人膜联蛋白Ⅴ的表达及核素标记

目的构建人膜联蛋白Ⅴ(AnnexinⅤ)表达载体并诱导其表达,应用双功能螯合剂联肼尼克酰胺(HYNIC)偶联后应用核素99mTc标记。方法PCR扩增含AnnexinⅤ编码基因序列,将扩增产物克隆至His融合表达载体pET-28a(+),以异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导His融合AnnexinⅤ的表达,应用Ni-NTA Super-flow纯化并经测序、SDS-PAGE及Western blot确证。表达的蛋白通过HYNIC偶联后进行99mTc标记,考察标记物的特性。结果琼脂糖凝胶电泳示PCR扩增产物碱基数量与目的片段大小一致。对重组质粒的分析表明,插入片段的序列与发表的AnnexinⅤ基因编码序列一致。在IPTG诱导下,经Western blot及SDS-PAGE证实,重组大肠埃希菌DH5α高效表达分子量约36 kD的目的产物9。9mTc-HYNIC-AnnexinⅤ标记率及放化纯均达到90%以上,稳定性在6 h以上,可以满足核素显像的要求。结论人AnnexinⅤ编码序列已被克隆至His融合表达载体pET-28a(+)上,并在大肠埃希菌DH5α中高效、大量表达。经HYNIC偶联后99mTc标记,可以得到较高的标记率和放化纯9。9mTc-HYNIC-AnnexinⅤ有望成为一种有良好临床应用前景的凋亡显像剂。

人重组钙依赖性磷脂结合蛋白Ⅴ在大肠杆菌中的高效表达、纯化及细胞凋亡检测

目的 :为细胞凋亡研究提供快速可靠的实验方法。方法 :利用RT PCR技术从人外周血单核细胞系U937cDNA文库中扩增出编码钙依赖性磷脂结合蛋白Ⅴ (AnnexinⅤ )cDNA ,并克隆到大肠杆菌表达载体中 ,在大肠杆菌中表达含凝血酶识别序列的MS2AnnexinⅤ融合蛋白。表达产物经凝血酶消化 ,可除去MS2细菌蛋白 ,再经离子交换层析纯化 ,可得成熟的AnnexinⅤ纯品 ,FITC标记后的AnnexinⅤ可用于细胞凋亡的检测。结果 :在大肠杆菌表达的人重组AnnexinⅤ占菌体蛋白的 5 6 % ,经纯化获得 99%纯度的非融合型AnnexinⅤ ,FITC标记的An nexinⅤ能有效地检测凋亡细胞。结论 :成功地建立了批量获取AnnexinⅤ的技术路线 。

细胞凋亡检测剂^(125,131)I-Annexin Ⅴ的制备和初步评价

利用国内基因工程制备的AnnexinⅤ,采用Iodo Gen标记方法,研究了125,131I AnnexinⅤ的标记条件。在每管加入50μgIodo Gen、pH=6～7.8、AnnexinⅤ的质量浓度大于25μg/mL的条件下,反应10min,标记物的标记率大于80%。经PD 10色谱柱纯化后,标记物的放化纯度大于95%,室温下,标记物能稳定40h。在正常小鼠体内的生物分布实验表明,碘标记的AnnexinⅤ主要浓聚于肝、脾、肾,在体内清除很快。凋亡细胞结合分析表明,碘标记的AnnexinⅤ保持了较好的生物活性,对PS的解离常数K为8.53nmol/L,结合容量RT为1.23×106结合位点数/个细胞。所制备的细胞凋亡检测剂125,131I AnnexinⅤ可以用于进一步的动物模型或人体实验。

川崎病患儿血浆抗β2糖蛋白1抗体对人脐静脉血管内皮细胞和膜联蛋白Ⅴ结合的影响及意义

目的通过研究川崎病(KD)患儿血浆抗β2糖蛋白1(β2GP1)抗体水平及其对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)与膜联蛋白Ⅴ结合率的影响,探讨抗β2GP1抗体在KD血管损害中的作用及意义。方法选择37例KD患儿作为观察组,均在用激素、阿司匹林和(或)静脉注射丙种球蛋白(IVIG)前采血;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测患儿血浆抗β2GP1抗体水平,流式细胞术分析KD患儿血浆对annexinⅤ与HUVEC结合水平的影响;20例同期住院年龄相仿的感染性疾病患儿为对照组,均除外心、肝、肾、血液及风湿性疾病。组间比较采用SPSS11.5软件进行分析。结果37例KD患儿中并冠状动脉病变者17例。观察组和对照组血浆抗β2GP1抗体水平分别为(8059.5±1917.7)U/L和(5210.0±1125.9)U/L,二者比较有显著性差异(t=15.41P<0.05);冠状动脉损伤患儿与冠状动脉正常患儿血浆抗β2GP1抗体水平分别为(9311.8±2148.2)U/L和(6995.0±697.0)U/L,二者比较有显著性差异(t=10.49P<0.05)。未加血浆时annexinⅤ与HUVEC结合率为(26.1±5.76)%,加对照组患儿血浆后annexinⅤ与HUVEC结合率为(21.22±5.54)%,二者比较无显著性差异(t=0.708P>0.05);加KD患儿血浆后annexinⅤ与HUVEC结合率为(10.55±3.18)%,与不加血浆时比较显著降低(t=8.06P<0.001);也显著低于加对照组血浆后结合率(t=4.72P<0.001)。结论抗β2GP1抗体阻止annexinⅤ与血管内皮细胞结合,是KD冠状血管炎的机制之一,抗β2GP1抗体是KD冠状动脉损伤的一种重要危险因子。

荷淋巴瘤裸鼠放射免疫治疗^(99m)Tc-Annexin Ⅴ凋亡显像的研究

探讨99mTc-Annexin Ⅴ凋亡显像在评价淋巴瘤131I-Rituximab放射免疫治疗疗效中的价值及其最佳显像时间。荷淋巴瘤裸鼠经肿瘤间质、尾静脉注射131I-Rituximab治疗后不同时间点进行99mTc-Annexin Ⅴ凋亡显像,并分离解剖肿瘤组织进行流式细胞术和免疫组织化学检查,根据其与凋亡显像的吻合程度确定显像最佳时间。结果显示:131I-Rituximab经肿瘤间质注射后24h、36h、48h、96h99mTc-Annexin Ⅴ凋亡显像肿瘤/非肿瘤组织摄取比(T/NT)分别为6.0±1.08、8.4±1.68、8.1±1.89、7.0±0.95,高于相同时间点静脉注射组(3.4±0.27、5.1±0.82、6.7±0.58、5.8±0.91),且均与相同时间点细胞凋亡率、bax/bcl-2变化基本一致。结论:99mTc-Annexin Ⅴ凋亡显像作为无创性手段,能有效监测淋巴瘤131I-Rituximab放射免疫治疗后细胞凋亡情况,且放射免疫治疗后36h^48h是凋亡显像较佳时间。

乳黏素及膜连蛋白Ⅴ检测心血管疾病的细胞凋亡

许多心血管疾病与细胞凋亡密切相关,预凋亡细胞上磷脂酰丝氨酸(PS)由细胞膜内侧翻转到外侧。乳黏素比膜连蛋白Ⅴ可更早地识别预凋亡细胞上暴露的PS,因其特异性强,敏感度高等优点,已发展成一项新的PS检测技术,逐渐成为各个领域的研究热点,其可能对某些心血管疾病的早期预防和治疗有重要意义。该文主要从乳黏素和膜联蛋白Ⅴ的生物学特性及心血管疾病检测方面进行介绍,并对乳黏素的发展前景进行展望。

人膜联蛋白Ⅴ基因的克隆及原核表达

目的 :构建人膜联蛋白 c DNA的原核表达载体并诱导其表达。 方法 :利用 RT- PCR技术从人胎盘组织总 RNA扩增膜联蛋白 基因的编码序列 ,将扩增产物克隆至 GST融合表达载体 p GEX- 2 T,以 IPTG诱导 GST融合人膜联蛋白 的表达。 结果 :凝胶电泳显示人胎盘组织 PCR扩增产物的分子质量大小与目的片段大小相符。对重组质粒分析表明 ,插入片段的序列与发表的人膜联蛋白 基因编码序列一致。在 IPTG的诱导下 ,BL 2 1重组菌高效表达出一个相对分子质量约为 6 0 0 0 0的产物。 结论 :人膜联蛋白 编码序列已被克隆至 GST融合表达载体 p GEX- 2 T。

^(99m)Tc-HYNIC-annexinⅤ活体检测单次放疗后肿瘤细胞凋亡

目的:本研究旨在采用99mTc-HYNIC-annexinⅤ活体检测放疗后肿瘤的凋亡情况,并初步探讨凋亡与照射剂量及肿瘤敏感性的关系。方法:将EL4淋巴瘤和S180肉瘤细胞株分别接种于实验小鼠右腋下10 d,随机分成显像组和观察组。显像组不同剂量照射后尾静脉注射99mTc-HYNIC-annexinⅤ,2 h后SPECT显像,取组织称重后分别测量放射性计数,计算每克组织百分注射剂量率(%ID/g)及T/B、T/M放射性比值,应用TUNEL法检测肿瘤凋亡细胞数。观察组照射后观察2周。结果:EL4淋巴瘤随照射剂量增加显影逐渐清晰,凋亡细胞数增多,且与%ID/g呈正相关(r=0.892,P<0.001);S180肉瘤不明显。相同剂量(0 Gy或8 Gy)照射,EL4淋巴瘤放射性分布及凋亡细胞数明显高于S180肉瘤。8 Gy照射后,S180肉瘤仅缩小0.1 cm,EL4淋巴瘤完全消退。结论:99mTc-HYNIC-annexinⅤ可早期活体检测放疗诱导的肿瘤凋亡。放射诱导的凋亡与疗效呈正相关,检测凋亡有助于判断其对放疗的敏感性,可以作为预后的指标。

人膜联蛋白Ⅴ的原核表达和鉴定

目的 构建人膜联蛋白 的原核表达载体并诱导其表达。方法 利用 RT- PCR技术从人胎盘组织总RNA扩增膜联蛋白 基因的编码序列 ,将扩增产物克隆至 GST融合表达载体 p GEX- 2 T,以 IPTG诱导 GST融合人膜联蛋白 的表达。结果 凝胶电泳显示人胎盘组织 RT- PCR扩增产物的分子量大小与目的片段大小相符。对重组质粒分析表明 ,插入片段的序列与发表的人膜联蛋白 基因编码序列一致。在 IPTG的诱导下 ,BL2 1重组菌高效表达出一个分子量约为 6 1k Da产物。结论 人膜联蛋白 编码序列已被克隆至 GST融合表达载体 p GEX- 2 T。

膜联蛋白Ⅴ去除奶牛死精子技术及其在性控冷冻精液生产中的应用

本研究旨在通过膜联蛋白Ⅴ(Annexin Ⅴ)与奶牛死精子的特异结合,并尝试与免疫磁珠技术共用去除奶牛精液中死精子,从而提高性控精液生产效率。试验结果显示,通过膜联蛋白Ⅴ与免疫磁珠筛选后的精子活力、膜完整性、线粒体活性均有不同幅度改善,特别是上机分离时X/Y死精率明显下降(P<0.05),说明该技术流程设计可以有效去除部分死精子,提高性控精液生产效率。同时,试验证明膜联蛋白Ⅴ与免疫磁珠筛选操作对于分离后的X或Y精子制备的性控冷冻精液各项产品技术指标均没有明显影响(P>0.05),说明该技术流程并不会对精子造成额外的损伤。综上所述,本研究开发的Annexin Ⅴ蛋白的特异性结合免疫磁珠方法与技术工艺,可以有效去除奶牛精液中的死精子,显著提升奶牛性控冷冻精液生产效率、降低生产成本,为家畜性别控制冷冻精液推广应用提供新的技术支撑。

急性疼痛应激对SD大鼠胃及颌下腺组织annexin5表达的影响

目的研究在福尔马林致炎的急性疼痛应激状态下SD大鼠胃及颌下腺组织膜联蛋白5(annexin 5)表达的影响。方法单侧后足底皮下注射0.2 m l 5%福尔马林溶液,建立SD大鼠的急性疼痛应激模型,对照组注射等量的生理盐水,分别取对照组和应激组SD大鼠胃及颌下腺组织通过western b lot分析急性应激状态下大鼠胃及颌下腺组织annexin 5表达的变化。结果在急性疼痛应激状态下,1 h和72 h组胃组织annexin 5表达水平与对照组相比均无显著性差异(P>0.05),而6 h和24h组annexin 5表达水平显著升高(P<0.01);1 h和24 h组颌下腺组织annexin 5表达水平与对照组相比均无显著性差异(P>0.05),而6 h和72 h组显著升高(P<0.01);结论annexin 5参与了胃及颌下腺对急性疼痛应激的反应,急性疼痛可能通过annexin 5影响胃及颌下腺的功能。

低剂量脉冲超声波对培养细胞的生物学效应

目的 研究不同时间的低剂量脉冲超声波刺激对细胞增殖和细胞凋亡的影响。方法 采用MTT法测定成纤维细胞增殖情况 ,AnnexinV法测定成纤维细胞和肿瘤MiaPaCa -2细胞的凋亡情况。结果 (1)在MTT法测定细胞活性中 ,细胞培养液不含FCS时 ,超声波刺激时间为 6min、 11min和 2 0min的剂量组 ,其吸光光度值较对照组都有显著性增高 ,且差异具有统计学意义 (均P <0 . 0 1) ,其细胞增殖峰值在 11min。细胞培养液含 5 %FCS时 ,超声波刺激不同时间的剂量组的吸光光度值较对照组亦有显著性增高 ,并具统计学意义 (P <0 .0 5 ,P <0 . 0 1)。 (2 )低剂量脉冲超声波刺激人皮肤成纤维细胞及肿瘤细胞超过一定时间后 ,少量细胞开始出现凋亡 ,且随着刺激时间的延长 ,凋亡细胞数增多 ,凋亡程度也逐渐加重。其中超声波刺激时间为 60min、 80min和 10 0min剂量组的细胞凋亡数与对照组比较差异有统计学意义 (P <0 .0 1)。结论 短时间低剂量脉冲超声波刺激能促进细胞增殖 ,超过一定时间则会抑制细胞生长 ,甚至引起细胞凋亡。

雪旺氏细胞凋亡在TNFRⅠ -/-鼠实验性自身免疫性神经炎发病机制中的作用

目的:建立实验性自身免疫性神经炎(EAN)在肿瘤坏死因子α受体I(TNFRⅠ)基因敲除鼠(TNFRⅠ-/-)的动物模型,进一步研究雪旺氏细胞凋亡在其发病机制中的作用。方法:采用周围神经P0蛋白180-199肽段皮下免疫方法分别在TNFRⅠ-/-及野生鼠C57BL/6上制备EAN动物模型;连续观察EAN的发病过程、疾病严重程度并进行临床症状评分;免疫后第22天取2组动物雪旺氏细胞进行原代培养,通过流式细胞仪检测Fas及Annexin-Ⅴ(Annexin-Ⅴ+/PI-)在雪旺氏细胞的表达。结果:TNFRⅠ-/-组EAN症状高峰临床评分(1.50±0.19)较野生型组(1.90±0.16)明显减低;TNFRⅠ-/-EAN组雪旺氏细胞Fas阳性表达率为(88.03±1.40)%,野生型组为(94.70±1.53)%,两组比较差异有显著性(P<0.05);Annexin-Ⅴ(Annexin-Ⅴ+/PI-)在TNFRⅠ-/-组雪旺氏细胞的阳性表达率为(8.78±0.94)%,野生型组为(13.03±4.15)%,TNFRⅠ-/-组呈降低趋势,但两组比较差异无显著性(P>0.05)。结论:TNFRⅠ可能通过增加雪旺氏细胞的凋亡进而引起周围神经损伤而加重EAN的临床症状。

细胞凋亡技术应用于电离辐射遗传损伤的研究

目的 了解不同剂量的辐射及不同时间段对小鼠骨髓细胞凋亡率的影响,比较PI/FITC-Annexin Ⅴ双染和PI单染2种荧光剂检测细胞凋亡方法的差异.方法 以60Co射线照射ICR小鼠,制备不同时间段的骨髓单个核细胞的单细胞悬液,用PI/FITC-Annexin v双染和PI单染法,通过流式细胞仪检测样品的凋亡率.结果 PI/FITC-Annexin Ⅴ方法检测出的骨髓单个核细胞早期凋亡率于6～24 h达到最高且与辐射剂量之间无正相关性;较低剂量辐射组凋亡率的下降速度明显高于大剂量辐射.PI单染法只能检测样本的总凋亡率.在各时间点,骨髓细胞的总凋亡率随辐射剂量增大而增高.结论 小剂量辐射相对于大剂量辐射单位剂量下的细胞凋亡率更高,因此能更加有效地清除受损细胞,保护机体.只有PI/FITC-Annexin Ⅴ双染法才能检测出早期细胞凋亡率,有效鉴别细胞凋亡与死亡.

膜联蛋白V的异硫氰酸荧光素标记和应用研究

目的制备一种新型的膜联蛋白V,用异硫氰酸荧光素进行标记,观察它对外露磷脂酰丝氨酸(PS)红细胞的荧光染色情况。方法带有金属螯合位点的膜联蛋白V通过毕赤酵母的培养和甲醇诱导表达获得,膜联蛋白V粗品通过离子交换和硫酸铵沉淀得到纯化产物。在硼酸盐缓冲液完成膜联蛋白V的异硫氰酸荧光素标记,标记产物经过离子交换进行纯化。红细胞经过戊二醛处理后PS外露于细胞表面。在荧光显微镜下观察异硫氰酸荧光素标记的膜联蛋白V对外露PS红细胞的结合。结果毕赤酵母重组表达的新型膜联蛋白V经过离子交换和硫酸铵沉淀后得以纯化和浓缩。经过异硫氰酸荧光素进行标记后观察到它对外露PS红细胞的结合。结论毕赤酵母系统重组表达的膜联蛋白V具有结合外露PS红细胞的能力,可以应用于细胞凋亡的体外检测。

人胎盘膜联蛋白V cDNA的克隆及检测

提取新鲜人胎盘组织的总RNA,利用RT-PCR技术扩增出膜联蛋白V(Annexin V)基因的编码序列,将扩增产物克隆到真核表达载体pCMV5并转化到大肠杆菌DH5α中.对重组质粒进行DNA测序,其测序结果完全正确.成功地从人胎盘组织中克隆出Annexin V的全长基因并构建了该基因的真核表达载体,为今后该基因的表达及其生理作用的研究奠定了基础.

^99Tc^m—His10—Annexin Ⅴ探测非小细胞肺癌细胞凋亡的实验研究

目的探讨^99Tc^m标记带有10个连续组氨酸的膜联蛋白Ⅴ（His10-Annexin Ⅴ）探测荷非小细胞肺癌（NSCLC）裸小鼠模型化疗后肿瘤细胞凋亡的可行性。方法用^99Tc^m直接标记His10-Annexin Ⅴ。荷H460 NSCLC肿瘤裸小鼠模型20只，按体表面积以100mg／m^2剂量紫杉醇化疗诱导，分成未治疗（对照）、化疗诱导后24，48，72h共4组.^99Tc^m-His10-AnnexinⅤ显像探测化疗前后肿瘤组织细胞凋亡，计算肿瘤／对侧正常肌肉组织放射性比值（T／NT），测定每克组织百分注射剂量率（％ID／g）。以^99Tc^m-IgG显像为对照，确定肿瘤的非特异性摄取。用流式细胞术（FCM）测定肿瘤组织活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶（Caspase-3），光学显微镜HE及原位末端标记法（TUNEL）染色测定凋亡指数。采用SPSS12．0软件进行统计学处理，运用单因素方差分析和直线相关分析（Pearson）。结果”^99Tc^m -His10-Annexin Ⅴ放化纯为（98．01±1．67）％。注射^99Tc^m- His10-Annexin Ⅴ后2h即可得到清晰图像，化疗诱导组肿瘤部位可见明显的放射性浓聚，化疗后24，48，72h组的T／NT值分别为2．63±0．76，3．41±0．90，3．85±0．62；对照组T／NT值为1．42±0．19，F值分别为12．064，23．322，70．177，P均〈0．01。未治疗组肿瘤仅有少量放射性摄取，为（1．09±0．18）％ID／g，化疗后肿瘤摄取明显增加，24，48，72h肿瘤摄取分别为（2．55±0．73）、（3．60±1．09）、（3．73±0．97）％ID／g，明显高于未治疗组（F值分别为18．733，20．624，35．626，P均〈0．01）。^99Tc^m-IgG显像化疗组及对照组肿瘤均未见明显放射性浓聚。未治疗组活化Caspase-3为（3．70±0．74）％，化疗后24，48，72h分别为（23．46±2．23）％、（62．85±6．13）％、（70．44±6．09）％，3个化疗诱导组和未治疗组相比差异均有统计学意义（F值分别为354．610，459．438，591．052，P均〈0．01）。光学显微镜HE及TUNEL染色法发现，未治疗组细胞凋亡指数为（3．31±0．61）％，化疗后24，48，72h细胞凋亡指数分别为（32．90±6．64）％、（70．42±7．54）％、（83．23±9．71）％，化疗诱导组与对照组细胞凋亡指数差异均有统计学意义（F值分别为98．627，393．215，337．386，P均〈0．01）。T／NT值、肿瘤组织放射性摄取与活化Caspase-3及细胞凋亡指数均有很好的相关性（r=0．847，0．833，0．774，0．850，P均〈0．01）。结论^99Tc^m-His10-Annexin Ⅴ显像可早期探测NSCLC化疗后细胞凋亡，进而早期预测和评价肿瘤治疗疗效。

凋亡显像剂^99mTc—HYNIC—annexin Ⅴ对肿瘤模型化疗疗效早期评价的可行性

目的评价凋亡显像剂^99mTc—HYNIC—annexin Ⅴ在肿瘤动物模型中对化疗疗效早期评估的可行性。方法人膜联蛋向Ⅴ（annexinⅤ）通过双功能螯合剂联肼尼克酰胺（HYNIC）进行^99mTc标记。在正常昆明小鼠右上肢接种Ehrlich腹水癌细胞，至肿瘤生长至1cm后，随机分为生理盐水处理组和环磷酰胺处理组（150mg／kg），并分别于处理后1h和24h时注射^99mTc—HYNIC—annexin Ⅴ，注射后30、60、180、360min进行双探头单光子发射计算机断层仪（SPECT）显像。图像分析采用感兴趣区（R01）技术，计算右上肢肿瘤部位与右下肢计数比值（肿瘤／下肢）。采用原位缺口末端标记（TUNEL）法检测肿瘤组织凋亡细胞。结果在不同处理时间，生理盐水处理组的肿瘤部位仅有少量娃像剂分布。环磷酰胺处理组存处理1h后，肿瘤部位显像剂分布少量增加；24h后，肿瘤部位显像剂分布明显增加，显影清晰。环磷酰胺处胛24h组的肿瘤／下肢比值（6．27±0．24）明显高于牛理盐水24h处理组（2．36±0．18）和环磷酰胺1h处胛组（4．00±0．38）。环磷酰胺处理24h后，TUNEL染色可见大请癌细胞凋亡。结论^99mTc—HYNIC—aflnexin Ⅴ是一种可以早期监测化疗药物治疗效果的核素捌亡显像剂，在化疗药物应用24h后就可以进行有效探测，并在注射显像剂后60min即可获得清晰的图像。

脐血AnnexinⅤ、ET-1、vWF在子痫前期患者的表达及其与胎儿生长受限的关系

目的:研究子痫前期患者脐血中AnnexinⅤ、ET-1、vWF的表达水平及与胎儿生长受限相关性。方法:采用ELISA方法检测子痫前期患者84例(轻度29例、早发重度型27例、晚发重度型28例)及同期无内外科合并症、因产科和社会因素行剖宫产健康产妇(对照组)29例脐血中AnnexinⅤ、ET-1、vWF的表达水平,评估其与终止妊娠前1日的胎儿脐动脉的S/D比值、新生儿出生体重以及胎盘重量的相关性。结果:1子痫前期各组脐血中annexinⅤ的蛋白表达水平均低于对照组,分别比较差异均有统计学意义(P<0.01);早发重度、晚发重度、轻度组两两分别比较差异均有统计学意义(P<0.01)。2子痫前期各组ET-1水平均明显高于对照组,分别比较差异均有统计学意义(P<0.01);轻度组与早发、晚发重度组比较差异均有统计学意义(P<0.01),但早发重度组与晚发重度组比较差异无统计学意义(P>0.05)。3子痫前期各组vWF浓度均明显高于对照组,分别比较差异均有统计学意义(P<0.01);早发重度组与晚发重度、轻度组比较差异有统计学意义(P<0.01)。4子痫前期孕妇脐血中AnnexinⅤ水平与脐动脉S/D比值呈明显负相关(P<0.01),与新生儿出生体重呈正相关(P<0.01),与胎盘重量呈正相关(P<0.01)。子痫前期孕妇脐血中ET-1水平与脐动脉S/D比值呈明显正相关(P<0.01),与新生儿出生体质量呈负相关(P<0.01),与胎盘质量呈负相关(P<0.01)。子痫前期孕妇脐血中vWF水平与脐动脉S/D比值呈明显正相关(P<0.01),与新生儿出生体质量呈负相关(P<0.01),与胎盘质量呈负相关(P<0.01)。结论:患者脐血中AnnexinⅤ、ET-1、vWF的表达可能与子痫前期发病机制有关,通过影响胎盘中凝血-纤溶系统及血管内皮系统参与子痫前期及胎儿生长受限发生、发展的病理生理过程。

人胎盘抗凝蛋白变体的抗凝与抗栓作用

探索新型抗凝蛋白质———人胎盘抗凝蛋白变体 (annexinⅤderivative,AND)抗凝和抑制动脉血栓形成的作用。方法 比较实验组动物和对照组动物在用药前 ,用药后 15 ,30 ,6 0min及停药 2h活化部分凝血活酶时间 (APTT)、凝血酶原时间 (PT)、凝血酶时间 (TT)、血浆纤维蛋白原 (Fg)含量。用药 15min后用球囊剥脱股动脉内皮并监测股动脉远端的血压 ,记录脉压为 0的时间即血栓完全闭塞血管的时间。最后剪取球囊损伤的股动脉 ,测量所形成血栓的长度、血栓的湿重和干重。结果 抗凝指标 :用药组在用药后 15min时 ,其APTT值最长 ,且APTT值明显长于生理盐水组 (P <0 .0 5 ) ,短于肝素组 (P <0 .0 1) ,肝素组的APTT、TT值明显长于其他 3组 ,PT值各组间差异无统计学意义 ;对Fg的影响 :大剂量用药组似乎可以降低Fg的血浆含量 ;血栓质量 :无论是湿重还是干重AND组都明显轻于对照组 (P <0 .0 0 1) ,大剂量AND组血栓干重显著轻于小剂量组 (P <0 .0 5 ) ;小剂量AND组血栓的长度明显短于生理盐水组 (P <0 .0 5 ) ,但和肝素组相比 ,差异无统计学意义 (P =0 .4 85 ) ,大剂量AND组明显短于生理盐水组 (P <0 .0 1)和肝素组 (P <0 .0 5 ) ;脉压为 0的时间 :AND组显著长于对照组 (P <0 .0 5 )和肝素组相比 ,差异无统计学意义。结?