检出2例结果高风险(1例21-三体、1例13-三体)。NIPT结果提示21、18、13-三体异常高风险孕妇分别为8例、2例、1例,进一步行染色体核型分析的确诊例数分别为:8例、2例、1例,结果证实NIPT用于检测胎儿21-三体、18-三体、13-三体的敏感度为100%,特异度为100%,准确率100%,与染色体核型分析结果一致。结论周口市孕妇外周血游离胎儿DNA高通量测序分析可用于胎儿常见染色体非整倍体疾病的筛查,敏感度高、特异度强、准确率高应推广临床应用。

柑橘原生质体非对称融合植株再生及鉴定(英文)

用 3.8krad/min的X射线辐射伏令夏甜橙 (CitrussinensisOsb .)原生质体 45min ,0 .2 5mmol/L碘乙酸处理Murcott橘橙 (C .reticulata×C .sinensis)原生质体 15min ,电场诱导两种原生质体融合。融合再生的愈伤组织培养近15个月后再生出胚状体 ,而且只能在MT +2 %甘油的培养基中再生。根尖和茎尖染色体检查表明 ,在再生植株中主要是二倍体细胞和非整倍体细胞 ,只在部分植株中观察到少数四倍体细胞。采用 10_mer随机引物进行RAPD分析 ,在再生植株中都能检测到融合亲本的特征带 ,表明通过非对称融合获得了柑橘种间体细胞杂种植株。

长春仙碱诱发果蝇生殖细胞非整倍体的研究

本研究以黑腹果蝇ＯｒｅｇｏｎＫ品系评价了长春仙碱（ＶＢＬ）在果蝇生殖细胞中的非整倍体诱发效应，秋水仙素（ＣＯＬ）为本实验的阳性对照，５％蔗糖溶液为溶剂对照。羽化后１－２天的雌、雄成虫口饲染毒后，分别与未染毒异性个体交配，分析Ｆ１代例外子代频率。结果发现：ＶＢＬ在三个剂最组（３－１０ｕｇ／ｍｌ）均显著诱发果蝇生殖细胞非整倍体，使ＸＸＹ及ＸＯ例外子代频率显著升高（Ｐ＜０．００１－０．０５），ＣＯＬ于所有受试组（２．５－２０ｕｇ／ｍｌ）中，亦显著诱发生殖细胞非整倍体（Ｐ＜０．００１－０．０５＝。试验表明：ＶＢＬ在果蝇生殖细胞形成过程中，可导致性染色体的丢失和不分离，但雌性果蝇对ＶＢＬ的灵敏性较差。

骨髓转移癌29例临床及细胞学特点分析

目的分析骨髓转移癌的临床特征及实验室检查特点。方法对以骨髓转移癌为首发表现的29例患者的临床表现及实验室检查结果进行综合分析。结果骨痛为最常见症状;常见的血象异常包括贫血、血小板减少、外周血涂片出现幼红、幼粒细胞;碱性磷酸酶可异常升高。骨髓细胞学检查均找到数量不等的癌细胞团和(或)单个散落的癌细胞,多见于片尾及边缘。骨髓细胞染色体检查发现非整倍体检出率高,每例细胞染色体数目差异大,同时伴有结构异常。结论骨髓细胞学检查及骨髓细胞染色体检查在以骨髓转移癌为首发表现患者的诊断和鉴别诊断中有重要意义,出现原因不明的贫血、发热、出血及骨痛,外周血出现幼红、幼粒细胞,碱性磷酸酶及肿瘤标志物升高等,应考虑骨髓转移癌的可能。

香蕉胚性悬浮细胞分化能力及染色体数目变异研究

以野生阿宽蕉(Musa itinerans Cheesman,AA)、抗枯1号(Kangku 1,AAA)、大蕉(Musa ParadidiacaL.,ABB)3个香蕉品种为试材,研究其胚性悬浮细胞在长期继代培养后的分化能力和染色体数目的变异。结果表明,3个香蕉品种ECS在继代培养过程中,胚性悬浮细胞染色体数目均不稳定,染色体数目从6个到116个不等,各ECS均为整倍体和非整倍体组成的混倍体,随继代次数的增加,染色体数目变异的细胞比例随之增多,体细胞胚胎分化能力逐渐下降。野生阿宽蕉、抗枯1号和大蕉的ECS继代培养1.5 a后,细胞变异率分别为96.3%、93.0%和94.0%,而体胚分化能力分别为0.96×103、0.55×103、0.65×103个/mL PCV。试验为进一步研究香蕉ECS染色体变异机理提供新的线索。

流式细胞仪在口腔颌面部肿瘤良、恶性诊断中的应用

目的:通过流式细胞仪对肿瘤DNA倍体及S期细胞增殖率的检测,探讨其对口腔颌面部肿瘤良、恶性诊断的可靠性。方法:对131例口腔颌面部良性、临界瘤及恶性肿瘤新鲜组织行流式细胞仪分析。结果:良性肿瘤组未检出DNA异倍体;混合瘤(临界瘤)组4例检出异倍体,提示有恶变倾向;恶性肿瘤异倍体的检出率最高为100%,S期增殖率也最高。结论:DNA异倍体的出现可以认为是癌变的标志,临界瘤中检出DNA异倍体预示有癌变倾向。S期增殖率为恶性肿瘤增殖的指标。

荧光原位杂交技术在诊断胎儿非整倍体疾病中的应用

目的探讨荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)诊断未培养羊水细胞非整倍体的临床应用价值。方法采用着丝粒探针、专一序列探针(13、18、21、X、Y)对99例进行产前诊断孕妇的羊水细胞进行FISH检测,并与常规细胞遗传学(CC)相比较。结果进行产前诊断的99例孕妇,CC检测其羊水细胞诊断出两例染色体异常患儿,分别是1例47,XX,+21和1例47,XY,+21,FISH与CC结果一致。结论 FISH对未培养羊水细胞非整倍体的检测有快速、准确、用量少的优势,可达到产前诊断要求,可用于产前诊断的临床应用。

一例胎儿微小额外标记染色体46,X,+mar羊水样本的遗传学检测分析

目的通过染色体非整倍体分析和Y染色体STR分析,对一例染色体核型为46,X,+mar的羊水标本进行遗传学分析。方法采用多重荧光定量聚合酶链反应(QF-PCR)进行常见染色体非整倍体检测;利用AGCU Y-STRs多重荧光复合扩增分析系统检测DYS391等22个STR位点。结果羊水标本在13、18、21号染色体基因座上,为峰高1∶1的双峰或两倍峰高的单峰,AMELY、XY3基因座的STRs峰高两倍于X染色体基因座峰高。AGCU YSTR多重荧光复合扩增分析系统检测结果显示,其父亲外周血在22个Y-STR位点上均检测到单峰。胎儿羊水标本在DYS456、DYS458、DYS393、DYS19、DYS522五个基因座上检测到单峰,其余17个基因座未检测到扩增产物。在以上五个基因座上,其基因型均与父亲一致。结论羊水标本性别染色体Y和X比例为2∶1,Y染色体有部分缺失,Y染色体上5个基因座的基因型来源于父亲。

C——有丝分裂细胞图象分析初探

本文以秋水仙素腹腔注射昆明种小白鼠,经常规骨髓细胞染色体制片后,用图像分析仪显微分析了小白鼠骨髓淋巴细胞染色体长度和角度变化,综合了人为分类及量化分类两个系统。旨在明确二者之间的吻合度;该实验的结果可作为分析秋水仙素及其类似的有丝分裂抑制剂对小鼠体细胞分裂抑制程度的指标,为检测体细胞非整倍体诱发剂提供依据。实验证明:人为分类可由准确,快速的图象分析所代替。

三种有丝分裂抑制剂诱发小鼠骨髓细胞非整倍体的比较研究

以秋水仙素有丝分裂(CM)效应、微核(MN)及染色体畸变(CA)三种体内细胞遗传学指标综合评估了有丝分裂抑制剂(秋水仙素、益康唑及对苯二酚)诱发小鼠骨髓细胞非整倍体的效应。结果表明:秋水仙素是典型的多倍体及非整倍体诱发剂。益康唑对细胞有丝分裂有与秋水仙素相类似的效应,进一步分析表明其在哺乳动物体细胞内无非整倍体诱发效应。对苯二酚在哺乳动物活体实验系统中,可能具有诱发非整倍体及染色体结构畸变的多种遗传毒性。结果提示三种细胞遗传学指标能为非整倍体诱发剂的检出提供依据。

昆明山海棠对中国仓鼠V79细胞核/质分裂协调性的影响

本研究以哺乳动物非整倍体诱发剂昆明山海棠根部水抽提物（ＴｒｉｐｔｅｒｙｇｉｕｍＨｙｐｏｇｌａｕ－ｃｕｍ（Ｌｅｖｅｌ）Ｈｕｔｃｈ，ＴＨＨ）处理中国仓鼠Ｖ９７细胞，通过检测Ｖ７９细胞末期和早Ｇ１期核／质构型变化和双核间期细胞的频率，分析了ＴＨＨ对哺乳动物细胞质分裂的影响。结果指出：ＴＨＨ能显著诱发Ｖ７９细胞的异常质裂（Ｐ＜０．００１），并明显的提高双核细胞的频率（Ｐ＜０．００１－０．０５）。结合以往的工作，提示ＴＨＨ不仅对哺乳动物染色体正常分离有直接的影响，同时对细胞质的正常分裂也具有显著抑制作用。受试物可能通过多途径诱发哺乳动物非整倍体。

全自动图象细胞仪在膀胱移行细胞癌尿细胞学诊断中的应用及临床意义

目的探讨全自动图像细胞仪对尿脱落细胞DNA异倍体的检测在膀胱肿瘤诊断中的价值及临床意义。方法采用全自动图像细胞仪对40例膀胱移行细胞癌(BTCC)患者和20例良性血尿患者尿样中脱落细胞进行DNA定量分析,同时行常规尿细胞学检查。结果BTCC患者尿液脱落细胞经常规尿细胞学和全自动图像细胞仪检查,阳性率分别为27.5%(11/40)和67.5%(27/40),20例良性血尿患者尿液标本经2种方法检查均为阴性。DNA倍体在膀胱移行细胞癌患者的尿液中为(7.08±2.34)c,在非膀胱移行细胞癌患者的尿液中为(2.95±3.06)c,P<0.01;临床分期Tis^T1为(6.29±3.61)c,T2~T3为(8.55±4.16)c,病理分级Ⅰ级为(5.85±1.72)c,Ⅱ级为(7.24±2.01)c,Ⅲ级为(9.25±1.81)c,DNA含量随着分期分级的增加而增加。结论应用全自动图像细胞仪对BTCC患者尿脱落细胞DNA的定量分析能够反映患者尿细胞中的恶性变化,可以作为BTCC诊断的辅助技术。

甲状腺疾病细胞DNA倍体分析

目的探讨甲状腺疾病细胞DNA倍体及异倍体的临床意义。方法收集本院手术中快速冰冻切片甲状腺新鲜标本作细胞印片,采用Fealgon染色,用DNA分析仪扫描30例甲状腺肿,8例甲状腺炎,23例甲状腺肿瘤的DNA倍体及异倍体。结果甲状腺肿30例,发现9例出现DNA倍体异常细胞;甲状腺炎8例,发现2例DNA倍体异常细胞;甲状腺肿瘤23例,发现14例倍体异常细胞;30%甲状腺肿细胞DNA表现为异常;60%甲状腺肿瘤细胞DNA倍体表现为异常;25%甲状腺炎细胞DNA表现为异常。结论甲状腺细胞DNA倍体分析可为判断甲状腺疾病提供一定的参考价值。

肾透明细胞癌中Ki-67指数、EGFR表达及DNA倍体的临床意义

目的:探讨肾透明细胞癌中Ki-67指数、EGFR表达及DNA倍体的临床意义。方法:经病理确诊的肾透明细胞癌66例患者的手术标本,用免疫组化染色法检测Ki-67指数及EGFR表达,流式细胞术检测DNA倍体,并分析其与临床病理特征之间的关系。结果:肾透明细胞癌Ki-67阳性细胞占59.4%(38/64),Ki-67指数与肿瘤分级(P<0.05)、DNA倍体异常(P<0.05)显著相关,与EGFR表达无相关性。EGFR蛋白表达阳性率为86.2%(56/65),其胞浆表达与肿瘤分级呈正相关(P<0.05);其胞膜和膜浆混合表达没有发现相关性。检测45例DNA倍体,31例(68.9%)为异倍体。结论:透明细胞癌中Ki-67指数和EGFR与肿瘤分级密切相关,提示Ki-67和EGFR有可能成为临床判断预后的重要分子指标。DNA异倍体与Ki-67指数显著相关,提示DNA也可能提示肾透明细胞癌临床预后。联合检测上述3种指标,并与临床指标结合,将能更准确地判断预后并指导临床治疗。EGFR在肾透明细胞癌中的高表达,使其可能成为个体化治疗的靶向分子。

小儿急性白血病免疫表型和骨髓细胞DNA含量及其相互关系的分析

目的 了解小儿急性白血病（ＡＬ）的免疫表型、异倍体、细胞周期分布状况及其之间的关系。方法 应用流式细胞仪检测了４２ 例初诊为ＡＬ患儿的免疫表型及骨髓单个核细胞（ＭＮＣ）的ＤＮＡ含量。结果 ４例ＡＬ患者同时表达了Ｂ系和髓系的抗原，预后差。ＡＬ患儿骨髓细胞周期的Ｓ期细胞百分率明显低于正常对照。而且，ＡＬＬ组中，亚二倍体患者的Ｓ期细胞百分率均值与超二倍体患者、二倍体患者比较存在显著差异性，ＡＮＬＬ组中，ＣＤ３３ ／ＣＤ１３ ＜ １ 患者的Ｓ期细胞百分率均值与ＣＤ３３ ／ＣＤ１３ ＞ １ 患者比较亦存在显著差异。结论 ＡＬ患儿的免疫表型、倍体关系、细胞周期及其之间的关系，与临床预后密切相关。

细胞核内特征值的改变可引起DNA倍体的变化

目的通过测定不同DNA倍体细胞,研究细胞核内特征值的改变。方法用宫颈刷刷出宫颈细胞,经固定后,用涂片离心机制成二张玻片,一张行巴氏染色作TBS诊断,另一张行Feulgen染色做DNA定量测定。通过对宫颈细胞核图像内像素的统计,计算出细胞核内多种特征值,比较不同DNA倍体细胞内特征值的不同。结果 161873例妇女行宫颈细胞学检查,常规细胞学检查发现2454例低级别鳞状上皮内病变(low-grade squamous intraepithelial lesion,LSIL)和523例高级别鳞状上皮内病变(high-grade squamous intraepithelial lesion,HSIL);而DNA倍体分析发现3412例有3个以上>5c细胞。84%以上的LSIL和HSIL病例均可见倍体异常细胞。与2c细胞相比,4c、5c、7c及9c细胞核面积及核半径明显增大;7c、9c细胞核内平均光学密度和紧实度均值也有明显改变,而光密度方差和灰度熵无变化。结论宫颈细胞DNA倍体改变往往伴有细胞形态和DNA核内分布等特征值的改变。

口腔中重度异常增生及癌症病变中异倍体细胞的研究

目的:比较口腔红斑和白斑处组织病理学诊断和上皮细胞内DNA倍体分析结果,研究口腔中、重度异常增生及癌变组织中异常体细胞及细胞核内DNA分布区的变化。方法:用小刷刷取口腔红斑或白斑处的上皮细胞,经固定后,涂片离心机制成1～2张玻片,行Feulgen染色做DNA倍体测定。同时在可疑处做活检行组织病理检查。比较病理和DNA倍体测定结果,同时测定口腔上皮细胞核内DNA分布区的变化。结果:46例病例中,病理证实为27例无异常增生、6例轻度异常增生、7例中度异常增生、5例重度异常增生和1例浸润癌。DNA倍体分析在无异常增生和轻度异常增生病例中未见DNA倍体异常;除1例外,另12例中、重度异常增生和浸润癌均可见DNA倍体异常。对12例口腔异倍体细胞定量测定发现5c(7±2.6)%、7c(11±4.3)%和9c(16±5)%细胞核内高DNA分布区明显较2c细胞(2±1.2)%增多(P﹤0.05)。结论:口腔中、重度异常增生和浸润癌的病例多可出现DNA倍体异常;DNA倍体异常细胞伴有核内高DNA分布区增大。

DNA定量分析可用于宫颈癌及癌前病变的早期筛查

目的:比较DNA定量分析方法与常规细胞学在宫颈癌及癌前病变筛查的灵敏度。方法:对胜利油田1646例妇女用宫颈刷取材,液基薄层制片。巴氏染色做常规细胞学检查,DNA染色做全自动DNA倍体分析。对经常规细胞学和DNA倍体分析系统检查可疑的妇女在阴道镜下行宫颈组织学活检。结果:常规细胞学检查发现36例(2.2%)异常,包括15例(0.91%)ASCUS、11例(0.66%)LSIL和10例(0.61%)HSIL。DNA倍体分析系统发现36例(2.2%)异常。26例妇女行宫颈组织学活检发现13例CINⅢ/CIS、5例CINⅡ。以病理诊断结果为标准,DNA定量分析系统发现3个以上>5倍体细胞为标准筛查CINⅡ以上宫颈病变的灵敏度为72.2%,而常规细胞学方法则为61.1%。讨论:用DNA定量分析方法对宫颈癌及癌前病变进行筛查的灵敏度高于常规细胞学方法高。

口腔肿瘤的预后与肿瘤细胞异倍体关系

目的研究口腔肿瘤预后与异倍体细胞的关系。方法口腔肿瘤切除后,将肿瘤组织在玻片印1-2张。经Feulgen染色,用DNA图像分析系统分析DNA含量。将DNA倍体分析异常结果分为3级,Ⅰ级为少数>5c异倍体细胞,Ⅱ级可见1个异倍体细胞峰,Ⅲ级可见多个异倍体细胞峰。其余肿瘤组织做病理分型分期。结果 30例口腔肿瘤按转移情况分为Ⅰ级19例,Ⅱ级6例和Ⅲ级5例。在19例Ⅰ级病例中,有12例(12/19)DNA倍体分析发现有>5c异倍体细胞峰。30例口腔肿瘤按病理分化程度分为16例高分化,9例中等分化和5例低分化程度。在16例高分化病例中,有11例(11/16)可见>5c异倍体细胞而无异倍体细胞峰。14例中等或低分化病例中,有12例可见DNA异倍体细胞峰。结论口腔肿瘤细胞异倍体细胞数量及细胞峰型与肿瘤分期和分化程度有关,即异倍体细胞越多,预后越差。