Ⅱ型子宫内膜癌患者癌组织中IMP3、PTEN表达及其临床意义

目的分析Ⅱ型子宫内膜癌(EC)患者癌组织中胰岛素样生长因子Ⅱ信使RNA结合蛋白3(IMP3)和磷酸酶与张力蛋白同源物(PTEN)的表达情况,并探讨其临床意义。方法收集60例Ⅱ型EC患者手术切除的癌组织及20例对应癌旁组织的存档石蜡标本,采用免疫组织化学法(IHC)检测标本中IMP3、PTEN蛋白表达情况;分析IMP3、PTEN蛋白表达与EC患者临床病理特征及预后的关系。结果EC患者癌组织中IMP3阳性表达率高于癌旁组织,PTEN阳性表达率低于癌旁组织,差异均有统计学意义(P<0.05)。EC患者癌组织IMP3阳性表达率与肌层浸润深度、FIGO分期及淋巴结转移有关(P<0.05),即肌层浸润深度越深、FIGO分期越晚、合并淋巴结转移者IMP3阳性表达率越高。PTEN阳性表达率与FIGO分期、淋巴结转移有关(P<0.05),即FIGO分期越晚、合并淋巴结转移者PTEN阳性表达率越低。Spearman相关性分析结果显示,EC患者癌组织中IMP3和PTEN蛋白表达无显著相关性(P>0.05)。IMP3阳性组整体生存情况差于IMP3阴性组,PTEN阳性组整体生存情况优于PTEN阴性组(P<0.05)。结论Ⅱ型EC患者癌组织中IMP3表达上调,而PTEN表达下调,二者表达异常可能参与了Ⅱ型EC的发生与发展,且IMP3阳性表达、PTEN阴性表达与Ⅱ型EC患者不良预后相关。

EMT、TGF-β_1、Ang Ⅱ与器官纤维化发生机制的研究进展

纤维化是大多数慢性炎症性疾病的病理转归,几乎能发生在身体的每个组织器官。纤维化以过多的细胞外基质沉积为特征,进一步发展可导致器官功能衰竭乃至死亡。关于器官纤维化的研究很多,但其确切机制目前尚不明确。近年来,上皮间质转化(EMT)、转化生长因子β1(TGF-β1)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)在组织器官纤维化形成机制研究中备受关注。该文就EMT、TGF-β1、AngⅡ与各器官纤维化的相互关系及作用机制予以综述,以更全面地认识纤维化的发生机制。

血管紧张素Ⅱ受体抑制剂对去卵巢骨质疏松小鼠腰椎骨组织的影响及可能机制

目的探讨血管紧张素Ⅱ受体抑制剂对去卵巢骨质疏松小鼠腰椎骨组织的影响及可能的机制。方法将60只雌性小鼠随机平均分为假手术组、模型组和氯沙坦治疗组,模型组和氯沙坦治疗组均将小鼠双侧卵巢切除建立骨质疏松模型。术后第7天开始,假手术组和模型组小鼠每天灌服0.5 m L生理盐水,氯沙坦治疗组小鼠按照10 mg/(kg·d)的剂量灌服氯沙坦水溶液0.5 m L。建模后8周和12周时,检测各组小鼠血清中雌二醇、碱性磷酸酶(ALP)、骨钙蛋白(OCN)和Ⅰ型前胶原羧基端前肽(PICP)水平,采用Micro-CT三维成像系统对小鼠腰椎进行骨形态计量学检测,采用实时荧光定量PCR技术检测各组小鼠腰椎组织中骨保护素(OPG)、核因子κB受体活化因子(RANK)和核因子κB受体活化因子配体(RANKL)表达。结果与假手术组相比,模型组和氯沙坦治疗组小鼠8周、12周时血清雌二醇水平均降低;模型组小鼠8周、12周时血清ALP、OCN和PICP水平均升高;氯沙坦治疗组小鼠8周时血清ALP、OCN和PICP水平均升高;差异均有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,氯沙坦治疗组8周、12周时小鼠血清ALP、OCN和PICP水平差异均降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与8周时相比,模型组12周时血清ALP、OCN和PICP水平均升高,氯沙坦治疗组12周时血清ALP、OCN和PICP水平均降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与假手术组相比,模型组和氯沙坦治疗组骨密度(BMD)、骨小梁数量(Tb.N)、骨小梁体积分数(BV/TV)和骨小梁厚度(Tb.Th)均降低,而骨小梁间隙(Tb.Sp)和结构模型指数(SMI)均升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,氯沙坦治疗组BMD、Tb.N、BV/TV和Tb.Th均升高,而Tb.Sp和SMI均降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与假手术组相比,模型组和氯沙坦治疗组小鼠腰椎组织中OPG m RNA、RANK m RNA相对表达量均降低,而RANKL m RNA相对表达量和RANKL/OPG比值均升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,氯沙坦治疗组小鼠腰椎组织中OPG m RNA、RANK m RNA相对表达量均升高,而RANKL m RNA相对表达量和RANKL/OPG比值均降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论血管紧张素Ⅱ受体抑制剂可能通过促进骨形成、抑制骨吸收,减少负转换而导致的骨丢失,从而改善去卵巢骨质疏松小鼠腰椎骨组织骨质疏松状态。

妊娠期高血压病患者胎儿脐静脉内皮细胞模型的建立及血管紧张素Ⅱ表达的检测

目的:探索建立妊娠期高血压病患者胎儿脐静脉内皮细胞模型的优化方法并对该细胞模型中血管紧张素Ⅱ表达量进行分析。方法:取妊高症孕妇脐带(约8cm),用PBS冲洗和灌注胰蛋白酶(浓度为1%)消化法分离脐静脉内皮细胞,用McCoy's 5A培养基进行原代和继代培养;用吖啶橙(AO)细胞荧光染色进行细胞的形态学鉴定;用免疫组织化学分析所分离细胞的来源;用Western blotting检测血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的表达情况。结果:利用1%的胰蛋白酶灌注消化可以获得大量的原代细胞,并且在不添加任何生长因子的情况下,使用McCoy's 5A培养基进行原代和继代培养可以实现连续传代6代以上,且细胞状态良好,生长稳定。AO染色鉴定显示细胞边缘平整,细胞核小且形态完整,符合正常细胞的形态。免疫组化鉴定结果表明在所分离的细胞中人VⅡI因子及血管内皮生长因子(VEGF)相关抗原呈强阳性。Western blotting检测发现在所分离的细胞中AngⅡ表达量远远高于普通细胞[(90.20±5.84)%,P=0.0130]。结论:1%浓度的胰蛋白酶灌注消化法与McCoy's 5A培养基培养法是体外建立妊娠期高血压病患者胎儿脐静脉内皮细胞模型的高效经济的方法,该模型高表达血管紧张素Ⅱ,推测AngⅡ可能是诱发妊高症的原因之一。

三参汤对早期糖尿病肾病大鼠血清血管紧张素Ⅱ、VEGF和尿ET-1含量的影响

目的观察三参汤对早期糖尿病肾病大鼠血清血管紧张素Ⅱ(ATⅡ)、血管内皮生长因子(VEGF)、血浆和尿内皮素-1(ET-1)的影响,探讨三参汤治疗早期糖尿病肾病的作用机制。方法采用高脂饲养+链脲佐菌素注射方法复制2型糖尿病肾病大鼠模型,造模成功大鼠随机分为模型组、对照组和治疗组各10只,另选10只尾静脉注射等量生理盐水大鼠作为空白组。模型组和空白组灌胃等体积生理盐水,对照组灌胃厄贝沙坦,治疗组灌胃三参汤,灌胃3周。治疗前后酶免法检测4组大鼠血清ATⅡ、VEGF、血浆和尿ET-1浓度,化学法检测尿微量白蛋白、血糖浓度。结果治疗后治疗组大鼠血清ATⅡ、VEGF和尿中ET-1浓度及血糖、尿微量白蛋白水平均明显低于模型组(P均<0.05)。结论三参汤可能通过调节肾素-血管紧张素系统而发挥治疗糖尿病肾病作用。

血管紧张素Ⅱ和阿片肽对Fos蛋白表达的影响

利用抗体免疫沉淀技术研究了血管紧张素Ⅱ（ＡⅡ），δ受体激动剂（ＤＰＤＰＥ）和к受体激动剂（ＮＤＡＰ）对大鼠脑组织ｃ－ｆｏｓ原癌基因表达的影响．结果表明，０．１μｍｏｌ／ＬＡⅡ可显著刺激脑组织中Ｆｏｓ蛋白的表达，０．１μｍｏｌ／ＬＤＰＤＰＥ和０．１μｍｏｌ／ＬＮＤＡＰ对Ｆｏｓ蛋白的表达亦有一定的诱导作用．ＡⅡ与ＤＰＤＰＥ或ＮＤＡＰ共同处理组织，Ｆｏｓ蛋白表达水平低于ＡⅡ单独诱导的水平．

重组荞麦胰蛋白酶抑制剂通过下调己糖激酶Ⅱ抑制HepG2细胞生长

糖酵解过度活跃是肿瘤细胞能量代谢的显著特征。抑制过度糖酵解已经成为一种新的癌症疗法。重组荞麦胰蛋白酶抑制剂(recombinant buckwheat trypsin inhibitor,r BTI)可以通过上调磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)进而抑制Hep G2细胞增殖。有关r BTI对肿瘤细胞能量代谢的影响仍未见报道。本研究中的MTT和ATP检测分析表明,r BTI以剂量依赖性方式抑制细胞活力及胞内ATP含量。qRT-PCR和Western印迹分析表明,r BTI处理Hep G2细胞后,己糖激酶Ⅱ转录显著下调,但是糖酵解过程中的其他酶及葡萄糖转运蛋白基因在转录水平未发生显著变化,同时己糖激酶Ⅱ蛋白水平的表达也显著下调。酶活性分析也表明,r BTI能显著降低己糖激酶的活性。进一步分析表明,r BTI使细胞内PTEN转录及表达水平明显上调,己糖激酶Ⅱ转录和p-AKT,p-m TOR、己糖激酶Ⅱ的表达下调。当PTEN抑制剂phen存在时,可阻断r BTI诱导的己糖激酶Ⅱ表达下降,表明r BTI能通过上调PTEN进而影响己糖激酶Ⅱ的表达。免疫荧光及Western印迹分析显示,r BTI作用后减弱了己糖激酶Ⅱ在线粒体的定位,导致己糖激酶Ⅱ与线粒体电压依赖性阴离子通道蛋白(voltage-dependent anion channel,VDAC)分离,促使己糖激酶Ⅱ从线粒体转位到细胞质,降低糖酵解的效率。上述结果证明,r BTI对肿瘤细胞能量代谢的调控作用主要通过抑制PI3K/AKT信号通路,下调己糖激酶Ⅱ的表达并影响空间定位,进而抑制肿瘤细胞糖酵解过程,导致癌细胞生长受到抑制。

黄芪多糖保护糖尿病心肌的初步研究

目的观察黄芪多糖(APS)对糖尿病(DM)仓鼠心肌chymase/ACE-AngⅡ的影响,探讨其对DM心肌病变的干预机制。方法检测APS治疗组和DM对照组仓鼠的血糖、胰岛素、C肽、心肌酶谱、糖化血清蛋白水平,血浆和心肌组织的AngⅡ含量;免疫组化法检测心肌Ⅰ、Ⅲ型胶原;荧光定量PCR法检测心肌chymase和ACE mRNA表达;放免法检测chymase和ACE活性。结果APS组血糖、糖化血清蛋白、心肌酶谱和心肌AngⅡ水平较DM组显著下降,胰岛素、C肽、血浆AngⅡ水平和DM组无差异;APS组心肌Ⅰ型胶原表达和Ⅰ/Ⅲ型胶原比值较DM组显著下降;APS组chymase mRNA表达和活性均显著低于DM组,ACE基因的表达和活性与DM组无显著性差异。结论APS可以抑制糖尿病心肌中chymanse依赖性AngⅡ的生成,起到对糖尿病心肌病变的保护作用。

坎地沙坦对自发性高血压大鼠骨骼肌胰岛素敏感性的影响

目的探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)受体拮抗剂(ARB)坎地沙坦对自发性高血压大鼠(SHR)骨骼肌胰岛素敏感性的影响及其机制。方法 30只SHR随机分为模型组、坎地沙坦高剂量组(Can 1组)及坎地沙坦低剂量组(Can 2组),每组10只,另选10只WKY大鼠作为对照组。均给予果糖喂养,Can 1组(0.8 mg/kg)、Can 2组(0.4mg/kg)分别给予坎地沙坦灌胃干预,观察第8周末各组大鼠胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)和AngⅡ的水平,以及骨骼肌蛋白激酶B(Akt)的基因及蛋白表达水平。结果与对照组比较,模型组大鼠AngⅡ、HOMA-IR及血清空腹胰岛素(FINS)明显升高,骨骼肌中Akt mRNA表达及P-Akt蛋白表达显著减少,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,Can 1组大鼠FINS、HOMA-IR明显降低,Can 1组和Can 2组骨骼肌Akt mRNA表达及P-Akt表达显著增加,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论 AngⅡ通过下调SHR骨骼肌的Akt蛋白表达引起胰岛素抵抗,而坎地沙坦通过抑制AngⅡ的这种作用改善骨骼肌胰岛素抵抗。

肿瘤抑制基因PTEN负性调控鼠心肌肥大

目的观察肿瘤抑制基因PTEN(phosphatase and tensin homolog tumor suppressor)过度表达对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)刺激所致Ca2+/钙调神经磷酸酶(calcineurin,CaN)信号通路的影响,探讨PTEN负性调控心肌肥大的作用机制。方法利用携带野生型PTEN基因的腺病毒(adenovirus-mediated transfer of PTEN,Ad-PTEN)感染获得过度表达PTEN的原代培养心肌细胞,以AngⅡ作为促心肌肥大刺激剂处理心肌细胞,利用Furo-2/AM比率荧光成像系统检测细胞内Ca2+浓度([Ca2+]i),逆转录酶-多聚酶链反应(reactive transcriptase polymerase chain reaction,RT-PCR)检测受感染细胞内心钠素(atrial natriuretic factor,ANF)、β肌球蛋白重链(β-myocin heavy chain,β-MHC)与钙调神经磷酸酶(calcineurin Aβ,CaNAβ)的mRNA表达,免疫印迹(western blot)检测CaN Aβ的蛋白表达,同时测定CaN活性。结果Ad-PTEN感染后,心肌细胞内过度表达PTEN的mRNA和蛋白。AngⅡ刺激后[Ca2+]i、CaNAβ mRNA与蛋白表达以及CaN活性分别为(229±18)nmol/L、(1.34±0.09)μmol·mg-1·h-1、(1.74±0.10)μmol·mg-1·h-1和(3.26±0.23)μmol·mg-1·h-1,较无AngⅡ刺激组显著增高(P<0.05),PTEN过度表达组[Ca2+]i,CaNAβ mRNA与蛋白表达以及CaN活性分别为(178±19)nmol/L、(0.81±0.07)μmol·mg-1·h-1、(1.18±0.02)μmol·mg-1·h-1、(1.89±0.39)μmol·mg-1·h-1,较无PTEN过度表达组显著降低(P<0.05)。结论PTEN过度表达可抑制Ca2+/CaN信号通路,负性调控血管紧张素Ⅱ刺激所致心肌细胞肥大。

MEK信号通路参与PTEN对心肌细胞肥大的负性调控

目的探讨第10号染色体上同源丢失的磷酸酶张力蛋白(PTEN)基因的过度表达对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌肥大的负性调控机制。方法通过携带野生型PTEN基因的腺病毒(Ad-PTEN)感染,构建过度表达PTEN的原代培养的心肌细胞模型。以AngⅡ为促心肌肥大的刺激剂,采用RT-PCR检测受感染细胞内心房钠尿肽(ANP)、β肌球蛋白重链(β-MHC)mRNA的表达,用Western blot检测细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)和磷酸化ERK1/2(pERK1/2)蛋白的表达。结果Ad-PTEN感染后,心肌细胞内过度表达的PTEN mRNA和其蛋白,可明显抑制AngⅡ刺激所致心肌细胞肥大标志基因的表达。AngⅡ刺激可使ERK1/2与pERK1/2蛋白的表达明显增高;但PTEN的过度表达能明显抑制AngⅡ引起的ERK1/2与pERK1/2蛋白的表达。结论PTEN能够负性调控AngⅡ刺激引起的心肌细胞肥大,MEK1/ERK1/2信号通路可能参与了PTEN的负性调控过程。

转化生长因子-β3和血管紧张素转移酶在肌营养不良中的表达

目的了解转化生长因子-β3(TGF-β3)和血管紧张素转移酶(ACE)是否参与了肌营养不良(MD)的肌肉病变,且是否与肌肉纤维化有关。方法回顾1986—2000年日本东北大学医学部附属病院儿科收治的19例MD患儿资料,应用免疫组织化学和三免疫荧光标记检测,其中9例Duchenne型肌营养不良(DMD)、3例Becker型肌营养不良(BMD)和7例先天性肌营养不良(CMD)患儿肌肉活检标本中TGF-β3及ACE的表达及共同定位。6例对照为疑似MD患者,肌肉组织化学等检查排除肌肉病变。结果免疫组化显示TGF-β3和ACE在MD中的表达明显增加,TGF-β3免疫表达部位与ACE基本相同,正常肌肉只在血管中表达。病变肌肉除血管明显表达外,TGF-β3和ACE免疫染色也一致分布于再生肌纤维的细胞浆和细胞核以及炎症细胞和炎症细胞浸润的坏死纤维中;所有DMD和CMD患儿肌肉中,含有成纤维细胞的肌内膜和肌束膜的结缔组织TGF-β3和ACE多为强阳性;但具有晚期纤维化的CMD和FCMD普遍显示TGF-β3和ACE弱反应;三免疫荧光标记显示DMD和CMD患儿肌肉肌内膜和肌束膜中大多数激活的成纤维细胞表达TGF-β3和ACE,两者在萎缩肌肉内也共同定位。结论病变局部TGF-β3和ACE表达增加,表明肌肉组织中肾素-血管紧张素系统在MD时被激活,可能与TGF-β3共同参与MD的发病,并在肌肉纤维化中起重要作用。