过敏性紫癜患儿急性期血清白介素-33与抗内皮细胞抗体-IgA、抗心磷脂抗体-IgA相关性分析

目的探讨不同临床类型过敏性紫癜(HSP)患儿急性期血清白介素-33(IL-33)、抗内皮细胞抗体IgA(AECAIgA)、抗心磷脂抗体IgA(ACA-IgA)水平变化及其临床意义。方法选取2012年11月—2013年1月住院的HSP急性期患儿37例,健康儿童20例作为研究对象;采用双抗体夹心ELISA法测定血清IL-33水平,双抗原夹心ELISA法测定血清AECA-IgA、ACA-IgA水平并进行比较。结果 HSP患儿急性期血清IL-33、AECA-IgA、ACA-IgA的水平较健康儿童明显升高,差异均有统计学意义(P均<0.001);混合型HSP患儿[除累及关节外,合并胃肠症状和(或)肾脏受损]血清IL-33、AECA-IgA、ACA-IgA水平与关节型、腹型和肾型相比较,差异均有统计学意义(P均<0.05);急性期HSP患儿血清IL-33与AECA-IgA、ACA-IgA水平呈正相关(r=0.752、0.788,P均<0.001)。结论 IL-33、AECA-IgA、ACA-IgA相互作用所致血管免疫病理损伤,可能是HSP发病的重要因素,可为HSP的早期诊断和治疗提供线索。

IL-33蛋白及抗IL-33全人源单链抗体的表达、纯化及鉴定

目的表达IL-33蛋白及抗IL-33全人源天然单链抗体并进行纯化及鉴定。方法前期采用噬菌体展示技术从文库容量为108的全人源天然抗体文库筛选了抗IL-33全人源单链抗体,并将筛选的抗IL-33基因转入表达载体p LY16中。在前期工作的基础上,进行了以下研究:表达并纯化人IL-33蛋白,将构建的IL-33/PET102/D-TOPO质粒转化到大肠杆菌BL21中,表达后用Ni-NTA树脂纯化、浓缩再进行SDS-PGE电泳和Western blot验证。将抗IL-33 sc Fv/p LY16重组质粒转化入大肠杆菌DH5αF’中,应用PCR技术挑选阳性克隆并进行验证,IPTG诱导可溶性表达,Ni-NTA树脂纯化,SDS-PGE电泳和Western blot验证。结果 IL-33/PET102/D-TOPO质粒测序结果显示,插入的外源基因为人全长IL-33 c DNA。表达的IL-33融合蛋白相对分子质量为45 000左右。Western blot结果显示表达的蛋白为人IL-33蛋白。对从天然抗体文库中筛选的抗IL-33单链抗体进行测序,结果显示序列大小为750 bp左右,为开放阅读框,各序列之间有个别氨基酸的差异,说明为不同的单链抗体。ELISA结果显示抗IL-33单链抗体与IL-33有一定的结合能力。Western blot结果证实,表达的抗体为抗IL-33抗体。结论成功表达并纯化了IL-33抗原、抗IL-33全人源天然单链抗体。

类风湿关节炎患者血清白细胞介素-33水平与疾病进程的相关性

目的通过检测类风湿关节炎(RA)患者血清中白细胞介素(IL)-33水平,分析血清IL-33水平与RA的临床及实验室指标之间的相关性,验证IL-33参与RA的发病过程,探讨IL-33对于RA的临床意义。方法采用ELISA方法测定70例RA患者和30例健康对照者血清IL-33水平。结果 RA组血清IL-33水平为(231±335)pg/ml,高于健康对照组(6±23)pg/ml,P<0.01。高疾病活动度组血清IL-33水平为(351±391)pg/ml,高于中低疾病活动度组(145±266)pg/ml,P<0.05。RA患者血清IL-33水平与类风湿因子(RF)及抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体呈正相关(P<0.01)。结论 IL-33参与了RA的发病过程,IL-33的升高可能提示RA预后不良。

兔抗小鼠睾丸表达蛋白33(Tex33)多克隆抗体的制备与应用

目的制备兔抗小鼠睾丸表达蛋白33(Tex33)的多克隆抗体并检测Tex33在小鼠精子发生过程中的表达情况。方法以成年小鼠睾丸组织c DNA为模板,PCR扩增Tex33基因可读框序列,最终将PCR产物插入p ET-30a载体,构建p ET-30a-Tex33原核表达质粒。将原核表达质粒转化入大肠杆菌E. coli BL21中,异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达Tex33蛋白。利用Ni-NTA亲和层析柱纯化蛋白,免疫成年雄性新西兰大白兔,获得Tex33多克隆抗体。ELISA测定多克隆抗体效价,Western blot法及免疫荧光组织化学染色分析多克隆抗体效价及特异性。结果成功构建了p ET-30a-Tex33重组质粒,IPTG诱导下表达出Tex33重组蛋白。ELISA检测多克隆抗体滴度为1∶1 000 000,Western blot法分析显示多克隆抗体能识别小鼠睾丸组织中的Tex33蛋白,免疫荧光组织化学染色显示Tex33在成年小鼠睾丸组织的精子细胞及精子均有表达,且定位于精子顶体及尾部。结论成功制备出高特异性的兔抗小鼠Tex33多克隆抗体并发现Tex33在小鼠睾丸中表达。

调控IL-33的药物研究进展

IL-33是细胞因子IL-1家族新成员。组织损伤或坏死后,IL-33表达增加并被释放到细胞外,作用于表达ST2受体的各种免疫细胞“敲响警钟”,发挥免疫调节作用。IL-33与过敏性疾病、自身免疫性疾病、感染性疾病和肿瘤等炎症相关性疾病的发生发展密切相关,并在维持组织稳态、炎症消除及组织损伤修复中发挥重要作用,是潜在的治疗靶点。本文将重点介绍IL-33中和抗体及对IL-33具有调控作用的药物研究进展,并对药物按照作用机制进行归类,以期为进一步研发针对IL-33的新型药物提供方向。

ST2抗体治疗对Kras^(G12D)非小细胞肺癌小鼠肿瘤标志物的水平和IL-33、ST2表达的影响

目的:探讨ST2抗体治疗对Kras^(G12D)小鼠非小细胞肺癌中肿瘤标志物神经烯醇化酶(NSE)、癌胚抗原(CEA)水平和IL-33、ST2表达的影响。方法:以野生型(WT)非小细胞肺癌小鼠为对照组,Kras^(G12D)非小细胞肺癌小鼠为试验组,用ELISA法于第6周、12周、18周检测小鼠血清中NSE和CEA的水平;流式细胞术检测小鼠肺肿瘤组织中的调节性T细胞(Tregs)以及表达ST2抗体的Tregs细胞的比例;RT-qPCR检测小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)和肺组织中IL-33的表达水平。结果:随着周龄增长,Kras^(G12D)小鼠血清中NSE和CEA的水平不断提高,肺肿瘤中Tregs高度表达ST2抗体(P<0.05);ST2抗体治疗可清除Kras^(G12D)小鼠肺癌中活化的Tregs,增强抗肿瘤免疫反应,降低血清NSE、CEA水平(P<0.05)。结论:Tregs中ST2抗体的表达可上调Kras^(G12D)小鼠血清中NSE、CEA的水平,并且ST2抗体治疗可通过清除肺组织中活化的Tregs,减轻肿瘤负担,降低血清中NSE和CEA的水平。

抗CCP抗体和抗MCV抗体等多种检测对类风湿性关节炎的诊断价值

目的探讨抗环瓜氨酸多肽(CCP)抗体、抗类风湿性关节炎蛋白33(RA33)抗体、抗葡萄糖6磷酸异构酶(GPI)抗体、抗突变型瓜氨酸波形蛋白(MCV)抗体、类风湿因子(RF)及其亚型、红细胞沉降率(ESR)对类风湿性关节炎(RA)的临床诊断价值。方法选取经临床确诊的RA患者165例、非RA结缔组织病患者120例、体检健康者80名,分别检测其血清抗CCP抗体、抗RA33抗体、抗GPI抗体、抗MCV抗体、RF-IgA、RF-IgG、RF-IgM、RF及ESR水平,并对结果进行统计分析。结果诊断RA的敏感性分别为抗CCP抗体85.4%、抗RA33抗体11.0%、抗GPI抗体67.2%、抗MCV抗体84.0%、RF-IgA 82.4%、RF-IgG 17.0%、RF-IgM83.6%、RF 87.8%、ESR 81.8%,特异性分别为抗CCP抗体95.0%、抗RA33抗体98.3%、抗GPI抗体83.3%、抗MCV抗体90.0%、RF-IgA 91.6%、RF-IgG 95.8%、RF-IgM 70.8%、RF 83.3%、ESR 70.8%。抗CCP抗体和抗MCV抗体联合检测的敏感性和特异性分别为98.8%和96.7%。结论抗CCP抗体和抗MCV抗体是对RA有较高诊断价值的血清学标志物,与抗RA33抗体、抗GPI抗体、RF-IgA、RF-IgG、RF-IgM、RF及ESR的检测结果相结合,可提高对RA的诊断率,有助于RA的临床诊断。

人乳头瘤病毒HPV33型E6E7蛋白的表达及多克隆抗体的制备

目的表达人乳头瘤HPV33型病毒癌蛋白E6E7，并免疫小鼠制备抗体。方法从HPV33型基因组中扩增出E6E7的基因片段，通过基因测序加以证实；将其克隆至原核表达载体pET28a中，在大肠埃希菌中经IPTG诱导表达，经HIS亲核层析对重组蛋白进行纯化，收集重组蛋向免疫的小鼠阳性血清，经ProteinA／G亲核层析柱纯化得到多克隆抗体，同时将E6E7克隆至真核表达载体pCDNA3．1／HisC中，转染293细胞，分别采用免疫荧光法和Western Blot检测抗体的特异性．、结果用得到高纯度的重组蛋白E6、E7制备的多克隆抗体，具有良好的特异性。结论这种高纯度重组E6、E7蛋白和抗体有望用于HPV33型人乳头瘤疾病的临床检测及发生机制的研究。

骨瓜提取物注射液联合洛索洛芬治疗类风湿性关节炎的临床研究

目的探讨骨瓜提取物注射液联合洛索洛芬钠片治疗类风湿性关节炎的临床疗效。方法选取2020年7月—2022年10月北京中医医院怀柔医院收治的85例类风湿性关节炎患者,按计算机随机排列将所有患者分为对照组(42例)和治疗组(43例)。对照组患者口服洛索洛芬钠片,60 mg/次,3次/d。治疗组在对照组治疗的基础上静脉滴注骨瓜提取物注射液,50 mg加入250 mL 5%葡萄糖注射液中充分稀释,1次/d。两组患者连续治疗30 d。观察两组的临床疗效,比较两组的晨僵时间、关节压痛数、关节肿胀数、视觉模拟评分法(VAS)评分以及血清类风湿因子(RF)、抗环瓜氨酸肽抗体(抗CCP抗体)、抗突变型瓜氨酸波形蛋白抗体(抗MCV抗体)、中高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、白细胞介素-33(IL-33)水平。结果治疗后,治疗组患者的总有效率88.37%明显高于对照组的总有效率69.05%(P<0.05)。治疗后,两组的晨僵时间、关节压痛数、关节肿胀数、VAS评分明显低于治疗前(P<0.05),且治疗组晨僵时间、关节压痛数、关节肿胀数、VAS评分较对照组更低,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组的RF、抗CCP抗体、抗MCV抗体水平均显著降低(P<0.05),治疗组RF、抗CCP抗体、抗MCV抗体水平均较对照组降低更明显,差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组的血清HMGB1、MMP-2、IL-33水平低于治疗前(P<0.05),且治疗组的血清HMGB1、MMP-2、IL-33水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论骨瓜提取物注射液联合洛索洛芬钠片治疗类风湿性关节炎疗效好,能显著减轻患者症状体征,控制病情发展,减轻炎症反应,治疗安全性良好。