CMIA与ELISA法检测慢性HBV感染者HBeAg/抗HBe双阳性现象的血清学特征和方法学差异

目的研究分析慢性乙型肝炎(Chronic hepatitis B virus infection,CHB)患者检出HBeAg(+)/抗HBe(+)结果的血清学特征及其方法学差异。方法收集2019年1月~12月在西安交通大学第二附属医院感染科就诊并接受治疗、临床实验室化学发光免疫分析(CMIA)法检测乙肝病毒血清标记物结果且呈HBeAg/抗HBe双阳性的CHB病例363例。另收集酶联免疫吸附(ELISA)法检测结果呈HBeAg/抗HBe双阳性样本87例。分析HBeAg/抗HBe双阳性的CHB病例的HBV-M血清学特征和病毒学特征,并比较CMIA和ELISA法检测HBeAg/抗HBe双阳性结果之间的方法学差异。结果CMIA法检出的363例HBeAg/抗HBe双阳性样本中HBsAg阳性率98.62%,HBsAg 3~4log10 IU/ml和2~3log10 IU/ml分别占63.36%和20.11%,HBsAg<0.05 IU/ml占1.38%;抗HBs≥10mIU/ml 32例,占8.82%;HBeAg均值5.27 S/CO,1~9.99 S/CO和10~19.99 S/CO水平分别占87.88%和9.09%;抗HBe均值0.61 S/CO,≥0.10 S/CO 95.87%;HBV-DNA≥6 log10病例8.39%,HBV-DNA≥2log10病例53.28%,不同HBV-DNA水平下HBeAg和抗HBe水平存在显著性差异。87例ELISA法初检HBV-M呈HBeAg/抗HBe双阳性样本经CMIA法检测阳性率3.45%;49例CMIA法检测HBeAg/抗HBe双阳性样本的ELISA法检测阳性率4.08%。结论CHB患者HBeAg/抗HBe双阳性时HBV-M水平多样,HBV-DNA水平多样,不同方法学之间存在明显差异,ELISA法检测结果假阳性较多,建议采用CMIA法复检。

患者的ELISA一步法检测乙型肝炎抗-HBc、抗-HBe存在假阳性

为证实酶联免疫吸附试验（ELISA）一步法检测抗-HBc和抗-HBe之间的相互交叉反应，用国产试剂对166例临床标本及266例体检标本，采用一步法和两步法检测并与Abbott产品结果比较发现其相对特异性，抗-HBc依次为50％、67．7％和98．2％、97．5％。抗-HBe依次为89．3％、88．6％和98．8％、99．2％，一步法均明显低于两步法。将两法结果不符的再与Abbott产品结果比较，抗-HBc检测临床标本存在30％和体检标本存在16％的差异，抗-HBe也分别存在12．2％和11．9％的差异，这些差异主要是试剂特异性低引起的非特异性交叉反应。因此一步法检测抗-HBc和抗-HBe存在假阳性。

慢性乙型肝炎患者抗病毒治疗过程中出现HBeAg/抗-HBe双阳性的临床意义

目的:分析慢性乙型肝炎(CHB)患者抗病毒治疗时发生HBe Ag/抗-HBe双阳性的临床意义。方法:回顾性分析115例CHB患者抗病毒治疗过程中出现HBe Ag/抗-HBe双阳性的CHB患者,其中50例接受聚乙二醇干扰素(PEG-IFN-α-2a)治疗,65例接受恩替卡韦(ETV)治疗。观察HBe Ag/抗-HBe双阳性发生时患者的生物化学、病毒学、血清学指标情况,以及临床转归。结果:115例患者纳入分析。PEG-IFN-α-2a组50例完成治疗后,6例(12.0%)发生HBs Ag阴转,31例(62.0%)患者发生HBe Ag血清学转换;ETV组无患者发生HBs Ag阴转,23例(35.4%)患者发生HBe Ag血清学转换,PEG-IFN-α-2a组HBs Ag阴转率和HBe Ag血清学转换率均高于ETV组(χ2=8.229,P=0.004;χ2=8.038,P=0.005)。结论:干扰素治疗出现HBe Ag/抗-HBe双阳性的CHB患者,最终发生HBs Ag阴转率和HBe Ag血清学转换率均高于ETV。

原核和真核细胞表达HBeAg的应用研究

目的 :将原核细胞和真核细胞分别克隆表达生产的 HBe Ag,经适当纯化后进行检测分析 ,并在乙型肝炎抗HBe检测中进行应用和比较。 方法 :分别用大肠杆菌和家蚕细胞表达生产 HBe Ag,并用 Saphacryl S- 2 0 0柱层析进行纯化 ;紫外分光光度法测定表达产物的蛋白含量 ;EIA法测定 HBe Ag和 HBc Ag效价及评估 HBe Ag的应用效果。 结果 :原核细胞 HBe Ag:比活性为 10 0 0 0 / m g,HBe Ag/ HBc Ag=5 0 ,用于抗 HBe的检测时特异性为 96 % ,灵敏度符合国家卫生部 panel要求。真核细胞 HBe Ag:比活性为 16 0 0 0 0 / m g,HBe Ag / HBc Ag =5 0 0 0 ,用于抗 HBe的检测时特异性为 10 0 % ,灵敏度高于国家卫生部 panel要求的 1～ 2个滴度。 结论 :真核细胞表达的 HBe Ag比活性高而 HBc Ag含量低 ,在抗

乙肝疫苗对单项抗-HBc、抗-HBe及抗-HBc均阳性者抗-HBs产生的探讨

[目的]探讨接种乙肝疫苗对促进乙肝抗-HBc单项阳性及抗-HBe、抗HBc 2项同时阳性者产生抗-HBs的作用。[方法]对抗-HBc单项阳性及抗-HBe、抗HBc 2项同时阳性者,进行乙肝疫苗接种。接种全程结束后1个月,抽血作抗-HBs检查。[结果]接种乙肝疫苗后,抗-HBs总阳转率为92.59%,抗-HBc阳性者抗-HBs阳转率为94.74%,抗-HBe、抗-HBc 2项同时阳性者阳转率为87.5%。男性抗-HBs阳转率为93.33%,女性为91.67%。[结论]接种乙肝疫苗对抗-HBc单项阳性及抗-HBe、抗-HBc 2项同时阳性者,有促进抗-HBs产生的作用。

一种新的无传染性的检测HBeAg抗HBe的单克隆酶联免疫吸附法(MonoLISA)的建立与应用

应用我室自1988年5月以来建立的抗乙型肝炎e抗原两个抗原决定簇的单克隆抗体,和在大肠杆菌中高效表达的乙型肝炎病毒e抗原,组装成检测HBeAg/抗HBe的酶联免疫试剂(简称Mo-noLISA)。测定了该试剂的特异性、敏感性和可重复性,并与用日本单克隆抗体和血清e抗原组装的类似的EIA试剂进行了比较。结果两种试剂检测92份乙肝病人血清e抗原和38份血清e抗体的总符合率,分别为97.8％和100％。用两种试剂同时滴定一份已知HBeAg阳往和一份抗-HBe阳性的血清,证明两者的敏感性无显著差异。重复性试验证实,该试剂的重复率为100％。由此证明,用抗-HBeMcAb和基因工程抗原组装的诊断试剂,特异性强,敏感性高,可重复性好,且无传染性。这不仅为诊断试剂原材料的更新提供了丰富的来源,而且将该类试剂提高到一个新水平。

分泌抗-HBe和抗-HBc单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立和鉴定

应用具有 HBeAg 和 HBcAg 双抗原活性的基因工程菌表达产物的粗提物免疫 BALB/c小鼠后,取脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系 SP^2/0融合,分别筛选出4株抗 HBe 单克隆抗体杂交瘤细胞株(WHBe_1,WHBe_2,WHBe_3,WHBe_4)和4株抗 HBc 单克隆抗体杂交瘤细胞株( WH-Bc_1,WHBc_2,WHBC_3,WHBc_4)。经3个月连续培养,能稳定分泌效价高、特异性强的单克隆抗体。

HBeAg、抗-HBe、HBV DNA共存与PreC/C基因变异分析

目的分析HBeAg、抗—HBe、HBV DNA共存的产生原因、临床特点。方法 Abbott法检测HBV血清标志物,HBV DNA定量测定,PreC/C基因序列测定。结果本模式76％系HBV慢性感染,24％急性感染,均有活动性肝损害;HBV DNA定量中位数4.57 copies/ml,HBeAg(P/N)32.31±87.81,抗-HBe(P/N)0.55±0.26;PreC基因83,C基因14、104、158、203、233多位点基因变异,并产生2个终止码变异。结论检测灵敏度的提高、宿主免疫反应激活、病毒基因变异是产生本模式的原因。

ELISA法检测抗HBc和抗HBe的性能研究

目的：对 ELISA 竞争法检测抗 HBc 和抗 HBe 的性能进行科学评价。方法以 ELISA 法初检，以CMIA 法作为确证方法，评价 ELISA 法检测抗 HBc 和抗 HBe 的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、真阳性率、假阴性率等性能指标。结果 ELISA 法检测抗 HBc 和抗 HBe 的 Se 、Sp 、PV ＋、PV‐分别为0．76、0．88、0．99、0．22和0．77、0．73、0．86、0．58；抗 HBc（＋）／抗 HBe（＋）组抗 HBc 和抗 HBe 的真阳性率分别为1．00和0．99，抗 HBc （＋）／抗 HBe（－）组抗 HBc 真阳性率为0．98而抗 HBe 的真阴性率为0．59，抗 HBc（－）／抗 HBe（＋）组抗 HBc 的真阴性率为0．22而抗 HBe 的真阳性率分别为0．82。结论 ELISA 法检测抗 HBc 特异度良好、灵敏度不足， ELISA 检测阳性可认定为真阳性，主要问题是存在大量假阴性；ELISA 法检测抗 HBe 特异度和灵敏度均相对不佳，存在一定的假阴性和假阳性；在抗 HBc 阳性时，抗 HBe 阳性具有极好的准确性，抗 HBe 阴性约半数呈假阴性，在抗 HBc 阴性时，抗 HBe 阳性对 HBV 既往感染具有重要的提示价值，需采用第二种方法确证。

ELISA 法检测 HBV-M 结果呈抗 HBc（－）抗 HBe（＋）的科学评价

目的：对 ELISA 法检测 HBV-M 呈抗 HBc 阴性、抗 HBe 阳性结果的科学评价。方法ELISA 法初检 HBV-M 呈抗 HBc 阴性，抗 HBe 阳性样本105例，以 CMIA 法为参考方法复检确证抗 HBe 和抗 HBc 并评价其真阳性率和假阴性率；以其 S／CO 水平不同分组评价不同水平抗 HBe 和抗 HBc 检测结果的真实性。结果CMIA 法复检后产生3种不同结果，即抗 HBc 阳性／抗 HBe 阳性、抗 HBc 阴性／抗 HBe 阴性、抗 HBc 阳性／抗 HBe 阴性，分别占72.38％，21.91％和5.71％，抗 HBc 假阴性率和抗 HBe 真阳性率分别为78.10％和72.38％；在0.00～0.10，0.10～0.80和0.80～1.00不同 S／CO 水平内抗 HBe 真阳性率分别为42.86％，88.14％和56.25％，在1.00～1.20，1.20～2.00和2.00～3.00不同 S／CO 水平内抗 HBc 假阴性率分别为93.33％，96.15％和47.37％。结论ELISA 法检测 HBV-M 呈抗-HBc 阴性／抗 HBe 阳性结果对HBV 既往感染有重要的提示价值，但不能反映真实结果，存在三种可能，应进一步复检确证。

单项抗-HBe阳性的临床意义——5266例肝病血清标本分析

报告5266例肝病门诊病人(肝病组)血清标本抗-HBe检测结果,并与自然人群(对照组)健康普查血清标本作比较分析。肝病组单项抗-HBe的出现率女性显著高于男性(P<0.05);与对照组相比(组间差异),男性无显著意义,女性有显著意义(P<0.05)。抗-HBe与年龄的关系无线性趋势(P>0.05)。结果还显示单项抗-HBs、单项抗-HBc的出现率女性均高于男性,性别差异有显著性(P<0.05),而HBsAg阳性率男性非常显著地高于女性(P<0.01)。对单项抗-HBe阳性及其它标志阳性的意义进行了讨论。

慢性乙型肝炎出现从HBeAg至抗-HBe自发血清转换之后肝病活动性变化的探讨

目的 为了弄清慢性乙型肝炎出现从ＨＢｅＡｇ 至抗－ ＨＢｅ 自发血清转换之后，肝病的活动性是否减轻。方法 在除外重叠甲、丙、丁或戊型肝炎病毒重叠感染引起慢性乙型肝炎肝病急性发作的前提下，分别比较慢性乙型肝炎ＨＢｅＡｇ 阳性组和从ＨＢｅＡｇ 至抗－ ＨＢｅ 自发血清转换组出现肝病急性发作的严重性指标。结果 肝病急性发作的间隔时间、血清谷丙转氨酶和总胆红素水平、凝血酶原时间和死亡的发生率在慢性乙型肝炎ＨＢｅＡｇ 阳性组和从ＨＢｅＡｇ 至抗－ＨＢｅ 自发血清转换组两组之间比较没有统计学差异（ Ｐ＞ ０ ．５０ ～０ ．０５） 。结论 这些结果提示，慢性乙型肝炎出现从ＨＢｅＡｇ 至抗－ ＨＢｅ 自发血清转换之后。

单克隆多克隆抗体不同标记ELISA技术对HBeAg/抗-HBe检测评估

采用抗-HBe单克隆和多克隆抗体进行生物素或酶标记作酶免疫试剂检测HBeAg及抗-HBe,结果显示单克隆抗体(McAb)敏感性高于多克隆抗体(PcAb)。生物素试剂在检测HBeAg的稀释度为1:5000,比酶标法ELISA高1倍多,与RIA相当,且稳定性优于RIA。生物素标记抗体至少1年内保持效价不变,1年内批间变异系数为5.8％,相同标本重复检测变异系数为5.94％,是一种较理想的检测e系统的方法之一。另外,研究发现一孔一期法同时测HBeAg/抗-HBe时,无论标记抗体为单克隆或多克隆,其包被只能用单克隆抗体。

HBsAg阴性、抗-HBs/抗-HBe/抗-HBc阳性肝硬化病因特点

目的:了解乙型肝炎中高流行地区乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)阴性,乙型肝炎表面抗体/乙型肝炎e抗体/乙型肝炎核心抗体(hepatitis B surface antibody/hepatitis B e antibody/hepatitis B core antibody,anti-HBs/anti-HBe/anti-HBc)阳性肝硬化的病因特点.方法:采用回顾性病例对照研究的方法,以2001-01/2013-12新疆医科大学第一附属医院13年的肝硬化住院病例作为研究对象,根据乙型肝炎五项检测结果将HBsAg阴性,但抗-HBs、抗-HBe、抗-HBc中任意一项阳性的肝硬化作为研究组,将同时期临床确诊为隐源性肝硬化的住院病例作为对照组,比较两组一般情况、合并代谢综合征水平及肝细胞肝癌发生情况等.结果:7012例肝硬化住院病例中,符合HBsAg阴性、抗-HBs/抗-HBe/抗-HBc阳性肝硬化220例(占3.14%),符合隐源性肝硬化147例(占2.10%).两组患者,研究组年龄均数显著性低于对照组(P<0.05)、男性患者构成比显著性高于对照组(P<0.05)、汉族患者比例高(P<0.05),研究组具有更高的肝癌发生率(P<0.05),而合并糖尿病、高血压的发生率显著性低于隐源性肝硬化组(P<0.05).结论:HBsAg阴性、抗-HBs/抗-HBe/抗-HBc阳性肝硬化与隐源性肝硬化患者在性别、年龄、合并代谢综合征水平及肝细胞肝癌发生情况等方面均存在统计学差异,提示乙型肝炎标志物阳性组肝硬化患者的病因与隐源性肝硬化存在不同的致病因素,该项研究有助于指导临床医师对两组肝硬化患者的病因诊断.

慢性乙肝病毒B亚型感染儿童不同HBeAg状态下CP基因变异测定

目的了解HBV基因型B/adw2型的慢性HBV感染儿童不同血清HBeAg状态下HBVC区启动子基因的变异。方法选择HBV基因型为B型/血清型adw2的慢性HBV感染儿童64例,按血清HBeAg不同状态分为血清e抗体阳性组(n=34)和e抗原阳性组(n=30)2组,以HBVDNA为模板行PCR反应扩增S区序列(确定HBV基因型)及C区启动子(CP)基因片断,CP基因片断经胶回收纯化后,应用T-A克隆技术构建重组质粒pGEM-CP,经蓝白斑筛选,阳性克隆以凝胶电泳、双酶切及PCR验证后将鉴定正确的克隆测序,将测序结果与Entrezdata-base中血清亚型及基因型相同的HBV序列相比较并进行分析。结果S区基因测序结果证实64例儿童感染的HBV基因型均为B型/血清型adw2。CP基因测序结果证实2组均有CP基因变异,血清e抗体阳性组CP变异率(29.41%)高于e抗原阳性组(6.67%)(P<0.05)。e抗体阳性组有4个变异热点,而e抗原阳性组无变异热点。结论慢性乙肝病毒B亚型感染儿童存在CP基因变异,且可能与e抗原血清转换有关。

新型EIA乙型肝炎HBeAg/抗-HBe诊断试剂的研制

应用抗-HBeAg单克隆抗体和重组HBeAg制备的检测HBeAg和抗-HBe EIA试剂,其特异性、敏感性及精密性均达到国家要求的质控指标,接近或达到国际同类产品水平。经北京医科大学肝病研究所与日本特殊免疫研究所出品的EIA诊断-HBeAg/抗HBe试剂盒比较,其检测HBeAg的检出总符合率达到100％;检测抗-HBe的检出总符合率为97.78％。使用单克隆抗体和重组基因工程HBeAg组装的EIA检测HBeAg和抗-HBe诊断试剂,其特异性强、敏感性高、无传染性,是比较理想的诊断HBeAg和抗HBe的诊断试剂。

抗-HBe阳性慢性乙型肝炎患者中HBV—DNA检测与ALT的对比观察

目的 探讨慢性乙型肝炎患者抗-HBe阳性患者中,乙型肝炎病毒核酸（HBV-DNA）含量与肝功能指标丙氨酸氨基转移酶（ALT）的相互关系及意义.方法 采用ELISA方法检测乙型肝炎表面标志物抗-HBe的表达;实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）检测HBV-DNA含量;采用IFCC速率法检测ALT的水平.结果 抗-HBe阳性的患者中,HBV-DNA检测的阳性率为44.95%,ALT的阳性率31.65%,其中在HBV-DAN含量小于10^7 copy/ml的标本中,HBV-DNA定量检测与ALT呈正相关性（P〈0.05）.结论 临床上血清HBe阳性转为抗-HBe阳性后,并不说明HBV-DAN完全消除,若HBV-DNA持续阳性,并且HBV-DAN含量小于10^7 copy/ml,ALT持续增高时,肝功能损害会进一步加重,血清中HBV DNA含量与乙型肝炎免疫标志物以及肝细胞损伤三者之间存在密切的关系,在临床工作中应对血清HBV、ALT和HBV-DNA含量联合检测,这样才能更准确地判断患者病情、预后及指导抗病毒药物的应用.

反向乳凝试验和乳凝抑制试验检测HBeAg和抗－HBe

以聚苯乙烯胶乳为载体，制成乙型肝炎ｅ系统胶乳诊断试剂．以反向被动乳凝试验（ＲＰＬＡ）和乳凝抑制试验（ＬＡＩＴ）检测ＨＢｅＡｇ及抗－ＨＢｅ，并和ＥＬＩＳＡ法进行比较，结果发现受检５０份ＨＢｅＡｇ阳性血清及４１份抗－ＨＢｅ阳性标本的符合率为９６．０％和９１．１％，经统计学ｘ２检验无显著性差异．并且发现乳凝试验对乙型肝炎病毒表面和核心系统无交叉反应，对５份类风湿因子阳性血清和５０份健康人血清检测均为阴性，表明该法有良好的特异性（９８．１％）．此外本法与ＥＬＩＳＡ法相比，前者更具有操作简单，不需任何仪器设备，３～５ｍｉｎ出结果的特点，是检测乙型肝炎ｅ系统较为理想的方法之一，有推广应用价值．

抗-HBe抗体室内质量控制探讨

目的探讨使用低值质控品在乙肝抗-HBe抗体室内质控的意义,并通过使用日期-吸光度描点的质控图指导对抗-HBe抗体进行室内质控。方法对2006年3月抗-HBe抗体检测结果进行统计分析,绘制质控图,并对质控图进行分析。结果抗-HBe抗体的临界值与质控品的吸光度值统计有统计学差异,通过绘制质控图可以对质控品和操作过程进行质量控制。结论采用临界值-质控品吸光度值质控图更能直观的反应整个检测过程和检测结果的可靠性,且节省计算量。

抗—HBe阳性慢性乙肝临床研究

报告34例抗-HRe阳性慢性乙型肝炎(CHB),占同期住院抗-HBe阳性者的38％。这些患者于3—9年内肝炎再活动2—4次,累计80次。肝炎再活动时的临床表现及肝功损害与同期住院的HBeAg阳性CHB相似,但抗-HBe阳性CHB者肝硬化及肝癌发生比例显著高于HBeAg阳性者(P<0.05)。血清乙肝病毒标志(HBVM)检测发现,80次肝炎再活动中,38次(47.5％)有HBV活跃复制,提示HBV活跃复制是部分抗-HBe阳性CHB肝炎再活动的根本原因,另一部要考虑是其它肝炎病毒重叠感染的结果。