青葙子对“2K1C”肾血管性高血压大鼠血压及血浆Ang Ⅱ的影响

目的观察青葙子对肾血管性高血压大鼠的血压及血浆血管紧张素I(IAng II)的影响。方法利用两肾一夹(2K1C)法建立肾血管性高血压大鼠模型,模型组给予青葙子5.25g/kg、一日一次,灌胃4周;对照组给予生理盐水同法处理。4周后用无创血压测量方法(尾套法)、颈动脉插管法测血压,酶联免疫分析法测定大鼠血浆Ang II的变化。结果干预后,青葙子组与对照组颈动脉压(SBP和mCAP)、Ang II水平均无显著差异(P>0.05)。两组大鼠干预后与干预前的尾动脉压差值比较以及同一组大鼠自身干预前与干预后的血压比较,均无显著差异(P>0.05)。结论在5.25g/kg的给药剂量和灌胃4周的疗程上,未见青葙子对2K1C型肾血管性高血压大鼠血压及血浆Ang II水平产生影响。

TO90可通过ACE2/Ang-(1-7)/MAS受体轴减轻Ang Ⅱ诱导人视网膜色素上皮细胞产生的炎症反应

目的探讨TO90与ACE2/Ang-(1-7)/MAS受体轴在血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导的人视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelium cells,ARPE-19)炎症反应中的关系.方法体外培养ARPE-19细胞,首先将其分为空白对照组及AngⅡ模型组(1μmol/L AngⅡ刺激细胞48 h),Real-time PCR与ELISA检测慢性低度炎症因子IL-6、IL-8、MCP-1的表达,判断是否成功建立炎症模型.随后将ARPE-19细胞分为AngⅡ模型组与TO90+AngⅡ治疗组,重复之前步骤检测慢性低度炎症因子IL-6、IL-8、MCP-1表达;Real-time PCR及Western blot检测ACE2及MAS受体表达,探究TO90在AngⅡ炎症模型中的作用.最后将ARPE-19细胞分为AngⅡ模型组、TO90+AngⅡ治疗组、A779(MAS受体抑制剂)+TO90+AngⅡ抑制剂组以及A779+AngⅡ抑制剂对照组,Real-time PCR、ELISA及Western blot重复之前步骤检测慢性低度炎症因子IL-6、IL-8、MCP-1、ACE2及MAS受体的表达,进一步验证TO90在AngⅡ炎症模型中的作用.结果 AngⅡ刺激ARPE-19细胞后,IL-6、IL-8及MCP-1在mRNA及蛋白水平表达升高(P<0.05),TO90预处理ARPE-19细胞能显著减少IL-6、IL-8及MCP-1在mRNA及蛋白水平的表达(P<0.05),同时升高ACE2及MAS受体表达水平(P<0.05).A779抑制后,与TO90+AngⅡ治疗组相比,IL-6、IL-8及MCP-1在mRNA及蛋白水平表达量均显著升高(P<0.05),ACE2及MAS受体表达水平降低(P<0.05).结论 TO90通过ACE2/Ang-(1-7)/MAS受体轴减轻AngⅡ诱导人视网膜色素上皮细胞产生的炎症反应.

Design and synthesis of 2-alkylbenzimidazole derivatives as novel non-peptide angiotensin Ⅱ AT1 receptor antagonists

A series of 2-alkylbenzimidazole derivatives 9a-n have been designed and synthesized as a novel class of non-peptide angiotensin Ⅱ AT1 receptor antagonists. The synthesized compounds were evaluated for their antagonism of angiotensin Ⅱ, induced contraction in the rabbit thoracic aortic ring and the results showed that compounds 9a, 9g and 9j exhibited potent antagonistic activity of AT1 receptor.

射频消融术后有氧运动对房颤患者ACE2、Ang Ⅱ、Ang-(1-7)表达及预后影响

目的探究射频消融术后有氧运动对房颤患者血清血管紧张素转换酶2(ACE2)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、血管紧张素-1-7(Ang-(1-7))表达及预后的影响。方法选取2017年5月至2019年11月在中国人民解放军西部战区总医院心内科行射频消融术的72例阵发性房颤患者,按数字表随机分为研究组(36例)和对照组(36例)。两组术后均接受基础药物治疗,研究组患者从术后第3 d开始进行有氧运动干预,对照组仅进行有氧运动健康宣教,不进行规律有氧运动,持续1年后观察疗效。比较两组房颤发生、心功能指标、炎症反应指标及血清ACE2、AngⅡ、Ang-(1-7)表达情况,并统计术后干预不同时间窦性心律维持率。结果干预1年后,研究组房颤发作次数少于对照组,持续时间短于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。两组左心室射血分数(LVEF)、6 min步行试验(6MWT)和血清ACE2、Ang-(1-7)表达水平均升高,左心房内径(LAD)、舒张末期室间隔厚度(IVST)及血清超敏C反应蛋白(hs-CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、AngⅡ水平均降低(P<0.05);且研究组各指标均明显优于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。研究组窦性心律维持率83.33%,显著高于对照组的61.11%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论射频消融术后进行有氧运动有助于尽快改善房颤患者症状,提高患者心功能,减轻机体炎症反应,纠正体内ACE2、AngⅡ、Ang-(1-7)表达水平,降低复发率。

电针“百会”“太冲”对自发性高血压大鼠主动脉Ang Ⅱ、Ang(1-7)蛋白表达的影响

目的观察电针"百会""太冲"对SHR主动脉血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、血管紧张素(1-7)[Ang(1-7)蛋白表达的影响,以主动脉AngⅡ、Ang(1-7)蛋白为切入点,研究其可能的机制。方法选取12周龄雄性自发性高血压大鼠(SHR)24只,随机分为电针组(EA)和模型组(SHR),Wistar-Kyoto(WKY)大鼠12只作为空白对照组(WKY),每日上午针刺电针组"百会"与双侧"太冲"穴,并将电针仪的正负极分别连于"百会"、右侧"太冲"穴,电流强度1 mA,频率2 Hz/15 Hz,留针20 min,连续针刺30 d。空白组和模型组每天进行与电针组相同的抓捉固定刺激。用无创血压仪检测各组大鼠尾动脉收缩压,HE染色后观察其组织形态,并用计算机图像分析系统测定主动脉血管中膜面积(MA)以及血管壁厚(WT)、血管内径(LD),计算LD/WT比值。用ELISA法检测主动脉组织AngⅡ、Ang(1-7)的蛋白含量并进行统计学分析。结果 1)模型组收缩压较正常组显著升高(P <0.01),电针组收缩压较模型组显著降低(P <0.01)。2)模型组较正常组WT明显增厚(P <0.01)、LD明显缩小(P <0.01)、LD/WT比值明显增大(P <0.01)、MA明显增大(P <0.05)。电针组较模型组WT明显缩小(P <0.01)、LD明显增大(P <0.01)、LD/WT比值明显减小(P <0.01)、MA面积明显缩小(P <0.01)。3)ELISA结果显示,与正常组相比较,模型组主动脉组织AngⅡ蛋白表达显著升高(P <0.01),Ang(1-7)蛋白表达显著降低(P <0.01),AngⅡ/Ang(1-7)比值显著增大(P <0.01)。与模型组相比较,电针组主动脉组织AngⅡ蛋白表达明显降低(P <0.01),Ang(1-7)蛋白表达显著升高(P <0.05),AngⅡ/Ang(1-7)比值显著缩小(P <0.01)。结论电针"百会""太冲"可有效改善SHR主动脉血管重塑,保护主动脉,其机制可能是电针通过激活主动脉局部RAS系统ACE2-Ang(1-7)-Mas受体轴,促进Ang(1-7)蛋白表达,抑制AngⅡ蛋白表达来实现。

血管紧张素转化酶2对Ang Ⅱ诱导的牛乳腺上皮细胞炎症损伤的缓解作用

以不同浓度血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导牛乳腺上皮细胞(MAC-T)炎症损伤,探讨血管紧张素转化酶2(ACE 2)的变化及与AngⅡ的相互作用。研究包括:ELISA检测细胞上清中细胞炎性因子的分泌或释放;Western blot检测细胞ACE 2和ACE的蛋白表达变化,并进行相关性分析;添加ACE 2活性蛋白对AngⅡ诱导损伤的保护作用。结果显示:1)AngⅡ处理MAC-T,细胞上清中促炎因子TNF-α、IL-6、IL-8含量显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)增加,抗炎因子IL-10含量显著降低(P<0.05);2)不同浓度AngⅡ处理细胞后,ACE 2蛋白表达均有降低,10-6 mol·L^-1 AngⅡ处理后显著降低(P<0.05);ACE蛋白表达结果相反;ACE 2与AngⅡ浓度之间存在显著负相关;3)添加外源性ACE 2活性蛋白,细胞上清中TNF-α、IL-6和IL-8浓度均有一定程度的下降,IL-10浓度升高。本研究表明ACE 2/ACE轴的失衡是AngⅡ诱导细胞炎性损伤的主要原因。高水平AngⅡ可激活炎症因子促进炎症反应,是促进炎症反应的主要介质,ACE 2可以通过降解AngⅡ,抑制其对炎症反应的上调效应。

阿利吉仑抑制糖尿病肾病大鼠血管紧张素Ⅱ/血管紧张素1-7(Ang Ⅱ/Ang1-7)信号途径

目的探讨阿利吉仑(AL)对于糖尿病肾病(DN)大鼠肾组织局部血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)/血管紧张素1-7 (Ang1-7信号轴的调控作用。方法雄性SD大鼠40只,随机分为正常对照组、糖尿病组(模型组)、AL处理组、缬沙坦(Val)处理组,每组10只。采用高脂饮食加小剂量链脲佐菌素方法建立DN模型,AL处理组给予50 mg/(kg·d) AL灌胃,Val处理组大鼠给予30 mg/(kg·d) Val灌胃。造模后2、4、6周,考马斯亮蓝比色法测定大鼠24 h尿蛋白变化,全自动生化分析仪检测血清肌酐,测定肾脏指数[肾脏质量(g)/体质量(kg)]; HE和PAS染色评估肾脏病变情况,免疫组织化学染色法检测血管紧张素Ⅰ转化酶2(ACE2)、Ang1-7受体(MAS受体)、1型血管紧张素受体(AT1R)及AT2R在肾组织的表达。结果成模后6周,各组间肌酐水平无显著差异;模型组、AL处理组、Val处理组大鼠造模后血糖显著增高,24 h尿蛋白、肾脏指数显著增加,与模型组相比,AL处理组、Val处理组大鼠24 h尿蛋白、肾脏指数有改善。与模型组及Val处理组相比,AL处理组AT2R和ACE2显著降低、MAS受体表达显著增加,AT1R表达显著高于对照组及Val处理组,与模型组无显著变化。结论 AL下调AT2R和ACE2的表达抑制AngⅡ/Ang1-7信号轴改善糖尿病大鼠症状。

Keap1-Nrf2抗氧化通路与AngⅡ在肝细胞癌中的作用机制

在全世界范围内,肝细胞癌的发病率呈逐年上升的趋势,并成为癌症相关死亡的第三大原因,每年超过90万的新发病例和超过80万的死亡病例[1-2]。在所有的原发性肝癌病例中,肝细胞癌是最常见的原发性肝癌[3]。因早期肝细胞癌的临床症状并不明显,故大部分肝癌患者确诊时已是晚期,对于晚期肝癌患者的治疗选择非常有限。2008年,小分子靶向药物索拉非尼被批准用于治疗晚期肝癌,在之后的十余年间,索拉非尼成为唯一一种治疗晚期肝细胞癌的一线分子靶向药物。

丹参酮ⅡA对大鼠肝纤维化的干预作用及其调控Ang Ⅱ的分子机制

[目的]观察丹参酮ⅡA(tanshinone ⅡA,TSN)对四氯化碳(carbontetrachloride,CCl4)致大鼠肝纤维化的干预作用,并以血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ)受体为靶点探讨相关的作用机制。[方法]SD大鼠随机分为5组,每组6只。除空白对照组外,其余各组大鼠用CCl4诱导肝纤维化模型。治疗组分别给予剂量为21.3mg/(kg·d)、14.2mg/(kg·d)、7.1 mg/(kg·d)的TSN与5%的黄蓍树胶混悬液,模型组和空白对照组给予等容积的5%黄蓍树胶溶液,灌胃1次/d。用药10周后,测定各组大鼠血清中丙氨酸转氨酶(alanine transaminase,ALT)、天冬氨酸转氨酶(aspartate transferase,AST)、Ang Ⅱ的含量,并对各组大鼠肝组织进行HE染色和羟脯氨酸(hydroxyl proline,Hyp)测定,实时荧光定量逆转录PCR(RT-PCR)和免疫组化法(immunohistochemistry,IHC)分别检测I型胶原蛋白(collagen type I,Col I)、缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible Factor-1α,HIF-1α)、血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth Factor,VEGF)及血管紧张素Ⅱ 1型受体(angiotensin Ⅱ type 1 receptor,AT1R)的m RNA和蛋白表达。[结果]TSN能明显降低肝纤维化大鼠血清中ALT、AST、Ang Ⅱ的水平,降低肝组织中Hyp的含量,抑制胶原纤维的表达,降低Col I、HIF-1α、VEGF及AT1R各m RNA和蛋白表达。[结论]TSN有明显的抗肝纤维化作用,其机制与改善肝脏微循环、减少细胞外基质合成、抑制胶原纤维密切相关。

Ac-SDKP对Ang Ⅱ诱导的大鼠血管外膜成纤维细胞胶原合成的调节作用

目的:探讨抗纤维化短肽N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(Ac-SDKP)经由Ang Ⅱ介导的细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)的调节通路在大鼠血管纤维化形成中的作用。方法:采用差速贴壁法获取新生大鼠血管外膜成纤维细胞,随机分为对照组,Ang Ⅱ(10-6mmol/L)组,Ang Ⅱ+Ac-SDKP(10-9mmol/L)组和PD98059(细胞外信号调节激酶通路特异性抑制剂)(25μmmol/L)组,分别采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测I、ⅡI型胶原蛋白mRNA表达,Western blot印迹法检测MMP(基质金属蛋白酶)-2、TGF(转化生长因子)-β1蛋白的表达。结果:Ac-SDKP能显著抑制Ang Ⅱ刺激的胶原蛋白合成和TGF-β1蛋白表达,并上调MMP-2表达。ERK1/2通道特定阻断剂(PD98059)则明显减弱Ac-SDKP的上述作用。结论:Ac-SDKP可能是通过ERK1/2信号转导通道抑制Ang Ⅱ刺激的胶原蛋白合成,从而发挥有效的抗血管纤维化作用。

LncRNA FOXD3-AS1靶向miR-127-3p对AngⅡ诱导的血管平滑肌细胞的影响

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)叉头盒转录基因D3反义RNA1(FOXD3-AS1)对血管紧张素(Ang)Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法采用0.001 mol/L的AngⅡ处理人主动脉VSMCs。实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测FOXD3-AS1和miR-127-3p的表达水平。CCK-8、流式细胞术、Transwell、Western印迹检测细胞活力、凋亡、迁移、侵袭及磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)和蛋白激酶B(AKT)的磷酸化水平。双荧光素酶报告基因实验和RT-qPCR验证FOXD3-AS1和miR-127-3p的靶向调控关系。结果AngⅡ诱导后VSMCs细胞存活率、迁移和侵袭细胞数、FOXD3-AS1、p-PI3K和p-AKT表达显著升高,凋亡率、miR-127-3p表达显著降低(P<0.05)。抑制FOXD3-AS1表达或过表达miR-127-3p后,AngⅡ处理的VSMCs细胞存活率、迁移和侵袭细胞数、p-PI3K和p-AKT表达显著降低,凋亡率显著升高(P<0.05)。FOXD3-AS1靶向负性调控miR-127-3p表达。抑制FOXD3-AS1能够逆转抑制miR-127-3p对AngⅡ处理的VSMCs细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭及p-PI3K和p-AKT表达的影响(P<0.05)。结论抑制FOXD3-AS1能够降低AngⅡ诱导的VSMCs细胞增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡,其机制可能与上调miR-127-3p和抑制PI3K/AKT信号通路有关。

NRG-1通过SIRT1-NOX2通路减轻血管紧张素Ⅱ诱导的心肌肥大

目的探究神经调节蛋白1(neuregulin-1,NRG-1)对血管紧张素Ⅱ(angiotensin-Ⅱ,Ang-Ⅱ)诱导的心肌肥大的保护作用及其潜在机制。方法体外培养大鼠心肌细胞系(H9C2),使用Ang-Ⅱ处理H9C2细胞,构建Ang-Ⅱ诱导的心肌肥大细胞模型。给予NRG-1干预H9C2细胞,通过测量心肌细胞表面积和活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量,检测线粒体膜电位,通过Western blot法检测心房钠尿肽(atrial natriuretic peptide,ANP)、脑钠肽(brain natriuretic peptide,BNP)、沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)、超氧化物歧化酶1(superoxide dismutase 1,SOD1)及NADPH氧化酶2(NADPH oxidase isoform 2,NOX2)蛋白表达,观察NRG-1的保护作用。结果与模型组比较,NRG-1能够明显降低心肌细胞表面积(P<0.05),减少肥大标志物ANP、BNP表达(P<0.05),降低ROS水平(P<0.05),升高线粒体膜电位(P<0.05),增加SOD1、SIRT1表达(P<0.05),降低NOX2蛋白水平(P<0.05)。SIRT1抑制剂EX527可以阻断NRG-1的保护作用。结论NRG-1可改善Ang-Ⅱ诱导的心肌细胞肥大,其潜在机制可能与SIRT1-NOX2氧化应激通路有关。

人参、知母调控NR2B-CaMKⅡ-AMPAR1通路防治糖尿病认知功能障碍作用研究

目的 观察人参、知母防治糖尿病认知功能障碍(diabetic cognitive impairment,DCI)的作用,并探讨其机制。方法 采用高脂高糖饲料联合腹腔注射链脲佐菌素(STZ)(70 mg/kg)建立DCI小鼠模型,除空白组,造模成功后随机分为模型组、二甲双胍组(30 mg/kg)、多奈哌齐组(30 mg/kg)、人参组(3.6 g/kg)、知母组(10.8 g/kg)、人参知母组(3.6、7.2 g/kg),每组8只。连续灌胃给药30 d,记录各组小鼠体质量和血糖。给药结束用Moriss水迷宫法进行行为学测试,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测小鼠血清中糖化血红蛋白(GHbA1c);苏木素-伊红(HE)染色法观察海马组织病理变化,Western blot法检测NR2B、钙调蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)、α-氨基-3-羟基-5-甲基-4-异唑-丙酸谷氨酸受体1(AMPAR1)蛋白的表达。结果 与模型组相比,人参组(3.6 g/kg)、知母组(10.8 g/kg)、人参知母组(3.6、7.2 g/kg)小鼠体质量增长,血糖下降(P<0.05,P<0.01),逃避潜伏期、探索距离显著缩短(P<0.05,P<0.01),站台穿越次数、目标象限游泳时间显著增加(P<0.05,P<0.01),GHbA1c降低(P<0.05,P<0.01),小鼠海马CA1区神经细胞更加整齐紧密,脑组织中NR2B、AMPAR1蛋白表达显著下调(P<0.01),CaMKⅡ蛋白表达显著上调(P<0.01)。结论 人参知母可改善DCI,其机制可能与调控NR2B-CaMKⅡ-AMPAR1通路有关。

抗奥合剂通过p38 MAPK/NF-κB信号通路和ACE2/Ang1-7/Mas轴缓解急性肺损伤研究

目的探讨抗奥合剂(KAHJ)治疗小鼠急性肺损伤(ALI)的作用及机制,为其可能作为缓解新型冠状病毒(COVID-19)感染后症状的药物提供依据。方法采用网络药理学方法预测KAHJ治疗ALI的主要活性成分、潜在靶点和相关信号通路。将C57BL/6J小鼠随机分为对照组、LPS组和LPS+KAHJ组。LPS+KAHJ组小鼠灌胃KAHJ(4.76 g·kg^(-1)·d^(-1),8.8 mL·kg^(-1)·d^(-1)),其余组小鼠灌胃生理盐水(8.8 mL·kg^(-1)·d^(-1))。14 d后,腹腔注射LPS(5 mg·kg^(-1))诱导ALI模型。收集小鼠血清和肺组织,通过组织病理学观察肺组织的病理变化。采用Western blot、qPCR、ELISA和IHC等方法评估KAHJ对ALI的改善作用。结果通过网络药理学筛选出疾病和药物共同的70个核心靶基因,并显示与多个信号通路密切相关,如MAPK、NF-κB、Apoptosis、COVID-19和肾素-血管紧张素系统(Ras)信号通路等。此外,通过实验验证发现KAHJ能改善小鼠ALI后的炎症和细胞凋亡,减少肺损伤和肺水肿,抑制肺纤维化。同时,KAHJ的作用机制与p38 MAPK和NF-κB的磷酸化以及ACE2/Ang1-7/Mas轴的调控也有着密切关系。结论KAHJ可能通过抑制p38 MAPK/NF-κB信号通路和调控ACE2/Ang1-7/Mas轴缓解ALI,为缓解COVID-19感染后症状提供了补充和替代药物。

血清Krüppel样因子2和血管紧张素Ⅱ受体样1内源性配体13对血液透析患者自体动静脉内瘘狭窄的预测价值

目的探讨血清Krüppel样因子2(KLF2)、血管紧张素Ⅱ受体样1内源性配体13(Apelin-13)水平对血液透析患者自体动静脉内瘘(AVF)狭窄的预测价值。方法选取2018年6月至2022年12月山东省济南市人民医院收治的214例以AVF为血管通路的血液透析患者为血液透析组,另选取同期53例体检健康者为对照组。血液透析组患者根据是否伴有AVF狭窄分为狭窄组(37例)和非狭窄组(177例)。记录患者临床资料,采用酶联免疫吸附试验法检测血清KLF2、Apelin-13水平。通过多因素Logistic回归方法分析血液透析患者AVF狭窄的影响因素,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清KLF2、Apelin-13水平对血液透析患者AVF狭窄的预测价值。结果血液透析组血清KLF2、Apelin-13水平均低于对照组(均P<0.001)。狭窄组年龄、透析龄、透析中低血压比例、超滤率、低密度脂蛋白胆固醇水平均大于/长于/高于非狭窄组,体重指数、收缩压、KLF2、Apelin-13水平均低于非狭窄组(均P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,透析龄延长、透析中低血压、超滤率增加为血液透析患者AVF狭窄的独立危险因素,体重指数增加、KLF2升高、Apelin-13升高为独立保护因素(均P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清KLF2、Apelin-13单独与联合预测血液透析患者AVF狭窄的曲线下面积分别为0.797、0.794、0.907,敏感度分别为54.05%、100.00%、91.89%,特异度分别为92.66%、50.85%、83.05%。结论血清KLF2、Apelin-13水平降低与血液透析患者AVF狭窄密切相关,可作为AVF狭窄的辅助预测指标。

自发性高血压大鼠左心室肥厚与ACE-Ang Ⅱ-AT_1R轴/ACE2-Ang(1-7)-MasR轴变化

目的探讨血管紧张素转换酶(angiotensin converting enzyme,ACE)-血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)-血管紧张素1型受体(angiotensin type 1receptor,AT_1R)轴与ACE2-Ang(1-7)-Mas受体(Mas receptor,MasR)轴在自发性高血压左心室肥厚中作用。方法 10只20周龄雄性自发性高血压(spontaneously hypertension,SH)大鼠为SH组,10只20周龄正常血压Wistar-Kyoto大鼠为对照组,采用尾动脉测压仪测定2组大鼠尾动脉收缩压(systolic blood pressure,SBP)、舒张压(diastolic blood pressure,DBP)和平均动脉压(mean arterial pressure,MAP);取2组大鼠全心和左心室称质量,计算心脏指数(cardiac index,CI)和左心室指数(left ventricular mass index,LVMI);取左心室心肌组织行组织病理检查HE染色,采用病理图像分析系统检测心肌细胞横径(cardiomyocytes transection diameter,CTD);采用ELISA法测定左心室心肌组织ACE、ACE2、AngⅡ和Ang(1-7)水平;采用Western blot法测定左心室心肌组织AT_1R和MasR蛋白表达情况,并进行2组间比较。结果SH组SBP[(217.07±17.83)mm Hg]、DBP[(160.10±13.85)mm Hg]、MAP[(179.10±13.43)mm Hg]、CI[(3.61±0.15)mg/g]、LVMI[(2.57±0.21)mg/g]、CTD[(145.65±30.86)μm]、AT_1R蛋白表达水平[(104.95±15.59)%]明显高于对照组[SBP(142.36±16.71)mm Hg、DBP(98.09±23.30)mm Hg、MAP(112.93±19.88)mm Hg、CI(3.13±0.24)mg/g、LVMI(1.94±0.14)mg/g、CTD(75.51±16.25)μm、AT_1R(63.82±17.56)%](P<0.01),MasR蛋白表达水平[(59.25±19.76)%]明显低于对照组[(96.83±30.53)%](P<0.01);SH组左心室心肌组织ACE、ACE2、AngⅡ、Ang(1-7)含量均低于对照组,但差异无统计学意义(P>0.05);SH组ACE与AngⅡ、ACE2呈明显正相关(r=0.915 8,P=0.001 2;r=0.844 7,P=0.003 8),ACE2与Ang(1-7)呈明显正相关(r=0.987 9;P=0.000 1)、AngⅡ与Ang(1-7)呈明显正相关(r=0.991 2,P=0.000 1);对照组ACE与AngⅡ、ACE2呈明显正相关(r=0.973 3,P=0.000 1;r=0.968 2,P=0.000 1),ACE2与Ang(1-7)呈明显正相关(r=0.916 0,P=0.000 1),AngⅡ与Ang(1-7)呈明显正相关(r=0.907 6,P=0.000 1)。结论ACE-AngⅡ-AT_1R/ACE2-Ang(1-7)-MasR平衡失调参与SH左心室肥厚的病理生理过程,主要机制与AT_1R功能增强及MasR功能减弱有关。

二脒那秦通过内源性激活ACE2抑制AngⅡ-TGF-β1通路缓解小鼠肺纤维化

本试验通过博来霉素诱导建立小鼠肺纤维化损伤模型,探究二脒那秦(diminazene aceturate,DIZE)内源性激活血管紧张素转化酶2(angiotensin-converting enzyme 2,ACE2)对小鼠肺纤维化发生发展的缓解作用。将24只雄性ICR小鼠随机均分为对照组(CON组)、模型组(MOD组)和二脒那秦处理组(DIZE组)。除CON组外,其余2组小鼠一次性气管内注射博来霉素(5 mg·kg^(-1))建立肺纤维化损伤模型。造模1 d后,DIZE组小鼠给予DIZE[15 mg·(kg·d)^(-1)]灌胃处理,CON组和MOD组小鼠同等剂量灌胃生理盐水。连续灌胃28 d,采血后,处死所有小鼠,取肺组织,进行如下试验:(1)肺组织称重,计算小鼠肺系数;HE和Masson染色观察肺病理组织学变化;碱水解法检测肺组织中羟脯氨酸的含量;(2)间接ELISA法检测血清中AngⅡ和Ang 1-7含量;(3)RT-qPCR及Western blot法检测肺组织中纤维化相关因子基因和蛋白等的表达水平。结果表明:(1)与CON组相比,MOD组小鼠肺系数及羟脯氨酸含量极显著或显著升高(P<0.01&P<0.05);肺组织出现明显病理变化,主要表现肺泡塌陷,炎性细胞浸润,肺泡间隔充血、增厚,有大量胶原纤维沉积。经DIZE处理后肺系数及羟脯氨酸含量显著或极显著降低(P<0.05&P<0.01);肺纤维化程度明显减轻;(2)与CON组相比,MOD组小鼠肺组织中ACE2蛋白表达下调,血清中AngⅡ含量极显著升高(P<0.01),Ang 1-7含量极显著降低(P<0.01);DIZE处理逆转了以上变化;(3)与CON组相比,MOD组小鼠肺组织中Col1a1和Col3a1基因表达极显著上调(P<0.01),α-SMA及TGF-β1基因和蛋白表达均极显著上调(P<0.01),上皮细胞的特征蛋白E-cadherin蛋白表达极显著下调(P<0.01);与MOD组相比,DIZE组缓解了以上变化。一次性气管内注射博来霉素,28 d后可成功诱导小鼠肺纤维化损伤,高水平的AngⅡ可能协同TGF-β1参与了小鼠的肺纤维化;DIZE可能通过内源性激活ACE2,降低AngⅡ的高水平,对小鼠的肺纤维化具有一定的缓解作用。

AngⅡ/AT_1R通路通过激活人脐静脉内皮细胞PP2A导致eNOS Ser1177磷酸化水平下调

目的:初步探讨血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)/血管紧张素Ⅱ1型受体(angiotensinⅡtype1 receptor,AT_1R)通路是否通过激活人脐静脉内皮细胞蛋白磷酸酶2A(protein phosphatase 2A,PP2A)导致内皮型一氧化氮合酶(eNOS)Ser1177磷酸化水平下调。方法:将人脐静脉内皮细胞随机分为正常对照(control)组、AngⅡ处理组、单纯坎地沙坦(candesartan,CAN;AT_1R特异性阻断剂)组和CAN预处理+AngⅡ组。用Western blot方法检测各组eNOS总蛋白表达、eNOS Ser1177磷酸化水平、PP2Ac蛋白表达、PP2Ac-Tyr307磷酸化水平和PP2A内源性抑制蛋白I_2^(PP2A)表达水平。采用化学比色法检测各组细胞培养基中的NO含量。结果:与control组相比,AngⅡ处理后eNOS Ser1177磷酸化水平及细胞培养基中的NO含量降低(P<0.05);与同一浓度AngⅡ组相比,CAN预处理可增加eNOS Ser1177磷酸化水平及细胞培养基中的NO含量(P<0.05);各组间eNOS蛋白表达差异无统计学显著性。与control组比较,AngⅡ处理后PP2Ac Tyr307磷酸化水平和I_2^(PP2A)表达降低(P<0.05);与同一浓度AngⅡ组相比,CAN预处理可增加PP2Ac Tyr307磷酸化水平和I_2^(PP2A)表达(P<0.05);各组间PP2Ac蛋白表达差异无统计学显著性。结论:AngⅡ可通过AT_1R通路导致人脐静脉内皮细胞eNOS Ser1177磷酸化水平下调,NO合成减少,这一效应可能与AngⅡ/AT_1R通路降低PP2Ac Tyr307磷酸化水平和I_2^(PP2A)表达水平、导致PP2A活性增强有关。特异性AT_1R阻断剂CAN预处理可通过增加PP2Ac Tyr307磷酸化水平和I_2^(PP2A)表达水平而降低PP2A活性,最终上调eNOS Ser1177磷酸化水平,恢复eNOS活性。