膜联蛋白A9在人结肠癌细胞株SW620增殖中的作用及机制

目的观察膜联蛋白A9（ANXA9）在人结肠癌细胞株SW620增殖中发挥的作用，并探讨其机制。 方法实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）和Western blot法检测人结肠癌细胞株HT29、SW620、SW480、LoVo、SW1116中ANXA9的表达；应用40 nmol/L的ANXA9-小干扰RNA（siRNA）转染ANXA9表达最强的SW620细胞株，抑制内源性ANXA9的表达；细胞计数试剂盒（CCK-8）实验检测转染对SW620细胞活性的影响；流式细胞术（FCM）检测转染ANXA9-siRNA对SW620细胞周期的影响；Real-time PCR和Western blot法检测增殖相关基因增殖细胞核抗原（PCNA）、细胞周期蛋白（Cyclin） D、Cyclin E、p21、p16的表达。 结果人结肠癌细胞株HT29、SW620、SW480、LoVo、SW1116中ANXA9 mRNA表达强度分别为0.027±0.004、0.041±0.005、0.028±0.003、0.033±0.003、0.025±0.005；ANXA9蛋白表达强度分别为0.287±0.076、1.246±0.103、0.326±0.040、0.387±0.097、0.295±0.064，其中SW620细胞ANXA9的mRNA和蛋白表达最强（F＝8.212，P＝0.003；F＝81.728，P＝0.000）。转染组、阴性对照组、空白组的ANXA9 mRNA和蛋白的表达水平分别为0.209±0.016、0.317±0.104，0.957±0.070、0.647±0.155，1.031±0.171、0.727±0.145。转染后转染组的细胞ANXA9的mRNA和蛋白均明显低于对照组及空白组（F＝54.072，P＝0.000；F＝7.601，P＝0.023）。CCK8结果显示，转染组、阴性对照组、空白组的细胞活性24 h分别为0.605±0.024、0.612±0.022、0.628±0.027；48 h分别为0.810±0.049、1.196±0.118、1.308±0.070；72 h分别为1.145±0.070、1.531±0.062、1.454±0.081。转染组的细胞活性明显低于对照组及空白组（F＝38.742，P＝0.000；F＝32.56，P＝0.000）。G0/G1、G2/M、S期的细胞比例在转染组为（66.870±3.850）%、（15.060±2.480）%、（18.080±1.420）%；阴性对照组为（50.070±3.370）%、（32.520±2.500）%、（17.410±0.920）%；空白组为（48.740±2.170）%、（32.390±1.820）%、（19.210±0.390）%。转染组细胞的G0/G1期比例升高（F＝29.752，P＝0.001）、G2/M期的比例降低（F＝57.860，P＝0.000），S期细胞的比例无明显变化（F＝1.568，P＝0.284）。转染组细胞Cyclin D1、Cyclin E1的mRNA和蛋白表达明显降低[mRNA：F＝462.821、5.512，P＝0.000、0.044；蛋白：F＝15.148、8.300，P＝0.005、0.019）]，而p21的mRNA和蛋白表达明显增高[mRNA：F＝6.472，P＝0.032；蛋白：F＝21.230，P＝0.002]。 结论ANXA9可能通过Cyclin D1、Cyclin E1、p21表达而参与了结肠癌细胞株SW620的增殖过程。

膜联蛋白A9在胃癌组织中的表达及其对胃癌细胞SGC-7901增殖能力的影响

目的探讨膜联蛋白A9(ANXA9)在胃癌组织中的表达及其对胃癌细胞增殖及裸鼠皮下成瘤能力的影响。方法收集140例胃癌患者的癌组织及其配对的癌旁组织,应用免疫组化染色和qPCR方法检测胃癌及其配对癌旁组织中ANXA9的表达水平,分析其与临床病理参数的关系及对预后的影响。应用慢病毒转染技术抑制胃癌细胞株SGC-7901中ANXA9的表达水平,CCK-8和细胞克隆形成实验检测对SGC-7901增殖能力的变化,流式细胞术检测SGC-7901细胞周期的变化。稳定转染细胞株构建裸鼠皮下移植瘤模型,研究抑制ANXA9对皮下移植瘤的影响。结果免疫组化染色结果显示:ANXA9在胃癌组织中阳性表达率为67.1%,明显高于癌旁组织的30.7%(t=31.17,P<0.05);qPCR检测结果显示:在癌旁组织和胃癌组织中ANXA9 mRNA的表达水平分别为0.142±0.107和0.819±0.191(t=6.942,P<0.05)。ANXA9高表达组与低表达组在组织分化程度上差异有统计学意义(P<0.05);高表达组和低表达组患者的中位生存期分别为50和59个月(P<0.05)。CCK-8检测结果显示:在人胃癌细胞株SGC-7901中下调ANXA9表达后,转染组细胞的OD值分别为0.285±0.025、0.386±0.031、0.711±0.032、1.007±0.084、1.552±0.055和0.274±0.026、0.380±0.049、0.714±0.035、1.106±0.081、1.561±0.060,与对照组的0.294±0.011、0.445±0.046、1.076±0.096、1.588±0.095、2.286±0.110相比增殖能力明显减弱,从48 h开始差异均有统计学意义(均P<0.05)。干扰组细胞克隆形成数目分别为(207±12)、(225±14)个,少于对照组的(412±14)个,差异有统计学意义(P<0.05)。抑制ANXA9表达后,转染组G0/G1期细胞所占比例分别为62.80%和55.87%,比对照组的44.37%明显增加;转染组细胞S期所占比例分别为22.74%、21.44%,与对照组的29.19%相比明显降低,差异均有统计学意义(均P<0.05)。肿瘤裸鼠皮下成瘤结果显示:在稳定干扰ANXA9后,移植瘤的生长速度明显慢于对照组。皮下注射第23天时两组移植瘤平均体积分别为(625±49)mm3和(303±157)mm3,两组瘤体组织质量分别为(1.60±0.11)、(0.57±0.09)g,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论ANXA9在胃癌组织中高表达,并与组织分化程度和预后有关;下调ANXA9表达能够抑制胃癌细胞增殖及裸鼠皮下成瘤的能力。