参附注射液对缺血/再灌注损伤诱导大鼠心肌细胞凋亡的实验研究

目的:通过观察参附注射液对缺血/再灌注损伤时,心肌细胞超微结构及心肌细胞凋亡参数的影响,探讨参附注射液拮抗心肌缺血/再灌注损伤的作用机制。方法:建立心肌缺血/再灌注损伤模型,结扎大鼠左冠状动脉前降支(LAD)30min,再灌注10min。将46只大鼠随机分为5组,(Ⅰ)假手术组;(Ⅱ)对照组心肌缺血30min+生理盐水;(Ⅲ)对照组心肌缺血30min/再灌注10min+生理盐水;(Ⅳ)给药组心肌缺血30min+参附注射液;(Ⅴ)给药组心肌缺血30min/再灌注10min+参附注射液。以上各组分别采集相同部位的心室肌组织;应用透射电镜观察心肌细胞超微结构,通过CIMAS多功能真彩色病理图像分析CIMAS系统对心肌细胞线粒体进行体视学分析。原位标记TUNEL法凋亡的心肌细胞,免疫组化方法检测心肌细胞Bcl-2、Bax蛋白的表达,病理图像分析系统进行凋亡心肌细胞、Bcl-2及Bax蛋白的表达分析。结果:与假手术组比较,给药组(Ⅳ、Ⅴ)心肌细胞的Bcl-2蛋白表达显著增多(P<0.05),Bax蛋白表达略增加(P>0.05)和显著降低(P<0.05),心肌细胞凋亡明显减少(P>0.05);心肌细胞组织结构损害明显减轻;对照组与假手术组比较线粒体有显著变化(P<0.01),给药组(Ⅳ、Ⅴ)与假手术组比较线粒体变化程度差异无统计学意义(P>0.05)。结论:参附注射液能明显抑制心肌缺血/再灌注损伤引起的心肌细胞凋亡,其作用机制可能与上调Bcl-2蛋白表达,下调Bax蛋白表达和保护线粒体相关。

缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在动脉粥样硬化斑块中的表达及血管生成关系

目的:观察缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在动脉粥样硬化(As)斑块中的表达,探讨HIF-1α与斑块血管生成的关系。方法:24只Wistar大鼠随机分为正常组8只(普通饲料)和As模型组16只(高脂饮食+VitD3)。实验3个月后,检测血清总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG);取主动脉石蜡包埋切片,HE染色;测量主动脉斑块占内膜总面积比(RAAPIs),内膜中膜面积比(I/M);免疫组化SP法检测HIF-1α蛋白的表达情况,鼠单克隆抗体CD34计数新生血管数目(MVD)。结果:实验后模型组血清TC、TG水平较正常组明显升高[(3.30±0.35)vs(1.51±0.19);(0.85±0.12)vs(0.50±0.14)],差异有统计学意义(P<0.01);模型组中RAAPIs,I/M明显高于正常组(P<0.05);模型组中HIF-1α蛋白表达增高;正常组中HIF-1α未见表达(87.5%vs 0%,P<0.01);模型组中微血管密度(MVD)明显高于正常组[(13.14±2.45)vs 0,P<0.05];不稳定斑块组HIF-1α、MVD均高于稳定斑块组[(100%vs 66.6%),(14.30±1.70)vs(10.25±1.26),P<0.05)],HIF-1α蛋白表达与MVD表达呈正相关(r=0.704,P=0.005)。结论:HIF-1α可通过促进As斑块内血管生成,从而增加斑块的不稳定性;HIF-1α的含量可能是影响斑块稳定性的重要因素。

骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠慢性阻塞性肺疾病

目的:探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠的治疗作用。方法:健康雄性SD大鼠,随机分成3组,正常对照组、模型组和治疗组。通过烟熏法建立COPD模型后,大鼠尾静脉注射BMSCs进行生物治疗。应用细胞膜荧光染料PKH26标记的BMSCs回输大鼠体内,制作肺组织冰冻切片,在荧光显微镜下观察BMSCs是否定位于肺组织;采用硫代巴比妥酸和黄嘌呤氧化法分别检测血清和肺组织中超氧化物歧化酶(SOD)和活性丙二醛(MDA)含量;收集支气管肺泡灌洗液(BALF),计数细胞总数,并进行分类;制作肺组织病理切片,观察肺组织微细结构变化并定量测定肺平均内衬间隔(MLI)、平均肺泡数(MAN)。结果:BMSCs能够归巢到COPD大鼠的肺组织并存活;BM-SCs治疗组与模型组相比,血清中SOD的活性明显增高、MDA含量显著降低(P<0.05);BALF中细胞总数明显减少,中性粒细胞总数及比例均减小(P<0.05);病理有明显的改善,MLI减小,MAN增大(P<0.05)。结论:BMSCs对COPD大鼠具有治疗作用。

体外膜肺氧合中犬肿瘤坏死因子、白介素8及白介素10的变化

目的:探讨细胞因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素8(IL-8)及白介素10(IL-10)在体外膜肺氧合(ECMO)过程中的变化特点及变化规律。方法:选择健康杂种犬6只,均为雄性,体质量(23±2)kg,采用Medtronic 550型离心泵;ECMO儿童套包:Medtronic Silicone。沿腹股沟方向切开皮肤并解剖出股静脉,分别插入12Fr动脉插管及14Fr静脉插管并结扎固定动静脉插管与ECMO循环管道连接。ECMO转流前5min静脉注射肝素1mg/kg,检测ACT,维持在180～220s。分别在ECMO治疗开始前30min,开始后6h、12h、24h、36h及48h抽取犬外周静脉血,分离出血清,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清炎性细胞因子TNF-α、IL-8及IL-10,观察TNF-α、IL-8及IL-10在ECMO过程中不同时间点的变化特点和变化规律。结果:在ECMO过程中随着辅助时间的延长外周血TNF-α浓度和IL-8浓度有升高的趋势,但在实验开始36h外周血中TNF-α、IL-8浓度差异均无统计学意义(P>0.05),在辅助48h时与辅助前差异有统计学意义(P<0.05)。IL-10浓度在ECMO辅助过程中无明显的变化,ECMO辅助前和辅助过程中的各时间点比较IL-10浓度差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:体外膜肺氧合治疗36h不会引起血清炎症及抗炎因子显著升高,48h开始血清炎症因子浓度开始升高,抗炎因子浓度仍无明显变化。

自身免疫性心肌炎心肌基质金属蛋白酶的其抑制因子表达改变的意义

目的:以人工合成多肽诱导的实验性自身免疫性心肌炎(experimental autoimmune myocar-ditis,EAM)小鼠为实验模型,分析心肌内基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)及组织基质金属蛋白酶抑制因子(tissue inhibitors of matrix mentalloproteinases,TIMPs)表达变化,探讨病理性自身免疫可能的致病机制。方法:人工合成多肽诱导易感品系(BALB/C)小鼠构建EAM模型。超声评价2组小鼠血流动力学变化情况。分别以免疫组化法、逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)法,比较2组小鼠心肌组织中MMP-3、MMP-9及TIMP-1在蛋白质水平与基因水平的表达变化。Masson三色染色法分析2组心肌胶原含量情况。结果:病理切片观察模型组小鼠心肌炎症反应明显。超声检查结果显示,模型组较对照组心功能明显恶化。免疫组化与RT-PCR结果分析显示,模型组MMP-3、MMP-9蛋白质及基因表达水平明显高于对照组,而TIMP-1的蛋白质及基因表达水平均相对下降。Masson染色切片分析显示,2组心肌胶原含量差异无统计学意义。结论:EAM模型小鼠心肌组织MMPs表达水平增高,而TIMPs表达水平下降,2者表达比例失衡。该失衡状态可能影响心肌胞外基质的正常功能,并进一步影响心功能。

兔血管内皮祖细胞的分离及诱导分化

目的：探讨自兔骨髓中分离及诱导血管内皮祖细胞（EPCs）的方法。方法：抽取兔骨髓，Ficoll离心液梯度离心，分离出骨髓单个核细胞，用含有血管内皮生长因子（VEGF）、碱性纤维细胞生长因子（bFGF）、胰岛素样生长因子-1（IGF-1）的M199培养液诱导培养EPCs，透射电镜及免疫荧光法对所培养细胞进行鉴定。结果：细胞诱导培养48-72h后即可见有细胞贴壁，逐渐变成梭形。培养至8d左右，可观察到数条由梭形贴壁细胞直线生长连接而成的条索，7-10d出现多个细胞团，贴壁的梭形细胞开始从细胞团的边缘出芽长出，培养至14d左右，细胞逐渐融合，连接成大片条索状结构。透射电镜及免疫荧光检查证实为血管内皮祖细胞。结论：梯度离心法白兔骨髓获得单个核细胞，在体外经诱导分化可获得血管内皮祖细胞。

改良扩张方法对兔静脉移植物内皮细胞保护作用研究

目的:观察不同扩张方法对兔静脉移植物内皮细胞保护作用。方法:健康纯种新西兰兔72只,按扩张液(空白对照、罂粟碱和罂粟碱+维拉帕米)随机分为A组、B组、C组,每组24只。每组又分为4个亚组,用相同扩张液分别以30mmHg、40mmHg、50mmHg和100mmHg扩张2min,再保存30min。实验终了取静脉,测量扩张后单位面积血管内皮细胞死亡数目,测定内皮细胞功能。结果:相同扩张压力下,扩张后各组均有内皮细胞死亡,但C组明显低于A组和B组(P<0.01);各组内皮细胞功能均有降低,C组明显高于A组、B组(P<0.01)。A组和B组扩张压力在50mmHg时,内皮细胞损伤最轻;而C组以40mmHg最佳(P<0.01)。结论:新的扩张方法可减轻兔静脉移植物内皮细胞损伤。

骨化三醇在小鼠气管移植排斥反应中的作用

目的:研究骨化三醇对小鼠异位移植气管排斥反应的作用及其与环孢素有无协同性。方法:建立小鼠异位气管移植模型。术后分为4组,每组10只。对照组给予生理盐水25mL.kg-1.d-1灌胃;骨化三醇(cal)组给予骨化三醇2.5μg.kg-1.d-1灌胃;环孢素组(Csa)给予环孢素25mg.kg-1.d-1。灌胃;混合用药组(mix)给予骨化三醇2.5μg.kg-1.d-1和环孢素25mg.kg-1.d-1灌胃。术后4周取出移植气管,行HE染色,观察每组气管的阻塞率、上皮细胞缺失率、有无软骨破坏等指标。同时测定小鼠血清中白细胞介素-12(IL-12)的浓度及计算小鼠体重增长值。结果:对照组气管阻塞率、上皮细胞缺失率与环孢素、骨化三醇、混合用药组3组相比有明显增高(P<0.05)。混合用药组的气管阻塞率与其他3组相比明显降低(P<0.05)。环孢素组的上皮细胞缺失率与骨化三醇组、混合用药组2组相比明显升高(P<0.05)。对照组90%观察到软骨破坏,环孢素组20%观察到有软骨破坏,骨化三醇、混合用药2组没有观察到软骨破坏。对照组血清IL-12的浓度较其他3组血清IL-12浓度明显增高(P<0.05),混合用药组的IL-12浓度明显较其他3组降低(P<0.05)。环孢素组和混合用药组体重增长值与其他2组相比明显降低(P<0.05)。结论:骨化三醇对小鼠异位气管移植的排斥反应有抑制作用,在此过程中骨化三醇与环孢素表现出协同性。

卡托普利及合用氯沙坦对大鼠心肌梗死区肌纤维细胞增殖和功能的影响

目的:比较卡托普利组和卡托普利与氯沙坦合用组急性心肌梗死(AMI)大鼠心肌瘢痕组织的肌纤维细胞在离体情况下的增殖率及转化生长因子-1(TGF-β1)水平。方法:雄性wistar大鼠36只,前降支结扎术后存活12h以上者随机分成对照组、卡托普利组和合用组,用药14d后分离培养梗死区肌纤维细胞。流式细胞技术检测血管紧张素Ⅱ(AngⅡ),刺激前后S期细胞比率(SPF)和增殖指数(PI),酶联免疫吸附实验(ELASA)法检测培养液中TGF-β1浓度。结果:AMI后梗死区肌纤维细胞具有极高的增殖活性。合用组SPF/PI低于对照组,而卡托普利组与对照组相比无统计学意义。合用组培养液中TGF-β1浓度低于对照组和卡托普利组。各组肌纤维细胞对AngⅡ刺激的反应性无统计学意义。结论:AMI后早期在有效剂量卡托普利的基础上加用氯沙坦更强抑制梗死区肌纤维细胞的增殖能力和生长因子产生。

L和L/T型钙通道对急性梗死心肌肌腱蛋白的调节

目的:研究L和L/T型钙通道对梗死心肌基质金属蛋白酶(MMP-2、MMP-3、MMP-9)及细胞外间基质肌腱蛋白(tenascin-c,TN-C)的影响。方法:结扎大鼠左冠状动脉建立心肌梗死模型,术前7d分别用安慰剂、L型钙通道阻滞剂阿莫地平(4mg·kg-1.d-1)、L/T型钙通道阻滞剂米贝拉地尔(10mg·kg-1.d-1)。术后1d、3d、7d分别检测左心室游离壁(left ventricular free wall,LVFW)MMP-2、MMP-3及MMP-9蛋白表达;免疫荧光检测LVFW心肌TN-C的分布。结果:术前LVFW心肌排列基本正常,术后7dLVFW心肌有不同程度的坏死、肥厚及纤维化。术后1d、3d、7dLVFWMMP-2、MMP-3、MMP-9及TN-C蛋白表达一直处于高水平,各时相点与基础值相比差异有显著性(P<0.01)。米贝拉地尔更明显地抑制LVFWMMP-2、MMP-3、MMP-9及TN-C上调,缩小心肌梗死病灶,阿莫地平能抑制MMP-2、MMP-3、MMP-9及TN-C上调,但较米贝拉地尔弱。结论:心肌梗死病理过程中,梗死病灶内MMP-2、MMP-3、MMP-9及TN-C上调,L和L/T型钙通道阻滞剂能减轻心肌重构与选择性的抑制心肌组织中的MMP-2、MMP-3、MMP-9及TN-C表达有关。

慢性阻塞性肺疾病大鼠主要脏器γ-GCS活性及其mRNA表达变化

目的:研究慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠血浆、肺、心、肝、和肾组织中氧化/抗氧化水平,及γ谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)活性及其表达在各器官组织中的差异和变化。方法:健康雄性Wistar大鼠14只,随机分COPD模型组和对照组,每组7只。采用每日熏香烟和两次气管内滴入脂多糖(LPS)法制作COPD大鼠模型。检测大鼠血浆、肺、心、肝和肾组织中还原型谷胱甘肽(GSH)、活性氧(ROS)、总抗氧化力(T-AOC)和γ-GCS活性。用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测肺、心、肝和肾组织中γ-GCS mRNA的表达。结果:COPD组大鼠心、肝中GSH、ROS、T-AOC和γ-GCS活性均显著增高(P均<0.05),但未显示出明显氧化/抗氧化失衡。肺中GSH和ROS提高,而T-AOC下降明显(P均<0.05),表明提高的GSH不足以抵御氧化作用,明显存在氧化/抗氧化失衡。血清中ROS增高,GSH和T-AOC下降明显,显示系统性氧化/抗氧化失衡。COPD大鼠肺组织γ-GCS mRNA表达较对照组显著增高(P<0.05),而心、肝、肾组织中γ-GCS mRNA表达与对照组无明显差异(P>0.05)。结论:COPD大鼠肺内存在氧化/抗氧化失衡,肺组织是γ-GCS表达的主要部位,在抗氧化损伤中可能发挥重要作用。

Mouse models of porcine circovirus 2 infection

PCV2 is considered the main pathogen of porcine circovirus diseases and porcine circovirus-associated diseases(PCVD/PCVAD). However, the exact mechanism underlying PCVD/PCVAD is currently unknown. Mouse models of PCV2 are valuable experimental tools that can shed light on the pathogenesis of infection and will enable the evaluation of antiviral agents and vaccine candidates. In this review, we discuss the current state of knowledge of mouse models used in PCV2 research that has been performed to date, highlighting their strengths and limitations, as well as prospects for future PCV2 studies.