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Enzyme-linked Immunosorbent Assay for Detection of Anti-idiotype Antibodies to Antibodies to Ligand of Nicotinic Acetylcholine Receptor in Sera of Patients with Myasthenia Gravis
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作者 黄德仁 涂来慧 +2 位作者 张仁琴 周广智 沈茜 《Journal of Medical Colleges of PLA(China)》 CAS 1990年第3期237-242,共6页
Anti-bungarotoxin anti-serum,which has the internal image of nicotinicacetylcholine receptor,was used as a tool to measure anti-idiotypic antibodies toantibodies to Iigand of nicotinic acctylcholine receptor in scra f... Anti-bungarotoxin anti-serum,which has the internal image of nicotinicacetylcholine receptor,was used as a tool to measure anti-idiotypic antibodies toantibodies to Iigand of nicotinic acctylcholine receptor in scra from 81 patients withmyasthenia gravis.Enzyme-linked immunosorbcnt assay was adopted.Thc positive ratewas 46.9%(38/81).The specific cross inhibitory test with nicotinic acetylcholinereceptor was positive.Anti-idiotype antibodies to antibodies to ligand of nicotinicacetylcholine receptor in sera of different types of myasthenia gravis patients classified ac-cording to modified Osserman’s standard and myasthenia gravis patients with or withoutthymoma were comparcd in this study and the role of anti-idiotype antibodies toantibodies to Iigand of nicotinic acctylcholinc receptor in the immunity of myasthcniagravis and the possibility of thcrapeutic use of anti-idiotype antibodies arc discussed. 展开更多
关键词 MYASTHENIA gravis enzyme-linked immunosorbent assay NICOTINIC acetylcholine receptor LIGAND antibungarotoxin antiSERUM anti-idiotypE antiBODIES
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Induction of Human Anti-Human Antibody Responses (Ab2) after Application of a Humanized Lewis Y Carbohydrate Specific Antibody (Ab1): Connection of Prolonged Disease Stabilization with Ab3 Induction? 被引量:1
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作者 Andreas Nechansky Stefan Stranner +2 位作者 Oliver Scheiber Nicole Halanek Ralf Kircheis 《Journal of Cancer Therapy》 2012年第4期269-277,共9页
Purpose: Detailed analysis of a patient with epithelial Lewis Y (LeY) positive cancer who received twice 50 mg of the humanized Lewis Y carbohydrate specific mAb IGN311 and developed a clinically significant human ant... Purpose: Detailed analysis of a patient with epithelial Lewis Y (LeY) positive cancer who received twice 50 mg of the humanized Lewis Y carbohydrate specific mAb IGN311 and developed a clinically significant human anti-human antibody (HAHA) response (Ab2). Results: Clinical stabilization of the disease was assigned to in this patient. The HAHA response consisted mainly of IgG1 and was found to be directed against the IGN311 binding site. Consistent with the induction of the HAHA response, CDC activity against Lewis Y positive target cells was completely abolished at day 8 and could not be restored by the second 50 mg infusion indicating complete neutralization of applied IGN311. The ADCC reactivity was also significantly reduced and anti-anti idiotype-specific antibodies (Ab3) were detectable at day 65. Conclusions: Induction of Ab3 antibodies should be considered as an additional factor influencing the efficacy of humanized antibodies. In this context, the potential threat of induced HAHA responses against therapeutic mAbs might have to be reconsidered because they might actually have also beneficial immunological long-term effects leading to an active immunization component induced by therapeutic antibodies. 展开更多
关键词 LEWIS Y CARBOHYDRATE Immunotherapy Immunogenicity anti-idiotypE HAHA (Human anti-Human antibodies)
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Preparation and Identification of Rat Monoclonal Anti-idiotope Antibody to the Antibody against Erythrocytic Stages of Plasmodium Falciparum
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作者 李纪良 巢穗 +1 位作者 欧阳明辉 李英杰 《Journal of Medical Colleges of PLA(China)》 CAS 1989年第1期57-59,共3页
A hybridoma cell line secreting monoclonal antibody to idiotope of the monoclonalantibody 94D1 specific for asexual erythrocytic stages of Plasmodium falciparum was established byfusion of SP2/0 mouse myeloma cells wi... A hybridoma cell line secreting monoclonal antibody to idiotope of the monoclonalantibody 94D1 specific for asexual erythrocytic stages of Plasmodium falciparum was established byfusion of SP2/0 mouse myeloma cells with spleen cells of Wistar rats immunized with monoclonalIgG of 94D1 purified from ascitic fluid of BALB/C mouse by affinity chromatography on ProteinA- Sepharose CL- 4B. Specificity of the anti - idiotope antibody (anti - Id), 41RF5, was deter-mined with indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The results showedthat 41RF5 reacted only with 94D1 IgG2b, not with normal mouse IgG and other seven mousemonoclonal antibodies - five specific for erythrocytic stages of P. falciparum, one for erythrocyticstages of P. inui, and one for Dengue fever virus type III, which indicates that 41RF5 does recognizespecifically the idiotope of 94D1 monoclonal antibody. In 41RF5 heterohybrid culture supernatant,anti-Id titre measured by ELISA was above 1:1 280. Up to the present, the heterohybrid cell linehas been cultured stably for 16 months. 展开更多
关键词 idiotypE MONOCLONAL anti-idiotope antibody mouse-rat heterohybridoma Plasmodium FALCIPARUM
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用单克隆Anti-Id代替HBsAg检测抗-HBs的探讨 被引量:1
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作者 李虹 王道若 牟家琬 《华西医科大学学报》 CAS CSCD 1993年第2期167-170,共4页
根据Jerne的独特型-抗独特型网络理论,本文研究用单克隆Anti-Id代替常规检测中的HBsAg,建立一种新的检测抗-HBs的方法。该法用Anti-Id作为包被抗体,HRP标记的羊抗人IgG检测被检血清中被结合的抗-HBs。实验结果表明,本法具有良好的敏感性... 根据Jerne的独特型-抗独特型网络理论,本文研究用单克隆Anti-Id代替常规检测中的HBsAg,建立一种新的检测抗-HBs的方法。该法用Anti-Id作为包被抗体,HRP标记的羊抗人IgG检测被检血清中被结合的抗-HBs。实验结果表明,本法具有良好的敏感性(0.5μg/ml)和特异性,而且安全、简便,试剂来源丰富,尤其适用于检测那些抗原不易获得,不易纯化或抗原传染性强的疾病。 展开更多
关键词 单克隆抗体 ELISA 乙型肝炎病毒
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Immunomodulation of Human Carcinogenesis by the Blood Serum Antibodies against Benzo[a]pyrene, Estradiol and Progesterone
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作者 Andrey N. Glushkov Elena G. Polenok Valentin A. Ustinov 《Open Journal of Immunology》 2016年第3期67-72,共6页
It was supposed that lung and breast cancer risks significantly increased when the levels of serum immunoglobulins A antibodies against benzo[a]pyrene and estradiol increased together, but did not separately. However,... It was supposed that lung and breast cancer risks significantly increased when the levels of serum immunoglobulins A antibodies against benzo[a]pyrene and estradiol increased together, but did not separately. However, the cancer risks dramatically decreased when the levels of immunoglobulins A against progesterone elevated separately or together with immunoglobulins A against benzo[a]pyrene and estradiol. So, immunoglobulins A against benzo[a]pyrene and immunoglobulins A against estradiol acted as co-initiator and co-promoter in developing cancer scenario, but immunoglobulins A against progesterone acted along or conjointly with immunoglobulins A against benzo[a]pyrene and estradiol as strongly inhibitor in human carcinogenesis. Also it was suggested the precise mechanism of carcinogenesis modulation using anti-idiotypic antibodies against estradiol and progesterone through their membrane steroid receptors. 展开更多
关键词 BENZO[A]PYRENE ESTRADIOL PROGESTERONE antibody anti-idiotypic antibody Immunoglobulins A Polycyclic Aromatic Hydrocarbons Immunology Lung Cancer Breast Cancer Cancer Risks
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基于Bt毒素的杀虫蛋白理性设计与创新应用策略
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作者 徐重新 金嘉凤 +5 位作者 孙晓明 沈成 张霄 陈澄宇 刘贤金 刘媛 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期96-125,共30页
Bt毒素是源于苏云金芽孢杆菌(Bacillusthuringiensis)的具有特殊杀虫功能的大分子蛋白,其制剂和转基因作物已广泛用于害虫防治,产生了巨大的经济和社会生态效益。围绕Bt毒素挖掘和提升其应用价值是持续研究的热点,特别是随着Bt毒素结构... Bt毒素是源于苏云金芽孢杆菌(Bacillusthuringiensis)的具有特殊杀虫功能的大分子蛋白,其制剂和转基因作物已广泛用于害虫防治,产生了巨大的经济和社会生态效益。围绕Bt毒素挖掘和提升其应用价值是持续研究的热点,特别是随着Bt毒素结构功能和作用机制日趋明晰,为其功能修饰和创新应用创造了条件,相关研究蓬勃发展,成效显著。大量研究表明,采用定点突变、结构域替换或融合以及抗独特型抗体模拟等策略,是理性设计活性更高、稳定性更强、杀虫谱更广、非靶标生物安全性更高甚至是可用于害虫抗药性治理的有别于母体Bt毒素的突变体、结构杂合体乃至功能效应物抗体等新型杀虫蛋白的有效手段;此外,采用催化毒素活化、驱动毒素靶向受体结合、促进毒素表达以及同源或异源杀虫材料复配或共表达的协同促效等创新增效策略,也是助推Bt毒素应用价值的重要手段。本文总结了Bt毒素结构功能和作用机制,梳理了基于Bt毒素功能修饰的突变体、结构杂合体以及功能效应物抗体等新型杀虫蛋白理性设计和基于Bt毒素功能增效的创新应用策略等相关研究进展,并结合作者团队在模拟Bt毒素杀虫功能效应物抗体靶向设计研发方面的最新成果,探讨了基于Bt毒素的杀虫蛋白理性设计与创新应用策略未来发展动向及潜在可行捷径,为相关研究提供较为全面的最新有价值的文献资料和启发思路。 展开更多
关键词 BT毒素 苏云金芽孢杆菌 杀虫蛋白 定点突变 抗独特型抗体 蛋白融合表达 杀虫增效物
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Preparation of Anti-Idiotypic Antibody against Avian Influenza Virus Subtype H9 被引量:2
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作者 BaoquanLi JunPeng +2 位作者 ZhongxiangNiu XunheYin FaxiaoLiu 《Cellular & Molecular Immunology》 SCIE CAS CSCD 2005年第2期155-157,共3页
To generate monoclonal anti-idiotypic antibodies(mAb2)against avian influenza virus subtype H9(H9 AⅣ), BALB/c mice were immunized with purified chicken anti-H9-AⅣ IgG and the splenocytes of immunized mice were fused... To generate monoclonal anti-idiotypic antibodies(mAb2)against avian influenza virus subtype H9(H9 AⅣ), BALB/c mice were immunized with purified chicken anti-H9-AⅣ IgG and the splenocytes of immunized mice were fused with myeloma cells NS-1.Hybridoma cells were screened by indirect enzyme-linked immunosorbent assays with both chicken and rabbit anti-H9-AⅣ IgG as coating antigens.One hybridoma cell clone secreting monoclonal antibody against idiotypes shared by both chicken and rabbit anti-H9-AⅣ IgG was established.Experiments demonstrated the mAb2 was able to inhibit the binding of hemagglutinin to anti-H9-AⅣ IgG and to induce chickens to generate hemagglutination inhibition antibodies,indicating this anti-species-sharing-idiotypic antibody bore the internal image of hemagglutinin on avian influenza virus.Cellular & Molecular Immunology.2005;2(2): 155-157. 展开更多
关键词 avian influenza virus anti-idiotypic antibody idiotypE
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Humoral immune responses induced by anti-idiotypic antibody fusion protein of 6B11scFv/hGM-CSF in BALB/c mice 被引量:3
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作者 CHANG Xiao-hong YE Xue CUI Heng FENG Jie LI Yi ZHU Hong-lan YANG Wen-lan FU Tian-yun CHENG Hong-yan GUO Hui-fang 《Chinese Medical Journal》 SCIE CAS CSCD 2006年第2期131-139,共9页
Background We have previously developed and characterized a monoclonal anti-idiotype antibody, designated 6B 11, which mimics an ovarian carcinoma associated antigen OC166-9 and whose corresponding monoclonal antibody... Background We have previously developed and characterized a monoclonal anti-idiotype antibody, designated 6B 11, which mimics an ovarian carcinoma associated antigen OC166-9 and whose corresponding monoclonal antibody is COC166-9 (Abl). In this study, we evaluate the humoral immune responses induced by the fusion protein 6B11 single-chain variable fragment (scFv)/human granulocyte macrophage colony-stimulating factor (hGM-CSF) and 6B 1 lscFv in BALB/c mice. Methods The fusion protein 6B 11 scFv/hGM-CSF was constructed by fusing a recombinant single-chain variable fragment of 6B11scFv to GM-CSE BALB/c mice were administrated by 6B11scFv/hGM-CSF and 6B11scFv, respectively. Results The fusion protein 6B11scFv/hGM-CSF retained binding to the anti-mouse F(ab)2' and was also biologically active as measured by proliferation of human GM-CSF dependent cell TF1 in vitro. After immunization with the 6B11scFv/hGM-CSF and 6BllScFv, BALB/c mice showed significantly enhanced Ab3 antibody responses to 6B11 scFv/hGM-CSF compared with the 6B11 scFv alone. The level of Ab3 was the highest after the first week and maintained for five weeks after the last immunization. Another booster was given when the Ab3 titer descended, and it would reach to the high level in a week. Conclusion The fusion protein 6B11scFv/hGM-CSF can induce humoral immunity against ovarian carcinoma in vivo. We also provide the theoretical foundation for the application of the fusion protein 6B11 scFv/hGM-CSF for active immunotherapy of ovarian cancer. 展开更多
关键词 anti-idiotypic antibody ovarian carcinoma recombinant fusion protein humoral immune responses BALB/c mice
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Anti-fecundity immunity in mice immunized with anti idiotypic monoclonal antibody NP30 of Schistosoma japonicum
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作者 冯振卿 李玉华 +4 位作者 仇镇宁 李芸茜 薛婉芬 管晓虹 吴观陵 《Chinese Medical Journal》 SCIE CAS CSCD 2000年第3期73-76,共4页
Objective To observe the effects of anti fecundity and anti embryonation immuntiy of anti idiotypic monoclonal antibody NP30 of Schistosoma japonicum on female adult worm Methods The active immunization ... Objective To observe the effects of anti fecundity and anti embryonation immuntiy of anti idiotypic monoclonal antibody NP30 of Schistosoma japonicum on female adult worm Methods The active immunization of C57BL/6 mice was conducted by means of three intraperitoneal injections of NP30 The control group was injected with SP2/0 ascites intraperitoneally Results On the twenty seventh day after challenge infection, the number of eggs in the liver tissue and in uterus of the group immunized with NP30 decreased by 30 91% and by 38 55%, respectively On the thirty ninth day after the challenge infection, the number of mature eggs in the liver tissue of the group immunized with NP30 decreased by 66 63% and the number of dead eggs increased by 60 66% Conclusions NP30, with which mice were actively immunized, possesses double effects of anti fecundity and anti embryonation immunity on female adult worm of Schistosoma japonicum , therefore it can be used as a promising candidate of anti pathologic vaccine molecule against Schistosomiasis japonica 展开更多
关键词 Schistosoma japonicum anti idiotypic antibody anti fecundity immunity egg mouse
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基于独特型-抗独特型初步建立玉米赤霉烯酮无毒ELISA定量检测技术 被引量:3
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作者 宋其芳 向军俭 +4 位作者 骆敏儿 钟娜 黄婉君 贾彦琼 王宏 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期1317-1321,共5页
目的:初步建立以玉米赤霉烯酮(ZEN)抗独特型单抗替代玉米赤霉烯酮标准品,检测ZEN残留的无毒ELISA定量检测技术。方法:以ZEN-BSA为包被原,ZEN单抗(1G4)为反应抗体,分别以不同浓度的ZEN毒素或ZEN抗独特型单抗1D5(Ab2β-1D5)为竞争物,建立... 目的:初步建立以玉米赤霉烯酮(ZEN)抗独特型单抗替代玉米赤霉烯酮标准品,检测ZEN残留的无毒ELISA定量检测技术。方法:以ZEN-BSA为包被原,ZEN单抗(1G4)为反应抗体,分别以不同浓度的ZEN毒素或ZEN抗独特型单抗1D5(Ab2β-1D5)为竞争物,建立竞争抑制曲线。根据抑制率在20%~80%间,在相同抑制率条件下,ZEN与1D5间浓度对应关系,绘制替代标准曲线及对应的浓度转换方程。以ZEN类似毒素代替ZEN作为竞争抗原,检验方法的特异性;板内、板间试验检验方法的精密度。结果:初步建立了ZEN无毒ELISA定量检测技术,1D5与ZEN毒素之间的替代标准曲线方程为:y=1.2846x1.9310(y为ZEN毒素浓度ng/ml,x为抗独特型抗体浓度(μg/ml)。检出限(IC2 0)为1.041 ng/ml,检测范围为1.041~25.99 ng/ml。方法的批内平均变异系数为3.88%,批间平均变异系数为4.96%。方法特异性好,与ZEN类似毒素几乎无交叉反应。结论:利用ZEN单抗和ZEN抗独特型单抗初步建立了ZEN的无毒ELISA定量检测方法。 展开更多
关键词 玉米赤霉烯酮 单克隆抗体 抗独特型单抗 无毒ELISA检测法
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抗T-2毒素单抗独特型抗体的制备及应用研究 被引量:8
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作者 江涛 郑佳 +2 位作者 李楠 吴岩 计融 《中国食品卫生杂志》 2007年第3期234-237,共4页
目的研制T-2毒素标准品的替代品并应用于酶联免疫吸附试验(ELISA)。方法在研制了抗T-2毒素单抗的基础上,将抗体用无花果蛋白酶进行酶切,制备抗T-2毒素单抗F(ab)2片段,并以F(ab)2片段作为免疫原免疫日本大耳白兔,研制出抗T-2毒素单抗独... 目的研制T-2毒素标准品的替代品并应用于酶联免疫吸附试验(ELISA)。方法在研制了抗T-2毒素单抗的基础上,将抗体用无花果蛋白酶进行酶切,制备抗T-2毒素单抗F(ab)2片段,并以F(ab)2片段作为免疫原免疫日本大耳白兔,研制出抗T-2毒素单抗独特型抗体。结果所研制的抗独特型抗体经过鉴定,是Ab2β型,与T-2毒素存在内影像关系。结论该抗体可以替代T-2毒素标准品应用于ELISA检测。 展开更多
关键词 T-2毒素 抗体 抗独特型 酶联免疫吸附试验
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HPV_(16)L1-E7重组腺病毒载体疫苗免疫BALB/c小鼠的研究 被引量:2
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作者 宋长芹 于修平 +10 位作者 栾怡 卞继峰 赵蔚明 贾继辉 李勇 周亚滨 于瑾 齐眉 宋静 王津秋 阎淑芳 《山东大学学报(医学版)》 CAS 2002年第6期489-491,共3页
目的:探讨人乳头瘤病毒16型L1-E7重组腺病毒载体疫苗的免疫效应。方法:①将rAd5HPV16L1-E7载体疫苗在293细胞中扩增后,以肌肉注射、腹腔注射、滴鼻和灌胃途径免疫小鼠,采用ELISA法测其血清IgG抗体水平;②制备脾细胞悬液,加入到96孔无菌... 目的:探讨人乳头瘤病毒16型L1-E7重组腺病毒载体疫苗的免疫效应。方法:①将rAd5HPV16L1-E7载体疫苗在293细胞中扩增后,以肌肉注射、腹腔注射、滴鼻和灌胃途径免疫小鼠,采用ELISA法测其血清IgG抗体水平;②制备脾细胞悬液,加入到96孔无菌培养板中,并分别加入rAd5HPV16L1-E7特异性蛋白和RPMI1640+10%胎牛血清,加入3H-TdR1μCi/孔,做T-细胞增殖实验;③取经过培养56h的培养液进行IFN-γ的测定。结果:不同途径免疫的BALB/c小鼠血清IgG抗体水平均高于对照组(P<0.05),但以肌注组产生抗体量最多,IFN-γ和T-细胞增殖亦高于对照组(P<0.05)。结论:rAd5HPV16L1-E7重组活病毒疫苗既能刺激T-细胞产生细胞介导的免疫应答,又能刺激B-细胞产生抗体介导的免疫应答,说明其具有很好的免疫原性。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒 HPV16L1-E7 重组腺病毒载体 疫苗 BALB/C 小鼠 T淋巴细胞 抗独特型抗体
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卵巢癌抗独特型单链抗体6B11ScFv/mGM-CSF融合蛋白的构建、表达及活性测定 被引量:4
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作者 刘蓓 崔恒 +7 位作者 冯捷 叶雪 李艺 曹善 津葛华 付天云 姚煜 钱和年 《解剖学报》 CSCD 北大核心 2000年第3期226-230,共5页
目的 构建卵巢癌抗独特型单链抗体 6 B11Sc Fv和鼠 GM- CSF融合蛋白 (6 B11m GM) ,以观察其在动物体内诱导的特异性免疫反应 ,为卵巢癌抗独特型疫苗应用于临床提供依据。 方法 用 DNA重组技术 ,将m GM- CSF连于单链抗体 6 B11Sc Fv... 目的 构建卵巢癌抗独特型单链抗体 6 B11Sc Fv和鼠 GM- CSF融合蛋白 (6 B11m GM) ,以观察其在动物体内诱导的特异性免疫反应 ,为卵巢癌抗独特型疫苗应用于临床提供依据。 方法 用 DNA重组技术 ,将m GM- CSF连于单链抗体 6 B11Sc Fv羧基末端 ,构建重组质粒 p ET30 - 6 B11m GM,转化大肠杆菌 BL2 1(DE3) ,IPTG诱导 ,以包涵体形式获高效表达 ,超声破碎细菌细胞获得包涵体 ,用 8mol.L- 1尿素溶解包涵体后直接稀释复性 ,SDS- PAGE分析蛋白纯度 ,EL ISA分析技术和细胞增殖实验测定融合蛋白的抗体和细胞因子活性。 结果 复性蛋白纯度达 90 %以上。采用氧化型谷胱甘肽 (GSSG)浓度为 1mm ol.L- 1 ,还原型谷胱甘肽 (GSH)浓度为 5 m mol.L- 1 ,10℃复性 48h,复性率达 36 %。表达的融合蛋白分别能与 COC16 6 - 9单抗和大鼠抗小鼠 GM- CSF单抗特异结合 ,并能刺激 m GM- CSF依赖株 NFS- 6 0细胞增殖。 结论 以包涵体表达的融合蛋白 6 B11m GM保留了两种蛋白的活性 。 展开更多
关键词 卵巢癌 重组融合蛋白 抗独特型单链抗体
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日本血吸虫抗独特型抗体NP30重链6×CDR3/IL-2融合基因构建及表达 被引量:1
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作者 徐玮 冯振卿 +4 位作者 朱进 仇镇宁 李芸茜 江汕 管晓虹 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期299-301,共3页
目的:构建日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30重链可变区6×CDR3基因/IL-2融合基因,以观察其对动物的抗血吸虫感染保护作用。方法:通过PCR方法体外扩增NP30 6×V_HCDR3和IL-2基因,经测序后先后重组入原核表达质粒pET-28a(+)相应... 目的:构建日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30重链可变区6×CDR3基因/IL-2融合基因,以观察其对动物的抗血吸虫感染保护作用。方法:通过PCR方法体外扩增NP30 6×V_HCDR3和IL-2基因,经测序后先后重组入原核表达质粒pET-28a(+)相应的位点上,将构建正确的6×V_HCDR3/IL-2-pET-28a(+)表达质粒转化E.coli BL21,IPTG诱导表达。结果:构建的6×V_HCDR3/IL-2融合基因中,6×V_HCDR3和IL-2序列均正确,融合基因经IPTG诱导表达重组蛋白,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析分子质量约为30ku,表达量约占菌体总蛋白的20%。结论:成功构建并原核表达了NP30 6×V_HCDR3/IL-2融合基因。 展开更多
关键词 日本血吸虫 融合基因 抗体 抗独特型 白细胞介素-2
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鸡源Bursin-ScFv噬菌体展示文库的构建及初步筛选 被引量:1
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作者 邬向东 曲悦 +2 位作者 谌南辉 王萍 何后军 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期488-493,共6页
本研究利用抗三肽囊素(Bursin)单克隆抗体免疫SPF来航鸡,获得产生抗独特型抗体的脾细胞,从中提取总RNA,经反转录合成cDNA第一链。以cDNA第一链为模板,根据来航鸡IgG抗体重链(VH)、轻链(VL)可变区基因FR设计引物,进行PCR扩增。在体外扩... 本研究利用抗三肽囊素(Bursin)单克隆抗体免疫SPF来航鸡,获得产生抗独特型抗体的脾细胞,从中提取总RNA,经反转录合成cDNA第一链。以cDNA第一链为模板,根据来航鸡IgG抗体重链(VH)、轻链(VL)可变区基因FR设计引物,进行PCR扩增。在体外扩增出该抗体的可变区VH和VL基因(大小分别约为370和320 bp)。通过重叠延伸反应(SOE),以(Gly4Ser)3为连接肽,将VH和VL基因连接成为VH-Linker-VLScFv,将ScFv DNA与噬菌粒载体pHEN1的连接产物转化于大肠杆菌TG1,经辅助噬菌体M13K07感染后,获得重组的鸡源抗三肽囊素独特型抗体全套单链噬菌体抗体库。并测得该库容量约为5×105,噬菌体中ScFv基因的插入率为80%,用辅助噬菌体援救后,得到滴度为1011PFU/mL的初级噬菌体抗体库。用抗Bursin单克隆抗体(2F9-4/HU2)进行4轮"吸附-洗脱-扩增"的淘筛,出现特异性富集。经ELISA、动物试验表明所筛选的5个阳性克隆可与抗Bursin单克隆抗体(2F9-4/HU2)特异性结合,并能促进抗体的生产。 展开更多
关键词 三肽囊素 抗独特型抗体 可变区 重链 轻链 单链抗体 单克隆抗体 噬菌体抗体库
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5-羟色胺抗独特型单克隆抗体的功能鉴定 被引量:2
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作者 张福琴 李志超 +3 位作者 黄威权 孙岚 帝新宇 赵德化 《第四军医大学学报》 1998年第4期460-462,共3页
对5-羟色胺(5-HT)抗独特型单克隆抗体的功能进行鉴定.方法:细胞培养法,免疫组织化学ABC法和形态计量法.结果:培养平滑肌细胞显示5-HT受体免疫反应阳性,在正常培养基培养的平滑肌细胞的平均长度为(18.8±35.4)μm.培养... 对5-羟色胺(5-HT)抗独特型单克隆抗体的功能进行鉴定.方法:细胞培养法,免疫组织化学ABC法和形态计量法.结果:培养平滑肌细胞显示5-HT受体免疫反应阳性,在正常培养基培养的平滑肌细胞的平均长度为(18.8±35.4)μm.培养基中含不同浓度的5-HT抗独特型单克隆抗体(分别为0.01%,0.03%,0.10%,0.30%,1%抗体原液),平滑肌细胞的平均长度分别缩短为(175.6±43.3)μm,(16.2±46.2)μm,(116.9±25.8)μm,(89.5±22.8)μm,(79.9±21.6)μm,除含0.01%抗体原液组外均比正常组有非常显著的差别(P<0.01).结论:该抗独特型单克隆抗体具有与5-HT相类似的诱导平滑肌收缩的功能,5-HT受体可能介导了这种功能. 展开更多
关键词 5-羟色胺 抗独特型 单克隆抗体 鉴定
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鼻咽癌患者血清中Epstein-Barr病毒早期抗原特异性抗体的IgA类抗独特型抗体的检测 被引量:1
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作者 李稻 曾毅 +2 位作者 纪志武 方仲 G.Pearson 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1992年第1期26-31,共6页
用3.5%PEG(MW6000)预先处理被检血清以除掉免疫复合物及干扰抗原之后,用新建立的ELISA方法测定血清中Epstein-Barr病毒早期抗原特异性抗体的抗独特型(Anti-Id)抗体。67例鼻咽癌患者中,80%IgA类的Anti-Id抗体阳性(P/N值≥2.1),而56例... 用3.5%PEG(MW6000)预先处理被检血清以除掉免疫复合物及干扰抗原之后,用新建立的ELISA方法测定血清中Epstein-Barr病毒早期抗原特异性抗体的抗独特型(Anti-Id)抗体。67例鼻咽癌患者中,80%IgA类的Anti-Id抗体阳性(P/N值≥2.1),而56例正常人群除1例阳性外,其余均阴性。测定46例鼻咽癌患者血清EA/IgA滴度与Anti-Id的关系表明,Anti-Id抗体P/N值与IgA/EA滴度呈负相关(r=-0.6,P<0.001)。12例鼻咽癌病人血清中EA抗体的IgG类Anti-Id抗体则与正常人无显著差别。 展开更多
关键词 抗独特型抗体 EB病毒抗原 鼻咽肿瘤
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6B11ScFv-mHSP70融合蛋白诱导抗卵巢癌免疫应答的体外实验研究 被引量:2
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作者 刘春雨 崔恒 +8 位作者 昌晓红 叶雪 付天云 程洪艳 张果 熊英 成夜霞 张丽 赵旸 《中国妇产科临床杂志》 2008年第4期274-278,共5页
目的既往研究证实,6B11抗独特型单链抗体(6B11ScFv)具有模拟卵巢癌相关抗原OC166-9的作用。本文研究6B11ScFv与小鼠热休克蛋白70(mHSP70)构建而成的融合蛋白(6B11ScFv-mHSP70)在体外抗卵巢癌免疫应答,探讨其作为卵巢癌疫苗的可能性。方... 目的既往研究证实,6B11抗独特型单链抗体(6B11ScFv)具有模拟卵巢癌相关抗原OC166-9的作用。本文研究6B11ScFv与小鼠热休克蛋白70(mHSP70)构建而成的融合蛋白(6B11ScFv-mHSP70)在体外抗卵巢癌免疫应答,探讨其作为卵巢癌疫苗的可能性。方法以大肠杆菌表达6B11ScFv-mHSP70融合蛋白,经变性复性后纯度达95%。采用ELISA检测其免疫学活性。采集HLA-A2阳性的女性健康志愿者的外周血单个核细胞,用6B11ScFv-mHSP70刺激并培养。采用CCK-8法、LDH释放法分别观察淋巴细胞增殖情况和对卵巢癌细胞系的细胞毒作用,流式细胞术检测6B11ScFv-mHSP70刺激前后淋巴细胞表型的改变。结果6B11ScFv-mHSP70具有特异性结合卵巢癌单抗COC166-9及抗小鼠-HSP70抗体的双重免疫学活性;可以刺激人外周血淋巴细胞的增殖;并对HLA-A2阳性、OC166-9表达阳性的卵巢癌细胞系有细胞毒作用;经6B11ScFv-mHSP70刺激后,实验组的淋巴细胞表型与未经蛋白刺激的对照组相比:CD4+T细胞明显增加,CD8+T细胞略有增加。CD4+/CD8+的比率明显增加,CD4+CD25+T细胞占CD4+T细胞的比率明显下降,差异有统计学意义。结论6B11ScFv-mHSP70融合蛋白在体外可诱导特异性抗卵巢癌的细胞免疫反应,有可能作为抗独特型疫苗用于卵巢癌的主动免疫。 展开更多
关键词 抗独特型抗体 热休克蛋白 融合蛋白 卵巢癌
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卵巢癌抗独特型抗体/hGM-CSF融合蛋白质对体外免疫细胞的刺激作用 被引量:6
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作者 杨飞雪 钱和年 刘蓓 《北京医科大学学报》 CSCD 1999年第1期9-12,共4页
目的:探讨卵巢癌抗独特型单链抗体6B11scFv/hGMCSF融合蛋白质(6B11GM)作为肿瘤疫苗的可能性。方法:采用体外T细胞增殖试验,对6B11GM刺激T细胞的能力进行测定,并用流式细胞仪对T细胞表型及APC... 目的:探讨卵巢癌抗独特型单链抗体6B11scFv/hGMCSF融合蛋白质(6B11GM)作为肿瘤疫苗的可能性。方法:采用体外T细胞增殖试验,对6B11GM刺激T细胞的能力进行测定,并用流式细胞仪对T细胞表型及APCMHCⅡ表达情况进行测定,测定了外周血单个核细胞经6B11GM激活后对卵巢癌细胞系的非MHC限制的杀伤活性。结果:6B11GM及6B11均能引起特异的T细胞增殖,但6B11GM组的增殖明显高于6B11组,以CD4+增殖为主。6B11GM能明显增加抗原提呈细胞(antigenpresentingcel,APC)的MHCⅡ表达,使APC更有效地摄取抗原,激活非MHC限制的杀伤活性。结论:6B11GM能引起细胞免疫反应。 展开更多
关键词 抗独特型抗体 融合蛋白质 HGM-CSF 卵巢肿瘤
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卵巢癌抗独特型单链抗体6B11scFv/hGM-CSF融合蛋白质的表达及活性测定 被引量:1
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作者 杨飞雪 钱和年 +3 位作者 冯捷 崔恒 付天云 叶雪 《北京医科大学学报》 CSCD 1998年第5期397-399,403,共4页
目的:为提高卵巢癌抗独特型抗体的免疫原性,构建表达6B11scFv/hGMCSF融合蛋白质,并对其活性进行测定。方法:用DNA重组技术,将以前构建的6B11scFvLinkerhGMCSF融合基因克隆至pET... 目的:为提高卵巢癌抗独特型抗体的免疫原性,构建表达6B11scFv/hGMCSF融合蛋白质,并对其活性进行测定。方法:用DNA重组技术,将以前构建的6B11scFvLinkerhGMCSF融合基因克隆至pET16(a+)表达载体,表达可溶蛋白质。用ELISA分析技术和细胞增殖试验测定融合蛋白质的抗体和细胞因子活性。结果:融合蛋白质实现可溶表达,能与COC1669单抗和小鼠抗人GMCSF单抗特异结合,并能刺激GMCSF依赖株增殖。结论:融合蛋白质保留了2种蛋白质的活性。 展开更多
关键词 卵巢肿瘤 抗独特型抗体 CSF 免疫学
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