MAPKs在anti-β_2 GPI/β_2 GPI刺激THP-1细胞表达TF过程中的作用探讨

目的:探讨丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated protein kinases,MAPKs)在anti-β2 GPI/β2 GPI复合物诱导单核细胞株THP-1表达组织因子(TF)中的活化及其作用。方法:利用荧光定量PCR(Real-time PCR)、TF活性试剂盒等分别检测anti-β2 GPI/β2 GPI复合物诱导THP-1细胞表达TF mRNA及TF活性,Western blot检测细胞表达p38、磷酸化-p38(p-p38)、ERK1/2、磷酸化-ERK1/2(p-ERK1/2)、JNK、磷酸化-JNK(p-JNK)的情况。进一步采用p38、ERK1/2、JNK抑制剂(SB203580、U0126、SP600125)观察是否能阻断anti-β2 GPI/β2 GPI复合物诱导THP-1细胞表达TF。结果:Anti-β2 GPI/β2 GPI复合物(100μg/ml)能够显著增强THP-1细胞表达TF,并使p-p38、p-ERK1/2、p-JNK水平显著升高(P<0.05 vs control);其引发的MAPKs磷酸化具有时间效应性,均在刺激30分钟时达到高峰;对应的特异抑制剂SB203580(10μmol/L)、U0126(5μmol/L)、SP600125(90 nmol/L)单独或合并处理THP-1细胞后,anti-β2 GPI/β2 GPI复合物诱导细胞TF mRNA表达及TF活性的效应明显被阻断(P<0.01 vs control)。结论:Anti-β2 GPI/β2 GPI复合物诱导THP-1细胞表达TF过程中,MAPKs被激活进而发挥重要作用。

PDTC和姜黄素对抗β_2GPI抗体诱导小鼠表达组织因子的影响

目的:本研究拟探讨PDTC和姜黄素对抗β_2GPI抗体诱导小鼠组织因子(Tissue factor,TF)表达的影响。方法:BALB/c小鼠先用PDTC[100 mg/(kg·d)]或/和姜黄素[50 mg/(kg·d)]预处理2 h,再进行腹腔注射anti-β_2GPI(500μg/只),取小鼠腹腔巨噬细胞、双侧颈动脉和胸主动脉,超声裂解,收集细胞总RNA和蛋白,实时定量PCR(Real-time q PCR)检测细胞TF mRNA水平,TF活性试剂盒检测TF活性,Western blot方法检测NF-κB p65、磷酸化NF-κB p65、c-Jun和磷酸化pc-Jun的表达情况。结果:抗β_2GPI抗体能够诱导小鼠腹腔巨噬细胞TF的表达及NF-κB p65和c-Jun/AP-1的磷酸化,与对照相比差异有统计学意义(P<0.05 vs NR-Ig G);PDTC和姜黄素均能抑制抗β_2GPI抗体诱导小鼠TF的表达以及NF-κB p65和cJun/AP-1的磷酸化效应(P<0.05 vs anti-β_2GPI),但是二者没有协同作用。结论:PDTC和姜黄素均能影响抗β_2GPI抗体诱导小鼠TF的表达,表明其具有防治血栓形成的潜力。

GPI、抗-CCP和RF联合检测对诊断类风湿性关节炎的临床意义

目的研究葡萄糖-6-磷酸异构酶(GPI)、环瓜氨酸多肽抗体(抗-CCP)和类风湿因子(RF)联合检测对诊断类风湿性关节炎的临床意义。方法选择2012年1月—2016年12月在本院进行诊治的类风湿性关节炎患者120例为A组,其他自身免疫性疾病患者(包括骨关节病、系统性红斑狼疮、原发性干燥综合征、系统性硬化症以及混合性结缔组织病)100例为B组,以及同期在本院进行体检的健康者100例为C组。采用酶联免疫吸附法检测GPI和抗-CCP,采用免疫比浊法对血清RF进行测定。比较3组研究对象GPI、抗-CCP、RF及联合检测的阳性率以及GPI、抗-CCP、RF与联合检测对类风湿性关节炎的特异度、敏感度、阴性预测值以及阳性预测值。结果 A组GPI、抗-CCP、RF及联合检测的阳性率均明显高于B组以及C组(P<0.05);GPI、抗-CCP、RF联合检测对类风湿性关节炎的诊断特异度、敏感度、阴性预测值以及阳性预测值均明显高于单独检测(P<0.05)。结论 GPI、抗-CCP和RF在类风湿性关节炎中具有较高的阳性表达率,三者联合检测可以提高对类风湿性关节的检出率。

mTOR活化对抗β_2GPI抗体/β_2GPI复合物诱导THP-1细胞组织因子表达的影响

目的探讨雷帕霉素靶蛋白(mTOR)在抗β_2糖蛋白I(β_2GPI)/β_2GPI复合物诱导THP-1细胞组织因子(TF)表达中的作用。方法用抗β_2GPI抗体/β_2GPI和β_2GPI/Ig G-APS处理THP-1细胞,mTOR抑制剂雷帕霉素(100 nmol/L)进行干预实验;收集细胞总RNA和蛋白质,实时定量PCR(RT-q PCR)和TF活性试剂盒分别检测THP-1细胞中TF mRNA表达水平及其活性,western blot检测THP-1细胞中mTOR、磷酸化mTOR(p-mTOR)、p38、p-p38、ERK1/2、p-ERK1/2、JNK、p-JNK、NF-κB p65和p-NF-κB p65的表达情况。结果抗β_2GPI抗体/β_2GPI和β_2GPI/Ig G-APS复合物均能明显增加THP-1细胞TF mRNA和TF活性以及mTOR磷酸化水平(P均<0.05);雷帕霉素能明显降低抗β_2GPI抗体/β_2GPI和β_2GPI/Ig G-APS诱导THP-1细胞TF的表达水平以及mTOR磷酸化的效应(P均<0.05),也能明显地削弱p38、ERK1/2和NF-κB p65的磷酸化水平(P均<0.05),而对JNK的磷酸化水平无抑制效应(P>0.05)。结论抗β_2GPI抗体/β_2GPI复合物能够刺激THP-1细胞mTOR的活化,并能影响TF的表达。

IgA抗β2-GPI与反复自然流产的关系

目的检测反复自然流产（RSA）患者血清IgA抗β2-GPI水平，探讨IgA抗β2-GPI与反复自然流产的关系。方法将2011年1月～11月来甘肃省妇幼保健院生殖免疫中心就诊的102例反复自然流产患者，按发生自然流产的时间分为早期流产组（孕周〈12w）57例，晚期流产组（孕周≥12w）45例，另将36例已生育健康妇女作为对照组，采用酶联免疫吸附法检测血清中IgA抗β2-GPI水平。结果早期流产组IgA抗β2-GPI阳性21例，阳性率36．8％；晚期流产组IgA抗β2-GPI阳性16例，阳性率35．6％，对照组IgA抗β2-GPI阳性3例，阳性率8．3％。与对照组比较，早期流产组、晚期流产组IgA抗β2-GPI抗体阳性率均显著高于对照组，差异有统计学意义（P〈0．05）；早期流产组与晚期流产组IgA抗β2-GPI抗体阳性率比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论IgA抗β2-GPI抗体可能与反复自然流产有关，IgA抗β2-GPI抗体可作为RSA免疫因素的辅助诊断指标。

不孕患者抗β2-GPI、A-TPO、AsAb和EMAb水平及因素

目的:探究不孕患者免疫抗体检出及相关影响因素。方法:收集2018年1月-2018年10月本院就诊的不孕女性患者61例为不孕组,61例正常生育史健康女性为对照组;分析两组抗β2糖蛋白I抗体(β2-GPI)、抗甲状腺过氧化物酶抗体(A-TPO)、抗精子抗体(AsAb)和抗子宫内膜抗体(EMAb)检出率以及影响因素。结果:在61例不孕组中,原发不孕18例(29.5%),继发不孕43例(70.5%);抗体阳性检出率不孕组β2-GPI(24.6%)、A-TPO(19.7%)、AsAb(23.0%)、EMAb(29.5%)均高于对照组(P<0.05),而原发不孕患者β2-GPI(16.4%)、AsAb(14.8%)、EMAb(19.7%)阳性检出率高于继发不孕患者(P<0.05),A-TPO阳性检出率原发与继发组比较无差异。不孕组发生排卵障碍41.0%、免疫因素29.5%、盆腔炎21.3%、输卵管病变19.7%,经logistic回归分析,上述4种病因均是女性不孕的主要危险因素。结论:女性不孕与体内抗β2-GPI、A-TPO、AsAb和EMAb抗体关系密切,对免疫性不孕病因诊断具有重要临床意义,排卵障碍、免疫因素、盆腔炎与输卵管病变是导致不孕的主要因素,临床应加以重视。

RF、GPI、抗CCP抗体联合对类风湿关节炎的检验价值

目的观察探讨RF、GPI、抗CCP抗体联合在类风湿关节炎（RA）中的检验方法，总结其临床应用价值。方法选取我院2009年6月～2011年6月72例类风湿关节炎的患者，设为观察组，再选取同期体检为健康的人群70例，设为对照组，均进行RF、GPI、抗CCP抗体联合检测，观察比较两组检测结果。结果观察组的RF、GPI、抗CCP抗体检测阳性率明显高于对照组（P〈0．05），具有统计学意义：在特异性方面．以抗CCP抗体最高，联合检测最低，比较差异显著（P〈0．05）；在敏感度方面，以联合检测最高，RF最低，比较差异显著（P〈0．05），具有统计学意义。结论抗CCP抗体可作为检验RA的特异性指标，联合检测可以明显提高RA诊断灵敏度．减少误漏诊发生．

兔抗人β_2糖蛋白Ⅰ多克隆抗体的制备与鉴定

目的制备兔抗人β2糖蛋白Ⅰ多克隆抗体,并鉴定抗体的特异性及功能活性。方法以纯化的人血浆β2糖蛋白Ⅰ(β2-GPI)免疫新西兰大白兔,获得抗血清;利用Protein A及β2-GPI亲和层析柱纯化血清中总IgG和抗β2-GPI多克隆抗体;用免疫双向扩散试验(IDD)、ELISA和western-blot等方法鉴定抗体。结果IDD及ELISA鉴定抗体效价分别达到16和1×105;western-blot显示纯化的总IgG和抗β2-GPI抗体与β2-GPI蛋白均有特异反应条带;且抗体与β2-GPI复合物能够刺激单核细胞株THP-1表达组织因子(TF)活性。结论成功获得并纯化兔抗人β2-GPI多克隆抗体,为进一步研究β2-GPI/抗β2-GPI复合物在抗磷脂抗体综合征血栓形成机制中的作用建立了基础。

类风湿关节炎六种指标联合检测的临床意义

目的评价分析抗瓜氨酸化波形蛋白(MCV)抗体、抗葡萄糖-6-磷酸异构酶(GPI)抗体等六项指标在类风湿关节炎(RA)患者血清中的表达与疾病的相关性及应用价值。方法收集110例RA、26例SLE、23例强直性脊柱炎(OA)、20例干燥综合征(SS)患者和50名健康人血清标本,用ELISA检测血清中抗MCV、抗GPI和抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体水平,采用间接免疫荧光法检测抗角蛋白(AKA)抗体,采用散射比浊法检测类风湿因子(RF)和hs-CRP水平。结果 4种抗体在RA患者组中的阳性率显著高于非RA疾病组和健康对照组。除AKA抗体阳性率较低(41.8%)外,其余抗体在RA组中的阳性率差异无统计学意义。结论抗MCV和抗GPI抗体诊断RA的敏感度最高;抗CCP抗体的特异性最高,AKA抗体具有较高的特异性,但敏感度最低,联合检测可弥补单项抗体检测造成的漏诊。

抗β_2糖蛋白Ⅰ型抗体与急性冠脉综合征相关性研究

目的:探讨抗β2糖蛋白I型抗体(抗β2 GPI抗体)与急性冠脉综合征(ACS)的临床相关性。方法:采用酶联免疫吸附法检测168例ACS患者血清中抗β2 GPI抗体的浓度水平,同时进行冠脉造影术检查,并对罪犯血管进行血管重建。根据抗体浓度水平分为高、中、低浓度组,分析各组中抗体浓度与ACS临床分型[急性ST段抬高型心肌梗死(STEMI)、急性非ST段抬高型心肌梗死(NSTEMI)、中危以上不稳定型心绞痛(UA)]的相关性,随访12个月,评价抗β2 GPI抗体浓度与ACS患者的疾病严重程度及主要不良心血管事件(MACEs)的相关性。结果:ACS中STEMI、NSTEMI、UA患者抗β2 GPI抗体浓度依次是(63.4±32.6)RU/ml,(39.8±25.9)RU/ml,(22.1±10.4)RU/ml,其中STEMI患者抗体浓度较高,UA患者的抗体浓度最低。抗β2GPI抗体的高浓度组中STEMI(10/11)占90.9%,高于中浓度组(29/96)和低浓度组(1/61)(P<0.01)。随访观察12个月,随访率98%;抗β2 GPI抗体高浓度组有4例发生MACEs,发生率36.4%,显著高于中浓度组(4.2%)和低浓度组(3.5%)。多因素回归分析提示抗β2GPI抗体高浓度是预测ACS发生MACEs的独立危险因素之一。结论:抗β2 GPI抗体浓度与ACS患者疾病的严重程度及MACEs密切相关,抗β2 GPI抗体高浓度是ACS再发MACEs的独立危险因素之一。

葡萄糖-6-磷酸异构酶与国产抗CCP抗体诊断类风湿关节炎的价值

目的探讨葡萄糖-6-磷酸异构酶、国产抗CCP抗体对类风湿关节炎(RA)的诊断价值,与德国欧蒙抗环瓜氨酸肽抗体(抗CCP抗体)之间的相关性以及在临床诊断上的意义。方法对165例RA患者血清和161例非RA患者血清和32例正常人血清用三种酶联免疫吸附试验(ELLSA)进行检测。结果165例RA患者葡萄糖-6-磷酸异构酶敏感度和特异度分别为71.5%和97.9%;国产抗CCP对RA的敏感度和特异度分别为72.1%和81.9%;与非RA对照组和正常对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);葡萄糖-6-磷酸异构酶与德国欧蒙抗CCP抗体和国产抗CCP抗体重叠阳性率分别为66.7%和77.8%。结论葡萄糖-6-磷酸异构酶与德国欧蒙抗CCP抗体、国产抗CCP抗体均能能用于RA的早期诊断,最好是多个指标综合判断。

利用技术变革教与学——访哈佛大学教育技术专家克里斯·德迪教授

目的探讨血清葡萄糖-6-磷酸异构酶（GPI）、抗环瓜氯酸肽抗体（anti—CCP）、抗突变型瓜氨酸波形蛋白抗体（anti—MCV）、类风湿因子（RF）对类风湿性关节炎（RA）的诊断价值。方法设置RA组、其他自免病组、健康对照组，检测单个指标在三组中的血清学水平；做单项检测RA的性能评价；以逐步Logistic回归结果的ROC曲线下面积（AUC）比较分析4个指标单独及联合检测的特异度；总结RA组4个指标的互补关系。结果（1）单项指标在三组受试对象水平差异有统计学意义（P〈O．05），RA组与其他自免组和健康对照组两两比较差异有统计学意义（P〈O．05）i（2）单个指标检测RA患者性能评价，总符合率为：GPI〉抗MCV〉抗CCP〉RF，但差异无统计学意义；（3）4项指标联合检测时用Logistic回归法模拟的AUC大于单独检测的AUC；（4）单一指标阴性时，其他3个指标均有一定的阳性率。结论GPI，抗CCP，抗MCV，RF是诊断RA的标志性指标，各指标对RA诊断价值比较还有待进一步验证，但联合检测可提高RA诊断的灵敏度和特异度，尤其是对临床症状不典型或RF阴性者，有利于RA的早期诊断和治疗。

Anti-β2GPI/β2GPI complexes induce platelet activation and promote thrombosis via p38MAPK: a pathway to targeted therapies

Anti-β2 glycoprotein I(anti-β2GPI)antibodies are important contributors to the development of thrombosis.Anti-β2GPI antibody complexes withβ2GPI are well known to activate monocytes and endothelial cells via the intracellular NF-kB pathway with prothrombotic implications.By contrast,the interaction of anti-β2GPI/β2GPI complexes with platelets has not been extensively studied.The p38 mitogen-activated protein kinase(MAPK)pathway has been recognized to be an important intracellular signaling pathway in the coagulation cascade and an integral component of arterial and venous thrombosis.The present study reveals that levels of anti-β2GPI/β2GPI complexes in sera are positively associated with p38MAPK phosphorylation of platelets in thrombotic patients.Furthermore,SB203580 inhibits anti-β2GPI/β2GPI complex-induced platelet activation.Thrombus formation decreased in p38MAPK−/−mice after treatment with anti-β2GPI/β2GPI complexes.In conclusion,p38MAPK may be a treatment target for anti-β2GPI antibody-associated thrombotic events.

抗心磷脂及β2糖蛋白Ⅰ抗体滴度值对妊高病母儿结局的影响

目的分析抗心磷脂抗体（ACA）及抗β2糖蛋白Ⅰ（β2-GPI）抗体的滴度值对妊高病患者妊娠结局的影响。方法选取冠县人民医院2013年9月至2015年9月收治的120例妊娠高血压患者作为观察组,按照病情轻重将60例轻度子痫前期患者作为观察组A,将60例重度子痫前期患者作为观察组B,另选择同时期收治的正常分娩产妇60例作为对照组,采用ELISA法对三组产妇的血清抗心磷脂抗体及抗β2-GP1抗体的滴度值进行检测,并对比三组患者的妊娠结局。结果观察组B较观察组A、对照组相比,ACA-Ig G、ACA-Ig M及抗β-GPI抗体水平升高,差异具有统计学意义（t=3.45~6.89,均P〈0.05）。观察组A与对照组相比,胎儿生长受限、早产、围生儿死亡、胎盘早剥、死胎发生率明显增加,差异具有统计学意义（χ2=4.45~7.12,均P〈0.05）。观察组B较观察组A、对照组相比胎儿生长受限、早产、围生儿死亡、胎盘早剥、死胎发生率明显增加,差异具有统计学意义（χ2=4.92~7.34,均P〈0.05）。ACA-Ig M与胎儿生长受限有显著相关性（r=0.42,P〈0.05）。ACA-Ig G及抗β-GPI抗体水平与早产发生率呈显著相关性,随着抗体水平的升高,早产发生率也相应增高（r值分别为0.54、0.68,均P〈0.05）。ACA-Ig G、ACA-Ig M及抗β-GPI抗体水平3者之间两两存在显著的相关性（r值分别为0.619、0.616、0.382,均P〈0.05）。结论血清抗心磷脂抗体及抗β2-GPI抗体可能均参加了子痫前期的发生发展过程,子痫前期患者不良妊娠结局率较高,早期检测ACA及β2-GPI抗体的滴度值具有好的应用价值。

联合多次检测ACA和抗β_2-GPI抗体对复发性流产的诊断价值

目的探讨联合多次检测抗心磷脂抗体(ACA)和抗β2-糖蛋白抗体(抗β2-GPI抗体)对自身免疫型复发性流产的临床诊断价值。方法2005年1月至2007年4月在上海交通大学医学院附属仁济医院妇产科就诊的417例有复发性流产史的患者作为研究病例。应用酶联免疫吸附(ELISA)法,对患者血清中的ACA及抗β2-GPI抗体进行检测。每隔3周1次,连续14次。结果患者抗磷脂抗体(APA)总阳性率达21.8%,其中ACA阳性率为18.7%、抗β2-GPI抗体阳性率为7.7%、ACA和抗β2-GPI抗体双阳性率为4.6%。自身抗体阳性检出率随检测次数的增加而逐渐增加:在确诊的91例APA阳性患者中,测定4次阳性率仅为68.13%;测定5次以上阳性率≥81.32%,与测定4次者比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论ACA和抗β2-GPI抗体联合、多次测定,可以提高自身免疫型复发性流产患者APA检测率,减少漏诊率。为了提高自身免疫型复发性流产的诊断率,建议临床上对APA的测定次数,应根据病情需要进行5次以上测定。

抗β2GPI抗体与β2GPI在血栓形成中作用的研究进展

自身抗体在血栓性疾病的发病中的作用受到广泛关注。β2GPI又称载脂蛋白H（ApoH），主要由肝脏合成。抗β2GPI抗体（anti—β2GPI）是以β2GPI为靶抗原的抗磷脂抗体，研究表明体内高滴度的anti—β2GPI在体内血栓形成过程中具有极其关键的作用。Anti-β2GPI与β2GPI结合后与细胞表面的磷脂、脂蛋白等多种带负电荷的蛋白作用可引起细胞活化，通过多种途径促使血栓形成。深入研究anti-β2GPI／β2GPI在血栓性疾病发病机制可为自身抗体引起的血栓性疾病的治疗提供新的治疗靶点。

抗Sa抗体、抗环瓜氨酸肽抗体、葡萄糖6-磷酸异构酶抗原和类风湿因子联合检测对类风湿关节炎的诊断意义

目的探讨抗sa抗体、抗环瓜氨酸肽（CCP）抗体、葡萄糖6一磷酸异构酶（GPI）抗原及类风湿因子（RF）联合检测对类风湿关节炎（RA）诊断的意义。方法采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测抗sa抗体、抗CCP抗体及RF亚型RF—IgA、RF—IgG、RF—IgM，免疫比浊法检测RF。结果抗sa抗体、抗CCP抗体、GPI抗原、RF对RA诊断的特异性和敏感性分别为95．69％和59．79％、98．28％和90．72％、76．14％和78．35％、67．24％和91．75％。RF—IgA、RF—IgG、RF—IgM对于RA诊断的特异性和敏感性分别为89．66％和58．76％、90．52％和68．04％、79．31％和79．38％。两项指标联合检测对RA诊断的特异性和敏感性为92．24％～100．00％和47．42％-86．60％；3项指标联合检测对RA诊断的特异性和敏感性为99．14％～100％和46．39％-71．13％；4项指标联合检测对RA诊断的特异性和敏感性为100．00％和46．39％。抗sa抗体阳性组患者C反应蛋白水平高于阴性组（P〈0．05）。结论两项及两项以上指标联合检测可以显著提高RA诊断的特异性，有利于RA的早期诊断及治疗。

血清抗环瓜氨酸肽抗体等对湿热痹阻及寒湿痹阻型类风湿关节炎的诊断意义

目的探讨血清抗环瓜氨酸肽抗体(抗-CCP)、类风湿因子(RF)、葡萄糖6磷酸异构酶(GPI)及抗角蛋白抗体(AKA)在湿热痹阻型与寒湿痹阻型类风湿关节炎(RA)中的诊断意义。方法收集305例RA患者临床数据,寒湿痹阻型146例,湿热痹阻型159例,纳入抗-CCP、RF、GPI分析样本276例,AKA分析样本253例。进行28个关节疾病活动度评分[DAS28(4)],检测AKA、RF、抗-CCP、GPI水平,分析抗-CCP、RF、GPI及AKA在湿热痹阻与寒湿痹阻型之间的差异以及与DAS28(4)的相关性。结果抗-CCP、RF、GPI及AKA水平在湿热痹阻与寒湿痹阻型RA间差异无统计学意义(P>0.05);两证型患者之间疾病活动度差异有统计学意义(P<0.01);抗-CCP、RF、GPI分别与关节压痛数、关节肿胀数、晨僵时间、DAS28(4)、C反应蛋白(CRP)等疾病活动性指标呈显著正相关(P<0.01)。结论抗-CCP、RF、GPI及AKA不能作为湿热痹阻及寒湿痹阻型RA的客观化分型依据,抗-CCP、RF、GPI与疾病活动有一定的相关性。