青蒿琥酯纳米胶束制备及其体内药动学、抗肿瘤活性研究

目的制备青蒿琥酯纳米胶束,并考察体内药动学和抗肿瘤活性。方法以聚乙二醇单甲醚-聚乳酸-聚组氨酸(mPEG-PLA-PHis)为载体制备纳米胶束,单因素试验结合Box-Behnken响应面法优化处方,测定包封率、载药量、沉降率、粒径、Zeta电位、体外释药。12只H_(22)荷瘤小鼠随机分为2组,分别尾静脉注射给予青蒿琥酯注射液和青蒿琥酯纳米胶束(1 mg/kg),于不同时间点采血,HPLC法测定青蒿琥酯血药浓度,计算主要药动学参数。36只H_(22)肝癌荷瘤小鼠随机分为6组,即模型组(生理盐水)、阳性组(20 mg/kg环磷酰胺)、青蒿琥酯注射液组(30 mg/kg)及青蒿琥酯纳米胶束低、中、高剂量组(10、20、30 mg/kg),末次给药3 d后记录体质量和瘤重,计算抑瘤率。结果最佳处方为mPEG-PLA-PHis与青蒿琥酯比例10.18∶1,青蒿琥酯质量浓度0.48 mg/mL,水化时间0.96 h,包封率、载药量、沉降率、粒径、Zeta电位分别为(94.27±1.26)%、(8.26±0.18)%、(4.19±0.20)%、(65.14±4.96)nm、-(17.64±1.06)mV。纳米胶束在弱酸性介质中的累积释放度高于在弱碱性介质中,具有pH敏感性。与注射液比较,纳米胶束t_(1/2)、MRT延长(P<0.01),CL降低(P<0.01),AUC_(0~t)升高(P<0.01);与模型组比较,青蒿琥酯纳米胶束不同剂量组小鼠体质量无明显变化(P>0.05),瘤重下降(P<0.05,P<0.01),以中剂量组更明显,抑瘤率达55.40%。结论青蒿琥酯纳米胶束包封率较高,体内抗肿瘤活性较强。

IL-12对CIK细胞体外增殖及体内外杀瘤活性影响的实验研究

目的动态观察IL-12对细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer cells,CIK)体外增殖,体内外的细胞毒活性的影响。方法采用三种不同的细胞因子组合扩增CIK细胞,即IL-2组:IFN-γ、CD_3单抗、IL-1和IL-2;IL-2加IL-12组:IFN-γ、CD_3单抗、IL-1、IL-2和IL-12;IL-12组: IFN-γ、CD_3单抗、IL-1和IL-12。流式细胞术分析细胞表型,细胞计数法测定细胞的增殖。MTT法测定CIK体外细胞毒活性,并通过做扫描和透射电镜,对CIK细胞杀伤的肿瘤细胞进行形态学观察。研究CIK细胞对BGC-823荷瘤裸鼠的体内抗肿瘤作用。结果三种方法均可使细胞增殖能力显著增加,对CD_3^+CD_(56)^+细胞的诱导作用也无明显差异,IL-12与IL-2联合作用组促增殖能力和细胞毒性作用明显强于其他两组(P＜0．05)。被CIK细胞杀伤的肿瘤细胞的死亡形式是坏死和凋亡。动物实验证实CIK有较强的体内抗瘤活性,可延长荷瘤鼠的生存期,联合IL-12与IL-2诱导的CIK细胞疗效较好。结论IL-12同样可以用于CIK细胞的诱导,而联合IL-12与IL-2诱导的CIK细胞其增殖能力和体内外抗肿瘤活性均增强。

白藜芦醇mPEG-PLGA纳米粒的制备及其体内药动学、抗肿瘤活性研究

目的制备白藜芦醇聚乙二醇单甲醚-聚乳酸-乙醇酸共聚物(mPEG-PLGA)纳米粒,并考察其体内药动学、抗肿瘤活性。方法乳化-溶剂挥发法制备mPEG-PLGA纳米粒,测定包封率、载药量、粒径、PDI、Zeta电位、体外释药。大鼠随机分为2组,分别灌胃给予白藜芦醇及其mPEG-PLGA纳米粒的0.5%CMC-Na混悬液(40 mg/kg),于0、0.25、0.5、1、2、2.5、3、4、6、8、12、24、36 h采血,HPLC法测定白藜芦醇血药浓度,计算主要药动学参数。荷人卵巢癌细胞株HO-8910PM裸鼠随机分为空白组(生理盐水)、阳性组(2 mg/kg顺铂)、白藜芦醇组(40 mg/kg)及白藜芦醇mPEG-PLGA纳米粒低、高剂量组(30、40 mg/kg),测量瘤体积、瘤重,计算抑瘤率。结果mPEG-PLGA纳米粒包封率为84.42%,载药量为3.84%,粒径为143.72 nm,PDI为0.121,Zeta电位为-6.7 mV,36 h内累积释放度为74.12%。与原料药比较,mPEG-PLGA纳米粒t_(max)、t_(1/2)延长(P<0.01),C_(max)、AUC_(0~t)、AUC_(0~∞)升高(P<0.01),相对生物利用度提高至3.56倍。与空白组比较,白藜芦醇mPEG-PLGA纳米粒各剂量组瘤重降低(P<0.01),并且高剂量组瘤体积、瘤重小于白藜芦醇组(P<0.01),抑瘤率更高。结论mPEG-PLGA纳米粒可增加白藜芦醇口服生物利用度及体内抑瘤作用。

桦褐孔菌多糖IOP3a体内抗肿瘤活性及其机制

通过建立裸鼠淋巴瘤细胞Jurkat模型,对桦褐孔菌多糖IOP3a的体内抗肿瘤活性及其机制进行了研究。实验结果表明,IOP3a高、中剂量组瘤重与阴性对照组相比均有显著性差异(p<0.05),肿瘤抑制率分别为69.28%和57.62%,具有明显的剂量-效应关系。随着剂量的增加,脾脏指数有逐步增加的趋势,具有升高裸鼠WBC和淋巴细胞的功能,同时对巨噬细胞产生的细胞因子TNF-α和L-1β均有明显的促进作用。组织病理学观察表明,IOP3a可使肿瘤组织中呈现明显的肿瘤坏死灶,瘤组织出现坏死的现象。免疫组化表明,IOP3a通过促进肿瘤组织细胞中Bax蛋白表达、抑制Bcl-2表达起到抗肿瘤作用。

赤魟组织粗提物的抗肿瘤作用

采用四甲基偶氮唑盐(MTT)微量酶反应比色法检查赤魟三种组织(皮肤、软组织和软骨)粗提物对体外培养的人癌细胞生长的影响,用腹腔注射或灌胃法检查赤魟三种组织粗提物对小鼠移植性肉瘤180(S180)和肝癌(H22)生长的影响。结果表明,赤魟组织粗提物对体外培养的人早幼粒白血病细胞(HL-60)、人子宫颈癌细胞(HeLa)和人低分化鼻咽癌细胞(CNE-2Z)的生长无明显影响,赤魟组织粗提物无论腹腔注射还是灌胃均显著抑制小鼠肉瘤和小鼠肝癌的生长,且对体重无明显影响;当三种组织粗提物以500mg/kg/d(相当生药量,下同)的剂量连续腹腔注射(ip)15d时,对S180的抑制率分别为63.9%、47.2%和80.3%;以3500mg/kg/d连续灌胃(ig)15d时,对S180的抑制率分别为66.9%、61.5%和66.9%;以500mg/kg/d连续腹腔注射15d时,对H22的抑制率分别为43.3%、43.3%和80.4%。

阿霉素脂质体的制备及抗肿瘤活性研究

目的开发一种新型阿霉素脂质体制剂。方法采用膜分散法制备阿霉素脂质体;采用噻唑蓝比色法(MTT法)考察阿霉素和阿霉素脂质体对5种人类肿瘤细胞株增生的抑制作用;以荷S180小鼠为模型,考察阿霉素和阿霉素脂质体的抗肿瘤活性。结果膜分散法适用于制备阿霉素脂质体,其平均包封率高于95%;阿霉素制备成脂质体仍具备抑制肿瘤细胞株增生活性,并呈现时间依赖关系;动物实验表明,阿霉素脂质体的抗肿瘤活性比阿霉素强,毒性比阿霉素低。结论此法制备的阿霉素脂质体包封率高,简便易行,重现性好,并且显示了较好的抗肿瘤活性。

松树皮原花青素的抗肿瘤作用研究

目的对松树皮原花青素的体内外抗肿瘤作用进行研究。方法采用MTT比色法观察松树皮原花青素体外对多种人肿瘤细胞株的抑制作用,采用小鼠移植性肿瘤模型考察了松树皮原花青素对小鼠S180肉瘤和EAC腹水癌的抑制作用。结果松树皮原花青素对多种人肿瘤细胞均有较强的抑制作用,最高抑制率达60%左右;松树皮原花青素200 mg/kg的剂量能显著抑制小鼠S180肉瘤的生长,抑瘤率达42.3%,但其对EAC腹水癌小鼠的生存时间无明显影响。结论松树皮原花青素体内外均有一定的抗肿瘤作用。

亮菌多糖的分离纯化及体内抗肿瘤活性研究

本文建立高效的亮菌多糖分离纯化工艺,并研究其体内抗肿瘤活性。以市售亮菌粗粉为原料,采用水提醇沉、Sevag法脱蛋白、DEAE纤维素离子交换层析、Sephadex G-100凝胶过滤层析等方法得到亮菌多糖ATPSⅡ和ATPSⅡ-2;建立小鼠S180实体瘤模型,以生理盐水和环磷酰胺为阴性和阳性对照,观察ATPSⅡ和ATPSⅡ-2在不同剂量(10 mg/kg,40 mg/kg,80 mg/kg)给药10 d后,对小鼠肿瘤抑制的作用。结果表明:亮菌粗粉中多糖含量为22.7 g/100 g;紫外光谱分析显示纯化得到的ATPSⅡ纯度接近100%;ATPSⅡ和ATPSⅡ-2对肿瘤的抑瘤率随着多糖浓度的增大而增大,其高剂量组对S180的抑瘤率分别为46.7%和51.7%,与阳性对照组相比,亮菌精制多糖ATPSⅡ和ATPSⅡ-2高剂量组抗S180效果接近于临床化疗药环磷酰胺,具有显著的抗肿瘤活性。

CIK体内外抗宫颈癌HeLa细胞的作用及其荷瘤小鼠体内分布特点

目的:探讨细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer cell,CIK)对荧光素酶标记的人宫颈癌HeLa-luc细胞的体内外抗肿瘤作用,了解CIK回输荷瘤小鼠后在不同器官的分布特点。方法:由健康志愿者外周血单个核细胞体外诱导培养CIK,流式细胞术检测CIK表面分子的表达,RT-PCR法检测IFN-γmRNA的表达,MTT法和瑞氏-姬姆萨染色测定CIK对HeLa-luc细胞的杀伤作用。建立荷HeLa-luc瘤BALB/c裸鼠模型,体内成像系统观察荷瘤小鼠肿瘤大小变化及CIK治疗效果,共聚焦显微镜观察不同器官中CIK的分布情况。结果:CIK在体外诱导培养14～21 d,其生长达到高峰,此时CD3+CD56+T细胞的比例增加50倍以上,IFN-γmRNA表达水平也达到高峰。在效靶比为20∶1、40∶1时,CIK对HeLa-luc细胞的杀伤率分别为(51.16±2.64)%、(72.14±4.21)%,明显高于对照组的(16.33±3.09)%、(21.26±2.71)%(P<0.05)。CIK治疗5周和8周后,对荷瘤小鼠的抑瘤率分别为47.18%、64.38%。CIK治疗组荷瘤小鼠外周血中IFN-γ水平为(61.92±6.49)pg/ml,明显高于对照组的(34.30±1.78)pg/ml(P<0.05)。CFSE标记的CIK经腹腔和瘤旁注射入荷瘤小鼠3 h,在肺、肝、脾、外周血、肿瘤中均可观察到绿色荧光;腹腔途径注射24 h时,肿瘤组织中CIK浓度达到高峰(20.56±1.72)%;瘤旁途径注射3 h时,肿瘤组织中CIK达到高峰(25.75±3.45)%。结论:CIK在体内外对宫颈癌HeLa-luc细胞均有较强的杀伤作用,CIK经不同途径注射荷瘤小鼠后可以广泛分布于全身器官,其到达各脏器的浓度与输注途径及时间密切相关。

参虫颗粒体内抗肿瘤实验研究

目的了解参虫颗粒的体内抑瘤作用和对比化疗药物的影响。方法体内抑瘤率和生命延长率观察分别用S180、人肝癌H22荷瘤小鼠进行;增效减毒实验采用S180小鼠,环磷酰胺作为化疗药物毒性模型。结果2,4,8 g/kg的参虫颗粒对小鼠S180实体瘤的平均抑瘤率为18.05%,21.24%和27.28%;对H22实体瘤的平均抑瘤率分别为17.35%,20.34%和27.26%;S180和H22具有一定的抗肿瘤作用,对化疗药物环磷酰胺有明显的减毒增效作用。结论参虫颗粒对移植性小鼠S180和H22具有一定的抗肿瘤作用,对化疗药物环磷酰胺有明显的减毒增效作用。

中药香加皮提取物的体内外抑瘤效果研究

背景与目的:研究中药香加皮水提取物(cortex periplocae extract,CPE)的体内、外抗肿瘤效果。材料与方法:采用MTT法和克隆形成实验,检测CPE对6种不同组织来源肿瘤细胞(K562、BGC-823、TE-13、SMMC-7721、MCF-7和HeLa)增殖反应的影响;将CPE灌胃给予S180和colon26荷瘤小鼠,观察其对肿瘤形成及小鼠生存期的影响。结果:CPE对6种不同肿瘤细胞株均有明显的抑制作用(P<0.05),其中对K562,BGC-823,TE-13的抑制作用量效关系明显(r分别为0.89、0.71和0.72,P值均<0.05)。将CPE灌胃S180或colon26荷瘤小鼠,可明显抑制肿瘤在体内的生长,并可明显延长荷瘤小鼠的生存期(P<0.05)。结论:CPE对6种不同组织来源的肿瘤细胞均具有抑制作用,可明显抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长,延长荷瘤小鼠寿命。香加皮作为抗肿瘤药物有待进一步开发研究。

毛脉酸模提取物体内抗肿瘤作用的实验研究

目的:研究毛脉酸模提取物小鼠体内抗肿瘤作用。方法:以S180肉瘤、H22肝癌及L1210白血病作为实验瘤株,观察毛脉酸模50%乙醇提取物和水提取物对于小鼠S180、H22细胞株移植性肿瘤动物模型的抑瘤作用、对于L1210细胞株移植性肿瘤动物模型的生命延长率的影响。结果:毛脉酸模50%乙醇提取物和水提取物对于小鼠S180、H22细胞株移植性肿瘤动物模型的抑瘤作用均大于30%,对于L1210小鼠的生命延长率均在50%以下。结论:毛脉酸模50%乙醇提取物和水提取物能明显抑制S180实体瘤和H22实体瘤的生长,但是毛脉酸模50%乙醇提物和水提取物对于L1210小鼠的生存时间无明显影响。

加入胡桃醌与敲除胡桃醌的胡桃楸水提物的抗肿瘤活性

目的明确胡桃醌对胡桃楸抗肿瘤作用的贡献。方法将胡桃醌及胡桃楸所有成分作为整体考虑,利用胡桃醌易挥发的性质,通过水煎煮敲除胡桃醌,比较加入和敲除胡桃醌的胡桃楸水提物在小鼠体内的抗肿瘤活性。采用荷H22肝癌小鼠模型,以瘤质量、抑瘤率、免疫器官指数和外周血常规参数评价不同样品的抗肿瘤活性及对荷瘤机体的影响。结果加入胡桃醌的胡桃楸水提物低、高剂量组能显著抑制小鼠H22肝癌细胞的生长,抑瘤率分别为31.96%和50.61%,呈量效关系。敲除胡桃醌的胡桃楸水提物低、高剂量组的抑瘤率分别为37.01%和12.35%,不呈量效关系。胡桃楸水提物中加入胡桃醌高剂量后,抑瘤率显著提高;加入胡桃醌低剂量后能改善荷瘤小鼠红细胞数量的异常;敲除胡桃醌高剂量组能改善荷瘤小鼠淋巴细胞百分比和中性粒细胞百分比的异常;其余各胡桃楸提取物对荷瘤小鼠免疫器官和外周血常规的异常无明显改善作用。结论胡桃楸水提物具有较好的抗肿瘤活性;胡桃醌高剂量组对胡桃楸水提物的抗肿瘤作用贡献较大。

康艾冻干粉针剂的体内外抗癌活性

目的研究康艾冻干粉针剂体内外抗肿瘤细胞的活性。方法建立小鼠S180、H22肿瘤模型,测定不同浓度康艾粉针溶液体内对荷瘤小鼠肿瘤的抑制作用。同时进行体外实验,选取小鼠肿瘤细胞S180、人肝癌细胞HepG2,分别以与不同浓度的康艾粉针溶液体外共同培养作为给药组,与5-Fu共同培养作为阳性对照组,并设空白对照组。MTT法检测待测药物对肿瘤细胞的抑制作用,荧光显微镜下观察药物对HepG2细胞核形态学特征的影响,采用流式细胞仪对HepG2细胞的细胞周期时相及凋亡率进行分析。结果康艾粉针在给药剂量为3~12g/kg时,对S180、H22荷瘤小鼠肿瘤均产生明显的体内抑制作用,且在该剂量范围内呈现一定的量效关系,对小鼠S180肿瘤的抑制率为20.20%~54.55%,对H22肿瘤的抑制率为30.18%~68.65%。康艾粉针对小鼠S180、人肝癌细胞HepG2的增殖均有明显的抑制作用,且具有直接杀死HepG2以及诱导HepG2凋亡的双重作用。结论康艾冻干粉针剂具有良好的体内外抗癌活性。

红皮云杉多酚体内抗肿瘤活性研究

[目的]研究红皮云杉多酚的抗肿瘤效果。[方法]采用动物试验法,将S180细胞注射进小鼠体内,通过测定抑瘤率和免疫指标,分析其抗肿瘤效果。[结果]环磷酰胺的抑瘤率为73.20%,高剂量红皮云杉多酚的抑瘤率为61.31%,但环磷酰胺对机体免疫器官和抗氧化能力有不良影响,而红皮云杉多酚对免疫器官具有保护作用,并可以明显提高机体的抗氧化能力。[结论]红皮云杉多酚有显著的抗肿瘤作用,且安全性好。

CEA迷你基因串联体疫苗的体内抗肿瘤活性观察

目的:观察已构建的含有CEA_(625-667)基因单倍体疫苗pc DNA-CEA_(625-667)及三串联体的DNA疫苗pc DNA-triCEA_(625-667)对荷瘤小鼠体内肿瘤的抑制情况及小鼠存活时间的改变。方法:建立小鼠肝细胞癌实验动物模型,应用单倍体疫苗pc DNA-CEA_(625-667)及三串联体DNA疫苗pc DNA-tri CEA_(625-667)免疫小鼠,以生理盐水为对照组,观察各实验组小鼠皮下肿瘤生长情况,记录皮下肿瘤生长曲线,观察疫苗对荷瘤小鼠肿瘤生长速度的影响以及疫苗对荷瘤小鼠生存时间的影响。结果:与生理盐水对照组相比,两种疫苗均能明显抑制CEA阳性荷瘤小鼠的肿瘤体积以及生长速度(P<0.01),其中,pc DNA-tri CEA_(625-667)疫苗组的抑制作用明显优于pc DNA-CEA_(625-667)疫苗组(P<0.01),而二者均不能抑制CEA阴性荷瘤小鼠的肿瘤生长。pc DNACEA_(625-667)疫苗组平均生存时间为(48.50±6.73)d,与生理盐水对照组(39.00±6.64)d相比有显著差异(P<0.01);pc DNA-triCEA_(625-667)疫苗组生存时间(48.50±6.73)d明显高于生理盐水对照组和pc DNA-CEA_(625-667)疫苗组(P<0.01)。两组疫苗均不能延长CEA阴性荷瘤小鼠的生存时间。结论:无论是单倍体还是三串联体的DNA疫苗,均能够明显抑制CEA阳性荷瘤小鼠的肿瘤生长速度(P<0.01)及明显延长其生存时间(P<0.01),而对CEA阴性荷瘤小鼠则无治疗作用。

薏苡茎醇提取物对荷H22小鼠体内抗肿瘤作用

目的研究薏苡茎醇提取物对荷H22小鼠体内抗肿瘤作用。方法采用小鼠肝癌H22腹水型瘤细胞建立荷瘤小鼠动物模型，将84只模型小鼠随机均分为薏苡茎醇提取物剂量1～5组、模型对照组、环磷酰胺组，分别灌胃薏苡茎醇提取液10、8、6、4、2g／kg，等体积生理盐水和环磷酰胺0．02昏他，每日1次，连续8d。观察小鼠的活动能力、腹部膨隆大小及出现的时间、毛发和摄食、饮水量变化等情况。测量荷H22小鼠的实体瘤质量，计算抑瘤率，并计算肝脏指数、脾脏指数和胸腺指数。结果模型对照组最先出现腋下肿瘤鼓起且生长最快，自主活动减少、食欲下降、毛色开始暗淡等反应，剂量1、2组次之，剂量5组和环磷酰胺组最慢。薏苡茎醇提取物剂量1-5组瘤质量【分别为（0．47±0．18）、（0．37±0．13）、（0．34±0．10）、（0．30±0．11）、（0．28±0．09）mg]均低于模型对照组（0．60±0．21）mg[F=5．700，P〈O．05]，薏苡茎醇提取物剂量1-5组、环磷酰胺组抑瘤率依次升高（分别是21．67％、38．33％、43．33％、50．00％、53．33％和60．00％）。环磷酰胺组和薏苡茎醇提取物组的肝脏指数、脾脏指数和胸腺指数均低于模型对照组（剂量1组脾脏指数除外）；薏苡茎醇提取物各剂量组的肝脏指数低于环磷酰胺组，脾脏指数、胸腺指数与环磷酰胺组差异无统计学意义。结论薏苡茎醇提取物对荷H：：小鼠体内肿瘤和肝脏损害有抑制作用。

仙茅的抗肿瘤作用研究

目的:探讨仙茅在抗肿瘤方面产生的作用。方法:选用健康雌性昆明种小鼠共55只为仙茅组。仙茅组:体内抑瘤实验,随机分为5组,每组11只。按常规方法分别接种肿瘤细胞,接种次日开始给药,分别为对照组,环磷酰胺组仙茅药液高、中、低剂量组;结果:体内抑瘤实验:仙茅对小鼠S180肉瘤抑瘤率与给药剂量成正相关,仙茅组与对照组用药后体重无差异(P>0.05);仙茅药液高剂量组对小鼠前胃癌MFC抑瘤率显著高于对照组(P<0.05),中、低剂量组无差异(P>0.05),体外抑瘤实验:仙茅组较对照组对肿瘤细胞有抑制作用,并且与剂量成正相关。结论:仙茅对特定肿瘤细胞具有抑制作用。

芹菜素纳米结构脂质载体的制备及其体内抗肿瘤活性研究

目的 制备芹菜素纳米结构脂质载体,并评价其体内抗肿瘤活性。方法 以脂药比、固液脂质比、表面活性剂用量为影响因素,包封率、粒径为评价指标,Box-Behnken响应面法优化制备工艺,测定载药量、Zeta电位、体外释药、介质稳定性,透射电镜下观察形态。建立MDA-MB-231荷瘤裸鼠模型,测定瘤体积、瘤重、抑瘤率。结果 最佳条件为脂药比14.3∶1,固液脂质比3.8∶1,表面活性剂用量1.3%,包封率为82.87%,粒径为164.8 nm。所得纳米结构脂质载体呈球形或椭圆形,平均载药量为5.13%,Zeta电位为-33.5 mV,72 h内累积释放度为79.08%,1.8%NaCl溶液为注射介质。与空白组比较,芹菜素纳米结构脂质载体各剂量组瘤体积增长趋势变缓,并呈剂量依赖性;中、高剂量组瘤重降低(P<0.01),抑瘤率分别为27.78%、37.04%。结论 纳米结构脂质载体可改善芹菜素溶解性,并具有明显的体内抗肿瘤活性。