抗α-1酸性糖蛋白血清的制备

作者用分离纯化的α-1酸性糖蛋白免疫新西兰兔,制备抗α-1酸性糖蛋白血清。鉴定结果表明,制备的抗血清与进口商品抗α-1酸性糖蛋白血清特异性相同;与人血清其他蛋白无交叉反应。琼脂双向扩散法测得抗血清效价为128,检出α-1酸性糖蛋白的最低浓度为204μg/ml。

抗TNF-α制剂对克罗恩病合并肛瘘患者术后血清炎性细胞因子水平及其病情远期复发率的影响

目的:探讨为接受手术的克罗恩病合并肛瘘患者使用抗肿瘤坏死因子α(TNF-α)制剂进行治疗对其血清炎性细胞因子水平、病情远期复发率的影响。方法:选取2018年2月至2019年2月期间红河州第一人民医院收治的58例克罗恩病合并肛瘘患者作为研究对象。将这些患者平均分为试验组和对照组。两组患者入院后,均对其进行单行挂线引流术。手术后,用抗TNF-α制剂对试验组患者进行治疗。然后比较两组患者病情的远期复发率、瘘管愈合的平均时间、肛周克罗恩病活动指数(PDAI)的评分、克罗恩病活动指数(CDAI)的评分、白介素-4(IL-4)/干扰素-γ(IFN-γ)值、转化生长因子-β(TGF-β)/白介素-17(IL-17)值。结果:手术后,试验组患者病情的远期复发率、PDAI的评分、CDAI的评分均低于对照组患者,P<0.05;其瘘管愈合的平均时间短于对照组患者,P<0.05;其IL-4/IFN-γ值、TGF-β/IL-17值均小于对照组患者,P<0.05。结论:用抗TNF-α制剂对进行手术后的克罗恩病合并肛瘘患者进行治疗,可降低其血清炎性细胞因子的水平及病情的远期复发率。

迟钝爱德华氏菌鞭毛蛋白的提取与分析

采用不同的方法提取迟钝爱德华氏菌鞭毛蛋白(Edwardsiella Tardaflagellin,ETF),选出合适的方法提取ETF,同时制备了ETF的鼠抗血清和迟钝爱德华氏菌菌株ETY全菌的鼠抗血清,通过ELISA法和Western blottig法分析了ETF的抗原性和免疫原性。试验结果表明,酸化高速离心法可获得高纯度分子量约为44 kDa的ETF,该蛋白可被爱德华氏菌的全菌鼠抗血清识别,同时由ETF制备的鼠抗血清除了能特异识别该蛋白之外,也可识别爱德华菌菌体裂解产物中44 kDa的蛋白,证实爱德华氏菌鞭毛蛋白具有抗原性和免疫原性,可作为亚单位疫苗的候选抗原。

动物抗血清及其制备技术要点与应用进展

抗血清对于控制动物疫病具有很重要的作用。综述了动物抗血清的发展历程、产品技术现状、制备技术要点与最新研究应用进展以及面临的问题和解决方案等。

槟榔植原体膜蛋白基因的克隆及其抗血清制备

根据实验室测得的槟榔植原体膜蛋白基因(Ac Pmp)序列设计1对特异引物mp-FP/mp-RP,以病样槟榔总DNA为模板扩增该Ac Pmp的编码区并连接到p MD19T simple中间载体。将测序正确的阳性菌提取质粒p MD19T-Ac Pmp,经NcoⅠ和XhoⅠ双酶切后回收Ac Pmp片段,然后以正确的编码框连接到原核表达载体p ET32a(+),转化Escherichia coli BL21感受态细胞。含有p ET32a-Ac Pmp的BL21表达菌经IPTG诱导和SDS-PAGE分析表明,在30℃,0.1 mmol/L IPTG条件下诱导4 h,可产生部分可溶性的融合蛋白。利用Ni2+-NTA亲和层析柱法进行纯化并获得高纯度的可溶性融合蛋白。将纯化后的融合蛋白多次免疫家兔,取其抗血清,以融合蛋白(1∶10 000稀释)作抗原,间接ELISA法测定抗血清效价大于125 000。Western Blot杂交结果表明槟榔植原体膜蛋白抗血清能与融合蛋白特异性结合。

马铃薯S病毒外壳蛋白基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

以田间采集的马铃薯病叶中提取的马铃薯病毒S(PVS)总RNA为模板,通过RT-PCR获取长度为890 bp的PVS-cp的cDNA,克隆至pGEM-T载体上。酶切回收该基因片段,并构建了该基因的原核表达质粒pBV-pvs。SDS-PAGE凝胶电泳和Western印迹分析表明:PVS-cp基因在大肠杆菌JM109中可特异地高效表达分子量约33kD的蛋白,且表达蛋白具有良好的抗原活性。利用该表达产物免疫动物家兔,获得的抗血清可用于大田马铃薯S病毒的快速检测。

小鼠Foxp3抗血清的制备及应用

目的:制备高效价的特异性小鼠Foxp3抗血清,并初步应用于正常小鼠组织的Foxp3表达的鉴定。方法:构建重组质粒pGEX-6p-2/Foxp3,并转化至E.coliBL21(DE3)中进行大量诱导表达,用纯化的重组融合蛋白免疫新西兰兔,制备抗血清。以制备的抗血清为一抗,Western blot检测小鼠组织的Foxp3蛋白的表达。结果:SDS-PAGE及Western blot鉴定,诱导表达及纯化的重组融合蛋白能被抗GST单克隆抗体(mAb)识别,在Mr45000附近有特异条带,与预期融合蛋白大小一致,获得的抗血清效价在1∶12800以上,该抗血清能特异性识别NIH3T3细胞中表达的Foxp3蛋白。Westernblot鉴定结果显示在脾脏、胸腺、淋巴结中Foxp3蛋白有较高表达,胃也有少量的表达,而骨骼肌、脂肪组织未见表达。结论:制备了高效价的特异性小鼠Foxp3抗血清,并可用于正常小鼠组织的Foxp3蛋白的表达鉴定,为进一步研究Foxp3奠定了实验基础。

拟蜘蛛拖丝蛋白基因重组蛋白的纯化及其抗血清制备

为了制备可用于拟蜘蛛拖丝蛋白体外检测的抗血清,利用前期工作中获得的蜘蛛拖丝蛋白基因重组原核表达载体2S-pET-52b(+),采用原核表达方法获得大量重组蜘蛛拖丝蛋白2S-His,对此重组蛋白进行His标签特异性的亲和纯化,再依次经SDS-PAGE、切胶和与佐剂混合后作为抗原;皮下多点注射法将抗原注入新西兰大白兔皮下进行免疫;采集已免疫的兔血清,采用ELISA检测方法对其效价进行检测。结果显示,重组质粒2S-pET-52b(+)转化BL21-pLysS后获得最佳的表达菌株;在筛选得到的最佳IPTG、温度和时间(分别为1.0 mmol/L、30℃和2 h)条件下诱导获得2S-His重组蛋白;经免疫的4只兔血清中,2只兔的血清效价达1∶25 600和1∶12 800。表明利用2S-pET-52b(+)重组质粒成功获得可用于拟蜘蛛拖丝蛋白体外检测的抗血清。本研究为加快建立在被毛中特异表达大量蜘蛛拖丝蛋白的新方法提供依据。

人肝癌特异性γ－GTⅡ纯化及抗血清制备

以生化技术从人肝癌组织中提取、纯化出肝癌特异性γ－谷氨酰转肽酶（γ－ＧＴⅡ），并以此酶为抗原免疫新西兰兔制备抗γ－ＧＴⅡ血清。应用免疫双扩散法对该抗血清的特异性进行检测。结果显示此抗血清与人肝癌γ－ＧＴⅡ抗原及原发性肝癌病人血清均具有很好的特异性免疫反应。

负离子中药无抗制剂对断奶仔猪血清指标的影响

试验采用纳米技术处理的硫磺矿粉与红曲中草药以科学合理比例混合,作为断奶仔猪饲料添加剂。为探究负离子中药无抗制剂对断奶仔猪血清各项指标的影响,试验选取40头体重为(8.45±0.67)kg、健康无疫病、体况相近且出生及断奶日龄相同,公母各半的杜×长×大三元杂交猪。按照试验要求完全随机分成2组,每组内设5次重复,每次重复4头,共计40头。对照组仅饲喂基础日粮,试验组在饲喂基础日粮的基础上加饲0.5%负离子中药无抗制剂,试验共42 d。结果表明:在添加0.5%负离子中药无抗制剂组的试验组中血清总蛋白(TP)含量极显著增加18.77%(P<0.01),血清尿素氮(BUN)含量极显著降低11.02%(P<0.01);试验组的血清甘油三酯(TG)含量极显著降低17.65%(P<0.01),血清胆固醇(TC)含量显著降低13.01%(P<0.05);试验组的生长激素(GH)含量极显著升高25.60%(P<0.01),生长抑素(SS)含量显著降低11.94%(P<0.05);试验组皮质醇(COR)含量显著降低22.88%(P<0.05)。结果显示,在饲料中添加0.5%负离子中药无抗制剂能够在一定程度上提高仔猪生长性能,调节机体代谢,促进仔猪对蛋白质的消化吸收,缓解炎症提高免疫力。

单甲氧聚乙二醇/牛血清白蛋白/5-氟尿嘧啶的制备及其抑瘤活性初探

目的:制备单甲氧聚乙二醇/牛血清白蛋白/5-氟尿嘧啶(mPEG/BSA/5-FU)偶联物,以延长5-FU的半衰期并降低其达峰浓度,同时初步探讨偶联物的抑瘤活性。方法:通过在5-FU的N-1处引入乙酸基后再制成活性酯并与BSA偶联,用mPEG修饰偶联物而得mPEG/BSA/5-FU。60只小鼠皮下注射H22肝癌细胞腹水建立实体瘤模型后随机分为生理盐水组、5-FU(25 mg·kg-1.d-1)组、BSA/5-FU组(以5-FU计25 mg·kg-1·d-1)及mPEG/BSA/5-FU(以5-FU计50、25、12.5 mg·kg-1·d-1)剂量组共6组,分别腹腔注射相应试药10 d后处死,计算各组抑瘤率等。结果:得到了偶联率为32.89%的BSA/5-FU,修饰度为48.37%的mPEG/BSA/5-FU。同等5-FU剂量下mPEG/BSA/5-FU组、5-FU组、BSA/5-FU组的抑瘤率分别为40.51%、33.63%、20.54%(P<0.01)。结论:制备mPEG/BSA/5-FU偶联物的偶联反应及修饰反应的工艺简单,抑瘤实验显示所得目标产物的抑瘤率明显高于5-FU组和BSA/5-FU组。

不同制备工艺葛根芩连汤抗炎抑菌作用比较

目的:对混煎液、分煎液、有效成分提取物3种不同制备工艺制备的葛根芩连汤进行抗炎、抑菌作用实验研究,对比其抗炎抑菌作用的异同。方法:二甲苯致小鼠耳肿胀实验:昆明种小鼠,随机分为混煎液组、分煎液组、有效部位提取物组及生理盐水组,ig给药1.95 g·kg-1,连续7 d。含药血清体外抑菌试验:ig给药20.475 g·kg-1,连续7 d,采集分离大鼠血清。以二甲苯致小鼠耳廓肿胀模型以及含药血清体外抑菌实验模型,评价其三者的抗炎、抑菌作用。结果:与混煎液和分煎液比较,有效成分提取物(1.95 g·kg-1)明显缓解了小鼠耳廓肿胀(P<0.01),其含药血清对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌及伤寒沙门菌等10种菌具有明显的抑制作用(P<0.01)。结论:葛根芩连汤有效成分提取物对化学刺激所致炎症的缓解作用及其含药血清的体外抑菌作用,优于混煎液和分煎液。

不同免疫方案制备家蚕抗菌肽多抗血清的比较

目的:以His-CecropinXJ融合蛋白、pcDNA3.0-cecropinXJ重组质粒为免疫原,分别采用蛋白皮下免疫、DNA肌肉免疫及使用活体基因导入仪肌肉免疫BALB/c小鼠,制备新疆家蚕抗菌肽的多克隆抗血清,并评价不同免疫方案对抗原免疫原性的影响。方法:采用间接ELISA测定免疫血清中抗新疆家蚕抗菌肽IgG抗体的滴度及亚型分类。用Western blot检测各免疫方案制备的抗血清,与新疆家蚕抗菌肽CecropinXJ抗原结合的特异性。结果:不同免疫方案均可诱导产生针对新疆家蚕抗菌肽不同滴度的多克隆抗血清。使用活体基因导入仪免疫后,可诱导高滴度的抗体产生。结论:以His-CecropinXJ蛋白免疫BALB/c小鼠后,可诱导高滴度的IgG1抗体产生;以pcDNA3.0-cecropinXJ质粒免疫后,可诱导针对IgG2a的抗体产生。