人urotensin Ⅱ对大鼠心肌细胞缺氧-再给氧损伤的保护作用及机制

目的:研究人urotensinⅡ(human urotensin II,h UII)对大鼠心肌细胞缺氧-再给氧损伤的作用及机制。方法:将培养的新生大鼠心肌细胞缺氧3 h后再给氧3 h造成细胞缺氧再给氧损伤(A/R)模型,用台盼蓝染色和MTT染色法分别检测细胞存活率和细胞活性,测定细胞培养上清液中肌酸激酶(CK)和一氧化氮合酶(NOS)活性及一氧化氮(NO)和心肌肌钙蛋白I(c Tn I)含量,用激光共聚焦显微镜检测细胞内游离Ca^(2+)荧光强度。结果:在1×10^(-10.5)~1×10^(-9.5)mol/L范围内,h UII明显地抑制A/R损伤引起的大鼠心肌细胞存活率和细胞活性的下降、CK活性和c Tn I含量的增高、NOS活性和NO含量的降低及心肌细胞内游离Ca^(2+)含量的增高,但1×10^(-9)、1×10^(-8.5)、1×10^(-8)mol/L h UII却无上述抑制作用。结论:h UII在低浓度时,对大鼠心肌细胞缺氧性损伤有保护作用,其机制可能与促进NO合成和降低细胞内游离Ca^(2+)有关。

黄芪多糖对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的探讨黄芪多糖(APS)对乳大鼠培养心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及其机制。方法取体外培养的乳大鼠心肌细胞建立缺氧/复氧心肌细胞损伤模型,实验分为5组:空白对照组;模型组(A/R组);3个APS给药组,于缺氧及复氧开始时分别加入终浓度为10、30、100mg·mL-1的APS,观察APS对细胞上清液中缺氧/复氧后LDH、CK、AST漏出量、MDA含量、SOD活性。用MTT法检测APS对缺氧/复氧损伤心肌细胞存活率的影响。用流式细胞仪测定APS对缺氧/复氧损伤心肌细胞凋亡的影响。结果 APS可明显减少缺氧/复氧后LDH、CK、AST漏出量(P<0.05或P<0.01);降低MDA含量,提高SOD活性(P<0.05或P<0.01);明显提高缺氧/复氧损伤心肌细胞的存活率,并能明显抑制缺氧/复氧损伤心肌细胞凋亡。结论 APS对培养心肌细胞的缺氧/复氧损伤具有保护作用,作用机制与其增强细胞抗氧化作用,减少自由基及脂质过氧化物导致的细胞膜损伤和抑制细胞凋亡有关。

红景天苷对缺氧复氧星形胶质细胞细胞损伤的影响

目的:研究红景天苷对缺氧复氧星形胶质细胞分泌炎症因子及氧化损伤得的影响。方法:分离培养大鼠皮质星形胶质细胞,构建缺氧复氧星形胶质细胞损伤模型,在缺氧复氧前给予红景天苷预处理,CCK8测定细胞活力,二硝基苯肼法检测乳酸脱氢酶(LDH)漏出率,黄嘌呤氧化法检测超氧化物歧化酶(SOD)活性,改良二硫双硝基苯甲酸定量法检测还原型谷胱甘肽(GSH)活性,代巴比妥酸法检测丙二醛(MDA)含量,ELISA法检测细胞分泌肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡变化,Western blot检测细胞中活化型Caspase-3(Cleaved Caspase-3)和活化型Caspase-9(Cleaved Caspase-9)蛋白表达水平,用罗丹明123法检测细胞线粒体膜电位变化。结果:缺氧复氧处理星形胶质细胞后细胞活力降低,LDH漏出率升高,细胞SOD活性、GSH活性降低,MDA含量升高,细胞分泌的TNF-α、IL-1β、IL-6增多,细胞凋亡率升高,Cleaved Caspase-3和Cleaved Caspase-9蛋白水平也升高,线粒体膜电位降低。红景天苷处理后的缺氧复氧星形胶质细胞,细胞活力升高,细胞LDH漏出率降低,细胞SOD活性、GSH活性升高,MDA含量降低,细胞分泌的TNF-α、IL-1β、IL-6减少,细胞凋亡率降低,Cleaved Caspase-3和Cleaved Caspase-9蛋白表达水平降低,线粒体膜电位升高。结论:红景天苷对缺氧复氧星形胶质细胞氧化损伤、炎症因子分泌及细胞凋亡均有抑制作用,红景天苷具有减轻缺氧复氧星形胶质细胞损伤作用。

川芎嗪对复氧后损伤心肌细胞的影响

目的 :观察川芎嗪对大鼠心室肌细胞缺氧—复氧损伤的作用。方法 :在缺氧—复氧条件下 ,测量对照组和不同浓度川芎嗪组对杆形心肌细胞百分比、心肌细胞释放乳酸脱氢酶 (L DH)和心肌细胞类脂过氧化产物—丙二醛 (MDA)含量。结果 :缺氧—复氧对大鼠心室肌细胞有损伤作用 ,浓度为 4μm ol/L 的川芎嗪开始对缺氧—复氧损伤细胞有保护作用 ,它能抑制损伤细胞挛缩 ,提高损伤细胞生存率 ,抑制细胞 L DH的释放 ,减少 MDA的生成 ,且剂量越大 ,保护作用越好 ,即川芎嗪对缺氧—复氧损伤细胞的保护呈剂量依赖性。结论 :川芎嗪对缺氧—复氧损伤的心肌细胞具有保护作用 。

薯蓣皂苷对培养乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的研究薯蓣皂苷对培养乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用并探讨其作用机制。方法采用体外培养乳鼠心肌细胞,建立缺氧/复氧损伤模型,以薯蓣皂苷进行干预。心肌细胞随机分为5组:空白对照组(C组);缺氧/复氧组(A/R组);薯蓣皂苷(Dioscin)低、中、高剂量干预组(Dioscin+A/R组)。分别观察各组心肌细胞搏动频率;MTT法测细胞存活率;用Rh123荧光探针标记线粒体,检测荧光强度以反映线粒体膜电位(△Ψm)变化;Fluo-3负载心肌细胞,激光扫描共聚焦显微镜观察细胞内钙离子浓度变化。结果薯蓣皂苷干预组心肌细胞搏动频率、细胞存活率、△Ψm与A/R组比较明显升高;细胞内平均钙离子荧光强度显著低于A/R组。结论从细胞水平初步证实薯蓣皂苷预处理心肌细胞对A/R损伤有一定保护作用,保护机制可能涉及对线粒体膜保护和防止细胞内钙超载等。

抑制Toll样受体4表达减轻缺氧/复氧心肌细胞损伤

目的研究抑制H9C2心肌细胞Toll样受体4(TLR4)基因表达对缺氧/复氧(A/R)诱导细胞损伤的影响及其机制。方法H9C2心肌细胞按随机数表法分为正常对照组(Con组):正常培养的H9C2心肌细胞、A/R组:按常规的方法进行缺氧/复氧处理、阴性对照组(NC组)和shRNA+A/R组:分别转染阴性对照TLR4-shRNA质粒和TLR4-shRNA质粒后缺氧/复氧相同的时间。Weston-blot法和RT-PCR法检测RNA干扰(RNAi)的效果;CCK-8法检测心肌细胞的存活率;流式细胞仪检测细胞凋亡;Weston-blot法测定B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关蛋白(Bax)、核因子-κBp65(NF-κBp65)和NF-κB抑制剂I-κBα)蛋白水平;ELISA法测量培养液中白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TN-α)的浓度。观察抑制TLR4表达后是否能通过减轻细胞凋亡和炎症因子的分泌改善A/R诱导的心肌细胞损伤。结果与Con组比较,A/R组H9C2心肌细胞TLR4与NF-κBp65表达、IL-6和TNF-α水平、细胞凋亡及Bax/Bcl-2比值增加,而细胞存活率和I-κBα表达明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与A/R组比较,shRNA+A/R组TLR4与NF-κBp65表达、IL-6和TNF-α水平、细胞凋亡及Bax/Bcl-2比值下降,而细胞存活率和I-κBα表达明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论抑制TLR4能通过抑制炎症反应和细胞凋亡减轻A/R诱导的H9C2心肌细胞损伤。

山莨菪碱对缺血心肌细胞钙摄入的影响

本工作应用离体成年大鼠心室肌细胞缺氧——复氧损伤模型,观察了山茛菪碱对细胞钙稳态的调节作用和心肌保护作用,并与异搏定做了比较。结果发现,复氧孵育时给予山茛菪碱(1.64×10^(-4)、1.64×10^(-3)mol/L)明显增强心肌细胞对复氧损伤的耐受性。表现为杆形细胞存活率增加,细胞外钙内流被抑制,显示有直接的细胞保护作用。而且这种保护作用呈剂量依赖关系。而复氧孵育时应用异搏定对细胞外钙内流和细胞生存率均无明显影响。提示,山茛菪碱对缺血心肌再灌注损伤具有强大的细胞保护作用。本文还对山莨菪碱的细胞保护机制作了进一步分析。

PTEN对缺氧复氧心肌H9c2细胞凋亡、氧化损伤及免疫炎症因子水平的影响

目的:研究第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物(PTEN)对缺氧复氧条件下心肌H9c2细胞凋亡、氧化损伤及免疫炎症因子水平的影响。方法:用H9c2细胞构建缺氧复氧模型。细胞转染PTEN小干扰RNA(siRNA)和阴性对照siRNA,缺氧复氧处理后,RT-PCR和Western blot分别测定细胞中PTEN的mRNA和蛋白水平。MTT法测定细胞活力,流式细胞术测定细胞凋亡,用黄嘌呤氧化法测定细胞中超氧化物歧化酶(SOD)活性,用硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)含量,用二硝基苯肼法测定培养液上清中乳酸脱氢酶(LDH)活性,ELISA测定培养液上清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)和白细胞介素6(IL-6)水平,Western blot法测定细胞中cleaved caspase-3、Bax和Fas L的蛋白水平。结果:缺氧复氧处理后H9c2细胞中PTEN的mRNA和蛋白水平均明显升高(P <0. 05)。转染PTEN siRNA后的细胞中PTEN的mRNA和蛋白水平明显下降(P <0. 05)。缺氧复氧处理后H9c2细胞活力下降,凋亡率升高,细胞中cleaved caspase-3、Bax和Fas L的蛋白水平升高,MDA水平也升高,SOD活性下降,培养液上清中LDH、TNF-α、IL-1β和IL-6的水平升高(P <0. 05),而下调PTEN可以部分拮抗缺氧复氧对H9c2细胞活力、凋亡率、MDA水平、SOD水平及培养液上清中LDH、TNF-α、IL-1β和IL-6水平的影响。结论:下调PTEN可以减轻缺氧复氧诱导的心肌H9c2细胞氧化损伤,减少H9c2细胞凋亡,降低TNF-α、IL-1β和IL-6的水平。

马齿苋总黄酮对缺氧/复氧致心肌细胞凋亡的影响

目的观察马齿苋总黄酮(PTF)对缺氧/复氧致H9c2心肌细胞凋亡及凋亡相关基因Caspase-3 mRNA表达的影响。方法利用体外培养的H9c2心肌细胞建立缺氧/复氧模型,采用荧光染色法观察心肌细胞凋亡形态变化,流式细胞术检测心肌细胞凋亡率、RT-PCR检测心肌细胞凋亡基因Caspase-3的表达。结果与A/R组比较,PTF组缺氧/复氧损伤后有部分细胞发生凋亡形态变化,但数量较A/R组明显较少;PTF组均可明显降低细胞凋亡率(P<0.05);PTF组可有效减少缺氧/复氧损伤的H9c2心肌细胞内Caspase-3 mRNA的表达。结论 PTF可抑制模拟缺血再灌注损伤心肌细胞凋亡,其作用可能是通过下调Caspase-3表达实现的。

薯蓣皂苷对缺氧/复氧所致乳鼠心肌细胞凋亡的保护作用

目的:研究薯蓣皂苷对缺氧/复氧所致乳鼠心肌细胞凋亡的保护作用,并探讨其作用机制。方法:体外原代培养乳鼠心肌细胞,建立缺氧/复氧损伤模型,以不同剂量的薯蓣皂苷进行干预。实验分为5组:空白对照组、缺氧/复氧组、薯蓣皂苷低、中、高剂量(10,20,40μmol/ml)干预组。MTT法检测心肌细胞存活率;TUNEL法检测心肌细胞凋亡百分率;Fluo-3负载激光扫描共聚焦显微镜观察细胞内[Ca2+]i的变化;硝酸还原酶法测定心肌细胞培养液中一氧化氮(NO)浓度。结果:与缺氧/复氧组比较,薯蓣皂苷各剂量干预组心肌细胞存活率明显升高,细胞凋亡率明显降低,心肌细胞[Ca2+]i荧光强度明显减弱,心肌细胞培养液中NO浓度降低。结论:薯蓣皂苷能有效抑制缺氧/复氧导致的乳鼠心肌细胞的凋亡,其可能与减轻细胞内钙超载,抑制受损心肌细胞NO升高,减轻过量NO的细胞毒性作用有关。

马齿苋总黄酮对缺氧/复氧致心肌细胞损伤的影响及机制研究

目的:研究马齿苋总黄酮(PTF)对缺氧/复氧致心肌细胞损伤的影响及机制。方法:利用体外培养的H9c2心肌细胞建立缺氧/复氧模型。将培养的心肌细胞分为5组:正常对照组、缺氧/复氧损伤模型组、缺氧/复氧损伤加10 mg·L-1PTF组、缺氧/复氧损伤加20 mg·L-1PTF组、缺氧/复氧损伤加40 mg·L-1PTF组。MTT法检测心肌细胞存活率,荧光分光光度法测定心肌细胞内钙离子浓度,比色法测定心肌细胞培养液中一氧化氮(NO)浓度,流式细胞术检测心肌细胞凋亡率、RT-PCR检测心肌细胞凋亡基因Caspase-3 mRNA的表达。结果:与A/R组比较,PTF组(终质量浓度为10,20,40 mg·L-1)均可明显提高缺氧/复氧损伤的心肌细胞存活率,降低NO浓度、细胞内钙离子浓度、细胞凋亡率[(18.25±2.64,P<0.05),(13.83±1.52,11.21±1.76,P<0.01)],PTF组可有效减少缺氧/复氧损伤心肌细胞内Caspase-3 mRNA的表达。结论:PTF可通过抑制心肌细胞内钙超载、减轻过量NO的细胞毒性作用、下调Caspase-3表达,从而保护心肌细胞。

山楂叶总黄酮对缺氧再给氧心肌细胞的保护作用及机制研究

目的:探讨山楂叶总黄酮(HLF)对培养乳大鼠心肌细胞缺氧再给氧损伤的保护作用及其机制。方法:采用体外培养的乳大鼠心肌细胞建立缺氧/再给氧心肌细胞损伤模型,实验分为5组:空白对照组;模型组(A/R组),缺氧再给氧组;3个HLF给药组,并于缺氧及再给氧开始时分别加入终浓度为10、30、100 mg/L的HLF,观察HLF对细胞上清液中缺氧及再给氧后LDH、CK、AST漏出量,MDA含量、SOD活性,NO含量、NOS活性的影响;用MTT法检测HLF对缺氧再给氧损伤心肌细胞线粒体的保护作用;用流式细胞仪测定HLF对缺氧再给氧损伤心肌细胞凋亡的影响。结果:HLF可抑制缺氧及再给氧后LDH、CK、AST漏出量,降低MDA含量,提高SOD活性,降低NO含量和NOS活性;升高A/R细胞OD吸光度值,并能明显抑制缺氧再给氧损伤心肌细胞凋亡。结论:HLF对培养心肌细胞的缺氧再给氧损伤具有保护作用,提示其作用机制与增强细胞抗氧化作用,减少自由基及脂质过氧化物导致的细胞膜损伤和抑制细胞凋亡有关。