Effects of autoantibodies against AT1-receptor and angiotensin Ⅱ on refractory hypertension

Objective The study will explore effects of the autoantibodies against AT1 receptor and angiotensin Ⅱ on the refractory hypertension. Methods Seventy-seven patients (46 men and 31 women) with essential hypertension were divided into groups of refractory hypertension (RH) and hypertension (HT) according to the 1999 WHO-ISH Guidelines for the Management of Hypertension. Forty normotensives (22 men) were recruited as controls. The mean age was 54. 3±13 years old in RH group, 53. 5±9 years old in HT group and 51. 2±11. 9 years old in normotensives (NT) group. The mean blood pressure was 154. 2±9. 4/98. 4± 8. 2 mmHg in RH group and 130. 1±7. 6/80. 5±6. 7 mmHg in HT group after combination drug therapy of hypertension for 4 weeks. Blood pressure in NT group was 120. 8±11. 7/76. 4 ± 7. 2 mmHg. The epitope of the 2nd extracellular loops of AT1 receptor was synthesized and used as antigens to screen the autoantibodies by ELISA. Plasma angiotensin (Ang) II were examined by a radioimmunoassay. Results The autoantibodies against AT1 receptor were positive in 18 (46. 15 %) patients with RH, in 4 (10. 5 % ) hypertension and in 3 (7. 5 % ) normotensives, P < 0. 01. Ang Ⅱwas 57. 01±52. 63 pmol/L in patients with RH. Both the autoantibodies positive and the Ang Ⅱ increasing were 4 (10. 3 % ) cases, both normal were 7 (17. 9 % ) cases, the autoantibodies positive or Ang II increasing was all of 14 (35. 9 % ) cases (x2 = 0. 09, P>0. 05) . There was no relationship between the autoantibodies against AT1 receptor and the angiotensin Ⅱ in refractory hypertension. Conclusion The autoantibodies against AT1 receptor and Ang Ⅱ might be two independent factors in developing of refractory hypertension. The findings suggest that AT1 receptor an-tagnist used in the treatment of refractory hypertension might have an important value.

阿克他利对Ⅱ型胶原性关节炎小鼠的治疗作用及部分机制研究

目的 研究阿克他利 (Acta)对小鼠Ⅱ型胶原性关节炎 (CIA)的治疗作用。方法 采用Ⅱ型胶原 (CⅡ )乳剂皮内注射诱导的小鼠CIA模型。在此基础上 ,检测小鼠足肿胀、免疫功能的改变 ,以及对CⅡ的迟发性变态反应 (DTH)和血清中抗CⅡ抗体的测定 ,同时进行了病理组织学的检查。结果 Acta(10 ,30 ,90mg·kg-1)ig对CⅡ诱导的小鼠足肿胀有明显的抑制作用 ;体外研究发现 ,Acta(10 ,30 ,90mg·kg-1)能使CIA小鼠过高的ConA增殖反应和IL 2的产生恢复至接近正常 ,同时对CIA小鼠过高的IL 1产生有明显的抑制作用 ;Acta(10 ,30 ,90mg·kg-1)ig可以明显减轻CⅡ诱发迟发性变态反应 (DTH) ,但Acta对CIA小鼠体内的抗体的产生无显著影响。病理学检查表明 ,Acta(10 ,30 ,90mg·kg-1)ig可以减轻CIA小鼠的骨膜增生和软骨破坏。结论 Acta对CIA小鼠具有治疗作用 ,该作用可能是通过细胞免疫调节实现的。

类风湿性关节炎患者血清抗Ⅱ型胶原抗体的检测及意义

目的 探讨类风湿性关节炎 (RA)患者血清抗Ⅱ型胶原 (CⅡ )抗体阳性的意义。方法 分别以人Ⅱ型胶原蛋白(HCⅡ )及牛Ⅱ型胶原蛋白CⅡ (BCⅡ )作为包被抗原进行间接ELISA法 ,检测 30例RA患者 ,对照组 (30例非RA的风湿病患者和 34例健康人 )血清抗CⅡ抗体。结果 以HCⅡ及BCⅡ作为包被抗原检测RA患者血清抗CⅡ抗体的阳性率分别约为 30 .0 %和 33.3% ;对照组血清中抗体阳性率均约为 1.6 % ;二者差异极其显著 (P <0 .0 1)。抗CⅡ抗体阳性的RA患者RF的阳性率高于抗CⅡ抗体阴性的RA患者。与HCⅡ和BCⅡ均发生阳性反应的血清 8例 ,均为早期RA患者。结论 抗CⅡ抗体可作为判断RA患者病情的辅助手段之一 。

Ⅱ型胶原蛋白抗血清的制备和检测

目的:探讨Ⅱ型胶原蛋白(collagen protein typeⅡ,CⅡ)抗体产生规律,制备CⅡ抗血清。方法:采用纯化的鸡和猪CⅡ免疫新西兰白兔,每隔10 d收集血清,以改良间接ELISA法检测抗CⅡ抗体效价。结果:鸡CⅡ免疫新西兰白兔后,第10天抗体效价为1∶3 200,第20天升至1∶204 800;加强免疫后,第30天和第40天抗体效价分别达到1∶409 600和1∶819 200。猪CⅡ免疫新西兰白兔后,第10天血清中未能检测出抗体,第20天血清抗体效价为1∶3 200;加强免疫后,第30天和第40天抗体效价分别为1∶51 200和1∶102 400。结论:采用纯化的鸡和猪CⅡ免疫新西兰白兔后,经一定潜伏期血清中出现抗体,可以获得高效价抗CⅡ抗体血清。抗体产生情况符合机体初次及再次免疫应答的有关规律,但血清抗体产生的潜伏期和效价与不同种属来源的胶原蛋白有关。

Ⅱ型胶原抗原分子结构的保守性与自身抗体形成关系的研究

目的:为了解各种属动物Ⅱ型胶原分子结构的保守性和自身抗体形成的关系。方法:(1)从不同种属动物(包括人、猪、牛、鸡)中制备Ⅱ型胶原,用溴化氰把胶原分解成多个片段,以聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹法(Westernblot)鉴定和测定抗体的各项特性。(2)用鸡Ⅱ型胶原自皮下多点注射至大鼠尾部,建立了类风湿关节炎(RA)的动物模型,并通过口服Ⅱ型胶原以观察其对疾病的干扰情况。(3)用ELISA法分析RA病人血清中自身抗体。结果:112例RA病人血清对牛Ⅱ型胶原IgG和IgA抗体反应的阳性率分别为19.6%和12.5%,对人Ⅱ型胶原IgG和IgA反应的阳性率则各自为17.5%和13.8%。对不同种属动物Ⅱ型胶原抗体IgG和IgA反应的阳性率无明显差异。IgA型阳性率高于一般正常比率。溴化氰能把各种属Ⅱ型胶原消化成8～12个片段,每个片段有类似的分子量,有类似的位点特异抗体,CB10、CB11、D和C是主要的位点抗体。动物模型结果表明预先口服胶原大鼠组发生RA的阳性率明显低于模型组,二组的发病率分别是44.4%和83.3%,口服胶原组的病情严重程度明显低于模型组,口服胶原组和模型组的肢体累及率分别为13.8%和49.9%。结论:不同种属Ⅱ型胶原分子结构有很高的保守性,自身抗体的产生可能是饮食胶原刺激人体免疫器官或直接刺激肠道黏膜的免疫系统所致,病人的主要位点特异抗体是CB10、CB11。此外该研究还发现D和C也是主要特异位点抗体,特异位点抗体与RA疾病程度有关。

HIV抗体检测替代策略Ⅱ在云南省应用的可行性探讨

目的评价用艾滋病病毒（HIV）抗体检测替代策略Ⅱ检测HIV抗体的可靠性，探讨HIV抗体检测替代策略Ⅱ在云南省应用的可行性。方法对所有筛查阳性标本同时用替代策略Ⅱ及免疫印迹法（WB）检测，并对检测结果进行比较。结果915份初筛阳性的标本中，两种酶联免疫吸附试验（ELISA）检测结果阳性且S／CO≥6的有854份，明胶颗粒凝集试验（PA）检测结果均为阳性，WB确认为阳性，符合率为100％；两种ELISA法检测结果均阳性，但其中1种或2种S／CO在1．0～5．9之间的共有61份，经WB确认检测，其中32份为阳性，28份为不确一定，1份为阴性。结论两种ELISA试剂和第三种高特异性筛查试剂联合检测HIV抗体，可以替代90％以上的WB确认检测。当两种ELISA法检测结果S／CO〉6，且第三种高特异性筛查试剂检测结果为阳性时，与WB确认检测结果符合率是100％；当1种或2种ELISA法检测结果1〈S／CO〈6时，三种方法与WB确认检测结果符合率仅为52．5％。因此，在使用HIV抗体替代策略Ⅱ时，应同时考虑ELISA法的反应强度（S／CO值）和其他筛查方法的结果。在综合考虑了以上因素后，HIV抗体检测替代策略Ⅱ在云南省应用是可行的。

抗血管紧张素ⅡAT1受体抗体对大鼠脾脏T淋巴细胞的促增殖作用

目的观察抗AT1受体（AT1R）抗体对培养的大鼠脾脏T淋巴细胞增殖活性的影响。方法以人工合成的AT1R细胞外第二环肽段（AT1R—ECⅡ）为抗原主动免疫Wistar大鼠，利用亲和层析法提纯免疫大鼠血清中含有抗AT1R抗体的IgGs；培养大鼠脾淋巴细胞，刀豆蛋白A（ConA）诱导其活化和增殖，分别给予不同浓度的提纯IgGs（0．01、0．1、1umol／L）和血管紧张素Ⅱ进行干预，通过CCK-8法测定脾淋巴细胞增殖情况，并确定抗AT，R抗体的作用位点。结果ConA刺激48h后，大鼠脾淋巴细胞CCK-8吸光度显著高于空白对照组（0．38±0．05比0．27±0．02，P〈0．05）；不同浓度的IgGs剂量依赖性促进脾脏T淋巴细胞增殖（A值分别为0．53±0．03、0．71±0．04和0．94±0．05），与血管紧张素Ⅱ的作用相类似（A值为0．73±0．14、1．52±0．17和2．14±0．12）；AT1R特异性阻断剂Losartan和AT，R—ECⅡ均可显著减弱含抗AT1R抗体IgGs的促增殖效应（A值由0．71±0．04分别降为0．54±0．02，P〈0．01；0．52±0．04，P〈0．01）。结论抗AT1R抗体具有受体激动剂样效应，通过特异结合AT1R—ECⅡ剂量依赖性增强离体脾T淋巴细胞增殖活性。

鲤疱疹病毒Ⅱ型ORF4基因的克隆、表达与免疫学检测方法

根据鲤疱疹病毒II型(Cyprinid herpesvirus Ⅱ,Cy HV-2)ORF 4基因序列(Gen Bank:JQ815364.1)设计特异性引物,PCR扩增得到ORF 4基因编码框全长序列1 041 bp,将其克隆至原核表达载体p ET-32a(+)中,构建了重组原核表达载体p ET-32a-ORF 4。将p ET-32a-ORF 4重组载体转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导得到融合表达的重组蛋白,融合表达的重组蛋白主要以包涵体的形式存在,其分子质量约为57 ku,与预期大小一致。将纯化的重组蛋白免疫日本大耳兔,制备了多克隆抗体,ELISA检测抗体效价大于1∶50 000,Western blot检测显示该抗体可以特异性识别重组蛋白。间接免疫荧光检测结果表明:该多克隆抗体可与由Cy HV-2感染引起细胞病变的异育银鲫脑组织细胞(GICB)发生特异性的结合。

鹿瓜多肽注射液对CⅡ诱导的免疫性关节炎大鼠血清TNF-α、IL-6以及CⅡ抗体活性的影响

目的 :观察鹿瓜多肽注射液对类风湿性关节炎 (RA)的治疗作用 ,并探讨其作用机理。方法 :以Ⅱ型胶原 (CⅡ )诱导的免疫性关节炎 (CIA)大鼠为RA动物模型 ,通过测量其关节肿胀程度及制作病理切片并在光镜下计分 ,观察鹿瓜多肽注射液对其的治疗效果 ;采用ELISA法测定大鼠血清中TNF α、IL 6以及CⅡ抗体活性 ,以探讨其作用机理。结果 :与模型组比较 ,鹿瓜多肽组大鼠踝关节肿胀程度和病理损伤计分均明显减轻。鹿瓜多肽组血清TNF α、IL 6的活性明显降低。结论 :鹿瓜多肽注射液对CⅡ诱导的免疫性关节炎有治疗作用 ,其机理可能与抑制血清TNF α、IL 6的活性有关。

应用ELISA方法检测单纯疱疹病毒-Ⅱ型抗体的研究

目的了解广东省汕头市人群单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-Ⅱ)的感染状况。方法采用ELISA方法检测HSV-ⅡIgM和IgG抗体。结果性传播疾病(性病)患者的抗体阳性检出率:HSV-ⅡIgM为16.2%(88/544),HSV-ⅡIgG为62.9%(324/544);正常对照组的抗体阳性检出率:HSV-ⅡIgM为3.3%(2/60)、HSV-ⅡIgG为41.7%(25/60)。两组的阳性检出率,患者组明显高于对照组(P<0.01)。结论不同人群HSV的感染状况不同;正常人群中存在HSV-Ⅱ感染,HSV-Ⅱ是性病的重要病原体之一。

血清抗Ⅱ型胶原抗体与骨关节炎关系的研究

目的研究血清中抗Ⅱ型胶原抗体水平与骨关节炎的关系。方法研究对象包括56例膝骨关节炎患者及33名健康体检者,应用酶联免疫吸附实验方法检测血清中抗Ⅱ型胶原抗体水平。结果骨关节炎患者血清中抗Ⅱ型胶原抗体水平高于对照组,有显著性差异(P<0.05)。结论骨关节炎患者血清中抗Ⅱ型胶原抗体升高,可能与骨关节炎的免疫反应有关。

PSⅡ反应中心D1蛋白的小肽抗体的制备和鉴定

用人工合成的PSⅡ反应中心D1蛋白中 ( 2 2 9～ 2 4 0 )的 1 2肽 ,与牛血清白蛋白偶联后做为抗原免疫家兔 ,获得抗菠菜D1蛋白抗体 .免疫双扩散法测得其具较高的效价 ,蛋白印迹检测结果显示该抗体仅与D1蛋白有免疫亲和反应 .

血清抗Ⅱ型胶原蛋白抗体检测法的建立与应用

目的建立血清抗Ⅱ型胶原蛋白抗体的ELISA法,探讨其在类风湿关节炎(RA)患者中的应用价值。方法以自提可溶性鸡Ⅱ型胶原蛋白(soluble chicken collagen type Ⅱ,SCCⅡ)作为包被抗原,优化实验条件,建立抗Ⅱ型胶原蛋白抗体间接ELISA法。对124例RA病人和54例健康人血清抗Ⅱ型胶原蛋白抗体进行检测。结果血清抗Ⅱ型胶原蛋白抗体的检测条件为:SCCⅡ包被浓度为20μg/ml;以含10%羊血清的缓冲液进行封闭、稀释血清和酶标抗体;采用双波长(450nm/630nm)进行测定。RA患者和健康人血清抗Ⅱ型胶原蛋白抗体阳性率分别为19.35%(24/124)和1.85%(1/54),两组有明显的统计学差异(P<0.01)。结论以SCCⅡ为包被抗原检测抗Ⅱ型胶原蛋白抗体可作为判断RA患者病情的一个辅助诊断指标。

Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒VP4、VP35蛋白多克隆抗体制备及其免疫原性分析

为建立针对Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒(GCRV)的血清学检测方法,分别构建了GCRV JX02株外衣壳蛋白VP4、VP35的原核重组表达质粒PGEX-4T-3-S6、PGEX-4T-3-S11,用纯化的重组蛋白r VP4、r VP35分别免疫小鼠制得相应的多克隆抗体,用间接ELISA方法测定2种抗体的效价,用Western Blot鉴定抗体的特异性。SDS-PAGE分析细菌表达的r VP4、r VP35大小分别约为98ku和61ku,且都主要以包涵体的形式存在;间接ELISA方法测定制备的抗体效价分别约为1:4×105和1:106;Western Blot结果显示,制备的2种多克隆抗体都既能够识别原核表达的重组蛋白,又能够识别JX02毒株上的对应蛋白,并且发现感染JX02的草鱼血清中存在结合VP4、VP35的相应抗体。本研究制备的2种多克隆抗体都具有良好的生物学特性,并且这2种重组蛋白作为相应抗体捕获原可以用于通过检测抗病毒抗体来确诊草鱼是否感染Ⅱ型GCRV。本研究将为GCRV主要流行株血清学检测方法的建立以及VP4、VP35蛋白相关功能研究奠定基础。

不同年龄大鼠血清胰岛素样生长因子Ⅱ水平的变化

目的研究不同年龄Wistar大鼠血清胰岛素样生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)、胰岛素(INS)和胰岛素抗体水平的变化。方法采用放射免疫分析法分别测定35只3月龄、12、18和24月龄Wistar大鼠血清IGF-ⅡI、NS和胰岛素抗体水平的变化。结果餐后血清IGF-Ⅱ在3月龄大鼠明显高于12、18和24月龄大鼠(P<0.05,P<0.01,P<0.05)。餐后的INS水平在12、18和24月龄均较3月龄大鼠明显升高(P<0.01)。4组大鼠餐后的胰岛素抗体水平均<5%,为阴性。结论餐后IGF-Ⅱ水平随年龄增长而降低,但在中年以后(12月龄大鼠)则处于稳定水平;餐后的INS水平随年龄增长而升高,中年以后INS也处于稳定水平。

血管紧张素Ⅱ2型受体自身抗体与血压水平及肾功能的关系

目的探讨血管紧张素Ⅱ2型受体自身抗体(抗 AT_2R)与血压水平及肾功能的关系。方法采用横断面研究方法,从门诊及体检人群中随机调查138例病人作为研究对象。根据血压水平按 JNC-7标准将其分为3组:正常血压组(≤120/80 mmHg,31例)、高血压前期组(120～139/80～89 mmHg,39例)、高血压组(≥140/90mmHg,68例)。通过问卷调查及体检获取一般资料,用酶联免疫吸附技术(ELISA)检测外周抗 AT_2R水平,放射免疫法检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)及内皮素1(ET-1)水平,并检测血脂、血糖、肾功能等。结果①3组人群外周血抗 AT_2R 水平有明显差异(P<0.01),且随血压水平升高而降低;抗 AT_2R 水平与收缩压、舒张压、平均动脉压呈负相关(r=-0.900,P<0.01;r=-0.766,P<0.01;r=-0.666,P<0.01);②3组人群血尿酸、血肌酐水平有显著差别(P<0.05),抗 AT_2R 与其均呈负相关(r=-0.295,P<0.01;r=-0.361,P<0.05);③TNF-α、ET-1水平在3组间有差异显著(P<0.01),抗 AT_2R 与其均呈负相关(r=-0.791,P<0.01;r=-0.795,P<0.01)。④多元线性回归分析显示,年龄、TNF-α、ET-1及抗 AT_2R 是平均动脉压的独立影响因素(P 均<0.05);TNF-α、ET-1及抗AT_2R 是收缩压的独立影响因素(P 均<0.05);年龄、TNF-α、ET-1及抗 AT_2R 是舒张压的独立影响因素。结论抗 AT_2R 与血压水平呈明显负相关,并与外周血 TNF-α、ET-1水平变化有关;提示抗 AT_2R 可能在高血压及其相关肾功能损害过程中起一定作用。

妊娠期Ⅱ型固有淋巴细胞相关分子与抗磷脂抗体表达及对妊娠结局的影响

目的研究妊娠期Ⅱ型固有淋巴细胞相关分子与抗磷脂抗体(anti-phospholipid antibody,ACA)表达及对妊娠结局的影响。方法收集2014年1月至2017年12月河北省人民医院就诊的产妇作为研究对象,采用酶联免疫吸附法对全部入组产妇测定血清抗心磷脂抗体IgA/G/M和抗β2糖蛋白I抗体IgA/G/M,将血清抗心磷脂抗体IgA/G/M阳性产妇作为对照组,将血清抗心磷脂抗体IgA/G/M和抗β2糖蛋白I抗体IgA/G/M同时阳性作为研究组。检测产妇血清Ⅱ型固有淋巴细胞相关分子相对表达量,统计妊娠结局,分析妊娠期Ⅱ型固有淋巴细胞相关分子与抗磷脂抗体表达与不良妊娠结局的相关性。结果研究组产妇Ⅱ型固有淋巴细胞相关分子IL-33 mRNA、ST2 mRNA、GATA3 mRNA相对表达量均低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。研究组产妇总不良妊娠结局发生率显著高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。IL-33与习惯性流产正相关,与早产、死胎、胎盘早剥无关;ST2与习惯性流产、死胎呈正相关,与早产、胎盘早剥无关;GATA3与习惯性流产、早产、死胎、胎盘早剥均呈正相关;ACA-IgA、ACA-IgG、ACA-IgM与习惯性流产、早产、胎盘早剥均呈现为正相关;β2-GP1-IgA、β2-GP1-IgG、β2-GP1-IgM抗体与习惯性流产、早产、死胎、胎盘早剥均呈现为正相关。结论妊娠期Ⅱ型固有淋巴细胞相关分子与抗磷脂抗体表达与妊娠不良结局具有一定的相关性,早期检测IL-33、ST2、GATA3、ACA-IgA/G/M、β2-GP1-IgA/G/M可对妊娠不良结局进行预防和控制。

血管紧张素Ⅱ1型受体胞外第二环肽抗体对大鼠血管平滑肌细胞质游离钙水平的影响

目的观察血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1受体)细胞外第二环肽抗体对培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)细胞质游离钙水平的影响。方法采用酶联免疫吸附测定法检测高血压患者血清中抗AT1受体抗体,亲和层析法提取阳性血清中的AT1受体细胞外第二环肽抗体。同时应用AT1受体胞外第二环肽主动免疫大鼠并提取抗体。将血管紧张素Ⅱ(AngⅡ),患者及大鼠的AT1受体胞外二环肽抗体分别刺激钙离子荧光探针Fluo-3/AM负载培养原代大鼠VSMC,观察荧光强度变化来检测细胞质游离钙水平变化。结果患者及大鼠血清中提取的AT1受体第二环肽抗体均刺激培养VSMC使细胞质游离钙水平升高,作用与AngⅡ类似。进一步实验发现抗体的激动效应能够被AT1受体胞外第二环肽的抗原表位序列及AT1受体拮抗剂氯沙坦阻断。结论针对AT1受体胞外第二环肽抗体具备激动效应,通过激动AT1受体刺激细胞质钙离子浓度增高,提示该抗体在高血压发病机制中起重要作用。

血管紧张素Ⅱ-1型受体抗体的制备及其生物效应检测

目的 利用主动免疫方法 在大鼠血清中制备AT1受体的抗体并检测其对心血管系统的生物效应,以探讨血管紧张素Ⅱ-1型（AT1）受体的抗体与心血管疾病的关系.方法 按照人AT1受体细胞外第二环表位肽段合成抗原肽段,以此对大鼠进行主动免疫,获取抗AT1受体抗体,并提纯抗体IgG,检测该抗体对大鼠血管环和离体心脏的生物效应.结果 ELISA检测表明,抗体滴度从免疫后第2周开始升高,第8周滴度达到一个高峰;PAGE凝胶电泳检测显示纯化结果 理想.AT1受体抗体可剂量依赖性地使大鼠主动脉血管环收缩增加,使离体灌流心脏的收缩和舒张功能增强.上述效应与血管紧张素Ⅱ的作用一致,并可被AT1受体阻断剂Losartan所阻断.结论 用主动免疫法可在大鼠血清中获取足量AT1受体抗体,借以研究其生物效应.AT1受体抗体对大鼠主动脉血管环和离体心脏均有激动剂样的刺激效应,提示该抗体可能与心血管疾病的发病有关.

猪圆环病毒Ⅱ型血清抗体ELISA检测方法的建立

为了检测猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)抗体,本试验建立了快速、敏感的ELISA诊断方法.通过比较差速离心、蔗糖不连续梯度离心、氯化铯等密度梯度离心和氯仿抽提结合超速离心等4种方法纯化PCV2抗原的包被效果,来确定最佳的PCV2包被抗原纯化方法,在此基础上,通过全病毒抗原最适包被浓度和二抗HRP-SPA稀释倍数的确定、待测血清稀释倍数的确定、封闭液浓度的确定、封闭时间的确定、HRP-SPA反应时间的确定、临界值的确定、特异性测定、重复性测定、符合率比较等,进一步优化检测PCV2抗体的间接ELISA方法.结果表明:对猪的多种病毒阳性血清进行ELISA检测,只有PCV2阳性血清呈阳性;对6份血清进行4次重复试验,方差分析显示P>0.05,差异不显著;与PCV2-ELISA试剂盒(INGEZIM公司生产)的符合率比较,其总符合率达88.89%.可见,优化建立的检测PCV2抗体的间接ELISA方法特异性强、重复性高、稳定性好,可用于PCV2血清学诊断和血清学普查.