心肌营养素-1在血管紧张素Ⅱ致心肌细胞肥大中的表达

目的利用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激心肌细胞造成肥大,观察心肌细胞肥大过程中心肌营养素-1(cardiotrophin-1,CT-1)的表达情况。方法培养原代心肌细胞,给予AngⅡ刺激心肌细胞造成肥大,在不同时间取细胞进行反转录聚合酶链反应(RT-PCR)观察CT-1 mRNA表达,免疫组化法检测CT-1蛋白表达,相差显微镜下观察细胞形态变化。结果经AngⅡ刺激后在相差显微镜下可见心肌细胞面积变大。CT-1 mRNA水平随着AngⅡ刺激时间延长而有增高的趋势,CT-1蛋白表达亦增加。结论AngⅡ致心肌细胞肥大过程中伴有CT-1表达增加,CT-1有可能参与心肌细胞的肥大机制。

依那普利拉抑制大鼠心室成纤维细胞增殖的实验研究

目的观察血管紧张素Ⅰ转换酶抑制剂(ACEI)依那普利拉(enalaprilat,Ena)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌成纤维细胞(CFb)增殖作用及作用机制。方法以培养的Wistar大鼠乳鼠CFb为模型,实验分为对照组、AngⅡ组、用药组三个剂量组,采用胰酶消化、差速贴壁法培养CFb,四氮唑盐(MTT)比色法检测CFb增殖;羟脯氨酸法测定胶原含量;流式细胞仪、免疫细胞荧光染色法、免疫印迹法检测细胞周期和p27^(kipl)表达。结果Ena能够抑制AngⅡ诱导的CFb增殖(P<0.01,P<0.05),降低羟脯氨酸含量(P<0.01,P<0.05),提高p27^(kipl)表达(P<0.01,p<0.05)。结论Ena抑制CFb增殖与提高p27^(kipl)表达相关。

血管周围脂肪组织中AngⅡ介导血管平滑肌细胞增殖的机制

目的探讨血管周围脂肪组织(PVAT)中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)介导血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的相关机制。方法培养大鼠平滑肌细胞,MTT试验检测AngⅡ处理后细胞增殖率,检测AngⅡ处理后活性氧(ROS)、H2O2及HOCL水平;预先给予NADPH抑制剂apocynin、H2O2水解酶catalase、ERK1/2抑制剂PD98059分别作用于AngⅡ处理的细胞,观察其对细胞总蛋白、细胞周期的影响,并检测H2O2及HOCL含量的变化。结果 AngⅡ(终浓度100 nmol/L)处理24 h后细胞与未予AngⅡ处理比较可见明显诱导细胞增殖(P<0.05),且ROS升高;预先给予apocynin、catalase、PD98059分别作用于AngⅡ处理的细胞与单用AngⅡ处理的细胞比较可见细胞增殖抑制(P<0.05);预先给予apocynin、catalase与单用AngⅡ处理的细胞比较可降低H2O2及HOCL含量(P<0.05),但预先给予PD98059与单用AngⅡ处理比较H2O2和HOCL含量无统计学差异(P>0.05)。结论在PVAT中ROS介导AngⅡ诱导VSMC增殖的通路可能为Nox/H2O2/HOCL/ERK1/2。

血管紧张素转化酶抑制剂和血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂在慢性肾脏疾病治疗中的应用

血管紧张素转化酶抑制剂和血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂是目前广泛使用的降压药。对肾脏疾病患者,这两类药物还有独立于降压作用之外的减少蛋白尿的作用,在保护肾功能、延缓肾脏疾病的进展方面起到了极其重要的作用。但使用血管紧张素转化酶抑制剂或血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂也可能导致产生高钾血症、急性肾损伤等不良反应,妊娠、双侧肾动脉狭窄或容量不足等患者禁用,老年人或肾功能明显减退患者慎用。一般不建议联合使用血管紧张素转化酶抑制剂和血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂。

RAS基因多态性与子痫前期肾脏损害的相关性研究

目的探讨肾素-血管紧张素系统基因多态性与子痫前期患者肾脏损害的相关性。方法随机选择子痫前期患者72例,正常妊娠妇女45例,利用PCR和RFLP反应分析其外周血白细胞中ACE基因和AT1R1166基因多态性,比较不同基因型子痫前期患者蛋白尿含量和血清肾功能指标的差异。结果1.ACE基因多态性与尿蛋白含量密切相关,携带D等位基因孕妇的尿蛋白含量显著增加,血清肌酐、尿素氮水平呈上升趋势。2.ACE基因和AT1R1166基因型分布频率在子痫前期患者与正常孕妇间无显著差异。结论ACE基因与子痫前期肾脏损害密切相关,D等位基因是导致肾脏损害的不利因素。

海南黎族高血压人群血管紧张素转换酶基因多态性研究

目的观察血管紧张素转换酶(ACE)基因16内含子插入/缺失(I/D)多态性与海南黎族高血压的关系。方法采用聚合酶链反应(PCR)检测146例黎族正常对照组与111例高血压病人血中ACE基因16内含子I/D多态标记,得到3种基因型:缺失纯合子(DD型)、插入纯合子(Ⅱ型)及插入缺失杂合子(DI型)。并对所有普通PCR定为DD型的样本进行插入特异性PCR检测,以减少误分型率。统计各基因型频率,计算等位基因频率。结果海南黎族正常对照组DD、DI、Ⅱ基因型频率分别为13.0%、43.8%、43.2%;D及I等位基因频率分别为34.9%、65.1%。海南黎族高血压组DD、DI、Ⅱ基因型频率分别为10.8%、37.8%、51.4%;D及I等位基因频率分别为29.7%、70.3%。两组之间DD、DI、Ⅱ基因型频率及D、I等位基因频率均无显著性差异。结论黎族正常人和高血压病人的D等位基因频率均比I等位基因频率低;ACE基因I/D多态性与黎族高血压无显著关联。

内皮祖细胞条件培养液对血管紧张素Ⅱ所致血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的研究内皮祖细胞条件培养液对血管紧张素Ⅱ所致血管平滑肌细胞增殖的影响及机制。方法从人脐带血分离、培养、诱导内皮祖细胞分化并鉴定,分别制备早期内皮祖细胞条件培养液、晚期内皮祖细胞条件培养液以及人脐静脉内皮细胞条件培养液,采用BrdU标记法、蛋白定量、MTT以及流式细胞术分析早期内皮祖细胞条件培养液、晚期内皮祖细胞条件培养液以及人脐静脉内皮细胞条件培养液对血管紧张素Ⅱ所致血管平滑肌细胞DNA合成能力、细胞总蛋白含量、细胞存活率以及细胞周期进程的影响;进一步采用Western blot观察早期内皮祖细胞条件培养液对血管紧张素Ⅱ所致血管平滑肌细胞MAPK(p38、JNK、ERK活化)信号通路以及原癌基因c-myc、c-fos表达的影响。结果血管紧张素Ⅱ(10-6mmol/L)诱导血管平滑肌细胞增殖48 h后,血管平滑肌细胞DNA合成能力、细胞总蛋白含量、细胞存活率均较对照组明显增加,细胞周期中S期细胞所占百分率较对照组显著增加,G1期细胞所占百分率均相应较对照组减少;p38、JNK、ERK活化以及c-myc、c-fos的表达均较对照组显著增加;而早期内皮祖细胞条件培养液、晚期内皮祖细胞条件培养液以及人脐静脉内皮细胞条件培养液处理后能够显著抑制血管紧张素Ⅱ所致血管平滑肌细胞DNA合成能力、细胞总蛋白含量、细胞存活率的增加以及阻滞血管平滑肌细胞从G1期向S期的转化;同样早期内皮祖细胞条件培养液也抑制了血管紧张素Ⅱ所致p38、JNK、ERK的活化以及c-myc、c-fos的表达,其中均以早期内皮祖细胞条件培养液的抑制效果最明显。结论内皮祖细胞能够抑制血管紧张素Ⅱ所致血管平滑肌细胞增殖,其机制可能与其抑制MAPK信号转导通路的活化以及原癌基因c-myc、c-fos的表达有关。

慢性肾脏病患者尿血管紧张素原与肾脏肾素血管紧张素系统活性的相关性

目的探讨慢性肾脏病（CKD）患者尿血管紧张素原（AGT）与肾损伤指标及肾脏局部肾素血管紧张素系统（RAS）活性的关系。方法用放射免疫法和酶联免疫吸附法（ELISA）测定血、尿RAS组分的浓度，并用免疫组织化学方法评价肾内肾素、ACT、血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）和血管紧张素Ⅱ受体的表达。分析129例CKD患者尿AGT与临床指标的相关性以及73例行肾组织活检的CKD患者尿AGT与肾脏局部RAS组分表达的相关性。结果129例CKD患者尿AGT（159．08±125．18）μg／g Cr，Scr（113．20±105．05）μmol／L，估算肾小球滤过率（eGFR）（58．52±27．15）ml·min-1·（1．73m2）-1，尿蛋白量（2．03±2．65）g／24h，尿Ang Ⅱ（164．71±139．25）ng／g Cr，尿Ⅳ型胶原（447．60±800．66）μg／g Cr，尿钠（162．17±81．61）mmol／24h。经Pearson单因素相关分析，尿AGT与eGFR（r=-0．55，P〈0．01）、尿钠（r=-0．20，P〈0．05）呈负相关；与Ser（r=0．51，P〈0．01）、24h尿蛋白量（r=0．30，P〈0．01）、尿AngⅡ（r=0．20，P〈0．05）及尿Ⅳ型胶原（r=0．47，P〈0．01）呈正相关。多元回归分析发现尿AGT与eGFR呈负相关（P〈0．01），与Scr（P〈0．01）、24h尿蛋白量（P〈0．05）、尿Ang Ⅱ（P〈0．05）、尿Ⅳ型胶原（P〈0．01）呈正相关。73例CKD患者。肾活检组织中，尿AGT与肾脏AGT（r=0．45，P〈0．01）、Ang1I（r=0．52，P〈0．01）和Ang Ⅱ1型受体（r=0．28，P〈0．05）免疫组化阳性面积呈正相关。结论尿AGT可能是反映CKD肾脏损伤尤其是慢性损伤程度的指标，可作为肾脏局部AngⅡ活性的无创评价指标。

吸入不同浓度薰衣草精油对大学生血压的影响

目的:探讨吸入不同浓度薰衣草精油对健康大学生血压的影响及其可能作用机制。方法:采用气相色谱-质谱(GC-MS)分析薰衣草精油化学成分;选择健康大学生,嗅觉检查采用改良康涅狄格州化学感觉临床研究中心(CCCRC)的方法检测嗅觉正常162名,随机分为4组,分别吸入薰衣草精油浓度为100%、1%、1‰和蒸馏水后均采用24h动态血压仪观测血压和心率变化;测定血浆肾素活性(PRA)、血管紧张素Ⅰ(AngⅠ)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和醛固酮(ALD)等指标。结果:①GC-MS分析共确认薰衣草精油29种化学组分,其主要化学成分为芳樟醇(25.49%)和乙酸芳樟酯(25.54%);②100%薰衣草精油组吸入后15min平均动脉压(MAP)下降(P<0.05),作用持续60min;1%薰衣草精油组吸入后15min MAP下降(P<0.05),作用持续120min;1‰薰衣草精油组吸入30min后MAP下降(P<0.05),作用持续60min。4组实验前后心率差异均无统计学意义;③1%薰衣草精油组吸入1%薰衣草精油后血浆PRA、AngⅠ、AngⅡ和ALD均降低(P<0.05);而蒸馏水组吸入蒸馏水后血浆PRA、AngⅠ、AngⅡ和ALD均无明显变化。结论:吸入3种不同浓度薰衣草精油均能降低健康人MAP,其中1%薰衣草精油组血压降低较明显,作用时间久,且对心率均没有影响,其可能作用机制是通过降低血浆PRA、AngⅠ、AngⅡ和ALD的浓度而降低血压。

血管紧张素转化酶基因多态性在海南黎、汉族高血压人群的对比研究

目的:研究血管紧张素转化酶(ACE)基因多态性在海南黎、汉族原发性高血压(EH)人群的频率分布差异。方法:采用聚合酶链反应(PCR)方法,检测海南黎族111例EH患者(黎族组),106例汉族EH患者(汉族组)ACE基因多态性,观察DD、DI、II基因型频率及等位基因频率,并对所有普通PCR定为DD型的样本进行插入特异性PCR检测,以减少误分型率。结果:黎族组DD、DI、II基因型频率分别为10.8%、37.8%、51.4%,D及I等位基因频率分别为29.7%、70.3%;汉族组DD、DI、II基因频率为16.0%、28.3%、55.7%,D及I等位基因分别为30.2%、69.8%,2组比较,差异无统计学意义。结论:ACE基因多态性不是海南黎族EH人群发病率不同于汉族人群的主要原因。