无偿献血者梅毒螺旋体抗体反应性确证结果研究

目的 评估开展梅毒反应性献血者确证工作的可行性。方法 采用梅毒螺旋体颗粒凝集试验(TPPA)及免疫印迹法(WB)对ELISA检测抗-TP反应性献血者标本进行确证试验,对2种确证结果为阴性、可疑或结果不一致者行追踪检测并进行结果对比;同时以2种确证方法结果为标准,采用受试者工作特征曲线(ROC曲线)评估对比A、B、C 3种筛查试剂及其组合的分析指标值。结果 1)223份ELISA抗-TP反应性标本(其中双ELISA试剂反应性124份,单ELISA试剂反应性99份)经TPPA确证阳性率为57.40%、WB确证阳性率38.57%(其中双ELISA试剂反应性标本经TPPA确证阳性率为89.52%、WB确证阳性率为52.42%,单ELISA试剂反应性标本经TPPA确证阳性率为17.17%,WB确证阳性率为21.21%);TPPA确证阴性率为35.43%,WB确证阴性率为42.60%(其中双ELISA试剂反应性标本TPPA确证阴性率6.45%、WB确证阴性率29.84%,单ELISA试剂反应性标本TPPA确证阴性率71.72%、WB确证阴性率58.59%)。经Kappa检验,2种方法确证结果一致性不高,特别是单ELISA试剂反应性标本;2)献血者追踪成功36名,其中17名(47.22%)确证检测结果有转变,但转变无规律;3)以TPPA、WB确证结果为标准对双ELISA试剂反应性标本抗-TP筛查S/CO值进行ROC曲线分析,ELISA筛查试剂A/B、A/C组合时,A试剂最佳S/CO值分别为1.815、5.73和10.205、16.165。结论 TPPA和WB对ELISA抗-TP反应性献血者标本确证结果一致性较差,追踪确证结果转归也不明确;ROC曲线最佳S/CO阈值分析受确证方法、筛查试剂组合影响,ELISA抗-TP反应性献血者的结果确证存在一定困难。

一种全自动血型仪应用于TPPA试验的适用性研究

目的 探讨使用Beckman PK7300全自动血型分析仪对献血者抗-TP反应性标本进行TPPA试验的适用性。方法 1)Beckman PK7300全自动血型仪TPPA试验(简称仪器法)建立及性能验证:与手工法比较,计算总符合率、阳性符合率和阴性符合率;评估本方法的重复性。2)评估仪器法适用性:连续6 d对555份抗-TP反应性标本使用仪器法进行TPPA试验,分析可判读率、凝集强度分布及其他控制方式等。结果 1)仪器法和手工法检测TPPA的总符合率、阳性符合率和阴性符合率均为100%(kappa值=1),手工法判读为“++”的标本对应仪器法SPC值均≤3、手工法判读为“-”的标本对应仪器法SPC值均≥20。2种方法符合性佳。仪器法对同1份标本重复12次,正确率均为100%(12/12),仪器法的重复性佳。2) 555份抗-TP反应性标本进行TPPA试验总体可判读率为99.82%(554/555);TPPA阴性和阳性结果对应的致敏颗粒及未致敏颗粒的凝集相与非凝集相SPC值分布于判定值两侧、无交叉;仪器法采用自动化方式对试验前、中、后均有控制及监测。结论 Beckman PK7300全自动血型仪进行TPPA试验适用于血站实验室对抗TP反应性标本的确证实验,实现TPPA试验自动化和标准化。

青岛地区无偿献血人群梅毒抗体检测结果分析

目的分析青岛地区无偿献血人群梅毒抗体检测结果,为减少抗-TP反应性造成的血液报废、招募低风险无偿献血者、加强用血安全提供参考基础。方法选择青岛地区2017年1月—2022年12月767604例无偿献血者标本,采用2种不同生产厂家酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)试剂进行初、复检检测,对各类献血人群梅毒螺旋体抗体(treponema pallidum,TP-Ab)反应性情况进行统计分析。结果共检测767604例,检出反应性1279例,反应率为0.17%。各年度间抗-TP反应率比较,2018年反应率有所偏高,其余5年呈下降趋势,差异有统计学意义(χ^(2)=109.24,P<0.05)。双试剂反应性高于单试剂反应性,双试剂反应率与总反应率比较,差异有统计学意义(χ^(2)=101.97,P<0.05);双试剂反应率与单试剂反应率比较,差异有统计学意义(χ^(2)=98.62,P<0.05)。不同性别反应率比较,女性高于男性,差异有统计学意义(χ^(2)=27.19,P<0.05)。不同民族比较,少数民族高于汉族,差异有统计学意义(χ^(2)=53.70,P<0.05);不同职业比较,个体从业人群高于其他职业人群,差异有统计学意义(χ^(2)=143.97,P<0.05)。不同文化程度比较,初中及以下人群高于其他学历人群,差异有统计学意义(χ^(2)=172.99,P<0.05)。结论实施献血者归队策略,加强对高危人群梅毒性病知识的宣传,做好献血前问询及梅毒快速检测,进一步降低梅毒血液传播风险。

梅毒螺旋体抗体筛查反应性献血者归队策略研究

目的制定梅毒螺旋体抗体(抗-TP)筛查反应性献血者归队策略。方法收集全国12家采供血机构2013年12月-2015年6月抗-TP ELISA筛查反应性献血者标本373例,经ELISA、TPPA确证检测或/和8周后追踪检测,鉴别这些献血者抗-TP是否为真(假)阳性,确定其是归队还是继续屏蔽。结果在373例抗-TP筛查反应性标本中,确证(经确证试验和/或追踪)抗-TP阳性145例(38.9%,145/373)、不确定4例,此149名献血者可作暂时性屏蔽;抗-TP阴性114例(30.6%,114/373),其献血者可以归队;110例(29.5%,110/373)因未成功追踪而被放弃。结论抗-TP筛查反应性献血者的归队策略:确证试验ELISA有反应性、TPPA为阳性者,判为抗-TP阳性,暂时性屏蔽;确证试验ELISA有(或无)反应性而TPPA是阴性,8周后追踪检测。

免疫胶体金技术效能评价

目的对 3种免疫胶体金技术 (DIGFA)检测试条 (卡 )检测乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、丙型肝炎病毒抗体 (抗HCV)、梅毒螺旋体抗体 (抗TP)和艾滋病病毒抗体 (抗HIV)的性能进行评价 ,为各血液中心传染病检测实验室选用提供参考。方法对多份质控血清和 4 2 1 4份患者血清或血浆分别采用 3个厂家的DIGFA试条 (卡 )和酶免疫法 (EIA)进行检测 ,以EIA技术为参照 ,对DIGFA试条 (卡 )的灵敏度、特异性、检测效率和物理性能等参数进行评价。结果多份质控血清 4个项目DIGFA试条 (卡 )检测特异性均为 1 0 0 % ,HBsAg、抗HIV、抗HCV和抗TPDIGFA试条 (卡 )检测的灵敏度分别为 86 .6 7%、93.33%、86 .6 7%和 90 .4 7% ;检测效率分别为 91 .1 1 %、96 .6 7%、93.33%和 94 .4 5 %。 4 2 1 4份患者血清 (血浆 )的HBsAg、抗HIV、抗HCV和抗TPDIGFA试条 (卡 )的检测特异性分别为 99.6 7%、99.76 %、99.5 6 %和 99.79% ;灵敏度分别为 6 8.35 %、1 0 0 .0 0 %、5 6 .4 1 %和 73.33% ;检测效率分别为 97.6 0 %、99.76 %、98.77%和 99.6 9%。结论DIG FA试条 (卡 )检测灵敏度比较低 ,花费成本较大。该技术可用于急诊病人的初步筛选 ,不适于献血员筛选试验。

免疫胶体金与酶免疫检测HIV抗体和梅毒螺旋体抗体对照实验

目的采用免疫胶体金技术(DIGFA)检测试卡和酶免疫(EIA)检测试剂,检测艾滋病病毒抗体(抗HIV1/2)和梅毒螺旋体特异性抗体(抗TP),对DIGFA技术参数进行评估。方法对多份质控血清和5863份患者血清或血浆,分别采用DIGFA试卡和EIA试剂进行检测,以EIA检测结果为参照,对DIGFA检测试卡的灵敏度、特异性、检测效能和物理性能等参数进行评价。结果多份质控血清抗TP和抗HIV1/2DIGFA试卡检测特异性均为100%;抗TP、抗HIV1/2DIGFA试卡检测的灵敏度分别为80.00%和93.33%;检测效率分别为88.44%和96.97%。5863份患者血清(血浆)的抗TP和抗HIV1/2DIGFA试卡检测特异性分别为99.86%和99.76%;灵敏度分别为50.94%和77.78%;检测效率分别为99.42%和99.69%。结论DIGFA试卡检测灵敏度比较低,花费成本较大,不适宜献血员筛选试验。如果应用到街头(采血车)献血员快速筛选,必须和EIA联合应用。

使用化学发光法检测26707例血清抗梅毒螺旋体特异性抗体以及结果假阳性率分析

目的：用雅培 I2000SR 全自动化学发光微粒子免疫分析仪检测26707例血清抗梅毒螺旋体特异性抗体，以梅毒螺旋体抗体明胶颗粒凝集试验法（TPPA）作为检查抗梅毒螺旋体特异度抗体标准参考方法，分析判定雅培 I2000SR 全自动化学发光微粒子免疫分析仪检测的假阳性率。方法收集内蒙古医科大学附属医院2013年9月1日～2014年3月5日的住院和门诊患者26707人份血清，要求受检者空腹条件下采取静脉血3 ml，3000 r／min 离心10 min 后分离血清，上机检测。使用化学发光微粒子免疫分析（CMIA）、明胶颗粒凝集试验法（TPPA）对血清梅毒螺旋体特异性抗体（Anti-TP）进行检测。运用统计学方法对检测结果进行分析。结果雅培 I2000SR 全自动化学发光微粒子免疫分析仪检测的26707例血清梅毒螺旋体特异性抗体 S／CO 值在1～的标本数52例，经 TPPA 验证阳性数9例，阳性率17.31％；S／CO 值在2～的标本数26例，阳性数9例，阳性率34.62％；S／CO 值在3～的标本数26例，阳性数9例，阳性率34.62％；S／CO 值在5～的标本数25例，阳性数11例，阳性率44％；S／CO 值在7～的标本数25例，阳性数17例，阳性率68％；S／CO 值在10～的标本数28例，阳性数24例，阳性率85.71％；S／CO 值在13～的标本数23例，阳性数20例，阳性率86.96％；S／CO 值在17～的标本数24例，阳性数22例，阳性率91.67％；S／CO 值在21～的标本数29例，阳性数28例，阳性率96.55％；S／CO 值在26的标本数104例，阳性数104例，阳性率100％；总初筛阳性例数364例，总真阳性例数254例，阳性率69.78％；假阳性率0.42％，阳性预测值69.78％。结论雅培 I2000SR 全自动化学发光微粒子免疫分析仪采用自动化检测、全封闭试剂，具有操作简单、检测速度快、结果更准确等特点。虽然其灵敏度高，但存在一定的假阳性，不可以仅凭其结果进行诊断，还需要 TPPA 方法进行补充检测确证。

1026例输血前患者血HBsAg、抗HCV、抗HIV和梅毒抗体检测结果分析

目的分析输血前患者传染病感染情况。方法选择本院海南分院2013年1月至12月共1026例输血前患者,对乙肝表面抗原(HBsAg)、丙肝抗体(抗HCV)、艾滋病抗体(抗HIV)和梅毒抗体检测结果进行分析。结果 HBsAg阳性者102例,阳性率为9.94%;抗HCV阳性者18例;阳性率为1.75%;抗HIV阳性者2例,阳性率为0.19%;梅毒抗体阳性者23例,阳性率为2.24%。感染指标阳性率在临床科室分布方面的差异具有统计学意义(P<0.05)。结论输血患者在输血前,传染病有一定的感染率,尤其是乙肝感染率很高。因此,输血前进行传染病检测很有必要,可减少或避免医院感染以及医疗纠纷的发生。

2560例输血前、术前、产前4项血液传染性指标检测与结果分析

目的：分析输血前、术前、产前4项血液传染性指标检测结果,及时发现潜在的感染源,同时还可避免不必要的医患纠纷。方法：对本院2012年1~6月输血前、术前、产前2560例患者进行梅毒螺旋体抗体（抗-TP）、人类免疫缺陷病毒抗体（抗-HIV1/2）、乙型肝炎表面抗原（HBSAg）、丙型肝炎病毒抗体（抗-HCV）四项感染性疾病指标检测,并分析其检测结果。结果：抗-TP、抗-HIV1/2、HBSAg、抗-HCV四项感染性疾病指标阳性患者210例,阳性率为8.20%;其中以HBSAg阳性率最高,170例,构成比例为80.95%;与其它三项感染性指标比较差异具有显著性,而感染者中以男性居多,男性患者阳性率为13.22%;女性患者为5.38%;两性阳性率比较差异具有显著性,有统计学意义P〈0.05。结论：输血前、术前、产前抗-TP、抗-HIV1/2、HBSAg、抗-HCV四项感染性疾病指标的检测可以确定患者在进行相关治疗前是否患有以上四种与输血相关的传染性疾病,同时在进行相关治疗前进行4项血液传染性指标检测,对感染源采取必要的预防隔离措施,对避免医患纠纷,降低医院感染率具有重要意义。

血站血液检测实验室设备性能比对方法探讨

目的探讨血站血液检测实验室不同检测设备性能比对的方法。方法1）比较不同型号的全自动血型仪的检测性能：采用2台全自动血型仪对1519（人）份常规献血者血样检测，应用Kappa检验评估2台血型仪检测结果的一致性。2）比较相同型号的全自动生化仪检测性能：采用2台全自动生化仪近7个月的室内质控品检测值计算不精密度，比较2台仪器的比对偏差；同时采用符合既定设计要求的40（人）份献血者标本在2台生化仪上检测，以回归分析比较2台全自动生化仪检测结果一致性。3）比较多台全自动酶免检测系统检测性能：采用4台全自动标本处理系统、6台全自动酶免检测系统和8种ELISA检测试剂，分别检测HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、TP血清盘和80（人）份常规血样，应用Х^2比检验和Kappa检验，比较4台全自动标本处理系统和6台全自动酶免检测系统检测结果的一致性。结果1）2台全自动血型仪平行检测献血者血样结果的一致率为99．0％（1504／1519），Kappa检验证明2者一致性为优。2）2台全自动生化仪低值质控标本（PNU）和高值质控标本（PPU）的比对偏差分别为0．26％和0．86％，均低于分析质量要求（〈6％）；40份ALT在（20—60）U／L的标本在2台全自动生化仪上的检测结果经回归分析证明两者一致性为优（P〉0．05）。3）4台标本处理系统检测抗-HCV（万泰试剂）一致性100％（80／80）为优；6台全自动酶免检测系统检测HBsAg除1种试剂（新创）6台仪器结果一致性≥99．2％（119／120）、抗-HIV1种试剂（生物梅里埃）6台仪器结果一致性≥99．2％（119／120）外，其余试剂一致性均为100％（120／120），经Х^2检验6台仪器一致性为优（P〉0．05）。结论对于包含多个结果分类的血型检测系统，至少1周的检测系统间平行试验是需要的；全自动生化仪性能比较适宜采用包含不同浓度的实际血液标本来比较；全自动酶免系统的性能比较适宜采用含有一定数量阴性和阳性的血清盘标本和常规标本。

常用抗-HIV、抗-TPELISA血液筛查试剂盒阳性判断值的验证

目的应用约登指数(Youden index)验证常用抗-HIV、抗-TP ELISA血液筛查试剂盒的阳性判断值(S/CO)及其"灰区"设置的必要性。方法利用SPSS17.0软件,计算国家卫计委临床检验中心(NCCL)牵头组织的国内常用血液筛查试剂多中心评估项目中的抗-HCV、抗-TP ELISA试剂不同S/CO值时的灵敏度、特异性及约登指数[约登指数=(灵敏度+特异性)-1],以S/CO值为横坐标,约登指数为纵坐标,绘制曲线,观察每种试剂各自在最大约登指数下的S/CO值。结果在所评估的7家抗-HIV ELISA试剂盒中,有1种试剂的S/CO值为1、其余6种试剂的S/CO值均为5时,其约登指数达最大。在所评估的5家抗-TP ELISA试剂盒中,有2种试剂的S/CO值为1、2种试剂的S/CO值为3和1种试剂的S/CO值为5时,其约登指数达最大。结论国内常用血液筛查试剂多中心评估项目中的抗-HIV和抗-TP ELISA试剂盒灵敏度和特异性最佳时均为S/CO≥1(亦即试剂盒自身设定的判定值),因此均不必设置"灰区"。

输血前对受血者四项感染性疾病指标的检测及临床意义探讨

目的：探讨输血前对受血者四项感染性疾病指标的检测及临床意义。方法：本院2011年1月~2012年12月需要输血治疗的患者820例,分别在受血前进行梅毒螺旋体抗体（抗-TP）、人类免疫缺陷病毒抗体（抗-HIV1/2）、乙型肝炎表面抗原（HBSAg）、丙型肝炎病毒抗体（抗-HCV）四项感染性疾病指标检测,探讨受血前上述指标检测的临床意义。结果：抗-TP阳性9例,阳性率为1.10%;抗-HIV1/2阳性1例,阳性率为0.12%;HBSAg阳性65例,阳性率为7.93%;抗-HCV阳性5例,阳性率为0.61%;其中男性阳性患者56例,阳性率为13.59%;女性阳性患者24例,阳性率为5.97%;男性感染性疾病患者明显高于女性,两种性别比较差异具有显著性,有统计学意义P〈0.05。结论：输血前对受血者抗-TP、抗-HIV1/2、HBSAg、抗-HCV四项感染性疾病指标的检测可以确定患者受血前是否患有以上四种与输血相关的传染性疾病,避免输血后不必要的医疗纠纷,同时可及时发现潜在的感染源,并进行预见性的管理,对降低医院感染率具有重要意义。

增强化学发光法检测手术及输血感染标志物的临床应用

目的对增强化学发光法检测感染性标志物进行临床应用评价。方法采用美国强生增强化学发光技术检测系统及配套试剂对乙肝表面抗原(HBsAg)、抗丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)、抗人类免疫缺陷病毒抗体(抗-HIV)、抗梅毒螺旋体特异性抗体(抗-TP)进行初筛检测,阳性标本立即重新复查一次,仍为阳性者判断为初筛试验阳性。对于HBsAg、抗-HCV初筛阳性标本采用酶联免疫吸附试验(ELISA法)进行确证;抗-HIV初筛阳性者送HIV确诊实验室进行确诊、抗-TP初筛阳性者采用梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验(TPPA)进行确证。结果增强化学发光法检测HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-TP的阳性检出率分别是5.83%、0.75%、0.05%、2.73%,阳性检出率均高于各检测项目的复检确认方法的阳性率。41123例术前检查患者血清标本中,应用增强化学发光法共筛查出2399例HBsAg阳性标本、308例抗-HCV阳性标本、19例抗-HIV阳性标本、1123例抗-TP阳性标本。筛查的阳性标本经各项目的复检确认方法进行复检确认后,共确认出2325例HBsAg阳性标本、299例抗-HCV阳性标本、17例抗-HIV为阳性标本、1054例抗-TP阳性标本。应用增强化学发光法检测HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-TP的S/CO值分别在5.71、9.24、15.9、10.82以上时,经复检后各检测项目均呈现100%的阳性。结论增强化学发光法HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-TP的检测特异性大于99%,检测阳性预测值完全能够满足临床诊疗需求,检测过程和工作效率都优于常规免疫标记技术,值得临床推广应用。

2010～2013年长沙血液中心血液筛查实验室澳大利亚室间质评结果回顾与问题分析

目的回顾分析2010—2013年长沙血液中心血液筛查实验室参加的澳大利亚国立血清学参比实验室（NRL）室间质评结果，总结经验，促进实验室质量改进。方法对2010—2013年NRL的输血传染病免疫学检测质评数据进行分析，统计异常情况，分析失控及偏差原因和改进措施的效果。结果参加NRL的质评活动中，抗－HIV检测出现假阳性1次，2010—2012有部分检测结果为离群值，2013年所有结果未出现离群现象。结论通过参加室间质评，对异常结果的原因进行分析，纠正偏差，实现了对检测流程的持续性监测，加强了本实验室质量控制，提高了血液筛查水平。

抗-TP临床检测结果分析及感染趋势评估

目的：了解广西地区梅毒螺旋体临床感染状况和感染趋势并作分析。方法：用酶联免疫吸附试验（ELISA）对患者进行梅毒抗体（抗-TP）检测,阳性者用梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验（TPPA）确认。结果：3年间共检测16 998份标本,抗-TP阳性率为3.91%,性病泌尿科的阳性率高达10.29%,且逐年大幅增长,其差异有统计学意义（χ2=24.843,P〈0.05）。女性的阳性率（4.99%）高于男性的阳性率（3.06%）,阳性患者峰值在（20~40）岁年之间。结论：近年该地区梅毒螺旋体感染趋势逐年递增,在预防,治疗及院内感染上应加大的力度。

TP-ELISA与其它梅毒检测方法比较分析

目的寻找一种更有效准确的梅毒筛查方法。方法应用梅毒免疫吸收试验(TP-ELISA)、甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)、梅毒螺旋体血凝试验(TPHA)同时检测82例梅毒患者和60例其它疾病患者以及50例正常人血清,并进行比较分析。结果TP-ELISA检测梅毒的敏感性,特异性,阳性预测值,阴性预测值,诊断效率分别为93.1%,98.1%,97.5%,98.3%,97.4%,与TPHA接近,均优于TRUST;TP-ELISA和TPHA总符合率(97.4%)大于TRUST和TPHA总符合率(85.4%)。结论TP-ELISA应作为目前梅毒抗体筛查的首选方法。

雷公藤内酯微乳凝胶抗炎镇痛作用的实验研究

目的:研究雷公藤内酯微乳凝胶的抗炎和镇痛作用。方法:通过急性、慢性炎症动物模型观察本品的抗炎作用,扭体法和热板法观察本品的镇痛作用。结果:雷公藤内酯微乳凝胶在20～120μg.kg-1剂量范围内(以雷公藤内酯计)能抑制二甲苯致小鼠的耳廓肿胀、棉球致大鼠的肉芽组织增生和角叉菜胶致大鼠的足趾肿胀,对佐剂性关节炎大鼠的继发性病变具有明显的治疗作用,能抑制醋酸所致小鼠扭体反应,延长热板致痛的潜伏期。结论:雷公藤内酯微乳凝胶具有良好的抗炎和镇痛作用。

基于抗-TP检测结果细化反应性献血者屏蔽策略的研究

目的探讨现行献血者屏蔽策略中对抗-TP ELISA反应性献血者实施屏蔽的准确性和适宜性。方法使用2种不同的抗-TP ELISA试剂常规检测后的标本,进行TPPA确证试验。根据抗-TP ELISA初筛结果及确证结果对双试剂反应性和单试剂反应性献血者检测数据进行分析和整理,从而判定献血者真阳性的可能性。结果共收集抗-TP ELISA反应性的献血者血液标本共1 624份,其中包括双试剂反应性标本1 467份,单试剂反应性标本77份和80份。双试剂反应性标本中,确证阳性1 254份,阳性预期值85.48%;双试剂反应性标本确证为真阳性的可能性与S/CO值的高低相关,试剂1和2的S/CO值≥13和17时,阳性预期值分别为98.56%和99.13%,明显较S/CO值≥1时高。确证阳性的单试剂反应性标本中,试剂1确证阳性2份,试剂2确证阳性3份,阳性预期值分别为2.60%和3.75%。而单试剂反应性标本无高S/CO值的特征。结论高S/CO值的抗-TP ELISA双试剂反应性献血者真阳性可能性高,宜永久屏蔽;TPPA试验可有效辅助单试剂反应性献血者筛选出真阳性。现行的献血者屏蔽策略可能需要补充确证实验和献血者追踪检测等措施方能更精确地屏蔽真阳性献血者,保障血液安全。

抗恶性黑素瘤单链抗体-鱼精蛋白融合蛋白表达载体的构建及评评价

目的构建抗MM单链抗体-鱼精蛋白融合蛋白表达载体,并验证其表达效率及功能。方法通过PCR方法将鱼精蛋白截短片段序列与抗黑色素瘤细胞表面抗原单链抗体基因相连接;采用TaKaRap MD19-T载体试剂盒将PCR后获得的融合蛋白扩增产物进行T载体构建;构建GST融合蛋白表达载体以实现在大肠杆菌中该融合蛋白的可溶性表达,经两步亲和纯化后获得scFv-tP蛋白;采用凝胶阻滞电泳迁移率变动分析EMSA技术检测Anti-MM scFv-tP与siRNA的结合活性;荧光分子标记scFv-tP蛋白后分别采用流式细胞术检测和共聚焦显微镜观察其与Li Br细胞株进行细胞表面抗原结合活性验证;采用不同浓度FITC标记的siRNA与scFv-tP进行混合,分别与LiBr细胞(A)及DU145细胞(B)进行混合孵育,观察肿瘤细胞对携载siRNA的单链抗体的内化活性。结果成功构建抗恶性黑素瘤单链抗体-鱼精蛋白片段融合蛋白(Anti-MM scFv-tP)表达载体;实现在大肠杆菌中该融合蛋白的可溶性表达,可获得较纯的scFv-tP蛋白;Anti-MM scFv-tP蛋白与siRNA有明显的结合与携载能力,可以有效与LiBr细胞表面特异性抗原进行结合,且有较强的内化活性。结论本研究构建的抗MM单链抗体-鱼精蛋白融合蛋白表达载体可稳定表达,Anti-MM scFv-tP蛋白具有siRNA结合携载能力,可靶向识别结合进入LiBr细胞,为后续进一步研究该单链抗体融合蛋白靶向载体携载siRNA在体内外抑制恶性黑色素瘤恶性进展奠定坚实的基础。

茶多酚对菜籽色拉油的抗氧化作用研究

在菜籽色拉油中添加TP ,VitE及TP +CA ,对油脂的POV和AV进行测定 ,结果表明 ,三者均有抑制色拉油POV和AV升高的作用。 0 .0 1 %～ 0 .0 4%TP ,0 .0 1 %～ 0 .0 4%VitE及 0 .0 1 %～ 0 .0 4%TP +CA(0 .0 1 % )对油脂POV的降低率依次为 2 8.4%～ 39.0 % ,0～ 39.4%及 5 0 .4%～ 71 .6 % ,而对AV的降低率则依次为 0～ 1 3.5 % ,5 .4%～ 1 0 .8%及 3.0 %～ 7.4%。在相同用量下 ,TP抗氧化能力优于VitE 。