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Experimental study of gene therapy with angiostatin gene in pancreatic cancer 被引量:3
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作者 Sheng-Li Nie Shi-Zhen Yuan the Department of Gastroenterology, Sun Yat-Sen Memorial Hospital, Medical College, Sun Yat-Sen University, Guangzhou 510120, China 《Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International》 SCIE CAS 2002年第3期452-457,共6页
Objective: To study the effects of angiostatin (AS) gene mediated by liposome on human pancreatic cancer cell line SW1990. Methods: Angiostatin gene was cloned into the eu- karyotic expression vector pRC/CMV. The reco... Objective: To study the effects of angiostatin (AS) gene mediated by liposome on human pancreatic cancer cell line SW1990. Methods: Angiostatin gene was cloned into the eu- karyotic expression vector pRC/CMV. The recombi- nant of pRC/CMV-AS was introduced into the pan- creatic cancer cell line, SW1990. The mechanism of anti-tumor was studied and tested. Results: The eukaryotic expression vector pRC/ CMV-AS was identified by the restriction digest. pRC/CMV-AS was stably integrated into the target cells and expressed by Western blot and drug-sensi- tivity tests, and inhibited the vascular endothelial cells proliferation in vitro. In addition, the effects of the angiostatin vector on reducing the volume of tumors implanted in nude mouse models were also noted. Conclusion: This study demonstrated that the recom- binant pRC/CMV-AS mediated by liposome may play a potential role in the treatment of pancreatic cancer in the future. 展开更多
关键词 angiostatin gene therapy pancreatic cancer vector angiogenesis LIPOSOME ANTIANGIOgeneSIS dormancy therapy
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pEgr-angiostatin基因辐射诱导表达特性及其抗肿瘤作用 被引量:6
2
作者 李秀娟 宋祥福 +4 位作者 杨巍 田梅 杨旭 刘林林 李修义 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期543-546,共4页
目的 :检测 p Egr- angiostatin重组质粒在 B1 6细胞中的辐射诱导表达和观察 p Egr-angiostatin基因 -放射治疗的抗肿瘤作用。方法 :用 RT- PCR方法从小鼠肝脏中扩增出 angiostatinc DNA,经测序证实后 ,构建 p Egr- angiostatin重组质... 目的 :检测 p Egr- angiostatin重组质粒在 B1 6细胞中的辐射诱导表达和观察 p Egr-angiostatin基因 -放射治疗的抗肿瘤作用。方法 :用 RT- PCR方法从小鼠肝脏中扩增出 angiostatinc DNA,经测序证实后 ,构建 p Egr- angiostatin重组质粒 ,脂质体介导的转染法转染小鼠 B1 6细胞 ,检测 B1 6细胞内 angiostatin m RNA的辐射诱导表达 ,体内观察 p Egr- angiostatin基因 -放射治疗的抑瘤作用。结果 :测序表明扩增的 angiostatin c DNA序列与报道基本一致 ,Egr- 1启动子和 angiostatinc DNA正确插入表达载体 pc DNA3.1 ,转染 B1 6细胞内 angiostatin m RNA的表达具有辐射诱导特性 ,p Egr- angiostatin基因 -放射治疗荷瘤小鼠具有明显的抑瘤作用。结论 :成功地克隆小鼠angiostatin基因 ,并证实 p Egr- angiostatin的辐射诱导表达规律及其基因 展开更多
关键词 小鼠 血管抑素 EGR-1启动子 pEgr-angiostatin重组质粒 基因-放射治疗
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Angiostatin基因对C6胶质瘤体内生长的抑制作用 被引量:2
3
作者 王成伟 庞琦 +1 位作者 栾立明 王益华 《山东大学学报(医学版)》 CAS 2004年第4期442-444,共3页
目的:研究血管生成抑制因子angiostatin对C6胶质瘤体内生长的影响。方法:以阳离子脂质体介导将angiostatin基因导入C6胶质瘤细胞,G418(1000μg/m1)克隆筛选、扩大培养后接种于裸小鼠皮下,观察移植瘤生长的体积、重量变化及肿瘤抑制率,应... 目的:研究血管生成抑制因子angiostatin对C6胶质瘤体内生长的影响。方法:以阳离子脂质体介导将angiostatin基因导入C6胶质瘤细胞,G418(1000μg/m1)克隆筛选、扩大培养后接种于裸小鼠皮下,观察移植瘤生长的体积、重量变化及肿瘤抑制率,应用SABC免疫组化技术检测肿瘤微血管密度。结果:angiostatincDNA对体内生长的胶质瘤有显著抑制作用,抑瘤率可达82.2%(P<0.01),转染组胶质瘤中微血管密度眼(6.8±2.1)/HP演低于对照组眼(16.7±4.8)/HP演(P<O.01)。结论:angiostatincDNA能通过抑制血管生成进而抑制胶质瘤生长,在胶质瘤临床治疗中有应用价值。 展开更多
关键词 angiostatin 基因疗法 胶质瘤 微血管密度 血管生成
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表达Angiostatin基因的B16黑色素瘤体内抑制作用 被引量:1
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作者 夏国宏 卢卫新 +2 位作者 邢力 费俭 郭礼和 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 1999年第4期284-287,共4页
目的:研究表达Angiostatin基因的B16黑色素瘤的体内生长行为.方法:通过改造Plasminogen cDNA得到Angiostatin基因,构建成真核表达载体pAGAGS3后导入B16黑色素瘤细胞使其表达.结果:表达Angiostatin的B16黑色素瘤细胞体外生长速率和软琼... 目的:研究表达Angiostatin基因的B16黑色素瘤的体内生长行为.方法:通过改造Plasminogen cDNA得到Angiostatin基因,构建成真核表达载体pAGAGS3后导入B16黑色素瘤细胞使其表达.结果:表达Angiostatin的B16黑色素瘤细胞体外生长速率和软琼脂中克隆形成能力均未改变.但接种小鼠26d后,体内生长抑制率达87%(P<0.01).结论:表达Angiostatin的B16黑色素瘤体内生长受到显著抑制. 展开更多
关键词 B16黑色素瘤 angiostatin 基因表达 血管生成
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Endostatin-Angiostatin融合基因治疗大鼠C6胶质瘤的3.0T磁共振动态观察 被引量:2
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作者 沈慧聪 戴建平 +4 位作者 高培毅 马军 李少武 艾林 魏新华 《中国医学影像技术》 CSCD 北大核心 2007年第6期805-808,共4页
目的探讨3.0T磁共振在重组单纯疱疹病毒介导的Endostatin-Angiostatin(Endo-Angio)融合基因对大鼠C6胶质瘤疗效评价中的作用。方法30只雄性Wistar大鼠采用立体定向方法在颅内接种C6细胞,将荷瘤大鼠随机分为两组,治疗组与对照组;两组大... 目的探讨3.0T磁共振在重组单纯疱疹病毒介导的Endostatin-Angiostatin(Endo-Angio)融合基因对大鼠C6胶质瘤疗效评价中的作用。方法30只雄性Wistar大鼠采用立体定向方法在颅内接种C6细胞,将荷瘤大鼠随机分为两组,治疗组与对照组;两组大鼠分别于接种后1、2、3周进行MR检查;第2、3周检查结束后每组留取2只鼠脑标本进行病理学检查;治疗组大鼠于第1周检查后于肿瘤接种位置原位注入Endo-Angio融合基因进行治疗。结果第1周检查共25只大鼠成瘤(成功率83%),第2周两组肿瘤体积均增大,二者无统计学差异(P>0.01),病理检查显示治疗组大鼠微血管腔减少,间质水肿及细胞水肿较对照组明显严重;第3周时治疗组大鼠体积减小,小于对照组(P<0.01)。结论重组单纯疱疹病毒介导的Endo-Angio融合基因对大鼠C6胶质瘤的生长有抑制作用,3.0T磁共振可以较好地动态观察大鼠C6胶质瘤的生长及治疗变化。 展开更多
关键词 大鼠 胶质瘤 基因疗法 ENDOSTATIN angiostatin磁共振成像
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旁分泌形式作用的人AngiostatinK(1-3)抑制大鼠C6脑胶质瘤的研究 被引量:3
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作者 高大宽 章翔 +3 位作者 吴景文 屈延 郭衍 程庆 《第四军医大学学报》 北大核心 2003年第22期2041-2043,共3页
目的 :研究人AK(1 3) [AngiostatinKringle (1 3) ]对大鼠C6脑胶质瘤的抑瘤效应 .方法 :利用基因转染的方法获得重组人AK(1 3)基因的C6胶质瘤细胞 ;以细胞增殖试验及免疫组化等方法检测转染细胞株是否表达了具有生物活性的人AK(1 3... 目的 :研究人AK(1 3) [AngiostatinKringle (1 3) ]对大鼠C6脑胶质瘤的抑瘤效应 .方法 :利用基因转染的方法获得重组人AK(1 3)基因的C6胶质瘤细胞 ;以细胞增殖试验及免疫组化等方法检测转染细胞株是否表达了具有生物活性的人AK(1 3) .正常大鼠C6脑胶质瘤模型作对照 ,研究转染细胞株在大鼠脑内的致瘤性 .脑组织切片进行Ⅷ因子染色 .结果 :大鼠C6胶质瘤细胞稳定表达的人AK(1 3) ,在体外明显抑制牛主动脉内皮细胞的增殖 ;在体内明显抑制了大鼠C6脑胶质瘤的生长 .试验组脑切片内仅见显微瘤灶 ,Ⅷ因子染色少见新生毛细血管 .结论 :旁分泌形式作用于大鼠C6脑胶质瘤内血管内皮细胞的人AK(1 3)可明显抑制肿瘤的血管生成 。 展开更多
关键词 旁分泌 C6脑胶质瘤 基因疗法 angiostatinK(1—3) 抑瘤效应 基因转染
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Angiostatin基因真核表达载体的构建及对B16黑色素瘤体内生长抑制作用
7
作者 王季石 孙等军 +2 位作者 郭礼和 林果为 费检 《实验生物学报》 CSCD 北大核心 2002年第4期303-306,共4页
Angiostatin是一种新发现的对肿瘤生长有特异抑制作用的抗血管生成因子,实验已证实其对多种肿瘤有明显的抑制作用。本文报告构建了含Angiostatin基因的真核表达载体pAG3,通过建立荷瘤小鼠模型来研究Angiostatin对人黑色素瘤B16的原位生... Angiostatin是一种新发现的对肿瘤生长有特异抑制作用的抗血管生成因子,实验已证实其对多种肿瘤有明显的抑制作用。本文报告构建了含Angiostatin基因的真核表达载体pAG3,通过建立荷瘤小鼠模型来研究Angiostatin对人黑色素瘤B16的原位生长,植入及与化疗药物DTIC的联合作用等来探讨Angiostatin裸DNA肌肉注射的体内抗瘤效应。实验结果表明Angiostatin可明显抑制C57荷瘤小鼠的肿瘤生长;人黑色素瘤B16细胞植入前5天肌肉注射pAG3能显著阻止正常C57小鼠新肿瘤的形成;但在pAG3与DTIC联合化疗实验中,两者未表现出明显的增强效应。本实验为拓展非病毒介导的Angiostatin抗血管生成基因治疗途径奠定了基础。 展开更多
关键词 肿瘤生长 抑制作用 真核表达载体 人黑色素瘤 荷瘤小鼠 抗血管生成 肌肉注射 N基因 联合作用 病毒
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血管生长抑制因子angiostatin在昆虫细胞中的表达及活性研究 被引量:1
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作者 徐晓琳 刘戈飞 黄东阳 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第9期1096-1101,共6页
背景与目的:抑制新生血管的形成,有助于抑制肿瘤的生长,减少和预防肿瘤转移的发生。血管抑素(angiostatin)是一种重要的内源性新生血管生成抑制剂,对血管内皮细胞增殖有较强的抑制作用。为获得具有高活性的Angiostatin表达,本研究通过... 背景与目的:抑制新生血管的形成,有助于抑制肿瘤的生长,减少和预防肿瘤转移的发生。血管抑素(angiostatin)是一种重要的内源性新生血管生成抑制剂,对血管内皮细胞增殖有较强的抑制作用。为获得具有高活性的Angiostatin表达,本研究通过杆状病毒表达系统表达重组的angiostatin,分析其在昆虫细胞中表达和生物活性。方法:用带有angiostatin的杆状病毒转移载体pBlueBacHis2B和病毒DNA共同转染Sf9细胞,构建重组病毒,蚀斑实验筛选,PCR分析确定后扩增产生大量高滴度的病毒贮存液;用SDS-PAGE电泳和Westernblot对感染不同时间后分泌的重组蛋白做时间表达分析;用ProBondTM纯化系统对表达的重组angiostatin进行纯化,分光光度计确定蛋白含量,SDS-PAGE电泳确定蛋白纯度;采用MTT法测定重组蛋白angiostatin对原代培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的抑制作用而后通过鸡胚尿囊膜实验进一步证实其抗血管形成作用。结果:成功构建了滴度为2×108pfu/ml的angiostatin重组杆状病毒,并在昆虫细胞Sf9中高效表达了分子量为53ku的angiostatin重组蛋白,纯度约为90%,重组angiostatin蛋白不仅在体外显著抑制内皮细胞的生长(IC50为2.3μg/ml),而且显著抑制鸡胚尿囊膜血管的生长。结论:此系统可制备高滴度angiostatin重组杆状病毒贮存液,并在Sf9昆虫细胞中高效表达该重组蛋白,经在体和离体细胞学实验验证其对内皮细胞的增殖具有抑制作用。 展开更多
关键词 血管 内皮细胞 血管抑制素/拮抗和抑制剂 杆状病毒 基因转染 草地贪夜蛾(Sf9) 昆虫细胞
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人血管抑制素基因克隆、表达和生物活性分析 被引量:3
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作者 张爱联 罗进贤 +1 位作者 张添元 罗学斌 《中山大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期56-59,共4页
应用PCR技术从人胎肝cDNA文库中扩增了人血管抑制素基因。将克隆的基因重组进酵母质粒pPIC9K获得含该基因的重组质粒pPIC9KA3。用电激法将质粒pPIC9K转化毕节酵母GS115 ,经PCR检测获得含人血管抑制素基因的酵母工程菌GS115 (pPIC9KA3)... 应用PCR技术从人胎肝cDNA文库中扩增了人血管抑制素基因。将克隆的基因重组进酵母质粒pPIC9K获得含该基因的重组质粒pPIC9KA3。用电激法将质粒pPIC9K转化毕节酵母GS115 ,经PCR检测获得含人血管抑制素基因的酵母工程菌GS115 (pPIC9KA3)。再用G418筛选法 ,在含不同浓度的G418平板上筛选高拷贝整合的转化子。对高拷贝整合的转化子进行发酵培养和诱导表达。SDS_PAGE及Western印迹分析显示 :表达产物约占胞外蛋白的 43% ,相当于 94mg L ,并具有免疫活性。并能抑制bFGF诱导的鸡胚尿囊膜新生血管的生成。还对用G418筛选高拷贝整合转化子的方法做了探索。 展开更多
关键词 人血管抑制素 基因表达 毕节酵母 G418 血管生成
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重组腺相关病毒载体介导人血管抑素K1-5基因预防和治疗B16黑素瘤的实验研究 被引量:3
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作者 曹培国 吴小兵 +3 位作者 阳月新 黄程辉 龙林 沈守荣 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期426-430,共5页
目的:研究重组腺相关病毒载体介导人血管抑素K1-5基因(rAAV—AG)对B16F0恶性黑素瘤细胞生长的影响。方法:观察rAAV-AG单次肌肉注射在预防肿瘤生长、血行转移及治疗肿瘤方面的不同作用;Western blot法定性检测血管抑素表达情况;免... 目的:研究重组腺相关病毒载体介导人血管抑素K1-5基因(rAAV—AG)对B16F0恶性黑素瘤细胞生长的影响。方法:观察rAAV-AG单次肌肉注射在预防肿瘤生长、血行转移及治疗肿瘤方面的不同作用;Western blot法定性检测血管抑素表达情况;免疫组化法检测肿瘤组织中的微血管密度(MVD);TUNEL法检测肿瘤凋亡细胞数。结果:rAAV-AG单次肌肉注射后第2周至实验结束时(~70d)小鼠体内均有血管抑素表达;预防肿瘤生长抑瘤率为97%(P〈0.01);预防肝、肺转移抑瘤率分别为37.5%(P<0.05)和47.7%(P<0.01);低、中、高剂量组治疗肿瘤抑瘤率分别为44%、61%和65%,小鼠中位生存时间分别为58d、66d和68d,与生理盐水组比较,低剂量组无显著性差异(P=0.06),中、高剂量组均有显著性差异(P〈0.01);基因治疗备组肿瘤MVD减少,凋亡细胞数增加,与生理盐水组比较,统计结果与各组抑瘤率一致。结论:rAAV-AG单次肌肉注射能有效预防和治疗B16恶性黑素瘤的生长及血行转移,延长荷瘤小鼠的生存期;在一定剂量范围内其抑瘤效应呈剂量依赖性;抑瘤作用可能是通过抑制肿瘤血管生成、诱导肿瘤细胞凋亡来实现的。 展开更多
关键词 黑素瘤 实验性 血管抑制素类 腺病毒科 基因疗法
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人血管生成抑制素基因在大肠杆菌中的融合表达 被引量:5
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作者 卢文菊 罗进贤 李文清 《中山大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 1998年第5期88-91,共4页
将人血管生成抑制素基因定向插入表达载体pET-17b的BamHⅠ位点,构建重组质粒pETA2,转化E.coliBL21(DE3).在IPTG诱导下,血管生成抑制素基因在重组转化株E.coliBL21(DE3,pETA... 将人血管生成抑制素基因定向插入表达载体pET-17b的BamHⅠ位点,构建重组质粒pETA2,转化E.coliBL21(DE3).在IPTG诱导下,血管生成抑制素基因在重组转化株E.coliBL21(DE3,pETA2)中获得高效表达.表达产物以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的37.2%.利用羊抗人纤溶酶原抗血清作为第一抗体。 展开更多
关键词 血管生成抑制素 基因表达 肿瘤 免疫疗法
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腺病毒介导的血管抑素K1-5转基因治疗裸鼠卵巢癌移植瘤 被引量:2
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作者 刘恩令 糜若然 钱其军 《天津医药》 CAS 北大核心 2007年第5期363-365,共3页
目的:探讨血管抑素k1-5对裸鼠卵巢癌皮下移植瘤的治疗作用。方法:20只荷瘤裸鼠随机分成4组,每组5只,DDP组:顺铂(DDP)20mg/kg,腹腔内注射隔日1次,连续5次;AdHA组:表达血管抑素k1-5基因的腺病毒载体(AdHA)1×108pfu/次,隔日1次,连续5... 目的:探讨血管抑素k1-5对裸鼠卵巢癌皮下移植瘤的治疗作用。方法:20只荷瘤裸鼠随机分成4组,每组5只,DDP组:顺铂(DDP)20mg/kg,腹腔内注射隔日1次,连续5次;AdHA组:表达血管抑素k1-5基因的腺病毒载体(AdHA)1×108pfu/次,隔日1次,连续5次;AdHA+DDP组:AdHA1×108pfu/次,隔日1次,连续5次+DDP20mg/kg,腹腔内注射隔日1次,连续5次,以上3组为实验组。NS组(对照组):生理盐水(NS)100μL,腹腔内注射隔日1次,连续5次。以肿瘤体积、瘤质量及组织学改变来评价AdHA治疗效果及安全性。结果:瘤体内多点注射表达血管抑素k1-5的腺病毒能显著抑制肿瘤生长,AdHA组、DDP组及AdHA+DDP组较NS组肿瘤体积及瘤质量明显降低(P<0.05或P<0.01),且AdHA组及AdHA+DDP组较NS组微血管密度明显降低(P<0.05)。结论:表达血管抑素k1-5的腺病毒载体能抑制裸鼠卵巢癌皮下移植瘤的生长,且与化疗药联合应用有协同作用,提高肿瘤抑制率。 展开更多
关键词 血管抑制素类 基因疗法 转基因 腺病毒科 卵巢肿瘤 小鼠
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血管抑素基因对人胰腺癌细胞PC3裸鼠原位移植瘤模型生长和转移的影响 被引量:3
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作者 黄春锦 杜卫东 +8 位作者 沈达明 袁祖荣 乔伟伟 唐健雄 程爱群 张赣生 王一倩 于晓峰 竺越 《中国实用医药》 2009年第14期1-2,共2页
目的研究血管抑素基因对胰腺癌原位移植瘤模型裸鼠肿瘤生长和转移的影响。方法微量注射器向胰腺包膜下人胰腺癌细胞PC3(2×106个细胞),建立裸鼠人胰腺癌细胞PC3原位移植瘤模型。观察血管抑素基因治疗组裸鼠的原位肿瘤体积,各脏器肿... 目的研究血管抑素基因对胰腺癌原位移植瘤模型裸鼠肿瘤生长和转移的影响。方法微量注射器向胰腺包膜下人胰腺癌细胞PC3(2×106个细胞),建立裸鼠人胰腺癌细胞PC3原位移植瘤模型。观察血管抑素基因治疗组裸鼠的原位肿瘤体积,各脏器肿瘤转移情况。免疫组化法检测肿瘤微血管密度(MVD)。结果血管抑素基因治疗组原位肿瘤体积小于对照组,肿瘤腹膜转移、肝转移以及其他脏器转移的发生率较低,腹水的发生率亦较低,免疫组化检查结果显示血管抑素基因治疗组裸鼠肿瘤组织中MVD明显低于其他各组(P<0.05)。结论血管抑素基因对胰腺癌原位移植瘤模型裸鼠肿瘤生长和转移有抑制作用。 展开更多
关键词 胰腺肿瘤 细胞株 动物模型 血管抑素 基因治疗
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pcDNA3/AFP/TK/Angio融合基因靶向性治疗人原发性肝癌的实验研究 被引量:2
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作者 盛勤松 王琳 +6 位作者 任锋 卢永刚 邹浩 肖曙峰 唐波 黄洁 张捷 《中国普外基础与临床杂志》 CAS 2007年第4期403-408,共6页
目的研究pcDNA3/AFP/TK/Angio融合基因对人肝癌细胞系SMMC-7721裸鼠移植瘤模型的靶向性治疗作用。方法建立人原发性肝癌裸鼠皮下移植瘤模型,将荷瘤裸鼠随机分成肿瘤对照组、空质粒组、丙氧鸟苷(GCV)组、pcDNA3/TK/Angio组及pcDNA3/AFP/T... 目的研究pcDNA3/AFP/TK/Angio融合基因对人肝癌细胞系SMMC-7721裸鼠移植瘤模型的靶向性治疗作用。方法建立人原发性肝癌裸鼠皮下移植瘤模型,将荷瘤裸鼠随机分成肿瘤对照组、空质粒组、丙氧鸟苷(GCV)组、pcDNA3/TK/Angio组及pcDNA3/AFP/TK/Angio组5组。于瘤体内分别直接注射不同的质粒,同时于裸鼠腹腔内注射GCV,观察不同时段皮下肿瘤的生长情况并做病理学检查,免疫组化法检测肿瘤微血管密度(MVD)以及血管内皮细胞生长因子(VEGF)的表达量,原位末端标记(TUNEL)法检测细胞原位凋亡。放免法检测裸鼠血清甲胎蛋白(AFP)的变化,透射电镜观察肿瘤细胞超微结构的变化。结果裸鼠皮下成瘤率100%;pcDNA3/TK/Angio组及pcDNA3/AFP/TK/Angio组的肿瘤体积、血清AFP含量、肿瘤MVD和VEGF表达强度均明显低于对照组、空质粒组和GCV组(P<0.05),细胞凋亡指数都明显高于后3组(P<0.05),可见较多的凋亡细胞。而pcDNA3/AFP/TK/Angio组的肿瘤体积、AFP、MVD及VEGF表达强度又明显低于pcDNA3/TK/An-gio组(P<0.05),凋亡指数高于后者(P<0.05)。结论pcDNA3/AFP/TK/Angio融合基因系统可显著抑制肿瘤的生长,有望成为治疗原发性肝癌的新型生物制剂之一。 展开更多
关键词 原发性肝癌 基因治疗 靶向性 融合基因 血管生长抑素基因 自杀基因
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重组人血管抑素基因K(1-3)腺病毒载体的构建 被引量:2
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作者 韩世愈 贾长茹 郑建华 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第15期2264-2267,共4页
目的构建携带血管抑素(angiostatin,AG)基因K(1-3)重组复制缺陷型腺病毒表达载体。方法将人血管抑素K(1-3)cDNA插入穿梭载体pShuttle产生重组质粒pShttle-AG(K1-3),经双酶切与骨架载体pAde-no-X重组产生pAdeno-X-AG(K1-3),转染293细胞... 目的构建携带血管抑素(angiostatin,AG)基因K(1-3)重组复制缺陷型腺病毒表达载体。方法将人血管抑素K(1-3)cDNA插入穿梭载体pShuttle产生重组质粒pShttle-AG(K1-3),经双酶切与骨架载体pAde-no-X重组产生pAdeno-X-AG(K1-3),转染293细胞制备重组腺病毒。结果对pShuttle-AG(K1-3)进行酶切鉴定及测序证实插入片断为AG(K1-3)。PCR鉴定pAdeno-X-AG(K1-3),扩增出318bp特异性片断。线性pAdeno-X-AG(K1-3)转染293细胞,成功包装出重组腺病毒。结论成功构建了携带人angiostatin(K1-3)重组腺病毒载体,可在体外表达具有生物学活性的人angiostatin(K1-3),为进一步研究奠定了基础。 展开更多
关键词 腺病毒载体 血管抑素 基因表达
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血管生长抑素基因联合生长抑素治疗人胰腺癌的体外研究 被引量:5
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作者 朱红 郭永章 +3 位作者 杨鸿炜 邹浩 王琨 黄松泉 《中国普外基础与临床杂志》 CAS 2009年第6期460-465,共6页
目的探讨血管生长抑素基因联合生长抑素在体外对人胰腺癌细胞BXPC-3和血管内皮细胞ECV-304增殖的抑制作用。方法重组pcDNA3/angio质粒转染人胰腺癌细胞BXPC-3,利用RT-PCR和Western blot检测其表达及分泌血管生长抑素的情况;MTT法和流式... 目的探讨血管生长抑素基因联合生长抑素在体外对人胰腺癌细胞BXPC-3和血管内皮细胞ECV-304增殖的抑制作用。方法重组pcDNA3/angio质粒转染人胰腺癌细胞BXPC-3,利用RT-PCR和Western blot检测其表达及分泌血管生长抑素的情况;MTT法和流式细胞仪检测生长抑素和血管生长抑素对BXPC-3和ECV-304细胞增殖的影响。结果转染后的BXPC-3细胞表达并分泌血管生长抑素。一定浓度(≥10μg/ml)的生长抑素对BXPC-3细胞的增殖有明显抑制作用(P<0.01),并在一定浓度范围内呈剂量依赖性,同时能诱导BXPC-3细胞凋亡(P<0.01);但其对ECV-304细胞的增殖无明显影响(P>0.05)。血管生长抑素对ECV-304细胞的增殖有明显抑制作用(P<0.01),并能诱导其凋亡(P<0.01);但对BXPC-3细胞的增殖无明显影响(P>0.05)。血管生长抑素联合生长抑素对BXPC-3及ECV-304细胞的增殖均有明显抑制作用(P<0.01),也可诱导其凋亡(P<0.01),但无协同增强效应。结论①生长抑素主要通过直接抑制胰腺癌细胞增殖、促进其凋亡而发挥抗胰腺癌作用;在体外其对血管内皮细胞无抑制作用。②血管生长抑素主要通过特异性地抑制胰腺癌血管内皮细胞的增殖并诱导其凋亡,从而抑制新生毛细血管的生成,致胰腺癌细胞坏死和肿瘤消退。 展开更多
关键词 生长抑素 血管生长抑素 胰腺癌 基因治疗
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重组小鼠血管抑素基因在胆囊癌细胞中的表达及对血管内皮细胞增殖的抑制作用 被引量:1
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作者 张吉成 王作仁 +7 位作者 赵西霞 程艳娟 杨定忠 陆学东 张小艳 杨来智 王秀玲 张德新 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期479-483,共5页
目的 研究重组小鼠血管抑素基因真核表达质粒转染的胆囊癌细胞能否表达具有抑制血管内皮细胞生长活性的血管抑素蛋白。方法 应用脂质体LipofectAMINE 2 0 0 0将重组小鼠血管抑素基因的真核表达质粒 pcDNA3.1(+) angiostatin转染胆囊... 目的 研究重组小鼠血管抑素基因真核表达质粒转染的胆囊癌细胞能否表达具有抑制血管内皮细胞生长活性的血管抑素蛋白。方法 应用脂质体LipofectAMINE 2 0 0 0将重组小鼠血管抑素基因的真核表达质粒 pcDNA3.1(+) angiostatin转染胆囊癌细胞株GBC SD ,G4 18抗性筛选 ;以Westernblot检测血管抑素的表达 ,以血管内皮细胞增殖分析检测其活性。结果 经Westernblot检测 ,得到高表达血管抑素的胆囊癌细胞克隆 ,其培养上清能有效抑制bFGF刺激的血管内皮细胞增殖 (P <0 .0 5 )。结论 小鼠血管抑素基因真核表达质粒 pcDNA3.1(+) angiostatin转导的胆囊癌细胞能够表达具有生物学活性的血管抑素蛋白 。 展开更多
关键词 胆囊癌 基因治疗 血管抑素 蛋白表达 生物学活性
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血管抑素基因治疗人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的实验研究 被引量:1
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作者 孙平 董典宁 崔保霞 《现代妇产科进展》 CSCD 北大核心 2007年第5期351-353,I0001,共4页
目的:研究血管抑素(Angiostatin)基因转染治疗人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的作用及其相关机理。方法:使用人卵巢癌细胞株SKOV3建立人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型。随机将荷瘤裸鼠分为基因治疗组、空质粒组和空白对照组,分别于瘤体注射Angiosta... 目的:研究血管抑素(Angiostatin)基因转染治疗人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的作用及其相关机理。方法:使用人卵巢癌细胞株SKOV3建立人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型。随机将荷瘤裸鼠分为基因治疗组、空质粒组和空白对照组,分别于瘤体注射Angiosta-tin/PCDNA3、空质粒PCDNA3和无菌生理盐水,质粒用脂质体DOTAP介导转染细胞。观察各组动物的肿瘤生长曲线,检测各组肿瘤Angiostatin、VEGF的表达和微血管密度(MVD),利用TUNEL染色法行原位细胞凋亡分析,计算细胞凋亡指数(AI)。结果:基因治疗组裸鼠的肿瘤生长在早期受到明显抑制,大约1周后生长速度有所加快,肿瘤组织中Angiostatin蛋白局部高表达,VEGF的表达高于空质粒组和空白对照组,AI(4.21±0.49)高于空质粒组和空白对照组,MVD(19.3±3.2)低于空质粒组。结论:Angiostatin基因可以通过抑制血管生成而在一定程度上抑制肿瘤生长,其作用的发挥是独立于VEGF的。 展开更多
关键词 angiostatin 基因疗法 抗血管生成治疗 卵巢肿瘤
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不同剂量的重组腺相关病毒载体介导的人血管抑素对糖尿病肾病大鼠肾功能的影响 被引量:3
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作者 李伟 应长江 林红晓 《徐州医学院学报》 CAS 2009年第7期428-430,共3页
目的探讨不同剂量的重组腺相关病毒载体介导的人血管抑素(recombinant adeno-associated viruscarrying human angiostatin gene,rAAV-AS)对糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)大鼠肾功能的影响。方法60只清洁级雄性SD大鼠随机抽取10... 目的探讨不同剂量的重组腺相关病毒载体介导的人血管抑素(recombinant adeno-associated viruscarrying human angiostatin gene,rAAV-AS)对糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)大鼠肾功能的影响。方法60只清洁级雄性SD大鼠随机抽取10只作为正常对照组(NC组),其余造模为糖尿病大鼠。大鼠空腹12 h腹腔注射链尿佐菌素(STZ)60 mg/kg,72 h后尾静脉测血糖大于16.7 mmol/L记为造模成功,适应性喂养1周后,把糖尿病大鼠随机分为DN组(n=10),rAAV-0组(n=10),AS1组(n=10,1×1012VG/kg),AS2组(n=10,2×1012VG/kg),AS3组(n=10,4×1012VG/kg)。AS1组、AS2组和AS3组3组大鼠尾静脉注射rAAV-AS,NC组和DN组分别注射同等剂量的生理盐水,rAAV-0组注射同等剂量rAAV-0空载体;从第2周起,整个实验过程共持续8周。8周后检测各组大鼠的体重(body weight,BW)、肾重(kidney weight,KW),计算肾指数(kidney in-dex,KI),检测血糖(blood glucose,BG)、糖化血红蛋白(hemoglobin A1c,HbA1c)、尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、血肌酐(serum creatinine,SCr)、尿微量白蛋白(miscroalbunminuria,MAU)。结果与NC组相比,DN、rAAV-0、AS1组的KI、MAU、BUN、SCr、BG、HbA1c明显增高(P<0.05);与DN组相比,AS2组和AS3组KI、MAU、BUN、SCr明显降低(P<0.05);与rAAV-0组相比,AS2组和AS3组KI、MAU、BUN、SCr降低(P<0.05);与AS1组相比,AS2组和AS3组KI、MAU、BUN、SCr降低(P<0.05)。结论中等剂量和大剂量rAAV-AS对DN大鼠肾脏具有保护作用,且不依赖血糖降低而起作用。 展开更多
关键词 糖尿病肾病 腺相关病毒载体介导的血管抑素 基因治疗
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血管抑素基因转染联合化疗药物对人卵巢癌裸鼠腹腔移植瘤的治疗作用 被引量:2
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作者 孙平 孔北华 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期91-94,I0004,共5页
目的研究血管抑素(angiostatin)基因转染联合化疗药物顺铂对人卵巢癌裸鼠腹腔移植瘤的协同治疗作用及其相关机制。方法使用人卵巢癌细胞株SKOV3建立人卵巢癌裸鼠腹腔移植瘤模型。将荷瘤裸鼠随机分为4组,分别注射空质粒PcDNA3、angiostat... 目的研究血管抑素(angiostatin)基因转染联合化疗药物顺铂对人卵巢癌裸鼠腹腔移植瘤的协同治疗作用及其相关机制。方法使用人卵巢癌细胞株SKOV3建立人卵巢癌裸鼠腹腔移植瘤模型。将荷瘤裸鼠随机分为4组,分别注射空质粒PcDNA3、angiostatin/PcDNA3、化疗药物顺铂、angiostatin/PcDNA3+顺铂,质粒用脂质体DOTAP介导转染细胞。观察各组动物的腹水量及腹腔荷瘤量,检测各组肿瘤组织中angiostatin的表达和微血管密度,利用TUNEL染色法行原位细胞凋亡分析。结果联合治疗组裸鼠的腹水量(P<0.01)及腹腔瘤负荷(P<0.005)均显著低于其他实验组;肿瘤组织中angiostatin蛋白局部高表达,微血管密度显著低于其他实验组(P<0.01),细胞凋亡指数显著高于其他实验组(P<0.05)。结论Angiostatin基因联合化疗治疗人卵巢癌裸鼠腹腔移植瘤可以产生协同抑制作用,多途径联合用药是提高疗效的有效方法之一。 展开更多
关键词 血管抑素 抗血管生成治疗 基因治疗 化疗 卵巢癌
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